高效液相色谱操作步骤演示幻灯片
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高效液相色谱法(HPLC) ppt课件
此法在杂环类药物的鉴别实验中有广泛应用。
ppt课件
32
流动相选择该注意的几点问题
1、尽量使用高纯度试剂做流动相，防止微 量杂质长期积聚而损坏色谱柱；
2、避免流动相与固定相发生相互作用而使 柱效下降或损坏柱子；
3、试样在流动相中应有适宜的溶解度，防 止产生沉淀并在柱中沉积；
4、流动相同时还应满足检测器的需求。
高效液相色谱法 （HPLC）
ppt课件
1
色谱法定义
• 色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分 离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测 手段，就成为色谱分析法。
• 色谱法中，流动相可以是气体，也可以是液体， 由此可分为气相色谱法（GC）和液相色谱法 （LC）。固定相既可以是固体，也可以是涂在 固体上的液体，由此又可将气相色谱法和液相 色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-固色谱、 液-液色谱。
阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；
流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液 ；
阳离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；
应用：离子及可离解的化合物、氨基酸、核酸等。
而ＨＰＬＣ改变的是流动相极性，使样品各组分
在最佳条件下得以分离。
ppt课件
10
四、液相色谱分析法的原理
• （二）高效液相色谱的分离过程 •
• 同其他色谱过程一样，ＨＰＬＣ也是溶质在固 定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。 它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或 分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶 质得以分离。
ppt课件
32
流动相选择该注意的几点问题
1、尽量使用高纯度试剂做流动相，防止微 量杂质长期积聚而损坏色谱柱；
2、避免流动相与固定相发生相互作用而使 柱效下降或损坏柱子；
3、试样在流动相中应有适宜的溶解度，防 止产生沉淀并在柱中沉积；
4、流动相同时还应满足检测器的需求。
高效液相色谱法 （HPLC）
ppt课件
1
色谱法定义
• 色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分 离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测 手段，就成为色谱分析法。
• 色谱法中，流动相可以是气体，也可以是液体， 由此可分为气相色谱法（GC）和液相色谱法 （LC）。固定相既可以是固体，也可以是涂在 固体上的液体，由此又可将气相色谱法和液相 色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-固色谱、 液-液色谱。
阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；
流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液 ；
阳离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；
应用：离子及可离解的化合物、氨基酸、核酸等。
而ＨＰＬＣ改变的是流动相极性，使样品各组分
在最佳条件下得以分离。
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10
四、液相色谱分析法的原理
• （二）高效液相色谱的分离过程 •
• 同其他色谱过程一样，ＨＰＬＣ也是溶质在固 定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。 它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或 分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶 质得以分离。
高效液相色谱仪ppt课件
Si CH3 H3C H
CH3 Si CH3
O Si O
O
Si O
O
O
Si O
O
O Si OO
O
Si O
O
O
Si O
O
O
O Si O
O
O Si O
O
Si O
O
OO O
Si O O Si
O
HO Si
OO
O
主要是由于修饰到硅胶上的硅烷化 试剂不同。 C8是修饰的带8个碳原子的硅烷， C18是修饰的带18个碳原子的硅烷。
发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
规格：常规分析柱(常量柱) 内径2～5mm(常用4.6mm， 3.9mm)，柱长10～30cm (15cm，25cm居多）
