紫外分光光度法快速测定废菌丝体中麦角甾醇的含量

剧烈震荡 15 min，再将提取液转移至分液漏斗中静
置 2 h。待提取液分层后吸取上层萃取液用 0.45 μm
滤膜过滤，即得供试品溶液。
1.3.3 废菌丝体中麦角甾醇含量的计算
根据标准曲线和稀释倍数按下式计算出废菌
丝体中麦角甾醇含量［8］。
C（%）＝K
æ è
W·V M
ö ø
×100
式中：C——废菌丝体中麦角甾醇含量，%；
第 57 卷（总第 223 期）
李南臻等：紫外分光光度法快速测定废菌丝体中麦角甾醇的含量
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吸光度（Abs）
1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2
0.005
0.010 0.015 0.020 麦角甾醇浓度（mg/mL）
0.025
图 2 麦角甾醇标准曲线
Fig.2 Standard curve of ergosterol
Fig.1 Ergosterol standard absorption of UV scan
2.2 标准曲线的绘制 分别精密吸取“1.3.1”项配置的各浓度标准溶
液于比色皿中，在波长 282 nm 下分别测定各标准溶 液的吸光度，以吸光度为纵坐标，麦角甾醇浓度为 横坐标，绘制麦角甾醇标准曲线如图 2，计算回归方 程 Y＝37.68X＋0.035 8，相关系数 R2＝0.999 79，麦
参考谢宗良［8］的方法并优化，取少量废菌丝体， 用去离子水洗涤三遍，洗去表面残留发酵液后放入 烘干皿，60 ℃烘干至恒重后准确称取 0.100 0 g 转移 到 250 mL 的圆底烧瓶中，加入 2 mL 50%的 NaOH 和 1.5 mL 无水乙醇轻轻混匀。将圆底烧瓶放在调温电 热套上 85 ℃皂化冷凝回流 3 h。回流结束待温度冷 却至室温后，加入 25 mL 二氯甲烷，塞紧圆底烧瓶并
BSA124S 电子天平，赛多利斯科学仪器（北京） 有限公司；DHG-9076A 电热恒温鼓风干燥箱，上海 精宏实验设备有限公司；DZTW 调温电热套，北京市 永光明医疗仪器有限公司；501A 型超级恒温器，上 海实验仪器厂有限公司；TU-1810 紫外可见分光光 度计，北京普析通用仪器有限责任公司。 1.2 材料
收稿日期：2021-03-08 基金项目：酶资源四川省科技资源共享服务平台（2020JDPT0018） 作者简介：李南臻（1990-），男，硕士研究生，工程师。研究方向：微生物与生化药学。 *通信作者
158
2021 年第 3 期
目前工业上主要是从酵母菌中提取制备麦角 甾 醇 ，而 本 实 验 室 结 合 实 际 生 产 拟 从 生 产 曲 酸 的 废菌丝体中提取麦角甾醇。曲酸主要由米曲霉发 酵制得，米曲霉废菌丝体是生产曲酸的副产物［6］， 本研究优化并确定了快速可行的麦角甾醇的检测 方法。目前大多采用高效液相色谱法测定麦角甾 醇［7］，但 是 此 方 法 设 备 费 投 入 大 ，且 运 行 成 本 高 、 操 作 繁 琐 、耗 时 。 本 论 文 分 析 比 较 了 紫 外 分 光 光 度 法［8］快 速 测 定 废 菌 丝 体 中 麦 角 甾 醇 的 优 势 ，如 设备投入低，操作简单、快捷，准确度高等，为后续 优化提取工艺提供了切实可行的快速检测手段， 有利于节约时间和资源。 1 材料与方法 1.1 仪器
李南臻等：紫外分光光度法快速测定废菌丝体中麦角甾醇的含量
Food and Fermentation Sciences & Technology 第 57 卷（第 3 期） Vol.57，No.3
紫外分光光度法快速测定废菌丝体中麦角甾醇的含量
李南臻 1，2，曾志刚 1*，王 刚 2，万玉军 2，陈沿言 1
Rapid Determination of Ergosterol in Waste Mycelium by UV Spectrophotometry
LI Nan-zhen1，2，ZENG Zhi-gang1*，WANG Gang2，WAN Yu-jun2，CHEN Yan-yan1
（1.Antibiotics Research and Re-evaluation Key Laboratory of Sichuan Province，Sichuan Industrial Institute of Antibiotics， School of Pharmacy，Chengdu University，Chengdu Sichuan 610106，China；
迅速精确称取麦角甾醇标准品 0.005 2 g，快速 转移至 200 mL 棕色容量瓶中，以二氯甲烷为溶剂溶 解并定容至刻度配制成 0.025 mg/mL 的标准溶液，然 后分别精密吸取 2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10 mL 置于 10 mL 棕色容量瓶中定容配制成 0.005 mg/mL、 0.010 mg/mL、0.015 mg/mL、0.020 mg/mL、0.025 mg/mL 麦角甾醇标准系列溶液，上述溶液 4 ℃保存。 1.3.2 供试品溶液配制
2.904
算麦角甾醇含量的 RSD 值为 1.03%（见表 2），表明麦 角甾醇供试品溶液在 10 h 内稳定性较好。
表 2 稳定性实验结果 Tab.2 Results of stability experiments
相对标准偏差
时间（h） 吸光度 麦角甾醇含量（%）
RSD（%）
0
0.439
2.795
2.Sichuan Food and Fermentation Industry Research & Design Institute Co.，Ltd.，Chengdu Sichuan 611130，China）
