荧光分光光度计课件资料
荧光分光光度计
第七章荧光分光光度计物质的分子吸收了照射光的能量后,处于基态最低能量级的分子被激发到电子激发态的各个振动能及。
被激发的分子与周围的分子碰撞,并把部分能量以热能的形式传给周五的分子,自己降落到单线第二电子激发态的最低振动能级。
然后,由此最低振动能级向基态的各个振动能级跃迁,同时以发光的形式释放出其能量,这种光即称为荧光。
荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。
其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。
通过对这些参数的测定,不但可以做一般的定量分析,而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化,从而阐明分子结构与功能之间的关系。
荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190~650nm,发射波长扫描范围是200~800nm。
可用于液体、固体样品(如凝胶条)的光谱扫描。
1.荧光分光光度计的基本原理由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中,激发样品中的荧光物质发出荧光,荧光经过滤过和反射后,被光电倍增管所接受,然后以图或数字的形式显示出来。
物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出,从而产生荧光.不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征,这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱,因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
在溶液中,当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似,荧光分析通常也采用标准曲线法进行。
2.荧光分光光度计的装置测试荧光的仪器主要由五个部分组成:光源、激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。
实验九荧光分光实验PPT课件
结果分析
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05
实验总结与思考
03
提高实验技能和数据分析能力
在实验过程中,我学会了正确操作实验设备、处理数据和绘制图表,提高了实验技能和数据分析能力。
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结果分析
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结合实验目的,对数据分析结果进行解释,得出实验结论。
对实验过程中可能产生的误差进行分析,以提高实验结果的准确性。
数据整理
数据分析
结果解释
误差分析
04
结果分析
结果分析
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荧光分光光度计课件
定期校准与维护
定期校准
按照仪器说明书要求,定期进行校准,以确保仪器准确性。
维护保养
根据仪器使用情况,定期进行保养,包括清洗光学元件、更换滤光 片、清洁机械部分等。
联系专业人员
如遇到无法解决的问题,应联系专业人员进行维修。
05 荧光分光光度计的实验技术与应用
CHAPTER
荧光光谱的测量技术
荧光光谱的测量技术
激发光谱的测量
通过测量荧光物质在不同波长激发光下的 发射光谱,可以了解荧光物质的性质和结 构。
通过改变激发光的波长,测量荧光发射光 谱的变化,可以得到荧光物质的激发光谱 。
发射光谱的测量
同步荧射光谱。
特点
具有高灵敏度、高分辨率和高精度等 优点,广泛应用于化学、生物学、医 学和环境科学等领域。
工作原理
激发光源
通常采用高压氙灯或激光器作为激发 光源,能够发出紫外或可见光。
激发光照射样品
激发光照射到样品上,使样品中的荧 光物质吸收光能并跃迁至激发态。
荧光发射与光谱分离
荧光物质从激发态回到基态时释放出 荧光,通过光谱分离技术将不同波长 的荧光分开。
数据采集与分析
数据采集
启动测量程序,开始采集数据,记录荧光光谱图及相关参数。
数据处理
对采集到的数据进行平滑处理、背景扣除等操作,以提高数据质量。
结果分析
根据测量需求对数据进行进一步分析,如荧光量子产率计算、动力 学分析等。
04 荧光分光光度计的维护与保养
CHAPTER
日常保养
清洁仪器表面
每天使用后,用软布擦拭仪器表面,保持清洁。
通过比较不同浓度的标准荧光物质的量子产率,可 以得到荧光物质的量子产率。
原子荧光分光光度计讲义PPT文档共17页
2、原子荧光法测定农产品中汞
1)前处理:按照GB/T5009.17-2003的方法,取样品0.3-0.5 克,不要超过0.5克。置于微波消解管中,加入5ml硝酸, 1ml过氧化氢,拧紧消解管盖子,放置30-60min,再置于 微波消解仪中,分三步完成消解步骤。第一步让温度升至 100度左右保持10分钟,第二步让温度升至150度保持10 分钟,第三步让温度升至180度保持5分钟。完成消解后, 取出冷却,用0.02%的重铬酸钾溶液转移至25ml比色管中, 并用其定容。摇匀后上机测定。
(四)原子荧的干扰
原子荧光的主要干扰是猝灭效应。这种 干扰可采用减少溶液中其它干扰离子的浓 度避免。
其它干扰因素有光谱干扰、化学干扰、物 理干扰等。
克服干扰的途径有加入络合剂、降低硼氢化 钾浓度、加入氧化还原电位高于干扰离子 的元素、分离干扰元素等方法。
(五)氢化物原子荧光分光光度法
氢化物原子荧光分光光度法的原理是待测元 素和强还原剂(硼氢化钾)反应后,以气态的形 式进入原子化器,经特制的光源激发后再返回至 基态或低能态,返回时发射出特种波长的光,这 种光强和元素的浓度成正比。
(2)谱线简单、干扰少。
(3)分析校准曲线线性范围宽,可达3 ~ 5 个数量级。
(4)可以多元素同时测定
(七)氢化物原子荧光分光光度计的基本组成部分:
1.激发光源.
