高效液相色谱法同时测定益肾壮骨丸中芍药苷、莫诺苷和马钱苷含量

•质量研究•Quality Research
2020年11月5日第29卷第21期
Vol. 29, No. 0), Novembee 5, 2020
China Pharmaceuticals
dob 14. 3969/j. dsn. 704 - 493 7 2020. 21. 014
高效液相色谱法同时测定益肾壮骨丸中芍药苷、莫诺苷
和马钱苷含量*
*基金项目：江苏省药学会-奥赛康临床药学基金科研项目［A24746］。

第一作者：张璐，女，大学本科，主管中药师，研究方向为中药药效物质基础和质量评价，（电子信箱）459466789@qq. com 。

△
通信作者：田静，女，硕士研究生，副主任中药师，研究方向为中药质量分析，（电话）45 7 - 8097431 7
张 璐1，姜志戎4，尹 萌1湖 旭4，朱殿雨4，田 静1A
(1.扬州市食品药品检验检测中心，江苏扬州225000； 2.宝应县中医医院，江苏扬州225800)
摘要：目的 建立同时测定益肾壮骨丸中芍药苷、莫诺苷和马钱苷含量的高效液相色谱法。

方法 色谱柱采用EclipseXDB-C 7柱(254mmx
4. 9 mm , j m ),流动相为乙腈(A )-4.5%磷酸水溶液(B )(梯度洗脱，4〜22 min 时7%A,20〜54 min 时7% A t 20%A, 54〜55 min 时 20%A,55〜60 min 时20% A t 7%A ,60〜70 min 时7%A ),流速为1 mL/min,芍药苷检测波长为230 nm 、莫诺苷和马钱苷检测波长为
242 nm ,柱温为34 C ，进样量为7 jL 结果 芍药苷、莫诺苷和马钱苷分别在29. 34〜586. 04 jg/mL G 二4. 999 8),2. 94〜58. 74 jg/mL 1n = 3. 999 7), 7. 25 - 305.60 j g/mL ( n = 7 004 4)范围內与峰面积线性关系良好；平均加样回收率分别为97. 93% ,99. 26% ,
101.45% ,RSD 分别为4. 93% ,0.60% , 7 40% ( n = 6);3批次样品中芍药苷、莫诺苷和马钱苷的含量范围分别为/759〜7 904 mg/g ,
4. 149〜4. 73mg/g,4.57〜4.527mg/g 。

结论 该方法灵敏度高，专属性强，可用于益肾壮骨丸中芍药苷、莫诺苷、马钱苷的含量测定。

关键词：益肾壮骨丸；芍药苷；莫诺苷；马钱苷;含量测定；高效液相色谱法
中图分类号:R932;R284.1;R286.0
文献标识码：A 文章编号：1006 -4931(2020)21 -0056-04
Content Determination of Paeoniflorin , Morroniside and Loganin in Yishen Zhuanggu Pills by HPLC
ZHANG Lu 1, JIANG Zhiron^, YIN Meng 1, HU Xu 2, ZHU Diagu 2, TIAN Jing 1
(I. Yangzhon Center fan Food and Drug Control , Yangzhon , Jiangsh , China 225000
;
2. Baoying Conni/ Hospital of Traditional Chines, Medicine ,
Yangzhon , Jiangsp , China 225500,
Abstract : Objective To estab/sh a hig/ 06X0X1800 Uquid chNmatoaraphy(HPLC ) methop foe the conteci determination oV paeon--
U o /p ,morroniside and Pvanin in Yishen Zhuanggu Pil l s. Methodi Ec/pse XDB - Ci 5 coPmn (254 mm x 4. 4 mm,5 j m ) was used,the
mopilo phase was aceUnitUlc(A )- 4. 5% phosphoric acid apueons soluUon (B ) with grapieci eluUon(() - 22 min, 7% A; 20 - 50 min ,
7%—22%A;50 - 55 min, 22% A;55 - 60 min,22%—7%A;60 - 70 min,4% A ),the Uow rate was 1 mL/min,thc detechon wavelength
was 230 nm for paeopiUorid ,240 nm for movonisido and lovamn,/!/ column temperature was 34 C ,and the injechon volume was 7 j L.
Results The range oV paeopUP/d, morroniside and Pvamn were 29. 3。

