人防御素分子生物学研究进展及其应用

・综述与专论・
生物技术通报
Ｂ１０ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＢＵＬＬＥＴＩＮ２００９年第１２期人防御素分子生物学研究进展及其应用
高金湖唐存多邬敏辰
（江南大学医药学院，无锡２１４１２２）
摘要：人防御素（ｈｕｍａｎｄｅｆｅｎｓｉｎｓ）是一类内源性阳离子抗微生物肤，在天然免疫防御中起重要作用，也能增强继承性免疫应答。

它具有强烈的广谱抗微生物活性，并且不易对微生物产生耐药性。

对人防御素的分子生物学特性方面的研究进展作一综述，重点在于比较和探讨其结构的异同，并对其应用和发展的前景进行展望。

关键词：人防御素抗茵肽分子生物学特性
ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＨｕｍａｎＤｅｆｅｎｓｉｎｓ
ＧａｏＪｉｎｈｕＴａｎｇＣｕｎｄｕｏＷｕＭｉｎｃｈｅｎ
（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＭｅｄｗｉｗａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ＪｉａｎｇｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ２１４１２２）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｈｕｍａｎｄｅｆｅｎｓｉｎｓａ８ａｆａｍｉｌｙｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｃａｔｉｏｎｉｃａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｐｌａｙａｌｌｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｂｏｔｈｉｎｉｎｎａｔｅａｎｄａ・ｄａｐｔｉｖｅｄｅｆｅｎｓｅｓｙｓｔｅｍｓ．Ｔｈｅｙｅｘｈｉｂｉｔａｂｒｏａｄｒａｎｇｅｏｆｉｎｔｅｎｓｉｖｅａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄｄｏｎｏｔｂｅａｒｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｇａｉｎｓｔｍｉｃｒｏｏｒ－ｇａｎｉｓｍｅａｓｉｌｙ．Ａｎｏｖｅｒｖｉｅｗｏｆｔｈｅｍｏｌｌｅｅｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｈｕｍａｎｄｅｆｅｎｓｉｎｓｗｉｔｈｓｏｍｅｅｍｐｈａｓｉｓｏｎｃｏｍｐａｒｉｎｇａｎｄｄｉｓｃｕｓ—ｓｉｎｇｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅｉｒｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓｗａｓｐｒｅｓｅｎｔｅｄ．Ｔｈｅｐｒｏｓｐｅｃｔｓｆｏｒａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｈｕｍａｎｄｅｆｅｎｓｉｎｓｗｅｒｅａｌｓｏ
ｄｉ－ｃｕｓｓｅｄ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＨｕｍａｎｄｅｆｅｎｓｉｎｓＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｅｐｔｉｄｅｓＭｏｌｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
人防御素是一类内源性阳离子抗微生物肽，富含精氨酸，并含有二硫键连接、位置保守的半胱氨酸残基…。

人防御素的分子量约为３．５～６ｋＤ，包含６个半胱氨酸残基形成的３个经典的分子内二硫键。

根据防御素分子内半胱氨酸的位置和连接方式、前体性质及表达位置的差异，可将防御素可分成ｄ、Ｂ、０三种。

在人体内仅发现前两种，而第３种防御素０．防御素（ｒｅｔｒｏｃｙｌｉｎｓ）是从猕猴白细胞中分离出来的一种环状防御素，称之为猕猴０．防御素（ＲＴＤ－１）¨１。

０一防御素采用封闭式的两条Ｂ．片层形成梯形二硫键结构口］。

０．防御素比其他两种类型防御素更有效地抵御ＨＩＶ．１，并且能够在实验室进行开发，这两个特征表示０．防御素仍然是人类抵御这种病毒的有效途径卜１。

１人ｄ一防御素
１．１Ｏｔ一防御素的发现
ｄ－防御素中ＨＮＰ．１（ｈｕｍａｎｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｐｅｐｔｉｄｅ－１）至ＨＮＰ－４最初是在人中性粒细胞分离获得。