是原子荧光分光光度计的主要组成部分,理想的光源应有发射强度高、无自吸;稳定性好, 噪声小;发射谱线窄且纯度高、价格便宜且使用寿命长等条件。目前有空心阴极灯、无 极放电灯、等离子体光源、激光光源等,其中空心阴极灯应用最为广泛。
荧光分光光度法PPT课件
若返回到较原能级稍高或稍低的振动能 级上,辐射出较激发光稍长或稍短的光,称 为拉曼散射。
第15页,本讲稿共73页
(7)表面吸附 在稀溶液中(<1g/mL),表面吸附尤
为明显,特别是有机溶剂,此吸附更为厉害。 溶质常常吸附在瓶子、吸管和吸收池等壁上。
芳香族化合物易吸附,并且所用溶剂的 极性越小,吸附就越大。
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(3) 试样池
荧光分析用的试样池需要用低荧光材料制 成。常用石英为材料。
试样池的形状以散射光较小的方形为宜。有 的荧光计附有恒温装置,便于控制温度。
测定低温荧光时,在石英池外套上一个盛有 液氮的石英真空瓶,以便降低温度。
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(4) 检测器 荧光的强度比较弱,因此要求检测器有
般都经过校正,但若仪器的光学系统和检测 器有所变动,或在较长时间使用后,或在重 要部件更换之后,有必要用汞弧灯的标准谱 线对单色器的波长刻度重新校正,特别在精 细分析工作中尤为重要。
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(3) 激发光谱和荧光光谱校正 用荧光分光光度计测得的激发光谱或荧
光光谱,往往是表观的,不是真实的。 其原因很多:单色器波长刻度不够准确;
仪器中的第二单色器称为荧光单色器。 它的作用是消除溶液中可能共存的其它光线 的干扰,以获得所需要的荧光。
第18页,本讲稿共73页
(1)光源 光源应具有强度大,适用波长范围宽两
个特点。常用光源有高压汞灯和氙弧灯。
❖ 高压汞灯常用在荧光计中,发射强度大而 稳定,但不是连续光谱。高压汞灯的平均寿 命均为1500~3000h,荧光分析中常用的是 365nm、405nm和436nm三条谱线。
❖ 采用凹面全息光栅的大孔径异面光学系 统,可减少杂散光的影响,并使检测限达 5pg/mL;
荧光分光光度计的应用ppt课件
3.2精细度 对两种模拟水样作精细度实验, 每个水样平行测定 6 次, 每次进样 2 0μ L, 结果见表 1
光法等, 但是这些方法都是对砷、 汞分别进展测定。采用 AF S- 23 0 双道原 子荧光光度计建立同
时测定的方法。
2 实验部分
2.1实( V) 被复原成 A s ( Ⅲ) 。样品中的 As( Hg) 与硼
2.2 仪器与试剂 AF S - 230a 型双道原子荧光光度计, 规范溶液 A s 1 mg/ ml, Hg 1 mg/ ml;
1 背景引见
苯并和( a石) 油芘的是多环芳烃中致癌性最强的化合物之一。环境中多环芳烃主要来自煤
熄灭以及裂解过程。在热电厂、 都有多环芳
煤气厂、
焦化厂以及石油化工企业的消费中,
烃排定入Ⅲ大类气水, 这些企业的废水中也都含有多环芳烃。我国地表水环境质量规范规
苯并要( a意) 义芘。含量为 2.8×10-6mg/ L。因此, 对水体中苯并( a) 芘的日常检测具有重
荧光分光光度计的运用
一、 荧光分光光度计
荧光分光光度计既可用于定量分析, 也可用于测绘激发光谱和荧光光谱。 第一单色器选择激发光波长〔> 250nm的紫外光〕,故称为激发单色 器。第二单色器〔荧光单色器〕与 激发光入射方向垂直,并选择荧光 波长,可提高方法的选择性和准确 度。
荧光分光光度法直接测定天然水中的酚
实验部分 1.仪器和主要试剂 日立 F一3000荧光分光光度计、规范酚溶液、0.200mol/L
