牛肉膏蛋白胨培养基的配制与灭菌ppt课件

3.学习斜面培养基制作
√
4.学习倒平板
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5.超净台的准备
√
6.灭菌效果检查
7.划线接种
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6.灭菌效果检查
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生化培养箱
为微生物培养提供恒温设备（固体培 养基）
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7.平板划线法：
取一接种环细菌，左手持平皿将盖口微开， 用沾有细菌的接种环在琼脂平板上划直线； 接种环火焰灭菌，待冷却，再用接种环在 顶端边缘划线处沾取标本继续划线，如此 划4~5次，划毕加盖。并用蜡笔在皿底玻璃 上写明接种菌名。于37℃培养18~24h观察， 注意平皿表面生长各菌落的大小、形态、 边沿、表面结构、透明度和颜色等特征。
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
琼脂 15-20g
pH 7.4-7.6，加水至1 000mL；若需分装，需先融化，摇匀 后分
于121℃高压灭菌15~20min备用 用途：普通细菌常用的培养基
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请大家配制：
请大家查看“营养琼脂”的成分与配制说 明，每组配置牛肉膏蛋白胨固体培养基 150mL于锥形瓶中
将以上物品放入灭菌锅中进行灭菌121℃ 20min
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2.培养基：
培养基分 液体、半固体和固体 3种 液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于
细菌扩大培养； 半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存
细菌 固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分
离细菌
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（1）固体培养基配置
牛肉膏蛋白胨培养基
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4.倒平板
超净工作台灭菌完毕，关紫外灯，打开风 机；
超净工作台门不能开太高，约20cm即可；
用新洁尔灭棉球擦拭工作台和手；
将酒精灯瓶外擦干净，转移入工作台；
将已融化的培养基瓶身擦干净，转移入工 作台；
待培养基冷却至50°C左右（不烫手为原则， 43
平板要求：平板平整，无凸起；平板无“挂 壁”；培养基布满整个平皿
适宜的酸碱度、一定的缓冲能力、一定的 氧化还原电位，合适的渗透压
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根据物理状态划分
培养基分 液体、半固体和固体 3种 液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于
细菌扩大培养； 半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存
细菌 固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分
离细菌
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培养基的配制原则
请大家查看营养琼脂的成分与配制说明每组配置牛肉膏蛋白胨固体培养基150ml于锥形瓶中请大家先写出1l的配方然后再写出150ml的配方37配制完毕将配制好的培养基装入锥形瓶内瓶口塞上棉塞用牛皮纸报纸包扎瓶口标注好组别进行高温高压蒸汽灭菌382液体培养基为固体培养基中不含琼脂牛肉膏蛋白胨培养液牛肉膏3g蛋白胨10gnacl5gph7476加水至1000ml用途
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四区划线
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圆形、突起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽， 不透明菌落，直径1～2mm
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请大家划线接种大肠杆菌、金黄色葡萄球 菌，置于培养箱16~18h后取出置于4℃冰箱 保存
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斜面培养基接种法
将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管内， 从斜面上轻轻挑取少量菌苔退出菌种管。 再伸进待接种的培养基管，进行斜面培养 基接种，从斜面底部轻轻向顶端弯曲划线， 不要触破培养基表面。
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安全操作与标准操作
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1 微生物吃什么？ （一）微生物培养基的制备 （二）微生物的消毒灭菌 （三）认识微生物培养所需的仪器设备
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（一）微生物培养基的制备
培养基：是人工配制的、适合微生物生长 繁殖或产生代谢产物的营养物质。
满足微生物生长发育的水分、C，N，生长 因子，P，S，Na，Ca等
消毒不一定能达到灭菌的要求，而灭菌则 可达到消毒的目的
无菌
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消毒灭菌方法：
（一）干热灭菌法 （二）湿热灭菌法 （三）过滤除菌 （四）紫外线杀菌 （五）药物杀菌
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（一）干热灭菌法 1.火焰灭菌法 2.热空气灭菌法 140~160℃2~3h
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（二）湿热灭菌法 1.高压蒸汽灭菌法 121℃ 20~30min
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课程内容
1
微生物吃什么？
2 微生物长的什么样？
3 如何得到微生物？
4 如何保存微生物？
5 我很爱吃熟食（猪头肉），但是听 说熟食微生物超标，这是怎么检测 的？
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LOGO
规则：
1.上课不迟到：第1、5节课，提 前10min到教室 2.下课前，自己的实验物品归类， 该清洗的清洗，该收拾的收拾 3.值日生负责擦黑板、扫地、擦 桌；为大家做好服务工作 4.上课时间请不要玩手机
调整温度时间121℃ 15min。 5）待排气阀冒出大量热气并持续约2~5min后排尽冷空气
后，再将其关闭； 6）灭菌结束，待压力下降至0，可打开放气阀，之后开盖。
注意防止烫伤 7）固体物品可进行干燥；液体物品冷却后拧紧。尽量避 27
5.鼓风干燥箱
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6.超净工作台