制备柱 （21.2mm、30mm、50mm） 半制备柱（〉5mm，7.8mm、9.8mm、10mm）
完整编辑ppt
16
C18柱（C8柱）
按测量性质： 通用型检测器（如示差折光、蒸发光散射检测器） 专属型检测器（如紫外、荧光检测器）
按检测方式： 浓度型检测器 质量型检测器
着重介绍四种检测器：紫外检测器（光电二极管阵列检测器）、
示差折光检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器
完整编辑ppt
21
a. 紫外检测器(UVD)： b. 应用最广泛的选择性检测器。
• 亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小 于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正 相柱。
• 若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色
谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上
的出峰顺序相反。
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30
2. 流动相类别
CH3 Si CH3
O Si O
O
Si O
O
O
Si O
O
O Si OO
O
Si O
O
O
Si O
O
O
O Si O
O
O Si O
O
Si O
O
OO O
Si O O Si
O
HO Si
OO
O
主要是由于修饰到硅胶上的硅烷化 试剂不同。 C8是修饰的带8个碳原子的硅烷， C18是修饰的带18个碳原子的硅烷。
发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
规格：常规分析柱(常量柱) 内径2～5mm(常用4.6mm， 3.9mm)，柱长10～30cm (15cm，25cm居多）
制备柱 （21.2mm、30mm、50mm） 半制备柱（〉5mm，7.8mm、9.8mm、10mm）
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16
C18柱（C8柱）
按测量性质： 通用型检测器（如示差折光、蒸发光散射检测器） 专属型检测器（如紫外、荧光检测器）
按检测方式： 浓度型检测器 质量型检测器
着重介绍四种检测器：紫外检测器（光电二极管阵列检测器）、
示差折光检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器
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21
a. 紫外检测器(UVD)： b. 应用最广泛的选择性检测器。
• 亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小 于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正 相柱。
• 若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色
谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上
的出峰顺序相反。
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2. 流动相类别
高效液相色谱PPT演示文稿
用紫外末端波长检测时，宜选用乙腈-水系统。流动相
中应尽可能不用缓冲盐，如需用时，应尽可能使用低浓
度缓冲盐。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时，流动相
中有机溶剂一般不低于5%，否则易导致柱效下降、色
谱系统不稳定。正相色谱系统的流动相常用两种或两种
以上的有机溶剂，如二氯甲烷和正己烷等。PH为2~8之
间。
5/7
12/7
HPLC
·品种正文项下规定的条件除填充剂种类、流
动相组分、检测器类型不得改变外，其余如 色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相流 速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测 器灵敏度等，均可适当改变，以达到系统适 用性试验的要求。调整流动相组分比例时， 当小比例组分的百分比例X小于等于33%时， 允许改变范围为0.7X～1.3X;当X大于33%时， 允许改变范围为X-10%～X+10%。
10/7
HPLC
四、连接不上电脑，工作站： 重新开机，开机顺序，仪器-电脑-检测器 五、色谱柱容易出现的问题： 1、色谱柱堵塞：显示压力过高，或出峰形状诡异。一般形成 原因是使用带有缓冲盐的流动相或比较复杂的样品，使用后未 及时冲洗。一般用10%的乙腈-水，加热后冲洗，温度不超过4 5℃（特殊柱子除外）。 2、色谱柱污染：出现前沿，拖尾，用10%的乙腈-水或甲醇-水 冲洗，冲洗后用纯乙腈或纯甲醇饱和。下次使用时，用乙腈水或甲醇-水平衡后使用。
4/7
HPLC
储液器（流动相）：
1.流动相要过滤，一般用0.45的滤膜，防止流动相中的颗 粒进入泵内。
2.流动相要脱气，一般超声7到10分钟，根据具体情况可 延长超声时间。主要是为了防止流动相从高压柱内流出 时释放出气泡进入检测器而使噪声剧增，致使不能正常 检测。