第5章荧光分光光度计课件
牛蒡子
黄连
元胡
浙贝母
4
可用荧光鉴别的中药
黄连:根茎折断面在紫外光下显金黄色荧光 浙贝母:粉末置于紫外光下呈亮淡绿色荧光 元胡:切面或粉末置于紫外光下,亮黄色荧光 牛蒡子:粉末,绿色荧光 麻黄:纵剖面,边缘显亮白色荧光,中心显棕 色荧光 甘草:粉末显黄色荧光 黄柏:断面呈亮黄色荧光
2.3、样品池
多为用石英制成的厚度为1cm的长方形体, 四面均为磨光面。所以使用时不能用手拿四面, 应拿对角侧棱。--区别于紫外-可见分光光度计
样品池
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荧光分光光度法 2、荧光分光光度计的基本结构 2.4、检测器 荧光分光光度计常用的是光电倍增 管 2.5、数据记录和处理系统: 利用计算机将测量到的荧光强度显 示出来。
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第五章 荧光分析法
1
荧光分光光度计
2
荧光分光光度法 1、荧光分光光度法简介
荧光分光光度法
当用紫外光照射某种物质时,
这些物质会发出各种颜色和 不同强度的光,当紫外光停 止照射时,这种光线也随之消失。
我们这种光线称为荧光。依据物质所发荧光的颜色和 强度建立起来的定性和定量的分析方法称为荧光分 光光度法。
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荧光分光光度法 2、荧光分光光度计的基本结构
荧光分析仪器的结构和主要部件:
光源
激发单色器
样品室
发射单色器
显示装置
检测器
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荧光分光光度法 2、荧光分光光度计的基本结构 2.1、光源: 对光源的要求是必须有足够的强度且 具有连续光谱,其波长范围能满足仪器 的需要。即:具有光强度大、适用波长
范围宽两个特点。
先多用氙灯。
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荧光分光光度法.精选PPT
优选第八章荧光分光光度 法
§ 8- 1 概述
一、分,电子从基态跃迁到激发 态,以光辐射的形式从激发态回到基态,这种现象称为分 子发光,在此基础上建立起来的分析方法为分子发光分析 法
较高激发态
吸收能
光辐射
量受激
退激
基态
分子在退激过程中以光辐射形式释放能量
VR S2
IC VR
S1
VR:振动驰豫 IC:内部转换 ISC:系间窜跃
分子中电子受激跃迁到激发态后,处于激发态的分子是不稳定的,去激 返回到较低激发态或基态时有两种方式:无辐射去激和辐射去激
2. 无辐射去激——不伴随发光现象的过程叫无辐射去激,体系内的多余的 能量以热的形式释放。包括:
内部转换(IC)—相同的多重态之间的转换 S-S
系间窜跃(ISC)—不同的多重态之间的转换 S-T
去激发光 * * n
基态
1. 电子自旋状态的多重性
大多数分子含有偶数电子,基态分子每一个轨道中两个电
子自旋方向总是相反的 ,处于基态单重态。用 “S0”
表示 ;当物质受光照射时,基态分子吸收光能产生电子 具有共轭体系的芳环或杂环化合物, 电子共轭程度越大,越易产生荧光; 环越多,共轭程度越大,产生荧光波长越长,发射的荧光强
振动驰豫(VR)—同一电子能级中,从较高振动能级到较低振动能级 的过程
外部转移—指激发态分子与溶剂分子或溶质分子的相互作用及能量转移, 使荧光或磷光强度减弱或消灭
发生系间窜跃电子需转向,S1—T1间进行,比内部转换困难
VR
VR:振动驰豫
S2
IC:内部转换
IC
ISC:系间窜跃
VR 计算 I前/I后
T1