果树基因提取实验报告
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
一、实验目的
1. 了解果树基因提取的一般原理和方法。
2. 掌握从果树组织中提取DNA的操作步骤。
3. 熟悉DNA提取过程中的质量控制与评估。
二、实验原理
DNA是生物体内的遗传物质,具有稳定的结构和独特的功能。
提取果树DNA是为了
后续的分子生物学研究,如基因克隆、基因表达分析等。
本实验采用常规的CTAB
法进行果树DNA提取,该方法具有操作简便、提取效率高、DNA纯度较好的特点。
三、实验材料
1. 果树叶片:选取成熟、无病虫害的叶片作为实验材料。
2. CTAB提取缓冲液:100mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)、1.4mol/L NaCl、
20mmol/L EDTA、2% CTAB。
3. 95%乙醇:分析纯。
4. 70%乙醇:分析纯。
5. DNA分子量标准:50ng/μL。
6. 灭菌蒸馏水。
7. Eppendorf离心机。
8. 微量移液器。
四、实验步骤
1. 样品制备:取新鲜果树叶片,用液氮迅速冷冻,然后用研钵和研杵进行研磨,
直至叶片成粉末状。
2. DNA提取:
a. 将研磨好的叶片粉末转移到1.5mL离心管中,加入600μL CTAB提取缓冲液;
b. 65℃水浴30min,期间不时振荡;
c. 取出离心管,加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1)混合液,充分振荡混匀;
d. 12,000r/min离心5min,取上清液;
e. 加入等体积的95%乙醇,混匀,静置5min;
f. 12,000r/min离心5min,弃去上清液;
g. 用70%乙醇洗涤DNA沉淀,12,000r/min离心5min,弃去上清液;
h. 将DNA沉淀晾干,用50μL灭菌蒸馏水溶解。
3. DNA纯度检测:取2μL DNA样品,加入2μL 1×Loading Buffer,进行琼脂糖凝胶电泳检测。
五、实验结果与分析
1. 琼脂糖凝胶电泳结果:DNA样品在琼脂糖凝胶上呈现清晰、明亮的主带,说明DNA提取成功。
2. DNA纯度评估:通过比较DNA样品与DNA分子量标准的电泳条带,可以初步判断DNA纯度。
本实验中,DNA样品与DNA分子量标准条带相对应,说明DNA纯度较好。
六、实验总结
本实验通过CTAB法成功提取了果树DNA,并对其纯度进行了初步评估。
实验结果表明,该方法适用于果树DNA的提取,为后续的分子生物学研究提供了基础。
七、注意事项
1. 操作过程中,注意无菌操作,防止污染。
2. 在DNA提取过程中,严格控制温度和时间,以确保DNA提取效率。
3. 在DNA纯度检测中,选择合适的DNA分子量标准,以便准确评估DNA纯度。
通过本次实验,我们掌握了果树基因提取的基本原理和方法,为今后的研究奠定了基础。