PBS缓冲液的配制方法

PBS缓冲液配方
不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是我们实验室的配方，供大家参考。

我们实验室的配方：
A液：0.1mol/L磷酸二氢钾：
磷酸二氢钾〔KH2PO4，MW136.09〕1.361g，加双蒸水至100ml。

B液：mol/L磷酸氢二钠：
酸酸氢二钠〔Na2HPO4.2H2O，MW177.99〕1.78g，加双蒸水至100ml。

或者酸酸氢二钠〔Na2HPO4.12H2O，MW358.14〕3.58g，加双蒸水至100ml。

pH －－A液〔ml〕－－B液〔ml〕
一般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO4•12H2O〔磷酸氢二钠〕NaH2PO4•2H2O〔磷酸二氢钠〕Nacl
用于细胞培养的PBS需含有氯化钾
称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml 蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L 即可
PBS缓冲液
称取NaCl 8g，KCl ，Na2HPO4•12H2O , KH2PO4 ，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。

PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。

以下是我的总结：
母液的配制：
Na2HPO4：称取 Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水
NaH2PO4：称取 NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水
各种浓度PB(pH=7.4)的配制：
先配 PB (pH=7.4，100ml)：取19ml NaH2PO4， 81ml 的 Na2HPO4, 即可。

然后只需将 PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：
PB〔PH=7.4〕：取 500ml PB，加水稀释至 1000ml 即可。

PB 〔PH=7.4〕：取50ml PB，加水稀释至 1000ml 即可。

PB 〔PH=7.4〕：取100ml M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

假设需要 NaCL 的话，加入 NaCL 至0.9%〔g/100ml〕即可。

另：其它各种另 PH值的 PB〔100ml)配方：
pH NaH2PO4
〔ml〕 92 8 90 85
51 45 38 33 28 23 19ml 16 13 7
磷酸盐缓冲液〔Phosphate Buffer, PB〕，磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液配方
磷酸盐缓冲液〔Phosphate Buffer, PB〕
试剂：NaH2PO4·2H2O Na2HPO4·12H2O
配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的
Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液〔PB〕，根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。

〔1〕0.2mol/L的Na2HPO4；称取Na2HPO4.12H2O 31.2g(或NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。

〔2〕0.2mol/L的Na2HPO4：称取NaHPO4.·12H2O 71.632g〔或Na2HPO4·7H2O 53.6g或Na2HPO4·2H2O 35.6g〕加重蒸水至1000ml 溶解。

〔3〕0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的Na2HPO4·12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB 〔pH约为7.4～7.5〕。

假设pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。

0.2mol/L磷酸盐缓冲液〔pH5.7～8.0〕
pH 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 0.2mol/L Na2HPO4(ml)
关于磷酸缓冲溶液的知识，我在网上搜索了好多帖子，但是还是不能确定正确的答案。

现在把他们链接过来，希望有高手们参与讨论，我会把最终的正确解答整理出来，提供给大家。

PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是
1.磷酸盐缓冲溶液〔phosphate buffered solution〕、
2.磷酸盐缓冲盐水〔phosphate buffered saline〕及
3.磷酸盐缓冲钠〔phosphate buffered sodium〕，
其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。

如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液〔phosp hate buffered solution〕。

无钙镁离子磷酸缓冲盐水〔PBS〕
〔0.15Mol/L PH 7.2〕
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.15g
〔如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g〕
KH2PO4 0.2g
将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。

此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。

我们用的都是第二种
问题1：磷酸盐缓冲盐水〔phosphate buffered sodium〕，为什么用第三种或第一种呢:
这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液，其他两种说法的英语名称常见到，不过我一直都以为他们是差不多的东西。

不同
的汉语翻译倒是第一次听说。

我们公司用的PBS有很多种，抗体组用的中和PBS配方就比较简单，没有K+离子，只起到缓冲PH的作用；Na2HPO4+ KH2PO4按照不同比例混匀，可以得到不同PH的缓冲液，用于不同目的，这个在分子生物学中用得很多；用于活细胞或者细菌处理的，为了保持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是NaCl 和KCl调节离子浓度。

以上是个人的理解，欢迎批评。

:
问题2：既然抗体组的PBS是起到缓冲PH的作用，那加入80G的N ACL作用是什么？需要平衡渗透压吗？还有加入K离子的是不是因为细胞上NA-K泵的原因啊，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？
我觉得之所以这么配，其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？我没说血清撒。

我们用的又没加K，我是说加了K的的
问题3：不加NACL会怎么样啊？多省钱啊
在中和磷酸盐缓冲液中，NaCl的主要作用应当是保持一定的离子浓度，以维持抗体的活性。

在离子浓度过高或过低的情况下，蛋白质都会变性，抗体当然不例外。

ps:哺乳类需用生理盐水浓度是0.9%。

称取氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。

鸟类需用的生理盐水浓度是0.75%。

称取氯化钠，溶解后用蒸馏水稀
释到100毫升。

两栖类需用的生理盐水浓度是0.65%。

称取氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。

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