被看作肠内防御素的ＨＤ．５（ｈｕｍａｎｄｅｆｅｎｓｉｎ－５）和ＨＤ－６∞１，主要是在潘氏细胞中合成和表达分泌。

由于天然的ＨＮＰ一１，ＨＮＰ－２和ＨＮＰ．３易从中性粒细胞纯化制得，因此被广泛用于研究。

而其他相继发现的天然ａ－防御素多肽的数量很少，所以对它们的性质研究仍不够清楚。

但新近的合成手段使得体外研究这６种０ｃ．防御素变得可行，尤其是对ＨＮＰ－４、ＨＤ・５和ＨＤ－６特征的鉴定非常有效。

近来，在回肠Ｃｒｏｈｎ’ｓ疾病的患者体内检测到ＨＤ－５¨１。

根据这一发现可推测，作为先天性免疫效应分子的ＨＤ－５可能在维持粘膜平衡中起重要作用，以及因其缺乏导致粘膜抗菌能力的减弱而发病。

目前，ＨＤ－５和ＨＤ－６已在大肠杆菌中获得可溶性表达…。

１．２ａ一防御素的结构
１．２．１０［－防御素的一级结构成熟的ａ．防御素是富含精氨酸的单链分子，由２９～３５个氨基酸残基组
收稿日期：２００９．０９．０９
作者简介：高金湖（１９８５－），女，硕十研究生．研究方向：基因工程制药；Ｅ－ｍａｉｌ：ｇａｏｊｉｎｈｕｌ９１＠１６３．ｃｏｒｎ通讯作者：邬敏辰（１９６２．），男，教授，研究方向：分子生物学；Ｅ－ｍａｉｌ：ｂｉｏｃｈ＠１６３．ｃｏｒｎ
２００９年第１２期高金湖等：人防御素分子生物学研究进展及其应用３１
成，含有６个保守的半胱氨酸序列…。

３个二硫键分别连接Ｃｙｓｌ．６、２－４、３－５。

ｄ．防御素前原肽一般由９３。

１００个氨基酸组成，其中包括氨基末端的信号肽、原片段和Ｃ．末端的成熟肽，终止密码子紧随成熟肽之后。

信号肽、原片段、成熟肽分别由１９个、４１—５１个、２９～３５个氨基酸残基组成。

迄今为止，已有５种不同的人ｄ－防御素的基因和６种不同的人ａ一防御素分子被阐述（表１）‘９｜。

表１廿防御素分子一级结构
由表ｌ中ｑ．防御素的成熟肽序列分析可知，
ＨＮＰ—ｌ。

ＨＮＰ．４前３种防御素在结构上非常相似，
差别仅在于Ｎ．末端的信号氨基酸有所不同，而
ＨＮＰ－４却与前３者在基因序列和氨基酸组成上存在
明显差异，与前３者仅有３２％的同源性¨…。

ＨＮＰ—Ｉ
和ＨＮＰ－３两者仅在Ｎ端的第一个氨基酸有差异，其
余氨基酸组成与排列完全相同。

而ＨＮＰ－２其实是一种截短了的ｄ一防御素，只比前两者少了Ｎ端的一个氨基酸，其余部分完全相同。

１．２．２仅坦ｆ御素的高级结构ｄ．防御素的二级结构是由３对二硫键以带电阳离子的Ｂ．发夹环方式¨¨，形成稳定的反向平行三股Ｂ．折叠结构域（图１，图２）。

大多数氨基酸侧链暴露在肽链表面。

二硫键可以使小分子防御素紧密连接以防止蛋白酶的水解，所以防御素能在富含蛋白的吞噬溶酶体环境中保持其特性，这也是防御素区别于其他抗微生物肽的主要因素¨…。

例如，ＨＤ－５的三维结构显示了其暴露在表面的正电荷独特的分布情况。

两对精氨酸残基在三维结构上处于该分子对侧，一对位于第９和２８位氨基酸，另一对在１３和３２位坤１。

图１ＨＮＰ－３二级结构模式图
图２由Ｍｏｌ∞ｆｉｐｔ和Ｒ∞ｔｅｒ３Ｄ绘制，蛋白质数据库登录序号为ｌＤｒＮ（ＨＮＰ．３），１９４ｓ（ＨＢＤ—１）
图２ＨＢＤ－ｌ二级结构模式图
２人Ｂ－防御素
２．１Ｂ・防御素的发现
Ｂ．防御素主要在上皮组织表达，在生物体和环
境之间形成第一道防御线。

