肾糖颗粒对糖尿病肾病大鼠疗效的实验研究

肾糖颗粒对糖尿病肾病大鼠疗效的实验研究
傅晓骏;熊荣兵;张婷
【摘要】目的通过中药肾糖颗粒对糖尿病大鼠的治疗作用,探讨其临床实验效果.
方法采用高脂饲料喂养+STZ腹腔注射方法制作糖尿病肾病大鼠模型.分为正常对照组、模型对照组、中药治疗组(肾糖颗粒)、西药治疗组(盐酸贝那普利)、中西药
治疗组(肾糖颗粒+盐酸贝那普利),观察各组大鼠治疗前后一般情况,并测定治疗后空腹血糖.24h尿蛋白定量,尿微量白蛋白,α1-微球蛋白、β2-微球蛋白、尿转铁蛋白、尿视黄醇结合蛋白.结果经肾糖颗粒治疗8周后.大鼠一般状况较模型对照组改善较好,体质量增加.空腹血糖,与模型组比较,各治疗组显著降低;24h尿蛋白定量、尿微
量白蛋白、α1-微球蛋白、β2-微球蛋白,各治疗组也分别显著低于模型组;尿转铁蛋白、尿视黄醇结合蛋白,各治疗组均分别显著低于模型组.结论肾糖颗粒对糖尿病肾病大鼠有治疗效果,可以改善其肾功能,延缓糖尿病的肾脏损伤.%Objective:To observe the efficacy of renal sugar granules on STZ-induced diabetic nephropathy rats. Methods:The model was induced by feeding with high
fat diet and STZ produced by intraperitoneal injection in rats. All rats were randomly divided into 5 groups including the normal control group, the model control group,the Chinese medicine group (Renal sugar granule group),the westem medicine group (Lotensin group) and the Chinese and Western medicine group (Renal sugar granule and Lotensin group). The general situations of these rats were observed before and after treatmen. After the treatment,some indices were detected including the fasting
blood glucose,the 24h urinary protein,the urinary albumin,the α1-microglobulin,the β2-microglobulin,the urinary transferring and the
retinol-binding protein. Results:After treatment for 8 weeks with renal sugar granule, the general situations improvements were more obvious than those in the model rats. Compared with the model group,the fasting blood glucose in the treatment groups were significantly lower. 24h urine protein,urinary albumin,α1microglobulin and β2-microglobulin in the treatment groups were also significantly lower than those in the model group. The urinary transferring and the retinol-binding protein in several groups were lower remarkably than those in the model group. Conclusion:Renal sugar granules have a certain therapeutic effect on STZ-induced diabetic nephropathy rats. It can improve the function of kidney and delay the damage of kidney.
【期刊名称】《中国中医急症》
【年(卷),期】2011(020)002
【总页数】3页(P264-266)
【关键词】肾糖颗粒;糖尿病肾病;疗效研究
【作者】傅晓骏;熊荣兵;张婷
【作者单位】浙江中医药大学附属金华中医院,浙江,金华,321017;浙江中医药大学附属金华中医院,浙江,金华,321017;浙江中医药大学附属金华中医院,浙江,金华,321017
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
糖尿病肾病（DN）是糖尿病的微血管病变，是影响患者生存质量和死亡率的重要因素。

据统计，糖尿病肾病占糖尿病患者死亡率的60%。

肾糖颗粒是金华市中医
院肾内科经过长期的临床实践总结出的治疗早期DN的有效中药复方［1］。

我们从观察DN临床疗效指标角度切入，通过本实验来阐述本方对大鼠DN模型的疗效。

1 材料与方法
1.1 动物健康雄性SD大鼠70只，清洁级，体质量（160±20）g，由上海中医药大学动物实验中心代购并饲养，动物许可证号：SYSK（沪）-2009-0069。

