信号转导因子her2在肾癌中的表达及其意义

华中科技大学同济医学院博上学位论史
阳性细胞所占比例（１０％，（＋）１０％一３０％，（＋＋）３１％．６０％，（＋＋＋））６１％（图２）。

１．２．４：统计学方法：全部数据用ＳＰＳＳｌ０．０软件包进行统计处理。

ＨＥＲ２蛋白的表达和ＭＲＰ．１表达采用卡方检验，ＨＥＲ一２蛋白与ＭＲＰ．１表达问的相关性研究采用ＲｘＣ列联表的等级相关检验，生存率曲线采用Ｋａｐｌａｎ．ｍｅｉｅｒ法绘制采用Ｌｏｇ—ｒａｎｋ检验。

图１ＨＥＲ２在肾痈中的表达ＨＥ×４００图２ＭＲＰｌ在肾癌中的表达ＨＥ×４００
２．结果
５９例标本中ＨＥＲ．２阳性表达２５例（４２．４％），ＭＲＰｌ阳性表达３２例（５４．２％）与肾癌组织类型、肿瘤大小、年龄、分化程度、术后化疗等关系见表３。

４３例获得随访，随访时间１～５年。

中位随访时间４７个月（４—６３月），５年生存时间为６３．７％，远处转移率为１２．４％
２．１、ＨＥＲ２、ＭＲＰｌ表达与肾细胞癌分级、分期的关系
表１肾癌病理类型与正常组中ＨＥＲ２、ＭＲＰｌ的表达
从表１中可以看出ＨＥＲ．２在肾癌各组织类型中的阳性表达无显著性差异，ＭＲＰｌ在混合细胞癌表达率略高，但与其它各组比较无显著性差异，同时在混合细胞癌中＋＋＋级表达明显增高，与其他各组有差异（Ｐ＜Ｏ．０５）。

多个实验组与对照组比较用Ｄｕｎｎｅｔｔ检验。

用ＳＰＳＳｌ０．０统计软件包进行统计学处理，Ｐ≤Ｏ．０５认为有显著性统计学意义。

二结果：
２．１Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ对ＡＣＨＮ细胞的杀伤抑制作用
２．１．１不同浓度的Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ对肾癌细胞株的杀伤抑制作用
表１Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ对肾癌细胞株的杀伤抑制作用
ＴａｂｌｅｌＴｈｅｋｉｌｌｉｎｇａｎｄｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｗａｓｍｚｕｍａｂｏｉｌｒｅｎａｌｃａｒｃｉｌｌＯｍａｃｅｌｌ
由表ｌ可见，浓度较低（５肛咖１）时，Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ对肾癌细胞株的抑制作用不明显，随着浓度增加，抑制作用开始显现，并逐渐增强，８０１１９／ｍｌ时，抑制率达５８．５９％，呈剂量效应关系，５０％药物抑制率（ＩＣ。

）为４６．４ｐ．ｇ／ｍｌ。

ＩＬ．２在较低浓度时（５００ｕ）已具有明显的杀伤抑制作用，至Ｕ５０００ｕ时抑制率达９９．３６％，ＩＣｍ为１８４７ｕ（数据未列出）。

２．１．２ＴｒａｓｔｕｍＬｍａｂ联合ＩＬ．２对ＡＣＨＮ细胞杀伤抑制时效的观察
１２０
１００
８０
６０
４０
２０
０
６１２２４３６４８７２
时间（小时）
表２不同药物组对ＡＣＨＮ生长抑制的比较
Ｔａｂｌｅ２ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｖａｒｉｏｕｓｄｒｕｇｇｒｏｕｐｓｏｎｇｒｏｗｔｈｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＡＣＨＮ
由表２可见：单纯用Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ组或ＩＬ一２组与Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ联合ＩＬ一２药物浓度的ＩＣ。