第１种人Ｂ一防御素
３２生物技术通报ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＢｕｌｌｅｔｉｎ２００９年第１２期
（ｈｕｍａｎｂｅｔａ—ｄｅｆｅｎｓｉｎ．１，ＨＢＤ．１）是从经受透析治疗的病人血浆中分离，它在与环境和菌群直接接触的上皮细胞（如肺、乳腺、唾液腺、肾、胰腺和前列腺）表达¨…。

ＨＢＤ．２最初是从牛皮癣患者皮损组织分离得到，而ＨＢＤ．３几乎是同时从牛皮癣鳞屑纯化得到，采用生物信息学比对并克隆出来。

通过局部比对搜索工具（ＢＬＡＳＴ），发现了另外３种１３－防御素（ＨＢＤ４—６）¨“。

ＨＢＤ．４在睾丸和胃窦的位置有最强表达，在嗜中性粒细胞和甲状腺、肺、子宫及肾的上皮细胞中表达微弱，但呈持续性表达¨“。

ＨＢＤ－５和ＨＢＤ－６主要在附睾表达。

除了直接从天然组织器官中提取，还可通过转录水平上的逆转录聚合酶链反应（ＲＴ．ＰＣＲ）或ｍＲＮＡ分子杂交证实许多Ｂ一防御素的表达。

据已有文献报道，人基因组至少有２８种防御素类似序列¨６｜。

但目前，作为Ｂ．防御素家族成员，只有ＨＢＤｌ－６的特征被描述。

Ｂ．防御素与０【．防御素在基因水平、ｃＤＮＡ水平、前体多肽序列都有所不同，但真正区分二者的却是氨基酸序列中位置固定的６个半胱氨酸残基组成的３个二硫键的连接方式。

２．２１３．防御素的结构
２．２．１Ｂ．防御素的一级结构成熟的Ｂ－防御素包含３６—５０个氨基酸残基，包括６个半胱氨酸残基（Ｃｙｓｌ－５，２－４，３—６）以独特的空间模式形成二硫键，与ｔ＇ｖ．防御素相区别。

Ｃｙｓ２．Ｃｙｓ４桥在多肽核内引入环状共价链（表２）。

根据ＮＣＢＩ所收录的数据资料，Ｂ．防御素前原肽（前体）一般由６４—２００个氨基酸残基组成。

Ｂ一防御素前体的结构比较简单，包括信号序列、短的（或者无）原片段、Ｃ．末端防御素成熟肽Ⅲ１。

例如，ＨＢＤＩ－６的前原肽含６４—７８个氨基酸残基（表３），信号肽、成熟肽分别由２０一２９个、３６—５１个氨基酸残基组成。

与ｄ．防御素相比，Ｂ－防御素中的原片段很短或是不存在¨引。

已知的Ｂ一防御素中，仅ＨＢＤ．１含有１１个氨基酸残基的原片段。

迄今为止，ＮＣＢＩ数据库中Ｂ－防御素前原肽多数没有给出原片段的序列，因此对于原片段的研究尚待深入。

有趣的是，后续发现的部分由６号和２０号染色体编码、含有原片段的Ｂ．防御素（如ＨＢＤ．２５、ＨＢＤ．２７、ＨＢＤ．２９）与ＨＢＤ．１以及ｄ－防御素相比，其成熟肽位于信号肽和原片段之间，而不是位于Ｃ．末端；原片段以罕见的长Ｃ．末端尾部表现出来。

这些富含阴离子残基的延伸片段，与其他Ｂ一防御素相比，没有明显的序列相似性。

研究ＨＢＤ一１８¨９｜，推测这些长ｃ．末端可能使抗菌活性对盐的敏感度有所降低。

该假设提出的功能意义有待进一步分析。

表２Ｂ・防御素成熟肽一级结构比较注：・代表多肽片段序列ＬＤＦＳＱＰＦＰＳＧ
２００９年第１２期高金湖等：人防御素分子生物学研究进展及其应用３３
ＨＢＤ－３的氨基酸序列与ＨＢＤ－２约有４３％的同源性ＥｌＯ］。