在室
温（22±1）℃、相对湿度55%±5%、光照周期12h环境中适应饲养1周后试验。

1.2 试药肾糖颗粒方：黄芪、水蛭粉。

根据人-鼠剂量的换算，药物经常规煎煮过滤，浓缩至每毫升含生药
2.33g，由金华市中医院制剂室提供。

盐酸贝那普利片（产品批号：x1377，北京诺华制药有限公司）。

链尿佐菌素（美国Sigma公司）。

血糖试纸（强生公司）。

24h尿蛋白定量试剂盒（南京建成生物工程有限
公司）。

α1-MG试剂盒（北京北方生物技术研究所）。

β2-MG试剂盒（原子高
科股份有限公司）。

尿白蛋白试剂盒，北京市福瑞生物工程公司。

尿转铁蛋白、尿视黄醇结合蛋白试剂盒（上海麦约尔生物科技有限公司）。

1.3 造模 SD大鼠适应性饲养1周后，随机取8只为正常对照组，其余为模型组。

模型组给予高脂饲料（10.0%猪油、10.0%蔗糖、
2.5%胆固醇、0.4%胆酸钠、77.1%基础饲料）喂养，按文献［2］腹腔注射STZ，每周1次，连续3周，造模完成72h后，经尾静脉采血测血糖，血糖≥16.7mmol/L为糖尿病模型复制成功。

1周后留取大鼠即刻尿，测尿微量白蛋白及尿肌酐，当模型组的尿微量白蛋白/尿
肌酐显著高于正常对照组，即为DN造模成功，不成功则剔除。

1.4 分组及给药造模将成功的32只大鼠随机分为4组，每组8只。

正常对照组、
模型对照组分别予以2mL的蒸馏水灌胃，中药治疗组予肾糖颗粒方煎液（每毫升含生药量2.33g）2mL灌胃，西药治疗组予盐酸贝那普利片（蒸馏水溶解，每毫
升含盐酸贝那普利药量0.33mg）2mL，中西药治疗组予肾糖颗粒方煎液联合盐酸贝那普利片（蒸馏水溶解每毫升含生药2.33g、盐酸贝那普利0.33mg）混悬液
2mL灌胃。

连续给药8周。

实验期间各组大鼠自由摄食、饮水。

1.5 指标检测实验灌胃8周后，即实验结束前1d，金属代谢笼收集大鼠的即刻尿及24h尿液，将所收集的尿液-70℃冰箱保存，检测24h尿蛋白定量、尿肌酐、
尿α1-MG、尿β2-MG、尿微量白蛋白、尿转铁蛋白（TRF）、尿视黄醇结合蛋
白（RBP）。

其中尿α1-MG、尿β2-MG、尿微量白蛋白采用放射免疫方法，由
上海曙光医院同位素室代测。

其余指标严格按试剂盒说明书操作完成。

开始用药前及治疗结束后，尾静脉采血，用血糖仪及血糖试纸测定血糖。

1.6 大鼠肾组织形态的观察处死大鼠，无菌操作取肾，去掉包膜，矢状线正中切开，所得肾脏用10%甲醛溶液固定，取小块皮质，进行脱水包埋组织，连续切片，片厚4μm行HE染色。

其步骤均按照说明书操作完成。

并用DFC295摄像头进行拍片观察。

1.7 统计学处理各组数据均采用SPSS 13.0统计软件进行处理，以（±s）表示，
组内比较采用单因素方差齐性检验。

P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 一般情况在实验过程中，正常对照组大鼠体质量增加明显，精神状态佳，反
应灵敏，活动自如，毛色光泽，全部存活。

模型对照组大鼠明显消瘦，多饮，多食，多尿，且精神萎靡，反应迟钝，活动缓慢，弓背蜷体，毛竖起无光泽，粪质稀溏，部分出现肢体及皮肤感染等合并症。

各治疗组也出现上述表现及合并症，但程度较模型对照组轻。

2.2 各组24h尿蛋白定量及血糖含量比较经8周治疗后，模型对照组血糖明显高
于正常对照组（P＜0.01）；与模型对照组比较，各治疗组血糖均显著降低（P＜0.05）。

