第十六课维生素类药物分析三演示文稿

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E11c%m = 41.0~45.5
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维生素EUV图
第32页,共72页。
(四) TLC法
薄层板 展开剂
显色剂
硅胶G
环己烷 -乙醚(4 :1) 硫酸(105℃ 5′)
VitE Rf = 0.7
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三、特殊杂质 1. 酸度
检查制备过程中引入的游离羧酸,酸碱 滴定法
R2 CH3 H
CH3 H
相对活性 1.0 0.5 0.2 0.1
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生物效价 右旋体 : 消旋体 = 1.4 :10
(天然品) (合成品)
dl-α-生育酚醋酸酯
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一、 结构与性质
苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链
1、易溶于有机溶剂,不溶于水
2、UV
3、酯键 易水解

A. 维生素A B. 维生素B1
C. 维生素C
D. 维生素E
E. 烟酸
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97:81.使用碘量法测定维生素C的
含量,已知维生素C的分子量
为176.13,每1ml碘滴定液
(0.1mol/L) 相当于维生素C
的量为
A. 17.61mg
B. 8.806mg
C. 176.1mg
D. 88.06mg
V(ml) 0.01 1.0 0.98(ml) 0.01020
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四、含量测定
(一)GC法 1、 GC特点
选择性好 灵敏度高 速度快
分离效能好
挥发性低、不 稳定、极性强 →衍生化易受 样品蒸气压限 制
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2、 VitE测定的色谱条件
载气→N2 固定液→硅酮(OV-17)
四、含量测定 HPLC 药典附录 维生素D测定法 共有三法
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第一法 适用于无维生素A醇及其它杂
质干扰时 正相色谱、内标法
1. 色谱条件
色谱柱 硅胶
流动相 正己烷 –正戊醇(997:3)
内 标 邻苯二甲酸二甲酯
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2. 系统适应性试验
维生素D3 光照
对照品

维生素D3 前维生素D3 反式维生素D3 速甾醇D3
VitE HorOH 生育酚 △ 醌型化合物 [O]
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二、 鉴别
(一) 硝酸反应
VitE H75N℃O 153′ 生育酚 生育红 [O]
橙红色
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强氧化剂
H3C HO
HNO3
CH3 O
CH3 C16H33
生育酚
CH3
生育红(橙红色)
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取本品约30mg,加无水乙 醇10ml溶解后,加硝酸2ml,摇 匀,在75℃加热15分钟,溶液应 显橙红色。
C. 碘化铋钾
D. 乙酰丙酮 E. 三氯醋酸和吡咯
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99m:84. 测定维生素C注射液的含量 时,在操作过程中要加入
丙酮,这是为了
A. 保持维生素C的稳定 B. 增加维生素C的溶解度
C. 使反应完全
D. 加快反应速度 E. 消除注射液中抗氧剂的干扰
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98:85. 能发生硫色素特征反应的药物
f2
As
mr f1 ms Ar 2 ms
Ar1
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4. 计算含量 维生素D及前维生素D折算成维生素 D的总量(mi)
mi ( f1 Ai1 f2 Ai2 )ms / As
单位 = 0.025 µg
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第二法 适用于有维生素A醇及其它杂
质干扰时
皂化提取 反相色谱系统分离净化
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药典规定
消耗硫酸铈液(0.01mol/L)≤1.0ml
若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L,
应重新计算硫酸铈的消耗量
设:应消耗硫酸铈液≤ V ml
0.01×1.0 =实际浓度× V
V(ml)
0.01 1.0 硫酸铈实际浓度
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例 Ce(SO4)2 = 0.01020mol/L
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三、杂质检查