由表３中Ｂ．防御素的成熟肽序列分析可知，对大多数Ｂ－防御素而言，在半胱氨酸附近只有少数几个保守的氨基酸残基。

例如，在Ｃｙｓ２左侧第２位氨基酸残基，大多存在甘氨酸（Ｇｌｙ，Ｇ）；在Ｃｙｓ２右侧第ｌ位氨基酸残基往往是碱性的精氨酸（Ａｒｇ，Ｒ）或者赖氨酸（Ｌｙｓ，Ｋ）；Ｃｙｓ３右侧第４位通常是酸性的谷氨酸（Ｇｌｕ，Ｅ）；Ｃｙｓ４左侧第３位（ＨＢＤ一１为Ｃｙｓ４左侧第４位）存在异亮氨酸。

这些保守的氨基酸序列可能与维持空间结构以及发挥功能活性相关。

２．２．２Ｂ．防御素的二级结构Ｂ－防御素家族结构简单，二硫键稳定，但作用却有所不同。

Ｂ．防御素二级结构也是由３对二硫键形成３股Ｂ一折叠结构和一个带有阳离子的ｐ－发夹环（图３）。

与口．防御素不同的是，在Ｂ一防御素Ｎ－末端还含有一股Ⅸ一螺旋。

光谱分析表明二硫键的连接对于ＨＢＤ－３的二级结构并没有显著影响。

因此，ＨＢＤ－３似乎是通过二硫键独立地形成其二级结构。

紧邻Ｂ一片层的ｄ．螺旋区段的包裹主要由Ｃｙｓｌｌ和Ｃｙｓ４０之间的二硫键驱使形成忙…。

已经清楚，由于结构上细微的差异，特别是分子表面的性质，决定了功能的特异性。

通过这些多肽的生物学活性所共有的结构折叠推测，它与对应的受体发生相互作用时要达到的最佳尺寸、形状很重要¨“。

２．２．３Ｂ．防御素的三级结构虽然ｄ和Ｂ一防御素家族在ＤＮＡ序列或二硫键拓扑结构并不相同，但它们具有相似的三级结构，并表现出共同的性质，如抗微生物活性旧…。

生物技术通报ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＢｕｌｌｅｔｉｎ２００９年第１２期
ＨＢＤ一１ＨＢＤ．－２
凼凸昌凸ＤＨＹＮＣＶＳＳＧＧＱＣＬＹＳＡＣＰＩＦｒＫＩＱＧＴＹＲＧＫＡＫＣＣＫｄｂ嘭岛岛
ＧＩＧＤＰＶＴＣＬＫＳＧＡＩＣＨＰＶＦＣＰＲＲＹＫＱＩＧＴＣＧＬＰＧＴＫＣＣＫＫＰ凼协岛岛
ＨＢＤ－３ＧＩｒＮｒＬＱＫＹＹｃＲｖＲＧＧＲ’ＣＡＶＬＳＣＬＰＫＥＥｏｉＧＫＣＳＴＲＧＲＫＣＣＲ’ＲＫＫ
括号中的数字代表有效电荷
图３争防御素二级结构元件对比在整个结构中，分子中心含有一个共同的（类
防御素）拓扑折叠（蛋白质结构分类）。