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每次使用前，先用75%酒精（或新洁尔灭） 擦洗台面，并提前用紫外线灭菌灯照射 15~30min处理净化工作区内积存的微生物； 关闭灭菌灯后应启动风机使之运转2min后 再进行培养操作；工作区内不应存放不必 要的物品，以保持洁净气流流型不受干扰； 使用完毕应及时清理工作台面上的物品并 用酒精擦拭台面使之始终保持洁净。
1.选择适宜的营养物质 实验室中常用：
不同微生物所需培养基各不同
牛肉膏蛋白胨培养基
细菌
高氏一号
放线菌
麦芽汁培养基
酵母菌
察氏培养基
霉菌
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2.营养物质的浓度及配比合适 3.控制pH条件
细菌和放线菌：pH7.0~7.5 酵母菌和霉菌：pH4.5~6.0 4.控制氧化还原电位 5.原料来源的选择 尽量利用廉价且易获得的原料作为培养基 成分
2.常压蒸汽灭菌法 3.常压间歇灭菌法
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（三）过滤除菌 薄膜滤菌器0.22μm和0.45μm
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（四）紫外线杀菌 240~280nm波段紫外线杀菌力较
强 多以253.7nm作为紫外线杀菌波长 特点：穿透力弱 超净工作台：
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（五）药物杀菌 1.酒精 2.新洁尔灭
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（三）认识微生物培养所需的仪器设备
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7.微量移液器的使用
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今天的工作：
1.固体物品的灭菌 2.配制培养基并进行灭菌 3.学习倒平板 4.学习斜面培养基制作 5.超净台的准备 6.划线接种 7.灭菌效果检查
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开始实验
1.固体物品： 1）平皿（6只/组） 2）试管与棉塞/塑料封口（6只/组）的包扎 3）灭菌蓝色、黄色和白色枪头
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6.灭菌处理 避免杂菌污染，要对所用器械及工作场所
进行消毒与灭菌 培养基一般采取高压蒸汽灭菌，一般培养
基0.1MPa，121.3℃ 15~30min
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（二）微生物的消毒灭菌
灭菌指利用物理和化学的方法杀灭或除去 物料及设备中一切生命物质的过程。
消毒是指用物理或化学的方法杀死物料、 容器、器具内外的病原微生物，一般只能 杀死营养细胞而不能杀死芽孢。
倒平板操作视频
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平板倒制结束，静置，待凝固使用
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4.学习斜面培养基制作
取无菌试管，倒入1/3高度的培养基，塞上 盖子，斜靠，使得斜面长度3~4cm，待凝固 后使用
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请大家先制备4个试管的斜面培养基，然后 将剩余培养基用于制备平板
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1.固体物品的灭菌
√
2.配制培养基并进行灭菌 √
于121℃高压灭菌15~20min备用
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请大家查询LB培养基配方 每组配置LB液体培养基50mL于锥形瓶中，
包扎好瓶口（纱布+牛皮纸/报纸）后灭菌 请大家先写出1L的配方，然后再写出50mL
的配方
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1.固体物品的灭菌
√
2.配制培养基并进行灭菌 √
3.学习斜面培养基制作
4.学习倒平板
牛肉膏蛋白胨培养基的配 制与灭菌
1
一、复习 二、实验：配培养基与灭菌 三、斜面的划线培养 四、倒平板的操作 五、平板划线培养
2
一、复习
3
4
《微生物培养与检验》主要课程内容 1.微生物营养需求 2.微生物形态 3.微生物纯化、分离 4.微生物培养、筛选与保存 5.微生物检验
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l 斜面培养基接种法
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请大家划线接种大肠杆菌、金黄色葡萄球 菌，置于培养箱16~18h后取出置于4℃冰 箱保存
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1.培养平板
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2.试管与棉塞
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3.接种环，涂布棒
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4.高温高压蒸汽灭菌 锅
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p42 高压蒸汽灭菌
请回顾灭菌锅的操作方法
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1）用之前检查水位及水质。若水质不好，需换水 2）放置灭菌物品，勿过满；瓶子灭菌，瓶盖拧松 3）盖上锅盖，相对的两个螺帽一起拧 4）启动加热，同时打开放气阀；检查安全阀是否关上。
5.超净台的准备
6.划线接种
7.灭菌效果检查
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3.如何倒平板
（1）超净工作台的准备 将超净工作台台面用酒精棉球擦干净；关
上门后，紫外灯打开，灭菌15-30min 灭菌结束，打开风机
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2.加热融化培养基（若为刚灭菌结束未凝固的培养基，
则略）
将培养基放入微波炉内加热融化，注意观 察，不要加热时间过长或温度过高，以免 液体溅出。
请大家先写出1L的配方，然后再写出150mL 的配方
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配制完毕，将配制好的培养基装入锥形 瓶内，瓶口塞上棉塞，用牛皮纸/报纸包 扎瓶口，标注好组别，进行高温高压蒸 汽灭菌
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（2）液体培养基
为固体培养基中不含琼脂
牛肉膏蛋白胨培养液
Байду номын сангаас牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
pH 7.4-7.6，加水至1 000mL