维生素D2中麦角甾醇的检查
灵敏度法
维生素D2 Ch.P(2005) 【检查】麦角甾醇 取本品10mg,加90%乙
醇2ml溶解后,加洋地黄皂苷溶液(取洋地黄
皂苷20mg,加90%乙醇2ml,加热溶解制成
)2ml,混合,放置18小时,不得发生浑浊或
沉淀。
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例 取本品0.10g,加无水乙醇 5ml溶解后,加二苯胺试液1滴,用 硫酸铈液(0.01mol/L)滴定,消 耗硫酸铈液(0.01mol/L)不得过
1.0ml。
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(三)限量 ≤2.15%
限量% V T 100% W
限量% 1.0 0.002154 100% 0.1
2.15%
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(二)IR Ch.P(2005)
维生素D2 Ch.P(2005) 【鉴别】(2)本品的红外光吸收图 谱应与对照Hale Waihona Puke 图谱(光谱集452图)一致。
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(三)维生素D2、D3的区别反应
维生素D 与乙醇+硫酸反应 维生素 D2显红色,max在570nm 维生素 D3显黄色,max在495nm
担体→硅藻土或高分子多孔小球
柱温→265℃
检测器→氢火焰离子化检测器(FID)
内标→正三十二烷
n ≥ 500
R≥2
内标法加校正因子
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内标法
供试液(样品+内标) 对照液(对照+内标)
内标物
是样品中不存在的物质 与被测组分峰靠近 能与各组分完全分离 与被测组分的量接近
E. 1.761mg
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97:[121—125](99:[121—125])
可发生以下反应或现象的药物为
A.维生素B1
对照液 精密称取VitE对照品0.2011g 置棕色具塞锥形瓶中,精密加入内
标液10ml,密塞,振摇使溶解,取
1~3ul注入GC仪,测定,计算
供试液 精密称取供试品0.1998g置棕
色具塞锥形瓶中,精密加入内标液
10ml,密塞,振摇使溶解,取1~3ul
注入GC仪,测定,计算
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对照液 A对 0.373
A内
供试液 A样 296513
0.368
A内 805741
VitE% . . % .% . .
本品含C31H52O3应为96.0 ~ 102.0%
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BP GC
内标 正三十二烷
R≥1.4
USP GC 内标 十六酸十六醇酯 R≥1.0
JP HPLC
外标 dl-α-生育酚
100%
100
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(三) JP - RP - HPLC法(外标法)
样品→ dl-α-生育酚
固定相→十八烷基硅烷键合硅胶
流动相→甲醇-水(49 :1)
检测波长→292nm R>2.6
RSD≤0.8%
W生育酚
W对
H样 H对
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(四) RP - HPLC法(外标法)
测定对象→血清中VitA和VitE 固定相→十八烷基硅烷键合硅胶 流动相→甲醇-水(96 :4) 检测波长→ 8′前330nm
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二、鉴别试验
(一)显色反应 1. 与醋酐-浓硫酸反应 Ch.P(2005)
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维生素D2 Ch.P(2005) 【鉴别】(1)取本品约0.5mg,加三氯 甲烷5ml溶解后,加醋酐0.3ml与硫酸 0.1ml,振摇,初显黄色,渐变红色,迅
即变为紫色,最后成绿色。
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生育酚易溶于醇
25滴 10S .
乙醇 水
C、酸性条件 防止Ce(SO4)2的水解
减慢生育酚被O2氧化速度
H2SO4
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4、 含量计算
MVitE = 472
T 0.01 472 2.3(6 mg / ml) 2
含量% V T F 100% W
V 0.00236 C实际 W 25 0.01
铁氰化钾后,再加正丁醇, 显蓝色荧光的是
A. 维生素A B. 维生素B1 C. 维生素C D. 维生素D E. 维生素E
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97:77.既具有酸性又具有还原性的
药物是
A. 维生素A B. 咖啡因 C. 苯巴比妥 D. 氯丙嗪 E. 维生素C
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99m:132.维生素C的鉴别反应,常采 用的试剂有 A. 碱性酒石酸铜 B. 硝酸银
目的 获得待测成分及各种干扰成分色谱峰,