Abstract： In order to quickly determine the content of ergosterol in waste mycelium， this paper examined the ultraviolet spectrophotometry. The extraction solvent was dichloromethane. The calibration curve was linear over the concentration range from 0.005 to 0.025 mg/mL， with a correlation coefficient of 0.999 79. The average recovery was 98.87% ～103.65% ， and the relative standard deviation （RSD） range was 2.03% ～3.07% . The sample was stable within 10 hours. This method has the characteristics of simple equipment operation and rapid detection，which are suitable for immediate detection. The method has good safety，precision and stability，and can be used for the rapid determination of ergosterol in waste mycelium. Key words：Aspergillus oryzae；waste mycelium；ergosterol；uv spectrophotometry doi：10.3969/j.issn.1674-2.781
4
0.436
2.775
1.03
6
0.433
2.754
8
0.431
2.740
10
0.428
2.719
2.5 重复性试验［10-11］ 按 照“1.3.2”项 的 方 法 精 密 称 取 干 废 菌 丝 体
0.100 0 g 共 6 份，制备 6 份废菌丝体供试品溶液作 为重复性试验样品，稀释 10 倍后在 282 nm 波长下 分别测定吸光度，代入标准曲线计算各提取液中麦 角甾醇浓度，代入含量公式计算得到的废菌丝体中 麦 角 甾 醇 的 平 均 含 量 为 2.794% ，重 复 性 试 验 的 RSD 值为 2.75%（见表 3），表明该方法测定麦角甾 醇重复性良好。
（1. 抗生素研究与再评价四川省重点实验室，四川抗菌素工业研究所，药学院，成都大学，四川成都 610106； 2. 四川省食品发酵工业研究设计院有限公司，四川成都 611130）
摘 要：为了快速测定废菌丝体中麦角甾醇的含量，本文对紫外分光光度法进行了考察。以二氯甲烷为提取溶剂，
麦角甾醇在 0.005～0.025 mg/mL 范围内线性关系良好，相关系数为 0.999 79，平均回收率为 98.87%～103.65%，RSD
K——稀释倍数；
W——试样中麦角甾醇浓度（标准曲线查出），
mg/mL；
V——萃取溶剂二氯甲烷体积，mL；
M——废菌丝体重量，mg。
2 结果与分析
2.1 麦角甾醇紫外波普分析
参考柯亚萍的论文［9］，取适量浓度的麦角甾醇
标准品，在 250～300 nm 的波长范围内测定其紫外
吸收曲线，结果如图 1 所示。由图 1 可以看出麦角
甾醇标准品在 271 nm、282 nm、293 nm 三处有特征吸
收峰，且最大吸收峰在 282 nm，因此选取 282 nm 作
为紫外分光光度法的测定波长。
吸光度（Abs）
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0 250 260 270 280 290 300 波长（nm）
图 1 麦角甾醇标准品紫外吸收曲线
表 3 重复性实验结果 Tab.3 Results of repeatability experiments
值为 2.03%～3.07%，样品在 10 h 内稳定。本方法具有设备操作简便、检测快速的特点，适用于即时检测，在安全性、
精密度和稳定性方面良好，可用于废菌丝体中麦角甾醇的快速测定。
关键词：米曲霉；废菌丝体；麦角甾醇；紫外分光光度法
中图分类号：TS207.3
文献标识码：A
文章编号：1674-506X（2021）03-0157-0004
米曲霉废菌丝体来源于成都金开生物工程有 限 公 司 生 产 曲 酸 副 产 物 ；麦 角 甾 醇 标 准 品（含 量 96.2%，批号 111845-201604），中国食品药品检定研 究院；微孔滤膜（0.45 μm）；无水乙醇、二氯甲烷、氢 氧化钠均为国产分析纯。 1.3 实验方法 1.3.1 标准溶液的配置
角甾醇在 0.005～0.025 mg/mL 范围内与吸光度呈良 好线性关系。 2.3 紫外分光光度法的精密度试验［10-11］
按 照“1.3.2”项 的 方 法 精 密 称 取 干 废 菌 丝 体 0.091 2 g，制备废菌丝体供试品溶液，稀释 10 倍在 282 nm 波长下连续取样分析 6 次，得到各次测定的 吸光度，利用建立的标准曲线计算每次测得供试品 溶液中的麦角甾醇浓度，代入废菌丝体麦角甾醇含 量公式计算得到每次测得的麦角甾醇含量，并计算 麦角甾醇含量的 RSD（n＝6）值为 0.44%（见表 1），表 明紫外分光光度法精密度良好。
表 1 精密度实验结果 Tab.1 Results of precision experiments
样品 吸光度 麦角甾醇含量（%） 相对标准偏差 RSD（%）
1 0.431
2.875
2 0.432
2.882
3 0.433
2.890
0.44
4 0.433
2.890
5 0.430
2.868
6 0.435
麦角甾醇又称麦角固醇，是一种甾类化合物， 为白色粉末或小叶晶，主要存在于酵母菌、霉菌等 真菌的细胞膜中［1-2］，能调节膜的流动性、通透性并 维持细胞膜结构，是真菌细胞膜中重要的特异性成 分［2］。麦角甾醇是制药工业中一种重要的医药原
料，可用于合成维生素 D2、芸苔素内酯和一些类固 醇激素类化合物［3］，例如可的松、黄体酮，另外还用 于合成一些抗癌新药［4］，具有很高的经济价值。麦 角甾醇转化为维生素 D2也可作为饲料添加剂，可提 高家禽的产卵率和孵化率［5］。