这种折叠的
原型是人Ｏｆ．．防御素．３的结构。

防御素分子内含３
个反向平行的Ｂ一折叠链，由３个分子内二硫键连
接。

在ｐ一防御素中，ｐ一片层与一个可变长度的ｄ－螺３６（“）４ｌ（＋６）４５（＋１１）
旋片段连接，形成分子Ｎ．末端片段（图４）。

ａ－螺旋
和Ｂ－片层的连接位点是通过二硫键来稳定的
（Ｃｙｓｌ－Ｃｙｓ５）。

此发现可能不够成熟，因为通过对
ＨＢＤ．３同源体的研究，提供了同上述观点截然相反
的证据‘２引。

图４Ｂ－防御素空间结构模式图
一些其他的观点可能支持Ｂ一片层作为防御素的结构和功能中心这一推测。

所有防御素（包括ａ一类型Ⅲ１）由保守基序Ｇｌｙ—Ｘ－Ｃｙｓ组成的第二条Ｂ・链部分，形成Ｂ．突起Ⅲ】。

Ｊ－突起的基本作用是增强Ｂ．片层的扭曲，它们的存在对于正确折叠并形成哺乳动物防御素的天然结构十分必要Ⅲ１。

近来发现，形成Ｂ．片层的残基在哺乳动物ｐ一防御素基因的进化过程中都不易受到的正向选择或负向选择的影响。

ＨＢＤ．１到ＨＢＤ．３中ｄ．螺旋的Ｎ－末端大小同在第一个半胱氨酸残基之前的氨基酸数量没有关系。

该螺旋片段的小型分子尺寸和可变长度表明某些ＨＢＤｓ可能完全缺乏它Ｈ“。

Ｂ．防御素Ｎ．末端的特殊结构可能对这些蛋白质性质很重要。

此区域的一级结构对观察Ｂ．防御素抗菌特性有重要意义［２７１。

虽然只有适量保守序列，但多数Ｂ一防御素的ｃ．末端片段富含碱性和疏水性氨基酸。

由上可知，ＨＢＤ．１到ＨＢＤ．３的Ｃ一末端表面的各种分子形式具有明显的、可以确认的两性特征。

不对称分布性和阳离子基序。

２．２．４Ｂ一防御素的四级结构人Ｂ．防御素分子要比ａ－防御素大些。

尽管这两个家族在初级序列上几乎没有同源性，但由于３对二硫键的存在，使得它们四级结构非常相似。

人Ｂ一防御素有形成多种低聚结构（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ）的潜能旧“，这些低聚结构影响着防御素蛋白的生物学活性和功能。

Ｂ．防御素中低聚体（ｏｉｌ．ｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）的本质为特异性蛋白。

关于Ｂ．防御素的低聚反应的报道最早来自对ＨＢＤ－２结晶学的研究，ＨＢＤ－２中八聚体（ｏｃｔａｍｅｒｉｃ）的形成归功于４个非共价二聚体，每个单体的第一条Ｂ．折叠链相互连接以稳定聚合物。

这种二聚体与以前提到的ａ．防御素的拓扑结构截然不同。

ａ一螺旋的Ｎ．末端在ＨＢＤ－２的八聚体的稳定方面起重要作用。

３防御素的活性、生物合成及修饰
防御素除了具有抗微生物活性外，还表现出其
２００９年第１２期高金湖等：人防御素分子生物学研究进展及其应用３５
他一些性质，如抗肿瘤活性、促进细胞增殖、干预信号传导通路、化学性诱导免疫细胞以及刺激细胞因子和粘连分子的表达等旧“。

ａ．防御素是以无抗菌活性的前原肽形式表达，其Ｃ．末端部分具有抗菌活性。

多数情况下，原片段所带电荷与成熟的防御素接近平衡，这种排列可协助防御素成熟肽稳定、折叠或亚细胞内运输，防止其与细胞膜的胞内相互作用Ｂ…，同时也抑制了防御素成熟肽的功能活性Ⅲｏ。

ａ一防御素的生物合成发生在骨髓、中性粒前体细胞、前髓细胞中。

血液中流动的或在炎症组织中发现的成熟中性粒细胞内涵有大量防御素，但不会再合成这些肽及其ｍＲＮＡ。

在骨髓细胞株合成的防御素，信号肽序列被迅速切除，而随后经蛋白酶加工生成成熟的防御素则需要数小时，如ＨＮＰ－２被认为是由ｐｒｏＨＮＰ一１和ｐｒｏＨＮＰ－３翻译后通过蛋白酶裂解而得¨¨。

