基因工程的基本操作程序答案

第二节、基因工程的基本操作程序答案
1．选A对目的基因(DNA片段)进行复制利用的是DNA聚合酶而不是DNA连接酶，DNA连接酶是将DNA片段连接时所使用的酶，DNA聚合酶是将单个脱氧核苷酸连接成一条链所使用的酶。

2．选A重组DNA分子包括两部分：载体DNA和目的基因DNA。

同一种限制酶切割载体DNA和目的基因DNA，DNA连接酶将两者连接，而载体上往往带有标记基因。

RNA聚合酶用于RNA的形成，四种脱氧核苷酸则用于DNA的形成。

3．选A目的基因导入植物体细胞常用的方法是农杆菌转化法，该方法比较经济有效，此外还有基因枪法和花粉管通道法；目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射法；大肠杆菌细胞最常用的转化方法就是用Ca2＋处理细胞，使细胞的生理状态发生改变，完成转化过程。

4．选C观察DNA在细胞中的分布的基本方法是利用甲基绿对DNA分子进行染色，再利用显微镜观察。

目的基因是否导入受体细胞，一般是利用放射性同位素作标记(标记目的基因)，是利用DNA分子杂交原理来实现的，而目的基因是否转录出相应的RNA是利用分子杂交原理来实现的。

最后检测目的基因是否翻译出蛋白质，其方法很多，一般是利用抗原—抗体杂交的原理来实现。

5．选B由X的位置可以判断其为启动子。

启动子是表达载体所必需的，功能是启动插入基因的转录过程。

氨苄青霉素抗性基因可以作为标记基因，但不是必需的标记基因。

限制酶和DNA连接酶都不是表达载体所需要的。

6．选D从图甲看出，用Eco RⅠ切割目的基因后两端各有一切口，与图乙中Eco RⅠ切口对接时，可有两种可能，即可产生两种重组DNA。

7．选D目的基因的表达是指在受体细胞中产生了目的基因所控制合成的蛋白质。

在受体细胞中检测到目的基因或其转录产物RNA，并不能表明目的基因已经成功表达。

8．选ABC限制性核酸内切酶大多是特异性识别6个核苷酸序列，但也有识别序列由4、5或8个核苷酸组成的，A错误；PCR中耐高温的DNA聚合酶只是在延伸阶段发挥催化作用，B项错误；载体质粒上抗生素抗性基因可作为标记基因，供重组DNA的鉴定和选择，不是抗生素合成基因，C错误；目的基因导入了受体细胞不一定就都能正常表达，D正确。

9．选C人的胰岛素基因存在于人的所有体细胞中，因此该人胰岛A细胞和肝细胞中均含有胰岛素基因，可与用胰岛素基因制成的DNA探针形成杂交分子。

该人胰岛B细胞中的mRNA有一部分是由胰岛素基因转录形成的，也能与用胰岛素基因制成的DNA探针形成杂交分子。

10．选D基因操作过程中，用同一种限制酶分别切割生长激素基因所在的DNA分子和质粒后，会产生相同的黏性末端，黏性末端连接时，目的基因和目的基因、目的基因和质粒、质粒和质粒都可能连接，因此，导入大肠杆菌的质粒不一定为重组质粒。

构建该重组质粒必需的工具酶是限制酶和DNA连接酶。

目的基因插入到基因B中后形成的重组质粒的抗氨苄青霉素基因被破坏，故导入了重组质粒的大肠杆菌对氨苄青霉素不具有抗性，对链霉素仍具有抗性。

11．（1）理论上，基因组文库含有生物的全部基因；而cDNA文库含有生物的部分基因．
（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中筛选出所需的耐旱基因．
（3）由于植物乙的耐旱性低，因此将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物乙的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株．要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的表达产物，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的耐旱性是否得到提高．
（4）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3：1时，该比例符合杂合子（Aa）自交后代的结果，则可推测该耐旱基因（A）整合到了同源染色体的一条上．
故答案为：（1）全部；部分；（2）筛选；（3）乙；表达产物；耐旱性；（4）同源染色体的一条上．12．答案：(1)反转录胰岛素 (2)胰岛素信使 RNA 反转录 (3)限制酶环状(4)重组DNA分子标记(5)将目的基因导入受体细胞Ca2＋细胞壁的通透性
(6)目的基因大肠杆菌能产生胰岛素
13．解析：农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞的常用方法，利用它能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，以及其Ti质粒上的T－DNA能转移至受体细胞，并且整合到受体细胞的染色体DNA上的特点，可以把目的基因插入其Ti质粒的T－DNA中，借助其作用使目的基因成功导入受体细胞。

答案：(1)目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定
(2)可转移至受体细胞并整合到受体细胞的染色体DNA上(3)转化(4)农杆菌转化法(5)目的基因是否插入到受体细胞的染色体DNA上DNA分子杂交技术。