对肾癌细胞株的抑制作用。

药物作用６ｈ后，各组均出现抑制现象，随着时间延长，抑制率也渐增加，但联合用药组效果最佳，４８ｈ抑制率达８５．５％，基本呈时间效应关系，其最佳作用时间为４８ｈ。

由以上图表分析各组之间差异有显著性，并且随着药物浓度的增加对肾癌细胞株的杀伤效果越明显。

２．２Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ对ＡＣＨＮ细胞迁移运动能力的影响
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华中科技人学旧漭医学院博卜学位论文表５用药前后ＨＥＲ２经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测结果
Ｔａｂｌｅ５ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇｗｊｔｈｄｒｕｇｓｉｎｖｅｒｖｅｎｔｉｏｎ
１．用药前２Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ阻断后３．白介２干预４．Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ＋ＩＬ－２联合干预后
从上图可以看出，经药物处理后，各组中ＨＥＲ２蛋白含量均有明显下降。

Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ阻断后或ＩＬ一２干预后ＨＥＲ２蛋白含量就有所下降，而联合用药后，ＨＥＲ２蛋白含量下降明显（Ｐ＜Ｏ．０５）
讨论
ＨＥＲ２或ｎｃｕ，是原癌基因，定位于染色体１７ｑ２１。

其表达产物分子量为１８５ＫＤ的单链跨膜糖蛋白，称为ｐ１８５。

细胞内段（ＩＣＤ）具有酪氨酸激酶活性，是一种受体酪氨酸激酶，属于表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）家族，也称为ＨＥＲ２或ＥｒｂＢ２家族，它们在细胞信号转导中发挥重要作用，是细胞生长、分化及存活的重要调节者。

因其能在肿瘤细胞膜表面表达，因而对它的检测可作为肿瘤转归的标志之一，并且它已作为一种抗肿瘤治疗的靶点而日益受到重视ｉ¨。

ＨＥＲ２／ｎｅｕ过度表达也增加了癌细胞的转移能力【２】。

Ｈｅｒ２／ｎｅｕ基因过度表达则容易出现转移和复发。

ＨＥＲ２／ｎｅｕ的过度表达通过启动多种转移相关机制而增加转移能力，包括细胞迁移率、体外侵袭力、Ｉｖ型胶原酶活性、实验性肺转移等，为肿瘤转移和复发的一个独立危险因素，并且对化疗耐药。

ＨＥＲ２／ｎｅｌｌ蛋白是癌症主动免疫的理想靶点，为我们临床治疗肾细胞癌提供了一种有效的方法。

针对人表皮生长因子受体２（ｈｕｍａｎｅｐｉｄｅｒｍａｌｒｅｃｅｐｔｏｒ２ＨＥＲ２）高表达的基因靶向药物Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ其高效、低毒、与化疗药物高兼容性的优点成为目前生物治疗的重要角色【３】。

作为一种非细胞毒性的单克隆抗体针对高表达的ＨＥＲ２／ｎｅｌｌ基因的拮抗剂。

其拮抗Ｔｈｅｒ２／ｎｅｕ的表达，抑制恶性肿瘤细胞信号的转导，它与具有细胞毒性药物的化疗药伍用，可增强化疗药物的疗效，具有协同作用。

Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ为重组人源性抗Ｈｅｒ２单克
华中科技大学问济医学院博十学位论文赫赛汀对肾癌细胞株的抑制作用不明显，随着浓度增加，抑制作用外始显现，并逐渐增强，８０１ａｇ／ｍｌ时，抑制率达５８．５９％，呈剂量效应关系，ＩＣｍ（５０％药物抑制率）为４６．４斗ｇ／ｍｌ。

ＩＦＮⅡ．２ｂ在较低浓度时（５００ｕ）己具有明显的杀伤抑制作用，至ＵｓＯＯＯｕ时抑制率达９９．３６％，ＩＣｓｏ为１８４７ｕ（数据未列出）。

２．１．２赫赛汀联合ＩＦＮａ．２ｂ对ＡＣＨＮ细胞杀伤抑制时效的观察
由从上图可见：单纯用药组及赫赛汀联合ＩＦＮａ．２ｂ药物浓度的Ｉｃｊ。

对肾癌细胞株的抑制作用。

我们看到，药物作用６ｈ后，各组即出现对肿瘤细胞的抑制现象，随着时间延长，抑制率也渐增强，但联合用药组抑制作用最强，４８ｈ抑制率达８５．５％，基本呈时间效应关系，其最佳作用时间为４８ｈ。