最终的裂解发生在成熟化颗粒内¨７｜。

该过程非常有效，可检测到只有少量的、加工不完全的中间体在成熟粒细胞中＂…。

单一金属蛋白酶可引起肠内活性防御素的释放ｐ１。

ＨＮＰ．１中Ｎ．端２／５的原片段（连续１８个氨基酸残基）的缺失对防御素的生物合成没有影响。

然而，包围成保守疏水区的连续１３个氨基酸残基的缺失，对防御素正确地运输和分类不利。

因此疏水区被认为对于ＨＮＰ．１的生物合成及运输所必需＂１。

微生物或炎症刺激能诱导结肠上皮细胞中的３种Ｂ．防御素（ＨＢＤ－２，．３，－４）的表达，故发生炎症或感染很可能与浆细胞中Ｂ．防御素的表达有关。

结肠浆细胞合成Ｂ．防御素并以小囊泡形式释放。

但对于Ｂ一防御素除了切除Ｎ．端信号序列使其成活性形式外，是否还需要额外的加工仍知之甚少。

对于Ｂ一防御素而言，早期研究从人气管上皮细胞中克隆发现，ＨＢＤ．１的氨基酸序列与其他Ｂ一防御素拥有同源的信号肽／原片段和成熟肽¨“。

其他缺少阴离子原片段的Ｂ．防御素前体与相对较大阴离子原片段的ａ一防御素前体相比较，之间的差异还未得到令人满意的解释。

４人防御素的前景展望
人防御素的前景方向必然是从研究和应用这两个方面同时展开。

从研究角度看，防御素分子结构与功能的关系，抗菌机制以及作用机理仍然吸引着众多研究者积极探索。

随着生物和其他学科相关技术的进一步发展，对于人防御素的特性和功能会有更深刻认识。

例如，通过突变研究防御素生物学性质和功能，或者以一般的防御素结构为模板产生一系列带有设定的生物学活性的新防御素。

应用方面，随着对人防御素不断的深入研究，人们逐渐提高了对其作为天然免疫抗菌效应物功能的认识。

体外试验表明，防御素对微生物的膜表面亲和性很高，对人体血清白蛋白亲和性很低，因此具有稳定的抗菌作用和低毒性，是理想候选药物。

与传统的抗菌、抗病毒药物相比，防御素具有特殊的作用机制，并且是内源性物质，能够克服细菌的耐药性和降低抗菌素的毒副作用，避免发生免疫反应。

目前已经考虑将Ｂ－防御素作为替代品于治疗多种细菌感染、烫伤和克罗恩病¨引。

这些肽类的抗癌活性也暗示可能会用于癌症的治疗Ⅲ１。

还可以调节或增强免疫反应，暗示着将来新型疫苗的发展方向＂－。

此外，在植物基因工程和海洋药物的研究领域中，植物、动物防御素的研究也在逐步展开。

可将不同种人、动植物防御素的结构和功能进行比较分析，根据生产和生活需求，经合理改造修饰或者融合表达。

形成具有特定功能的新防御素。

可以做出一些设想，例如，可考虑将人防御素与植物防御素进行杂合表达，以增强植物抗菌能力，减少化学农药的使用，减少农药的有害残留和富集作用，有效保证农产品的安全。

将人防御素和海洋生物活性多肽进行融合，形成一系列抗肿瘤、抗真菌、提高心血管功能的人融合防御素。

参考文献
ｌＬｉｎｚｍｅｉｅｒＲ，ＨｏＣＨ，ＨｏａｎｇＢＶ，Ｃ¨ｚＴ．Ｇｅｎｅ。

１９９９，２３３：２０５－２１１．
２ＴａｎｇＹＱ，Ｙｕ¨Ｊ，ＯｓａｐａｙＧ，ｅｔ且Ｉ．ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９，２８６：４８９—５０２．
３ＺｏｕＧＺ．ｄｅｋｅｕｗＥ，ＬｕｂｋｏｗｓｋｉＪ，ｅｔａ１．ＪＭｏｌＢｉｏｌ，２００８，３８１：１２８ｌ—１２９１．
４Ｗ¨ｇＷ，ＯｗｅｎＳＭ，ＲｕｄｏｌｐｈＤＬ，ｅｔ丑１．ｎｅＪｏｕｍａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００４．１７３：５１５—５２０．
５ＪｏｎｅｓＤＥ，ＢｅｖｍｓＣＬ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，１９９２，２６７：２３２１６—２３２２５．
６ｄｅＬｅｅｕｗＥ，Ｒａｊ且ｂｉＭ，ＺｏｕＧＺ，ｅｔａ１．ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｎ，２００９，５８３：２５０ｒ７—２５１２．
７ＨｕｎｇＬ，ＣｈｍｇＣＢ，ＪｉａｎｇＲＧ，ｅｔａ１．ＰｒｏｔｅｉｎＥｘｐ＂ｓｓｉｏｎ¨ｄＰｕ曲－
生物技术通报Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｂｕｌｌｅｔｉｎ
２００９年第１２期
ｃａｔｉｏｎ。

２００８。

６１：１６８—１７４．ＬｅｈｒｅｒＲＩ，ＧａｎｚＴ．ＣｉｂａＦｏｕｎｄＳｙｍｐ，１９９２，１７１：２７６—２９０．ＳｃｈｎｅｉｄｅｒＪＪ，ＵｎｈｏｌｚｅＡ，ＳｅｈａｌｌｅｒＭ，ｅｔ
ａＬＪＭｏｌ
Ｍｅｄ。