— 586. 04 j g/mL (厂=4. 999 8), 2. 64 — 58. 64 j g/mL ( o =
0.999 7),7.29 -345.64 j g/mL (o = 1. 200 4), 1espechvely. The average recoveries were 97. 63% ,99. 94% , 177 25% , and the RSD -
were 4.93% , 4. 60% and 1. 20% , respechvep( n = 6). The contents of paeopiUo/d, morroniside and Pvamn of the 3 batches were in the
range of 1. 659 - 1. 904 mg/g,4. 269 -4. 78 mg/l and 4. 512-0. 627 mg/g,respechvep. Conclusion This methop has hig/ secs/mity and
goop specibcby ,which can be used for the conteci determination V paeopiborid , movonisido and Pvamn in Yishen Zhuanggu Pibs.
Key wordt : Yishen Zhuanggu Pil l s : paeoniUo/n ; movonisido ; Pvamn ; conteci determination ; HPLC
益肾壮骨丸是宝应县中医医院获得专利授权的 独家制剂，由山萸肉、枸杞子、杜仲、白芍、赤芍等7
余味中药组方，具有补益肝肾、壮骨强身、活络通经 的功效，主要用于肝肾亏虚、筋骨痿弱引起的腰腿 痛、关节痛、腰膝酸软、四肢无力等病症，临床应用广 泛且疗效确切［1］0方中山萸肉为君药，白芍和赤芍为 臣药，莫诺苷、马钱苷为山萸肉的主要活性成分［0-6］,
芍药苷为白芍和赤芍的主要活性成分［7-7］0本方药 味较多，但现行标准仅有性状鉴别和常规检查项，无 法有效控制产品质量。

本研究中以芍药苷、莫诺苷和 马钱苷为指标成分，建立了同时测定益肾壮骨丸中3 种成分含量的高效液相色谱（HPLC ）法w -7」。

现报道
如下。

1 仪器与试药
111 仪器
AgiNnt764型高效液相色谱仪（包含DAD 检测
器，美国安捷伦科技有限公司）；Mettler Toledo XS225
DU 型分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司,精度为十万分
之一）;KH -400KDE 型高功率数控超声波清洗器（昆山禾 创超声仪器有限公司，功率为374 W,频率为54 kHz ）；
OGH64型电热恒温干燥箱（美国赛默飞世尔科技公司）；
MUll-Q 型超纯水仪（美国密理博公司）；BT - 74型多
功能粉碎机（浙江拜杰电器有限公司，功率为554 W,频 率为 50~ 60 Hz ）0
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•质量研究•Quality Research
2020年1月5 日第29卷第21期
Vol. 29, No. 23 November 5, 2020
China Pharmaccuticals
1 •
2 试药
益肾壮骨丸（宝应县中医医院，批号分别为
20 1 8 1 1 1 9,20 1 8 1 203,20 1 8 10 1 8,规格为每盒 43 y ）;芍药
苷对照品（批号为11 0736 - 20 1 74 1 ,含量为53. 7%。

，莫
诺苷对照品（批号为111998 -201 602,含量为96. 3% /, 马钱苷对照品（批号为1 1 1 640 -20 1 808,含量为99% ; 批号为11 1 640-20 1 606,含量为98. 3%。

，均购自中国
食品药品检定研究院；乙腈（色谱纯，北京迪马科技有限
公司）；甲醇、乙醇、磷酸（分析纯，国药集团化学试剂有 限公司）；水为纯化水。

2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱：Agilent Eclipse XDB - Ci 8 柱（250 mm x
4. 6mm,5
Mm ）;流动相：乙腈（A ）-0.3%磷酸溶液（B ）,
梯度洗脱程序见表1;流速：1 mL/mio;检测波长： 230 om （芍药苷），244 om （莫诺苷、马钱苷）；柱温K C ;
进样量12 m L 。