高效液相色谱分析 教学PPT课件
四、离子交换色谱
此法是利用离子交换原理和液相色谱技术相结 合，测定各类阴、阳离子的分离分析方法。它既 适于无机离子，也适于有机物分离，如蛋白质、 氨基酸、核酸等。
1. 原理：利用不同待测离子对固定相的亲和能力 （或离子交换能力）的差别来实现分离的。
阳离子交换: R - SO-3H M R SO-3M H
从速率理论各项的差别看HPLC与GC的区别
H A B Cu u
1）涡流扩散项A 2）分子扩散项 B/u
A=2dp B=2Dl
3）传质阻力项
包括固定相传质阻力系数和流动相传质阻力系数
Hs
Cs df2 Ds
u
Hm
Cm
d
2 p
Dm
u
Hsm
Csm d p2 Dm
u
改进固定相成为提高液相色谱柱效的一个重要问题
惰性核
薄膜型
表面多孔型
四、排阻色谱法固定相
• 软质凝胶：水为流动相，孔径大小由交联剂控制 • 半硬质凝胶：适用于非极性有机溶剂，不能随意 更换溶剂，能耐较高压力，流速不宜大
• 硬质凝胶：多孔硅胶、多孔玻珠；多孔硅胶化学 稳定性好，热稳定性好，机械强度高，吸附问题需 要进行特殊处理。
• 选择填料时首先要考虑相对分子质量排阻极限
三、离子对色谱法（IPC）
主要用来分离强极性有机酸和有机碱。
原理：将与待测物离子A电荷相反的离子B（称为 对离子或反离子）加入到流动相中，使待测离子 与对离子形成离子对AB，该AB离子对的性质与A 离子或B离子的性质不同，即间接改变了待测离子 的保留特性。
还可借助离子对的生成给试样引入紫外吸收活发 荧光的基团，以提高检测的灵敏度。
早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定 相, 现多为化学键合固定相（通过化学反应将有机 分子键合在载体表面所形成的柱填充剂，具有稳定、 流失小、适于梯度淋洗等特点 ）。
高效液相色谱HPLC流程示意图PPT课件
第13页/共16页
高效液相色谱的应用
高效液相色谱，特别适用于分离 沸点高和热稳定性差的物质，目前已 广泛应用于化工、食品、医药、生化、 卫生、环境保护和高能化合物等生产 和科研工作中。
第14页/共16页
THE END
THANK YOU 第15页/共16页
感谢您的观看！
第16页/共16页
❖20世纪60年代后期 液相色谱法得到了快速
发展
论文内容
第2页/共16页
第3页/共16页
第4页/共16页
❖ 分配系数 K和分配比k K=(溶质在固定相中的浓度)/(溶质在流动相中的
浓度) =Cs / Cm
K为每一溶质的特征值，仅为固定相和温度有关， 与两相体积论文内容、柱管特性及仪器无关。 k=(组分在固定相中的质量)/(组分在流动相中的质 量)
论文内容
➢ 色谱分析方法发展概述 ➢ 分类 ➢ 基本原理
➢流出曲线及有关术语 ➢高效液相色谱简介
第1页/共16页
❖1903年 Tswett创立色谱法（在碳酸钙上分 离了叶绿素）
❖20世纪四五十年代 出现了纸色谱（PC)和 薄层色谱法（TLC)
❖1952年 James和Martin提出了气相色谱法 （GC)
=Ms / Mm 第5页/共16页
色谱流出曲线示意图
第6页/共16页
有关术语
1）色谱流出曲线和色谱峰 2）基线 3）峰高 4）保留值（死时间、保留时间、调整保留时 间、死体积、保留体积、调整保留体积、相对保留 值） 5）区域宽度（标准偏差σ,半峰宽W1/2，峰底 宽度W）
第7页/共16页
： 从色谱流出曲线中可以得出许多重要信息
▪ 高压：一般可以达到150~300kg/cm2 ▪ 高速：一般可以达到1~10mL/min ▪ 高效：一般可以达到60000理论塔板/米 ▪ 高灵敏度 ：微升数量级的就可以进行全分析
高效液相色谱的应用
高效液相色谱，特别适用于分离 沸点高和热稳定性差的物质，目前已 广泛应用于化工、食品、医药、生化、 卫生、环境保护和高能化合物等生产 和科研工作中。
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THE END
THANK YOU 第15页/共16页
感谢您的观看！
第16页/共16页
❖20世纪60年代后期 液相色谱法得到了快速
发展
论文内容
第2页/共16页
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第4页/共16页
❖ 分配系数 K和分配比k K=(溶质在固定相中的浓度)/(溶质在流动相中的
浓度) =Cs / Cm
K为每一溶质的特征值，仅为固定相和温度有关， 与两相体积论文内容、柱管特性及仪器无关。 k=(组分在固定相中的质量)/(组分在流动相中的质 量)
论文内容
➢ 色谱分析方法发展概述 ➢ 分类 ➢ 基本原理
➢流出曲线及有关术语 ➢高效液相色谱简介
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❖1903年 Tswett创立色谱法（在碳酸钙上分 离了叶绿素）
❖20世纪四五十年代 出现了纸色谱（PC)和 薄层色谱法（TLC)
❖1952年 James和Martin提出了气相色谱法 （GC)
=Ms / Mm 第5页/共16页
色谱流出曲线示意图
第6页/共16页
有关术语
1）色谱流出曲线和色谱峰 2）基线 3）峰高 4）保留值（死时间、保留时间、调整保留时 间、死体积、保留体积、调整保留体积、相对保留 值） 5）区域宽度（标准偏差σ,半峰宽W1/2，峰底 宽度W）