２００５，８３：
５８７—５９５．
Ｇａｎｚ
Ｔ，Ｓｅｌｓｔｅｄ
ＭＥ，ＳｚｋｌａｒｅｋＤ，ｅｔ
ａＬ
ＪＣｌｉｎ
Ｉｎｖｅｓｔ。

１９８５，７６（４）：
１４２７—２４３５．ＤｅＳｍｅｔ
Ｋ，ＣｏｎｔｒｅｒａｓｌＬ
ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓ．２００５．２７：１３３７—
１３４７．高真贞，董开忠．西北民族大学学报，２００７，２８（２）：６３—６６．
Ｂｅｎｓｃｈ
ＫＷ，ＲａｉｄａＭ，ＭａｇｅｒｔＨＪ，ｅｔ
ａ１．ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔ，１９９５，３６８：
３３１—３３５．
Ｇａｒｃｉａ
ＪＲ，Ｋｒａｕｓｅ
Ａ，ＳｃｈｕｈＳ，ｅｔ
ａ１．ＴｈｅＦＡＳＥＢ
Ｊｏｕｒｎａｌ，２００１，１５：
１８１９—１８２１．
刘青，张阳根，王厚照．实用医技杂志，２００６，１３（１５）：２５７７
—２５７９．
ＰａｚｇｉｅｒａＭ，Ｈｏｏｖｅｒｂ
ＤＭ，ＹａｎｇＨｕｍａｎＤ，ｅｔ
ａ１．Ｃｅｌｌ
Ｍｏｌ
ＬｉｆｅＳｅｉ，
２００６．６３：１２９４一１３１３．Ｖａｌｏ＂ＥＶ，Ｇａｎｚ
Ｔ．Ｂｌｏｏｄ。

１９９２，７９：１５３８—１５４４．
Ｒａｈｍａｎ
Ａ，ＦａｈｌｇｒｅｎＡ，Ｓｉｔｏｈｙ
Ｂ，ｅｔ“．Ｂ—Ｄｅｆｅｎｓｉｎ
Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｂｙ
ＨｕｍａｎＣｏｌｏｎｉｃＰｌａｓｍａ
Ｃｅｌｌｓ：Ａ
ＮｅｗＬｏｏｋ
ａｔ
ＰｌａｓｍａＣｅｌｌｓｉｎＵｌｃｅｒ－
ａｆｉｒｅＣｏｌｉｔｉｓ．ＩｎｆｌａｍｍＢｏｗｅｌＤｉｓ，２００７。

１３：８４７—８５５．
ＹｅｎｕｇｕＳ，ＨａｍｉｌＫＧ，ＲａｄｈａｋｆｉｓｈｎａｎＹ，ｅｔ
ａ１．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００４，
１４５：３１６５—３１７３．
ＢａｔｏｎｉＧ，ＭａｉｓｅｔｔａＧ，ＥｓｉｎＳ．Ｃａｍｐａ
Ｍ．Ｍｉｎｉ－ＲｅｖｉｅｗｓｉｎＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６，６：１０６３—１０７３．
ＴｏｒｒｅｓＡＭ，Ｋｕｃｈｅｌ
ＰＷ，ｅｔａ１．Ｔｏｘｉｅｏｎ。

２００４．４４：５８１—５８８．ＬｕｎｄｙａＦＴ，ＮｅｌｓｏｎＪ，Ｌｏｃｋｈａｒｔ
Ｄ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００８，４５：
１９０一１９３．
Ｗｕ
Ｚ，ＨｏｏｖｅｒＤＭ，ＹａｎｇＤ。

ｅｔ
ａ１．ＰｒｏｃＮａｄＡｃａｄ
ＳＣｉ，２００３．１００：
８８８０—８８８５．
Ｘｉｅ
Ｃ，ＰｒａｈｌＡ，ＥｒｉｅｋｓｅｎＢ，ｅｔａ１．Ｊ
Ｂｉｏｌ
Ｃｈｅｍ，２００５，２８０：３２９２１—
３２９２９．
ＹｏｕｎｔＮＹ，ＹｅａｍａｎＭＲ．Ｐｒｏｃ
ＮａｉｌＡｃａｄ
Ｓｅｉ，２００４，１０１：７３６３—
７３６８．
Ｔｏｎｅｓ＾Ｍ，Ｋｏｃｈｅｌ
ＰＷ．Ｔｏｘｉｃｏｎ，２伽１４，４４：５８１—５８８．
ＳａｗａｉＭＶ，ＪｉａＨＰ，Ｌｉｕ
Ｌ，ｅｔ
ａ１．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００１，４０：３８１０—
３８１６．
ＤｅＳｍｅｔ
Ｋ，ＣｏｎｔｒｅｒａｓＲ．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓ。