表1 流动相梯度洗脱程序
时间（min ）A (% )
B (% )0〜207
93
20 〜577—20
93—80
50 〜5520
80
55 〜66
20—780—9360〜747
93
2.2 溶液制备
供试品溶液:取样品粉末（过5号筛）5 y,精密称定，置 具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50 mL ,称定质量，超声处理 （功率为300 W ,频率为50 kHz ）30 min,放冷，再称定质量,
用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液,即得。

混合对照品溶液:分别取芍药苷、莫诺苷和马钱苷
对照品适量,精密称定,用甲醇溶解,分别制成质量浓度
3 172,0. 587,3 0 1 7 my/mL 的对照品贮备液。

精密吸取
芍药苷贮备液5 mL 、莫诺苷贮备液1 mL 、马钱苷贮备液
3 mL,置12 mL 容量瓶中，用甲醇稀释成每1 mL 含芍药
苷586. 0 M7、莫诺苷58. 5 M7、马钱苷305. 5 MO 的混合
对照品溶液，避光保存。

再用甲醇稀释成每1 mL 含芍药 苷293. 0 MO 、莫诺苷29. 0 MO 、马钱苷152. 9 MO 的混合 对照品溶液。

阴性对照品溶液:按处方比例和制备工艺制备缺山
萸肉、白芍和赤芍（芍药苷）的阴性样品，取阴性样品粉
末,按供试品溶液制备方法制备,即得。

2.3 方法学考察
系统适用性试验:取对照品溶液、供试品溶液、阴性
对照品溶液各2 m L 注入液相色谱仪测定，记录色谱
图。

结果见图6芍药苷、莫诺苷和马钱苷色谱峰的理 论板数均不低于5 000,与相邻峰的分离度均大于3 3o
专属性试验：分别取不同批次（批号分别为
20 1 8 1 1 1 9,2 1 8 1 203,20 1 8 1 0 1 8）样品及山茱萸、芍药苷阴
性样品粉末,依法制备供试品溶液和阴性对照品溶液，
按拟订色谱条件进样测定，并记录色谱图。

详见图1 1结果
3批样品均检出莫诺苷、马钱苷和芍药苷的色谱峰，阴
性样品均未检出相应色谱峰，益肾壮骨丸中其他成分对芍 药苷、莫诺苷和马钱苷未造成干扰，表明方法专属性良好。

线性关系考察:取混合对照品贮备液适量,用甲醇 稀释成6个不同质量浓度的混合对照品溶液，芍药苷质
量浓度分别为 29. 30,58. 60,11 7. 20,293. 00,468. 80 ,
586. 00 Mf/mL,莫诺苷质量浓度分别为2. 94,5. 87,
13 75,29, 37,46. 99,58: 74 Mf/mL,马钱苷质量浓度分别
为 15. 29,30. 37,63 14,152. 85,244: 36,305. 50 Mf/mL 。

取上述溶液各12 m L 分别注入液相色谱仪,测定,记录
A (230 nm)
mAU
C (230 nm)
i2 min
1501271007350270
19.5602
35.696
b
mAU
10
20 30
40 50 60
A ；240 nm)
i/min 6芍药苷 2.莫诺苷 3.马钱苷
tU min
A,A ；.混合对照品溶液 B,B ；.供试品溶液 C,C ；.阴性对照品溶液
图1 高效液相色谱图
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•质量研究•Quality Research
22年1月5日第29卷第21期
Vol.29,NxO1,November5,2020 China Pharmaceuticals
色谱图。

以各对照品的质量浓度（X,Mg/mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得芍药苷、莫诺
苷、马钱苷的回归方程，Y芍=7678X芍+9569（= 0.9938）,Y莫=774X莫+4280（r= 0.9997）,Y马= 7 136X马+9019（4=1.0000、结果表明，芍药苷、莫诺苷和马钱苷的质量浓度分别在29.34-586.00, 2.94~5&74,15.29〜305.70Mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

