2012-9-19 X染色质

#
•
• ①
② ③
④
1、材料：3H或2H铅笔、软橡皮、直尺、实验报告纸、彩 笔。 2、方法： 首先认真观察标本，弄清它的基本形态和重点观察部位 的毗邻关系。 图的大小、位置、布局要恰当，注意各部分结构的比例 关系。 生物绘图的线条要粗细均匀而连续，在一条线上不能有 重叠。表示结构和明暗立体感不能用铅笔涂，而要用铅 笔打出小圆点，用点的疏密程度表示。必要时可用彩色 呈现标本的颜色。 图的下方写上图的名称和放大倍数。图的标注应从各部 分做出水平引线，在引线末端写出各部分名称。引线上 下对齐。 #
#
实验材料
• 器械 – 消毒牙签（取材）； – 天平和量筒（配液）； – 染色缸和试剂瓶（染色和固定）； – 盖玻片和载玻片（制片）； – 显微镜（观察标本）
• •
试剂：硫瑾、HCl、甲醇、冰醋酸、醋酸钠、蒸馏水
#
实验步骤
1. 人口腔粘膜上皮细胞X染色质标本制备 2. 人口腔粘膜上皮细胞X染色质标本观察
#
2. X染色质发现过程及其基本形态
1949年Barr等在雌猫 的神经细胞中发现一 种浓缩小体，而雄猫 无。而且在其他物种 的雌性个体组织细胞 核中都有。因此X染 色质又称Barr小体。
#
3. X染色质的本质
•异固缩的X染色体随机失活。
•胚胎发育第16天，出现失活；卵子与精子受精后， 其中失活的X染色质变为常染色质恢复活性。
人口腔粘膜上皮细胞（示X染色质）
#
1. 刮取口腔粘膜上皮细胞时不宜用力过大 2. 滴片时尽量使其均匀，最好能使细胞成单层分 散平铺。 3. 掌握好HCl水解和染色时间 4. 避开含有大量细菌的区域；避免与核内其他核 质凝集物等混淆。凡位于核中间的浓染小体都 不在计数之内 5. 计数细胞时，细胞核必须完整无缺，无皱褶， 染色均匀。
X染色质为兼性异染色质
#
4. X染色质检查的临床应用
• X染色质存在于细胞分裂间期的细胞核中， 在口腔粘膜上皮细胞、羊水脱落细胞、 以及皮肤结缔组织、宫颈、阴道、尿道 等组织的间期细胞核内均可检出。 • 通过检查，可以判定被检者的性别，临 床上也常用于产前预测胎儿性别，还可 以鉴定两性畸形患儿。
#
生物绘图方法
实验原理
X染色质的相关知识：1.形成过程 2.发现过程及基本形 态 3.本质 4.临床应用
#
1. X染色质的形成过程
女性细胞内X染色体上基 因翻译蛋白质的量是男性 的两倍吗？
46 , xx

46 , xy
NO
不论细胞内有几条X染色体，只有一 条是具有转录活性的，其余的形成 异固缩的X染色质。
#
注意事项
实验结果的观察
• X染色质的识别方法：一般位 于核膜内侧缘，形状多样，多 为半圆形，三角形。轮廓清晰 的浓染小体，直径1－1.5μ m 可计数细胞的标准：a：核较大 ，轮廓清除完整，无缺损、皱褶 ，染色清晰。b：核质呈细网状 或均匀的细颗粒状，无深染大颗 粒及细菌污染
#
#
实验报告
一.实验目的 二.记录试验过程 三.选绘1－2个典型细胞，展示X染色质的形态部位，表 明细胞膜、细胞质、细胞核、X染色质四部分。 四.观察50个以上女性可计数细胞，计数X染色质出现率 五.讨论分析实验结果
#
1.人口腔粘膜上皮细胞 X染色质标本制备
– 染色（硫瑾染色法）
① ② ③ ④ 水解：5M HCl溶液，室温15min 蒸馏水冲洗，充分去除HCl，晾干 染色：硫瑾染色15min 依次用蒸馏水，70%，95%乙醇冲洗，晾干或冷 风吹干
#
2.人口腔粘膜上皮细胞 X染色质标本观察
• 先在低倍镜下找到细胞较集中而又均匀分散的细胞群，观察到蓝 黑色的细胞核。胞质和胞膜不易看见。 • 油镜观察50个可数细胞X染色质出现率 • 正常值：间期细胞核中X染色质阳性率：女性，10%-30%；男性， 低于1%
#
授课策略
• 先将学生分组，男女搭配 • 先取材，在第一次离心间隙简述随后的 实验步骤 • 在固定间隙讲解实验原理和详细的实验 步骤 • 在水解和染色的间隙讲解如何观察、分 析实验结果，包括注意事项 • 要求当堂完成实验报告
#
#
#
1.人口腔粘膜上皮细胞 X染色质标本制备
– 取材
• • • 漱口几次， 用清洁的消毒牙签的钝头从两颊部内侧或下唇轻轻刮 取少许口腔黏膜上皮细胞，连续刮取数次。 将刮取物涮入事先装有9ml生理盐水的刻度离心管，制 成细胞悬液
#
1.人口腔粘膜上皮细胞 X染色质标本制备
–制作标本
• 离心：细胞悬液以1500rpm/min,8min,弃上清 • 固定：加5ml新鲜固定液（3份甲醇︰1份冰醋 酸 ），吹打混匀，固定25min • 离心： 1500rpm/min,8min,去上清 • 制备细胞悬液：加适量固定液，充分混匀 • 滴片：1滴细胞悬液于干净冰载片，冷风吹干
遗传学实验
实验1：小鼠减数分裂标本的制备和观察
实验2： 性染色质标本制作和观察
实验3：PTC尝味实验 实验4：数量性状的遗传分析：人类指纹的分析
实验指导教师：赵主江
实验二
X染色质标本制作和观察
实验目的
• 学习X染色质标本制作方法 • 掌握X染色质(X chromatin)的形态、 数量、分布特点