HPLC-ELSD法测定新霉素的有关物质

HPLC-ELSD法测定新霉素的有关物质
摘要】目的建立HPLC-ELSD法测定新霉素的有关物质的方法。

方法流动相：
0.2mol?L-1三氟乙酸溶液-甲醇（98：2）；色谱柱：ODS－HYPERSIL（5μ）
125mm×4.6mm，Kromasil-100-5C18：150mm×4.6mm；流速：0.4ml?min-1；雾化
管温度：30 ℃；漂移管温度：70 ℃；压力：0.4MPa；进样量：20μL。

结论新霉
胺在0.02～0.1mg?mL-1范围内线性良好，线性方程为：y= 1.513x+7.629，
r=0.9996 (n = 6)。

HPLC-ELSD法法能够快速、准确测定新霉素的有关物质。

【关键词】新霉素 HPLC-ELSD 有关物质
1 溶液的配制
供试品溶液的制备精密称取硫酸新霉素样品50.17mg，加水溶解并稀释至
50ml，作为供试品溶液。

对照溶液浓度的制备精密称取新霉胺对照品适量，加水溶解依次稀释至浓度
为0.04 mg?mL-1，0.05 mg?mL-1，0.06 mg?mL-1，0.07 mg?mL-1，0.08 mg?mL-1的系列对照溶液。

系统适用性溶液的制备分别精密称取新霉胺、巴龙霉素、新霉素B和新霉素
C对照品，加水制成约各含0.3mg?mL-1的溶液，摇匀，作为系统适用性试验用溶液。

2 系统适用性试验
精密量取系统适用性溶液20μL，在上述色谱条件下分析，各杂质峰的分离度
不小于1.5，理论塔板数均大于3000，对称因子均小于1.5。

见图1，2。

3 有关物质测定
精密量取标准溶液与供试品溶液各20 μL注入液相色谱仪，按上述方法测定
并绘制标准曲线，计算新霉胺的含量为0.1%。

见图3。

4 线性范围的考察
精密称取新霉胺对照品适量，分别加水制成含新霉胺0.0201、0.0301、0.0401、0.0502、0.0702、0.1003 mg?mL-1的溶液，精密量取20 μL注入液相色谱仪，以上述测定方法绘制随行标准曲线，得线性方程为：y= 1.513x+7.629，r=0.9996 (n = 6) 。

结果表明新霉胺在0.02～0.1mg?mL-1范围内线性良好。

见图4。

检出限与定量限逐级稀释新霉胺对照品溶液，进样，记录色谱图。

以噪音的
3倍计，测得新霉胺的最低检出量为0.005mg，以噪音的10倍计，测得新霉胺的
定量限为0.01mg。

精密度试验分别量取浓度为0.1 mg?mL-1的新霉胺对照溶液20μL注入色谱仪，连续进样5针，RSD为1.0%（n=5）。

结果表明，仪器的精密度良好。

重复性试验称取硫酸新霉素样品，按照上述溶液的制备方法制备5份供试品
溶液，分析测定新霉胺的含量，RSD=0.2%（n=5），结果表明，方法重复性较好。

5 结果及限度的确定
试验测得新霉胺的含量为0.04%，参考《中国药典》2010年版的规定，以含
新霉胺的量不得过2.0%为本法有关物质的限度。

6 讨论
流动相流速与比例的确定流动相的比例及流速对系统分离的影响较大，当流
速或流动相中甲醇的比例增大时，新霉素B和新霉素C的峰易合并在一起，因此
需严格控制。

有关物质限度的确定参照《中国药典》2010年版新霉素杂质检查(TLC法)中新霉胺的限度规定，以含新霉胺的量不得过2.0%作为本法有关物质的限度。

7 结论
HPLC-ELSD法法能够快速、准确测定新霉素的有关物质。

图3。