第7页/共16页
： 从色谱流出曲线中可以得出许多重要信息
▪ 高压：一般可以达到150~300kg/cm2 ▪ 高速：一般可以达到1~10mL/min ▪ 高效：一般可以达到60000理论塔板/米 ▪ 高灵敏度 ：微升数量级的就可以进行全分析
高效液相色谱仪使用与操作规程学生用-ppt课件
级的水
六、 基线噪声
1.气泡(锋利峰) 2.污染(随机噪声) 3.检测器灯延续噪声 4.电干扰(偶尔噪声) 5.检测器中有气泡
1.流动相脱气,加柱后背压 2.清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂 3.改换氘灯 4.采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等) 5.流动相脱气,加柱后背压
七、峰拖尾
1.柱超载 2.峰干扰 3.硅羟基作用
2、先以所用流动相冲洗系一致定时间〔如所用流动相为含盐流动相，必需 先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相〕，正式进样分析前30min 左 右开启D灯或W灯，以延伸灯的运用寿命；
3、建立色谱操作方法，留意保管为本人命名的Method，勿覆盖或删除他 人的方法及实验结果；
4、运用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒， 洗针液普通选择与样品液一致的溶剂，进样前必需用样品液清洗进样针 筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；
8、 运用者须仔细履行仪器运用登记制度，出现问题及时向教 师报告，不要擅自装配仪器。未经操作培训，不得擅自运用 仪器。
第四步、本卷须知
四、运用阅历交流〔1〕 1、流动相必需用HPLC级的试剂，运用前过滤除去其中的
颗粒性杂质和其他物质(运用0.45um或更细的膜过滤)。 2、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温
不能用纯水保管柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，由于纯 水易长霉。 6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂(如甲醇)等清洗进 样器。 7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。 8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过 滤器→单向阀检查 并清洗。清洗方法：①以异丙醇作溶剂
第四步、本卷须知
0791-7118659 (Lab.)
第二步、开 机
六、 基线噪声
1.气泡(锋利峰) 2.污染(随机噪声) 3.检测器灯延续噪声 4.电干扰(偶尔噪声) 5.检测器中有气泡
1.流动相脱气,加柱后背压 2.清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂 3.改换氘灯 4.采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等) 5.流动相脱气,加柱后背压
七、峰拖尾
1.柱超载 2.峰干扰 3.硅羟基作用
2、先以所用流动相冲洗系一致定时间〔如所用流动相为含盐流动相，必需 先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相〕，正式进样分析前30min 左 右开启D灯或W灯，以延伸灯的运用寿命；
3、建立色谱操作方法，留意保管为本人命名的Method，勿覆盖或删除他 人的方法及实验结果；
4、运用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒， 洗针液普通选择与样品液一致的溶剂，进样前必需用样品液清洗进样针 筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；
8、 运用者须仔细履行仪器运用登记制度，出现问题及时向教 师报告，不要擅自装配仪器。未经操作培训，不得擅自运用 仪器。
第四步、本卷须知
四、运用阅历交流〔1〕 1、流动相必需用HPLC级的试剂，运用前过滤除去其中的
颗粒性杂质和其他物质(运用0.45um或更细的膜过滤)。 2、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温
不能用纯水保管柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，由于纯 水易长霉。 6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂(如甲醇)等清洗进 样器。 7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。 8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过 滤器→单向阀检查 并清洗。清洗方法：①以异丙醇作溶剂
第四步、本卷须知
0791-7118659 (Lab.)