２００５，２７：１３３７一
１３４７
ＧａｎｚＴ．ＣＲＢｉｏｌｏｇｉｅｓ，２００４，３２７：５３９～５４９．
Ｖａｌｏｒｅ
ＥＶ，ＭａｒｔｉｎＥ．ＧａｎｚＴ，ｅｔａ１．Ｊ
Ｃｌｉｎ
Ｉｎｖｅｓｔ．１９９６，９７（７）：
１６２４—１６２９．
ＬｉｎｚｍｅｉｅｒＲＭ，ＧａｎｚＴ，ｅｔａ１．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２００５。

８６：４２３—４３０．ＨａｒｗｉｇＳＳ，ＰａｒｋＡＳ，ＬｅｈｒｅｒＲＩ．Ｂｌｏｏｄ，１９９２，７９：１５３２—１５３７．
ＭｅＣｒａｙ
ＰＢ
Ｊｒ．Ｂｅｎｔｌｅｙ
Ｌ．Ａｍ
Ｊ
Ｂｅｓｐｉｒ
ＣｅｌｌＭｏｌ
Ｂｉｏｌ。

１９９７．１６（３）：
３４３—３４９．ＰａｐｏＮ，Ｓｈａｉ
Ｙ．ＣｅｌｌＭｏｌＬｉｆｅＳｅｉ，２００５，６２：７８４—７９０．
Ｂｉｒａｇｙｎ
Ａ．ＣｕｒｒＰｒｏｔｅｉｎ
Ｐｅｐｔ
Ｓｅｉ，２００５．６：５３—６０．
（上接第２９页）
参考文献
６
ＢｅｎｓａｓｓｏｎＤ，Ｐｅｔｒｏｖ
ＤＡ。

ＺｈａｎｇＤＸ，ｅｔａ１．Ｍｏｌ
Ｂｉｏｌ
Ｅｖｏｉ，２００１，１８：
１
ＡｉｔｋｅｎＡ，ＢａｘｔｅｒＨ，ＤｕｂｏｉｓＴ，ｅｔ
ａ１．ＢｉｏｃｈｅｍＳｏｃｔｒａｎｓ，２００２，３０
２４６—２５３・
（４）：３５１—３６０．
７
ＨａｒｒｉｓｏｎＰＭ，ＨｅｇｙｉＨ．ＢａｌｍｑｕｂｍｍａｎｉａｕＳ，ｅｔ
ａ１．Ｇｅｎｏｍｅ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ，
２Ｙｇ
Ｚ，ｅｔ且１．Ｊ
Ｂｏｉｌ
Ｃｈｅｍ，２００１，２７６：８４０３—８４０８．
２００２ｔ１２（２）：２７２＿２８０・
３ＪａｃｑＣ，ＭｉｌｌｌｅｒＪＲ，ＢｍｗＩｄｅｅＧＧ．ＣｅＵ，１９７７，１２（１）：１０９—１２０．８
ＺｕｅｋｅｒｋａｎｄｌＥ・Ｇｅｎｅｔｉｃａ，２００２，１１５：１０５—１２９・４
Ｈａｒｄ∞ｎＰＭ，ＧｅｒｓｔｅｉｎＭ．Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆＭｏｌｅｃｕｔａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ。

２００２，３１８
９
ＧｌｕｓｍａｎＧｔＳｏｓｉｎｓｋｙＡ，Ｂｅｎ。

ＡｓｈｅｒｘＥ．ｅｔ
ａｌ・Ｇｅｎｏｍｉｅｓ，２０００，６３：
（５）：１１５５．１１７４．
２２７。

２４５・
５
Ａｄｏｌｐｈ
ＫＷ．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓ
Ｒｅｓ
Ｃｏｍｍｕｎ，１９９９，２５９：５２７—５３５．
甜砣
＂Ｍ
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