治疗后各组大鼠24h尿蛋白定量，模型组高于正常对照组，有显著差异（P＜0.01）；各治疗组均低于模型组（P＜0.05），但各治疗组组间比较差异无
统计学意义（P＞0.05）。

见表 1。

表1 各组血糖、24h尿蛋白定量比较±s）与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

下同。

组别 n 血糖（mmol/L） 24h尿蛋白定量（mg/L）正常对照组 8
7.25±0.95** 13.01±3.72**模型对照组8 32.38±1.26* 91.77±14.33△*中药治疗
组8 24.59±1.98* 53.42±24.35**西药治疗组8 26.10±3.51* 54.10±22.14**中
西药治疗组8 23.32±5.62* 38.34±14.18**
2.3 各组尿微量白蛋白、α1-MG、β2-MG水平比较治疗后各组大鼠尿微量白蛋白、α1-MG、β2-MG，模型对照组均高于正常对照组，有显著差异（P＜0.01）；各治疗组均显著低于模型对照组（P＜0.05），各治疗组之间比较差异均无统计学意义。

见表2。

表2 各组尿微量白蛋白α1-MG、β2-MG水平比较（±s）β2-MG（mg/L）正常对照组8 341.73±65.66** 0.8633±0.11** 32.83±11.22**模型对照组 8
3008.93±156.24 1.40±0.24 74.61±13.21中药治疗组8 1017.74±260.74*
1.00±0.16 39.99±10.56*西药治疗组8 1034.18±686.93* 1.185±0.15*
45.89±6.81*中西药治疗组8 565.53±105.56* 0.98±0.14* 51.73±12.99*组别 n 尿微量白蛋白（ng/L）α1-MG（μg/mL）
2.4 各组 TRF、RBP水平比较治疗后各组大鼠 TRF、RBP，模型组高于正常对照
组（P＜0.01）；各治疗组均低于模型对照组（P＜0.01）；各治疗组间比较无统
计学意义。

见表3。

表 3 各组 TRF、RBP 水平比较（μg/mL，±s）组别 n 尿 TRF（μg/mL）尿RBP（μg/mL）正常对照组8 1.46±0.19** 575.94±160.87**模型对照组 8
17.67±4.72** 1579.50±190.80**中药治疗组8 4.60±0.06** 895.25±247.76**
西药治疗组8 6.22±0.32** 1000.39±223.39**中西药治疗组8 2.72±0.62** 884.60±81.40**
2.5 各组大鼠肾组织形态观察见图1。

从图1可以看到，与正常组大鼠比较，模型组大鼠的肾小球体积明显增大，呈现肾小球肥大，并且有毛细血管腔狭窄及肾小囊粘连，肾小管上皮细胞空泡及颗粒变性，而治疗组的中药组、西药组及中西药组较模型组明显改善，没有明显的球囊粘连，中药组肾小管无上皮细胞空泡。