随着药物浓度的增加对肾癌细胞株的杀伤效果越明显。

２．２赫赛汀对ＡＣＨＮ细胞迁移运动能力的影响：经赫赛汀处理后，各组细胞过河时间明显延长，与对照组比较，１０“ｇ／ｍｌ组延长２４．７８％，８０９９／ｍｌｌ；且蔓垂．长１６０％：大于１２０９９／ｍｌ组７２ｈ仍未见细胞完全过河。

结果表明，赫赛汀可明显抑制肿瘤细胞的迁移运动能力。

！芏主型丝盔兰旦！塑堕堂堕塑！：兰些堡皇２．３赫赛汀对ＡＣＨＮ细胞ＨＥＲ２、Ｙ－ＧＣＳ表达的影响
表１不同药物组对ＡＣＨＮ细胞中ＨＥＲ２、Ｙ．ＧＣＳ阳性百分数的影响
蛋白表达％
组别例数——一——……
ＨＥＲ２Ｙ—ＧＣＳ
对照组６２．８２±３．２０５７．２８±３．６７赫赛汀组（４０ｕｇ／ｍ１）１０３０．７９±２．１５８３１．５３±２．８２＋ＩＦＮｏ．２ｂ组（２０００ｕ／ｍ１）１０２９．３１±１．４０＋２７．４３±２．５６＋赫赛汀组＋ＩＦＮｏ．２组
１０２４．３５±１．２６４１３．６１±２．１５８（４０ｌａｇ／ｍｌ＋２０００ｕ／ｍ１）
＋与对照组比较，Ｐ＜Ｏ．０５
通过表１我们可以了解到对照组肾癌细胞６７ＨＥＲ２、Ｙ．ＧＣＳ大多呈阳性染色，阳性指数分别达（６２．８２±３．２０）％和（５７．２８±３．６７）％；赫赛汀＋ＩＦＮＱ－２ｂ组作用４８ｈ后，ＨＥＲ２、Ｙ．ＧＣＳ阳性表达细胞减少，染色变淡、变浅，阳性指数分别降至（２４．３５±１．２６）％和（１３．６１±２．１５）％，与对照组比较，差异有显著性（Ｐ＜Ｏ．０５）。

２．４ＲＴ—ＰＣＲ检测ＢＥＲ２ｍＲＮＡ在用药前后含量变化
图ｌＨＥＲ２ｍＲＮＡ在用药前后含量变化Array
１．用药前２．Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ阻断后３ＩＦＮａ一２ｂ干预４．Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ＋ＩＦＮｏ．２ｂ联台干预后（３４３ｂｐ处）
２８６ｂｐ处为内参Ｂ—ａｃｔｉｎ
华中科技人学同济医学院博七学位论文
表ｌＴｒａｓｔｕｚｕｍａｂ对肾癌细胞株的杀伤抑制作用
ＴａｂｌｅｌＴｈｅｋｉｌｌｉｎｇａｎｄｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂｏｎｒｅｎａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌ
２．１．２赫赛汀联合ＩＦＮｄ．２ｂ对ＡＣＨＮ细胞杀伤抑制时效的观察
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时间（小时）
表２不同药物组对ＡＣＨＮ生长抑制的比较
Ｔａｂｌｅ２ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｖａｒｉｏｕｓｄｒｕｇｇｒｏｕｐｓｏｎｇｒｏｗｔｈｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＡＣＨＮ由从上图可见赫赛汀联合ＩＦＮａ．２ｂ药物浓度的Ｉｃ５。

对肾癌细胞株的抑制作用。

各组药物作用６ｈ后，即出现抑制现象，随着时间延长，抑制率也渐增强，但联合用药组杀伤抑制作用最强，４８ｈ抑制率达８５．５％，基本呈时间效应关系，其最佳作用时间为４８ｈ。

随着药物浓度的增加对肾癌细胞株的杀伤效果越明显。

２．２赫赛汀对ＡＣＨＮ细胞迁移运动能力的影响：经赫赛汀处理后，各组细胞过河时间明显延长，与对照组比较，ｌＯｐｇ／ｍｌ组延长２４．７８％，８％ｇ／ｍｌ组延长１６０％；大于１２０ｐ．ｇ／ｍｌ组７２ｈ仍未见细胞完全过河。

结果表明，赫赛汀可明显抑制肿瘤细胞的迁移运动能力。