动植物检验检疫

1.什么是动植物检验检疫
人类在社会实践中逐渐认识到防止外来的动植物有害生物传播和蔓延也可采取检疫的措施来达到目的。

因此也就有了动植物检疫。

动植物检疫：
原始：单纯的隔离检疫
现行：通过对进出境货物、运输工具、邮寄物、人员携带物实施检疫，防止外来有害生物传入，保护农、林、牧、渔业生产和人体健康，促进对外经济贸易的发展。

2.病料的采集和保存
采集
1).判断被检动物患有何种疾病，以便病料采集
2).采取病料所用的容器、手术器械，均需灭菌。

如脏器表面污染，可用烧红的金属片在表面烧烙，再采深部的病料。

3).解剖前(急性死亡)检查是否炭疽杆菌感染(血液抹片或组织触片)
4).应尽快取病料
5).病料采集
(1)血样采集
血样：采集方法：静脉采血、末梢采血，心脏采血
采血部位：牛、马、羊…颈静脉禽…翅下静脉
血清分离方法：
1非抗凝：用灭菌的注射器或真空采血管采血，将血液注入到试管中，血量约5-10毫升，将管内血液摆成斜面，室温静置，凝固后送实验室。

以无菌吸管分离血清，冷藏，防止溶血。

2抗凝：离心分离
(2)乳汁：消毒后挤出10-20毫升于灭菌容器。

(3)脓汁、鼻液、水泡液、肿样等：用灭菌棉签蘸取、或注射器、灭菌吸管等吸取。

(4)粪便：新的玻璃棒挑取或棉拭子从直肠取出。

(5)肠：扎紧后剪取两端(约6厘米)。

(6)胆汁：取整个胆囊或吸取胆汁。

(7)脑和脊髓：采取后放在适当保存液中或取整个头包于浸过0.1％升汞的纱布中，于木箱中送检
(8)实质脏器：选择病变部位连同正常组织切下4×2×2厘米3的1-2块
典型病症采集方法
病变最明显的部位，含毒(菌)量高的部位
猪瘟：采取淋巴结、脾脏。

口蹄疫：发病期采水疱皮、水疱液；肉品检验时采淋巴结、肌肉、脊髓、扁桃体。

禽流感：采呼吸系统的组织和黏液·
炭疽：采病灶水肿部的水肿液：病变淋巴结、脾脏。

保存
1．细菌检验材料。

脏器组织：饱和氯化钠溶液或30％甘油缓冲盐水溶液
液体：毛细玻管或试管
肠道：去除粪便，用灭菌生理盐水清洗，按脏器组织保存
粪便：灭菌容器
2．病毒检验材料
30％甘油缓冲盐水溶液或鸡蛋生理盐水
3．病理组织学检验材料：
10％福尔马林溶液或95％酒精固定
3.风险评估
风险评估：对输出国家或者地区的动物卫生和公共卫生体系进行评估：
问卷调查或实地考察
定性(高、中、低或者极低等表示)及定量(用数据或概率表示)
风险评估过程包括：传入评估、发生评估、后果评估和风险预测
传入评估应当考虑以下因素：
1生物学因素，如动物种类、年龄、品种，病原体感染部位，免疫、试验、处理和检疫技术的应用
2国家因素，如疫病流行率，动物卫生和公共卫生体系，危害因素的监控计划和区域化措施
3商品因素，如进境数量，减少污染的措施，加工过程的影响，贮藏和运输的影响
发生评估应当考虑以下因素：
1生物学因素，如易感动物、病原性质等
2国家因素，如传播媒介，人和动物数量，文化和习俗，地理、气候和环境特征3商品因素，如进境商品种类、数量与用途、生产加工方式，废弃物的处理
后果评估应当考虑以下因素：
1直接后果，如动物感染、发病和造成的损失，以及对公共卫生的影响等
2间接后果，如危害因素监测和控制费用，补偿费用，潜在的贸易损失，对环境的不利影响。