检测限与定量限确定:分别取芍药苷、莫诺苷、马钱苷对照品贮备液适量，加甲醇稀释成适当质量浓度的溶液，取7m L进样分析。

以信噪比（S/N）=3为指标，结果芍药苷进样质量浓度为0.44Mg/mL,即检测限为40X7-3M0；莫诺苷进样质量浓度为0.29M g/mL,即检测限为2OX10-3M0；马钱苷进样质量浓度为0.31Mg/mL,即检测限为3.1X10-3Mg o以S/N=7为指标,结果芍药苷进样质量浓度为106Mg/mL,即定量限为70x7-M g；莫诺苷进样质量浓度为0.98Mg/mL,即定量限为9.3X10-3M0；马钱苷进样质量浓度为102Mg/mL,即定量限为70X3-3Mg。

精密度试验:取混合对照品溶液,按拟订色谱条件
连续进样6次，记录色谱图。

结果芍药苷、莫诺苷和马钱苷峰面积的RSD分别为0.53%,009%,0.55%（n=6）,表明仪器精密度良好。

重复性试验:取样品（批号为2018117）粉末，依法平行制备6份供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算含量。

结果芍药苷、莫诺苷和马钱苷含量的RSD分别为0.57%,0.84%,0.69%（n=6）,表明方法重复性良好。

稳定性试验：取样品（批号为2018139）粉末，依法制备供试品溶液，分别于室温下放置0,4,8,7h后按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。

结果芍药苷、莫诺苷和马钱苷的峰面积均无明显变化，RSD均小于1%（n=4）,表明供试品溶液在3h内稳定性良好。

加样回收试验:取样品（批号为223117）粉末（过5号筛）2.5g,精密称定，精密加入含芍药苷293.0mo、莫诺苷290M0、马钱苷32.7M0的混合对照品溶液3mL,平行制备4份,按拟订色谱条件进样，测定各待测成分含量，并计算加样回收率。

结果见表2o
耐用性考察：分别米用AgVenR266型和Waters e2695型液相色谱仪，以及AgOent Eclipse XDB-C1、Inertsil ODS-SP Ci3,All/ma C n色谱柱测定对照品溶液和供试品溶液，结果待测成分分离均较好，对含量测定结果也无影响，表明该方法耐用性良好。

2.4样品含量测定
取不同批次（批号分别为2213117,203723,
表2加样回收试验（n=6）
成分样品含量（m-）加入量（m-）测得量（m-）回收率（％）1(%)RSD(%)芍药苷 4.3709 4.3908.607494.03
4.5749 4.39058.645599.00
4.3794 4.39058.730799.37
90.939.23
4.5396 4.39058.013493.33
4.3305 4.39058.696593.09
4.5333 4.39058.678390:75
莫诺苷9.41949.44799.803893.59
9.42579.44799.859899.76
9.41999.44799.569499.89
99069.29
9.45749.4479 5.304393.73
9.45739.4479 5.365439.55
9.45779.44799.558499.53
马钱苷7.5750 5.2937 3.6535175.74
70897 5.2937 3.645833.55
7.575720937 3.6504197.74
197057.09
7.574020937 3.6530197.47
7.576420937 3.597339.93
7.570920937 3.546699.97
2218718）样品粉末,依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定各待测成分含量。

结果见表3o
表3样品含量测定结果（mg/g）
批号芍药苷莫诺苷马钱苷2018111707590.1690012 2018703 1.8720.730.535 20181218 1.0040.780.427
3讨论
3.1色谱条件选择
分别考察了乙腈-磷酸、乙腈-水、甲醇-醋酸的流动相体系，并综合比较峰形、分离度、出峰时间等参数，选择以乙腈-0.3%磷酸溶液梯度洗脱为流动相。

在200〜440nm波长范围内进行扫描，选择有最大吸收且干扰峰较少的230nm波长测定芍药苷,240nm波长测定莫诺苷、马钱苷。

3.2样品前处理方法考察
提取溶剂与提取方法：取样品（批号为203718）粉末（过3号筛）5g,精密称定，置具塞锥形瓶中，共8份。

分别为甲醇加热回流组、甲醇超声组、74%甲醇加热回流组、74%甲醇超声组、乙醇加热回流组、乙醇超声组、70%乙醇加热回流组和70%乙醇超声组，分别精密加入对应提取溶剂50mL,并按对应提取方法提取34min,考察待测成分的含量。