第二步、开 机
高效液相色谱系统ppt讲解
色谱柱
液相色谱柱是高效液相 色谱仪的核心部分，是 分析好坏、成败的关键
键合相色谱柱
• 键合相: – 反相: 70%; C18, 65%; C8, 15%; 苯基柱 <5%, – 正相: 20%; 硅胶、 -NH2、 -CN、-OH – 其它 (手性柱, 离子交换柱): 10%
• 反相色谱是目前应用得最为广泛的高效液相色谱方法。 • C18 和 C8 在反相色谱中应用得最为广泛。
LC-5510紫外-可见光检测器
功能特点： • 使用波长范围宽 • 波长精度高 • 噪声低漂移小 • 可用汞灯自动校正波长 • 采用LCD带背光的显示屏来显示波长的设
置参数和运行参数
LC-5510工作站
功能特点： • 具有色谱仪控制系统、数据采集和处理系
统； • 可进行波长程序控制 • 可对两台泵进行程序控制，进行梯度洗脱 • 功能健全，操作便捷
±1.0% ±1.0% ±2.0%
0.5% ±5.0%
0.5%
1.5%
±2.0
±1.0%
%
最高压力
4000 Psi 40 MPa 39.2 MPa 40.0 MPa 40MPa
进样器
• 隔膜进样 • 停留进样 • 阀进样 • 自动进样
进样器
• 对进样器的要求 密封性好 死体积小
重复性好 保证中心进样 进样时对色谱系统的压力、流量影响小
• 在线脱气机主要由真空泵、脱气膜管、传感器、 控制电路、真空腔等组成
• 在线脱气机的主要目的是脱除流动相中的气泡
LC-5510高压输液泵
技术指标 • 工作压力：0～42MPa • 流量范围：0.01～5.0mL/min • 流量准确性：≤1％ • 流量精密度： ≤0.5％ • 压力脉动： ≤1％
高效液相色谱操作步骤ppt课件
10
1：设置程序文件（流动相
通道、流速、比例、检测 器检测波长、分析时间、 最高压力、最低压力） 2：设定分析方法的方法文 件（文件名称，表示浓度 的单位） 3：设定样品分析表（标准 名称、测定次数、样品名 称、编号）
4：待进样环境平衡后，打开
检测器的氘灯，检测器开始 自检和教正，进行基线检测， 待基线平稳后进样分析。
1
前
后
2
1、溶剂（流动相）
真空脱气机
高效液相色谱分析仪的 型号、外形因生产厂家 的不同而有较大的差异。 各型号仪器配有相应的 数据处理系统。
2、输液系统 （四元泵） 3、手动进样器 4、柱温箱 （色谱柱， 固定相）
5、检测器 6、色谱工作站
3
1：有机溶剂的过滤（使
2：流动相超声脱气
用 0.45um的一次性水系 滤膜过滤）
17
1、 采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含 固体颗粒； 2、 用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比 流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂 制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液； 3、手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时， 进样体积应为定量管的3～5倍；
打开检测器的氘灯
简而言之：软件的各种设置；繁杂但不复杂
11
1：启动设置程序文件、
2：顺时针旋转六通阀，
设定分析方法的方法文件、 设定样品分析表按照样品 分析表的顺序，用平头微 量注射器将经过0.45um滤 膜过滤的标准溶液和样品 溶液逐次注入六通进样阀 中，
仪器开始进行分品的出峰时间定性
14
依次关闭检测器的氘灯 将高压泵的流速降为“0” 关闭检测器开关 关闭高压泵开关 关闭仪器色谱工作站 关闭检测器电源开关 关闭高压泵电源开关 关闭柱温箱电源开关 关闭电脑开关 关闭稳压电源开关 并在仪器使用登记本上记录环境温度、湿度、仪器工作状态及 使用情况 结束操作，整理实验台
1：设置程序文件（流动相
通道、流速、比例、检测 器检测波长、分析时间、 最高压力、最低压力） 2：设定分析方法的方法文 件（文件名称，表示浓度 的单位） 3：设定样品分析表（标准 名称、测定次数、样品名 称、编号）
4：待进样环境平衡后，打开
检测器的氘灯，检测器开始 自检和教正，进行基线检测， 待基线平稳后进样分析。
1
前
后
2
1、溶剂（流动相）
真空脱气机
高效液相色谱分析仪的 型号、外形因生产厂家 的不同而有较大的差异。 各型号仪器配有相应的 数据处理系统。
2、输液系统 （四元泵） 3、手动进样器 4、柱温箱 （色谱柱， 固定相）
5、检测器 6、色谱工作站
3
1：有机溶剂的过滤（使
2：流动相超声脱气
用 0.45um的一次性水系 滤膜过滤）
17