检查分离度是否符合规定
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3. 计算校正因子(对照品为维生素D3)
(1)维生素D校正因子(f1)
内标 对照
进样
f1
f1
As Ar
/ ms / mr
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(2)前维生素D折算成维生素D的校正 因子(f2)
对照品 2,6 二叔丁基对甲酚 通N2,排空气、密塞 90℃、1.5h 冷至室温 内标物 进样
维生素D3 Ch.P(2005) 【鉴别】(1)取本品约0.5mg,加三氯甲 烷5ml溶解后,加醋酐0.3ml与硫酸0.1ml振 摇,初显黄色,渐变红色,迅即变为紫 色、蓝绿色,最后变为绿色。
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2. 与三氯化锑反应 BP 维生素D + 三氯化锑
→橙红色→粉红色 3. 其他显色反应
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(二) 三氯化铁-联吡啶反应
VitE
K△OH
生育酚
Fe3
[O]
对 生育醌
Fe2 联吡啶 红色
第28页,共72页。
H3C HO
CH3 O
CH3 C16H33
生育酚
CH3 3+
Fe [O]
弱氧化剂
对-生育醌
第29页,共72页。
红色
第30页,共72页。
(三)UV法
0.01%无水乙醇中 λmax = 284nm λmin = 254nm
8′后292nm
W样
A样 A对
W对 稀释度 稀释度样
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108.在三氯醋酸或盐酸存在下,经 水解、脱羧、失水后,加入吡 咯即产生蓝色产物的药物应是 A. 氯氮卓 B. 维生素A
C. 普鲁卡因
D. 盐酸吗啡 E. 维生素C
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99:88.中国药典(2000年版)采用 以下何法测定维生素E含量
R≥1.4
第48页,共72页。
(二) 铈量法 1、 原理 利用生育酚的易氧化性
VitE 无水乙醇 溶解 HSO △
生育酚 Ce(SO ) 对 — 生育醌
2、 指示剂
二苯胺(亮黄→灰紫)
还原型 氧化型
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3、 讨论
A、反应速度
分子量较大,反应慢
易被O2氧化
B、溶剂 Ce(SO4)2易溶于水
第43页,共72页。
校正因子:
A内
A内
f相对
W内
W内
A对
A样
W对
W样
A样
A内 A对
W样 W对
A内
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实际工作中的计算方法
A对 A内
K1
A样 A内
K2
VitE%
K2 K1
W对 W样
稀释度 稀释度
100%
第45页,共72页。
例 内标液 取正三十二烷加正己烷溶解 并稀释成1.0mg/ml溶液
按第一法
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第三法 适用于按第二法处理后前维 生素D仍被干扰的样品
第二法净化后样品
对照
维生素D
外标法计算维生素D含量
第19页,共72页。
维生素D2 Ch.P(2005)
【含量测定】 精密称取本品25mg,置100ml
棕色量瓶中,加三甲基戊烷80ml,避免加热 ,用超声处理1分钟使溶解,加三甲基戊烷
第十六课维生素类药物分析三 演示文稿
第1页,共72页。
优选第十六课维生素类药物分 析三
第2页,共72页。
维生素D3(胆骨化醇)
第3页,共72页。
一、结构与性质
1. 溶解性 脂溶性 2. 不稳定性 含多个双健易被氧化,
对酸不稳定
3. 旋光性 性状项下比旋度
4. 显色反应
5. 紫外吸收特征 性状项下吸收系数
至刻度,摇匀;精密量取上述溶液与内标溶
液各5ml,置50ml棕色量瓶中,加正己烷至 刻度,摇匀,作为供试品溶液。照维生素D测
定法(附录Ⅶ K 第一法)测定,即得。
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第五节 维生素E
苯并-二氢吡喃醇
第21页,共72页。
*
*
*
名 称α-生育酚 β-生育酚
γ-生育酚 δ-生育酚
R1 CH3 CH3 H H
2. 游离生育酚的检查
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(一)原理 利用游离生育酚的还原性,
将硫酸铈还原成硫酸亚铈
生育酚 2Ce4 2Ce3 对 生育醌
(二) 试剂 硫酸铈滴定液(0.01mol/L)
二苯胺(亮黄→灰紫)
第35页,共72页。
T CM n
(M生育酚= 430.8)
T 0.01 430.8 2.15( 4 mg / ml) 2
A. 酸碱滴定法
B. 氧化还原法 C. 紫外分光光度法 D. 气相色谱法 E. 非水滴定法
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98:79.中国药典(2000年版)采用
气相色谱法测定维生素E含
量,内标物质为 A. 正二十二烷 B. 正二十六烷
C. 正三十烷
D. 正三十二烷 E. 正三十六烷
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99:77. 下列药物的碱性溶液,加入
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