结果表明，甲醇提取的各待测成分的含量均大于乙醇;加热回流提取法与超声提取法相比,未见更多的色谱峰信息，且待测成分含量差异不大，超声提取法更方便快捷,故选择以甲醇超声提取o
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22年11月5日第29卷第21期
Vo/ 29, No. 41, November 5,2020
China Pharmaceuticals
Quality Research
dV ： 14. 3969/j. U n n 704 - 493 7 2020. 2/ 017
药用胶塞中残留水分检测方法探讨*
吴红洋1，詹宇杰1，李 莎1，蒋 波1，余春梅4，蒋 猛4，范能全1A
*基金项目：重庆市科研机构绩效激励引导专项项目［csm2419jxje30444］。

第一作者：吴红洋，女，硕士研究生，工程师，研究方向为药包材相容性，(电子信箱)why751224421@73. com 。

△
通信作者：范能全，男，硕士研究生，正高级工程师，研究方向为药包材相容性与新药药理学，(电子信箱)**************。

(1.重庆市食品药品检验检测研究院，重庆441121； 2.西南药业股份有限公司，重庆400033)
摘要：目的建立药用胶塞残留水分的测定方法。

方法采用卡式炉-卡尔费休法，通过优化取样部位、取样方式、加热时间等条件，测 定胶塞中的水分含量。

结果 优化后的条件为冠部剪碎，取样量约为220 mg,加热温度为254 C ，加热时间为45 min,载气流量为 40 mL/min ；该方法准确度和灵敏度较高；平均加样回收率为99. 36% , RSD 为1.53% (n = 4)o 结论 该方法操作简单、结果准确、重复
性好，可用于药用胶塞中水分含量的快速测定。

关键词：卡式炉-卡尔费休法；药用胶塞;残留水分
中图分类号：R955
文献标识码：A
文章编号：1006 - 4931 (2020)21 -0059 -03
Detection of Residuat Moistsro in MeOicinat Rubber Stopper
WU Hongyuag 1, ZHAN Yujie 1, LA Sha 1, JIANG B o 1 , YU Churned , JIANG Meng 2, FAN Nengquun 1
(I. Chongqing Insi/uie foo Food and Drug Control , Chongqing , China 401III ; 2. Sf/wd Pharmaceutical Co. , Li/. , Chongqing , China 400038
、
Abstract : Objective To estab/sh a methop for the detechon oV residual moisture in a medical rubber stopper. Methodt The sampling
position , sampling methop and heating time were optimized , and the moisture content in the ruPbor stopper was detected by the oven
sample changer — Kart Fisher methop. Reshlts The optimized condiUons were as follows : the crown V medical ruPbor stopper was cut into pieces , the sample size was 200 mg, the heating temperature was 250 C , the heating time was 47 min, and the carrier gas Uow
rate was 40 mL/min. The accuracy and secs/mity V the methop were hig/, the average recovem was 95.36% , and the RSD was
1. 33% 2 n =6). Conclusion The methop is simple ,accurate and repropucibP,which can be used for the rapid detecUon V moisture in
a medical ruPbor smppe/
Kyy words ： oven sample changcr - Kart Fisher methop ;medical rubber smppcr;residual moisture
胶塞中的残余水分易迁移至药物中，会影响药品的 针剂[1-4]0研究表明，冻干制剂的水分来源主要是胶塞安全性，特别是对于水分较敏感的冻干制品和抗生素粉残留水分的释放，胶塞的清洗、灭菌过程均会导致水分
提取时间:考察了不同提取时间下待测成分的含量 差异。

取样品粉末(过3号筛)约3 g,3份，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇54 mL,分别超声提取34,
27,64 min 0结果表明，3份样品中待测成分的含量无明
显差异，故选择超声处理34 min 。

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