1、 采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含 固体颗粒； 2、 用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比 流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂 制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液； 3、手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时， 进样体积应为定量管的3～5倍；
打开检测器的氘灯
简而言之：软件的各种设置；繁杂但不复杂
11
1：启动设置程序文件、
2：顺时针旋转六通阀，
设定分析方法的方法文件、 设定样品分析表按照样品 分析表的顺序，用平头微 量注射器将经过0.45um滤 膜过滤的标准溶液和样品 溶液逐次注入六通进样阀 中，
仪器开始进行分品的出峰时间定性
14
依次关闭检测器的氘灯 将高压泵的流速降为“0” 关闭检测器开关 关闭高压泵开关 关闭仪器色谱工作站 关闭检测器电源开关 关闭高压泵电源开关 关闭柱温箱电源开关 关闭电脑开关 关闭稳压电源开关 并在仪器使用登记本上记录环境温度、湿度、仪器工作状态及 使用情况 结束操作，整理实验台
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2020/4/23
15
流动相 ： 1、 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸 碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系 膜和油系膜的使用范围； 2、 水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止 长菌变质；
2020/4/23
16
1、 使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用 范围，如pH值范围、流动相类型等； 2、 使用符合要求的流动相； 3、 使用保护柱； 4、 如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后， 先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲 醇冲洗。
数据处理系统。
6、色谱工作站
2020/4/23
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1：有机溶剂的过滤（使 用 0.45um的一次性水系 滤膜过滤）
2：流动相超声脱气 （10~30min）
滤膜
开关
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1：样品过滤（过滤装置： 一次型注射器;一次性滤 头）进入高效液相色谱仪 样品液都必须经过样品过 滤装置过滤
2:把经过称量、定容、超声 处理后的样品溶液，用一 次性注射器和一次性滤头 过滤后，加入2ml具塞试管 中备用。
顺时针旋转
量注射器将经过0.45um滤
膜过滤的标准溶液和样品
溶液逐次注入品的出峰时间定性
2：根据样品的峰面定量
（在一定的色谱操作条件下，流入检测器的待测组分的 含量、质量或浓度与检测器的响应信号：峰面积或峰 高成正比。）
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色 谱 图 示 例
1.环境污染物分析：大气、水、土壤和食品中的多环芳烃、 多环联苯，阴离子表面活性剂，有机氯农药、有机磷农药， 除草剂，酚类胺类、黄曲霉毒素等污染物的分离与测定。
2.精细化工 ：在精细化工生产中使用的具有较高分子量和 较高沸点的有机化合物，如高碳数脂肪族或芳香族的醇、 剂、药物、农药、燃料、炸药等工业产品的醛、酮、醚、 酸、酯等化工原料，以及各种表面活性分离与测定。
5、 色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密 封闭两端保存；
6、 不要高压冲洗柱子； 7、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；
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1：将储存流动相的贮液 瓶放置于贮液瓶架上
2：更换仪器泵头里清洗 瓶中的超纯水（以确保 仪器外回路系统清洁和 良好的工作状态）
清洗瓶
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依次打开： 稳压器 柱温箱 高压泵 检测器 计算机电源开关
