自体和异体血液在全血分离实验体系中对免疫细胞因子的影响

自体和异体血液在全血分离实验体系中对免疫细胞因子的影响

来源：岁月联盟

作者：

时间：2010-06-28

作者：夏晓峰郭峰钱宝华花美仙

【摘要】目的：运用系统血液免疫反应分离实验体系，探讨在抗原激活的情况下异体血细胞对反应体系中细胞因子含量水平影响的变化。方法：以 S180 作为激活抗原，加异体血细胞与自体血细胞对比，37℃孵育 1 h，取上清液用ELISA 法测定 IL-8、TNF -α、IFN -γ的分泌量。结果：IL-8 的分泌量异体红细胞实验组〔（133.92±135.85）%〕与自体红细胞对照组

〔（37.93±27.74）%〕相比明显上升（P < 0.05）；TNF -α的分泌量异体红细胞实验组〔（8.31±3.57）%〕与自体红细胞实验组〔（16.55±10.38）%〕相比明显下降（P < 0.05）；IFN -γ分泌量无明显差异。结论：异体红细胞对自体血液免疫反应细胞因子的分泌具有双向调控作用，提示异体输血对受者的血液免疫反应具有干扰和失平衡的不良影响。

【关键词】淋巴细胞；红细胞；抗原；免疫调控；细胞因子

Effects of Autogenetic and Allogenous Blood on C ytokines by Means of Natural Isolated Experimental Syst em

〔Abstract〕 Objective Autogenetic and allogenous erythrocytes regulate the immunological reactions

activated by antigens by means of natural isolated ex perimental system, to observe the changes of cytokines.

Methods Using inactivated S180 as activating

antigen and autologous plasma as reaction substratum, A fter incubation an hour in 37℃, supernate fluid is suspended and detected the change of IL-8、TNF -

αand IFN -γ

by ELISA assay. Results The secretion of IL-8 of allogenous erythrocytes experimental group

〔(133.92±135.85)%〕

is much higher than that of autogeneic erythrocytes c ontrol group

〔(37.93±27.74)%〕 (P < 0.05), The level of TNF -α of allogenous erythrocytes experimental group

〔(8.31±3.57)%〕

is much lower than that of autogeneic erythrocytes experimental group〔(16.55±10.38)%〕

(P < 0.05); the expression of IFN -γ

红细胞在天然免疫防御中发挥着重要作用，红细胞在补体系统天然免疫反应的参与下有黏附和调理抗原、清除循环免疫复合物、调控淋巴细胞表达免疫分子和细胞因子等作用。有实验证明在库存血中有多达 14 种以上炎性细胞因子，中性粒细胞弹性蛋白酶和 TNF -α浓度的增加在临床的异体输血时都可造成免疫功能的不利影响[1]。结合了补体的病原体可以被红细胞补体受体免疫分子黏附，激发对致病原发生连锁的系统血液天然免疫反应，同时红细胞还可参与相关免疫细胞分泌细胞因子的调节。

本实验研究是运用全血分离实验体系[2]，通过 ELISA 的方法测定上清液中相关细胞因子 IL-8、TNF -α、IFN -γ分泌量在实验体系反应中的变化，探讨其可能存在的临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3 分离实验体系的设计和建立

实验共分 6 只试管，以自体或异体血浆作为反应基质，分离实验组以灭活腹水癌细胞 S180 作为激活抗原，其对照组加 NS 作为对照，即（注：* 为加异体血浆组）：①0.1 mL 异体 RBC+0.1 mL S180+0.2 mL 自体 WBC+0.3 mL 异体血浆 *（加异体血浆）。②0.1 mL 异体 RBC+0.1 mL S180+0.2 mL 自体 WBC+0.3 mL 自体血浆（加自体血浆）。③0.1 mL 异体 RBC+0.1 mL NS+0.2 mL自体 WBC+0.3 mL 异体血浆 * （加异体血浆）。④0.1 mL 异体 RBC+0.1 mL NS+0.2 mL 自体 WBC+0.3 mL 自体血浆（加自体血浆）。⑤0.1 mL自体RBC+0.1 mL S180+0.2 mL 自体 WBC+0.3 mL 自体血浆（加自体血浆）。⑥0.1 mL 自体 RBC+0.1 mL NS+0.2 mL 自体 WBC+0.3 mL 自体血浆（加自体血浆）。

将上述 6 只试管置于37℃水浴箱中温育 1 h，加盖，中间摇匀 2 次，间隔 20 min；完成后，2 000 r/min 离心 5 min；小心取出上清液约

400 L 装入安瓿管中，编号，置于 -20℃冰箱中冷藏待测。

1.4 上清液细胞因子 IL-8、TNF -α、IFN -γ的检测

实验前 20 min 从冰箱中取出试剂盒和待测样品，平衡至室温（25℃），96 孔板用包被缓冲液稀释的试剂，每孔加 100 L，4℃过夜，洗板 3 次；加 100 L 待检样品上清液于已包被的反应孔中（同时做空白、阴性及阳性孔对照），37℃孵育 1 h，洗板 3 次；于反应孔中加入新鲜稀释的 streptavidin-HRP 100 L，室温下孵育 20 min，洗板 3 次；于各反应孔中加入临时配制的 TMB 底物溶液 100 L，避光反应 20 min 使其显色；于各反应孔中加入 2 mol/L 硫酸 100 L 终止反应；在 ELISA 酶标检测仪上，于 450 nm 处，以空白对照孔调零后测各孔 A 值，绘制标准曲线，并比较各孔实测值。

1.5 统计学处理

数据以x±s 表示，统计学处理采用 t 检验或方差分析，P < 0.05 为差异显著。

2 结果

2.1 IL-8、TNF -α、IFN -γ分泌量（pg/mL）的变化

在 S180 激活情况下，异体红细胞能够对自体血液免疫反应的细胞因子发生调控作用。其中，IL-8 的分泌量异体红细胞实验组 *

〔（133.92±135.85）%〕与自体红细胞对照组〔（37.93±27.74）%〕相比表