4.屏障环境
设施适用于饲育清洁实验动物及无特定病原体实验动物，该环境严格控制人员，物品和环境空气的进出。

5.动物的等级
按微生物和寄生虫的控制程度，将实验动物划分为普通(CV)动物、清洁(CL)动物、无特定病原体(SPF)动物、无菌(GF)动物四个等级。

实验小鼠和大鼠分为清洁级、SPF级和无菌级
豚鼠、地鼠和兔为普通级、清洁级、SPF级和无菌级：
犬和猴分为普通级和SPF级
普通级动物Conventional Animal CV)是在微生物学控制上要求最低的动物，它要求不携带人兽共患病和动物烈性传染病的病原。

如鼠痘病毒、流行性出血热病毒、弓形体等，饲养于普通环境中。

清洁级动物(Clean animal，cL)是指除普通动物应排除的病原体外，不携带对动物健康危害大和对科学研究干扰较大的病原的动物，如鼠肝炎病毒、仙台病毒、体外寄生虫等，饲养于屏障环境
无特定病原体动物(Specific Pathogen free SPF)
是指除清洁级动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原的动物，允许携带非特定的微生物和寄生虫，又称SPF动物。

饲养于屏障环境。

无菌动物(Germ．Free AnimaI，GF)是指无可检出的一切生命体的动物。

饲养于隔离环境。

悉生动物：(gnotobiotic animaI，GN)是指在无菌动物体内植入已知的一种或几种微生物的动物。

又称已知菌动物。

6.抗原抗体
抗原：一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答，并能与相应免疫应答产物(抗体或抗原受体)在体内外发生特异性结合的物质·通常是一种蛋白质，但多糖和核酸等也可作为抗原
抗体：在人和动物体内，由于抗原或半抗原入侵刺激机体而在细胞中产生的免疫球蛋白·能可逆、非共价、特异地与相应抗原结合，形成抗原．抗体复合体。

主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中·
7.微生物群转变为条件性致病感染？为什么？
机会性感染或条件致病性感染：
由正常微生物群在机体免疫功能低下、发生定位转移或菌群失调等条件下引起的感染。

正常微生物群→条件致病菌（特定条件）
致病条件：菌群失调免疫功能低下定位转移
8．单向琼脂扩散试验：是一种常用的定量检测抗原的方法。

将适量抗体与琼脂混匀，浇注成板，凝固后，在板上打孔，孔中加入抗原，抗原就会向孔的四周扩散，边扩散边与琼脂中的抗体结合。

一定时间后，在两者比例适当处形成白色沉淀环。

沉淀环的直径与抗原的浓度成正比。

如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则从曲线中可求出标本中抗原的含量，敏感性很高。

9．溶血：(αβγ)—溶血性细菌侵入红细胞破裂，血红蛋白逸出称红细胞溶解，简称溶血
10．免疫电镜定位技术：特异性抗体用电子致密物质，如铁蛋白、过氧化物酶等标记后，使之与组织超薄切片中的抗原结合，在电镜下观察到标记物所在位置，即为抗原抗体反应的部位。

11．PCR技术：PCR技术—类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时
间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，
使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备：
②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单
链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列
配对结合；
③引物的延伸：DNA模板引物在TaqDNA聚合酶的
作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对
与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保
留复制链重复循环变性—退火—延伸三过程，就可获得更多的
“半保留复制链，，，而且这种新链又可成为下次循环的模板。

每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因
扩增放大几百万倍。

12．ELISA技术：一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上，因而，具有特异性。

另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。

ELISA法是一种既敏感又特异的方法。

ELISA的基本原理有三条：
(1)抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可
能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保
持其免疫学活性；
(2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，
而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；
(3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底
物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反
应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因
此，可以按底物显色的程度显示试验结果。

13．口蹄疫:一种由病毒感染引起的偶蹄动物，如牛、羊、猪、骆驼、鹿等共患的急性接触性传染病。