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1：拧松泵右侧的快速排气 阀（两圈即可）
快速排气阀
2：按下泵前面的“排气”键 排气5min后拧紧快速排气阀
如果流动相为有机相和纯水相的混合液，在用甲醇或 乙腈冲洗流路后，按照分析样本的需要调节比例阀的比例， 冲洗流路约20min；
如果流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其他 电解质，则应该用与分析样品流动相中缓冲盐溶液或有机酸、 无机酸、其他电解质与有机相相同比例的水加有机相冲洗流 路约20min以上，再按照分析样品的需要调节有机相与缓冲溶 液等的比例冲洗流路约20min，平衡进样环境。
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1：冲洗流路和色谱柱 a:若流动相为有机相和超纯水的混合溶剂，则直接用甲
醇或乙腈冲洗流路约30min，待基线无杂质峰出现走平稳 后可停泵关机。 b:若流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其他电 解质溶，则先用5%甲醇冲洗流路30~60min，其次用50%甲 醇溶液冲洗流路约30min，再用甲醇或乙腈冲洗流路约 30min，待基线无杂质峰出现走平稳后可停泵关机。 2：冲洗进样系统 a:清洗手动进样阀，将手动进样阀的扳手逆时针扳到头， 用一次性平头微量注射器吸入2~4ml的50%甲醇，注入手 动阀的进样口。 b:每次样品测定完后，一定要用50%甲醇清洗；若样品 水系，则先用超纯水清洗，再用50%甲醇清洗。
3.食品质量分析：农药残留，兽药残留；防腐剂、抗氧化 剂、人工合成色素等食品添加剂的分离与测定，保健食品 中的功效成分检测，真菌毒素分析等
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前
后
2
2
1、溶剂（流动相）
真空脱气机
2、输液系统 （四元泵） 3、手动进样器 4、柱温箱 （色谱柱， 固定相）
5、检测器
高效液相色谱分析仪的 型号、外形因生产厂家 的不同而有较大的差异。 各型号仪器配有相应的
一次性滤头：由机系、水系组成；
滤膜的孔径为0.45um
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将色谱柱按流动相流动 方向即色谱柱标示箭头
方向安装在仪器上
色谱是一种分离分 析手段，分离是核 心，因此担负分离 作用的色谱柱是色 谱系统的心脏。对 色谱柱的要求是柱 效高、选择性好，
分析速度快等。
拧紧色谱柱的接口
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3：进入色谱工作站，待仪 器自检完成后进行进样系 统的清洗
4：用一次性平 头微量注射器 吸入1~2ml的样 品溶液，注入 手动进样阀的 进样口
一次性平头 微量注射器
色谱工作站
排气
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作用：平衡活化色谱柱并清除管路中的杂质和残留的水分。
步骤：分析样品前先用甲醇或乙腈冲洗流路20min~30min
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依次关闭检测器的氘灯 将高压泵的流速降为“0” 关闭检测器开关 关闭高压泵开关 关闭仪器色谱工作站 关闭检测器电源开关 关闭高压泵电源开关 关闭柱温箱电源开关 关闭电脑开关 关闭稳压电源开关 并在仪器使用登记本上记录环境温度、湿度、仪器工作状态及
使用情况 结束操作，整理实验台
简而言之：根据流动相的不同选择不同的溶液冲洗流路。
具体问题具体分析！
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1：设置程序文件（流动相 通道、流速、比例、检测 器检测波长、分析时间、 最高压力、最低压力）
2：设定分析方法的方法文 件（文件名称，表示浓度 的单位）
3：设定样品分析表（标准 名称、测定次数、样品名 称、编号）
4：待进样环境平衡后，打开 检测器的氘灯，检测器开始 自检和教正，进行基线检测， 待基线平稳后进样分析。
打开检测器的氘灯
简而言之：软件的各种设置；繁杂但不复杂
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1：启动设置程序文件、 2：顺时针旋转六通阀， 设定分析方法的方法文件、 仪器开始进行分析
设定样品分析表按照样品 分析表的顺序，用平头微