同时治疗组的大鼠肾小球体积较模型组也没有明显的增大。

图1 各组大鼠肾组织形态学观察（HE染色）
3 讨论
DN的原发病是糖尿病，属于中医学“消渴”范畴。

消渴病日久及肾，易发生以下两种病变：一是阴损及阳，阴阳俱虚，五脏虚弱，肾虚为主；二是久病入络，且阴虚内热，耗津灼液，而致肾络瘀滞。

因此，肾虚络瘀是其基本病机特点，益气活血通络乃其治疗关键。

在前期临床研究［1］中观察发现，DN患者大多数有肢体麻木、刺痛、舌质紫暗、脉细涩等瘀血症状，提示DN患者体内存在瘀血现象。

本
课题肾糖颗粒方由黄芪和水蛭组成。

方中黄芪性温，有益气、补虚、消肿的功效，而水蛭为传统的破血、逐瘀、通经中药。

两者合用旨在益气活血化瘀通络。

大量的临床和药理研究证实，黄芪有抗血小板凝集，降低纤维蛋白原及全血黏度，增强肾血流量，改善内脏微循环的作用。

而水蛭唾液中有一种抗凝血物质——水蛭素，
能阻止凝血酶对纤维蛋白的作用，对糖尿病患者的高黏血症疗效确切［3］。

水蛭还具有扩张毛细血管，增加外周血流量，改善缺血及抗血小板聚集和血栓形成的作用［4］。

造模后，大鼠较正常组比较明显消瘦，多饮，多食，多尿，且精神萎靡，反应迟钝，活动缓慢，弓背蜷体，毛竖起无光泽，粪质稀溏，部分甚至出现肢体及皮肤感染等合并症。

这是DN虚证的典型表现。

而经肾糖颗粒治疗8周后，大鼠
一般情况得到明显改善，表明肾糖颗粒可改善DN大鼠的症状。

实验中还观察到
肾糖颗粒组大鼠的血糖、24h尿蛋白定量与模型组比较也明显下降（P<0.05）。

说明肾糖颗粒方还具降低血糖，降低24h尿蛋白定量，改善肾功能的作用，可有
效的延缓DN大鼠的肾损伤。

Mongensen将1型糖尿病肾损害分为5期，其中微量白蛋白尿是诊断早期DN
的主要指标，而出现持续性蛋白尿及临床症状时，已达3级以上，肾病属不可逆
改变，已失去了预防和有效治疗时机，故早期诊断治疗十分重要。

目前研究认识到糖尿病不仅会累及肾小球，而且还会累及肾小管间质结构，且肾功能恶化的程度与肾小管间质纤维化程度密切相关［5］。

肾脏病的发生、发展、预后转归过程中，肾小管间质损害起着极其重要的作用［6］。

尿微量白蛋白（mAlb）、TRF属于
肾小球性蛋白［6］，皆属于低分子蛋白。

在正常情况下，绝大部分的白蛋白、TRF均不能通过滤过膜，一旦肾小球损伤即可出现了肾小球性蛋白尿。

α1-MG和β2-MG都是小分子量蛋白，能自由通过肾小球滤过膜滤入原尿，正常情况下，尿液中含量微乎其微。

DN早期，当肾小管受损，重吸收功能减退时，尿α1-MG升高，且肾小管对α1-MG重吸收障碍先于β2-MG，在较宽的pH范围内（4.0～10.0）较稳定，很少分解，而尿β2-MG不稳定，在酸性环境极易分解。

因而尿
α1-MG更能反映肾小管早期损伤，对早期DN的诊断价值更高，是极有价值的肾小管损伤标志性蛋白［8］。

而尿视黄醇结合蛋白（RBP）是一种相对分子质量
21kD的小分子蛋白质，当肾小管重吸收功能异常时，尿中RBP水平显著增加。

目前认为RBP是最敏感反映肾近曲小管损伤的指标。

本实验中不但模型组大鼠的
尿微量白蛋白和TRF均显著高于正常对照组；同时实验结果还显示模型组DN大
鼠尿α1-MG、尿β2-MG及尿RBP较正常对照组比较均呈显著升高。

说明DN早期不仅存在肾小球损伤，产生了肾小球性蛋白尿，肾小管功能也受到一定程度破坏。

通过治疗干预8周后显示，肾糖颗粒组DN大鼠尿微量白蛋白及TRF与模型组比
较均分别呈显著下降趋势；同时肾糖颗粒组DN大鼠尿α1-MG、尿β2-MG及尿RBP较模型对照组比较也都显著降低。

由此表明肾糖颗粒方不仅扭转了DN大鼠的肾小球病变，同时也在一定程度上改善了肾小管的重吸收功能，从而延缓了肾脏的进一步损伤。

有学者认为在DN早期阶段进行有效干预治疗，仍有希望防止DN向大量蛋白尿发展［9］。

我们的实验也证实了这一点。

如前所述，本实验通过肾糖颗粒方的干预有效地降低了DN大鼠的蛋白尿，改善了DN大鼠的一般状况，从而延缓了DN 微量白蛋白尿向大量蛋白尿的进展，延缓了肾损害。

参考文献
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