高效液相色谱法同时测定止颤颗粒中芒果苷和芍药苷的含量

高效液相色谱法同时测定止颤颗粒中芒果苷和芍药苷的含量吴飞;洪燕龙;张继全;阮克锋
【摘要】目的建立高效液相色谱法(HPLC)用于同时测定止颤颗粒中芒果苷和芍药苷的含量.方法色谱柱为Agilent Zorbax SB C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2％冰醋酸溶液(15∶85),流速1.0 mL· min-1,柱温30℃,检测波长230nm.结果芒果苷和芍药苷的进样质量分别在0.05340～2.670μg(r =0.9999)和0.02930 ～1.465μg(r =0.9997)范围内线性良好,平均加样回收率分别为99.88％(RSD=1.6％)和99.78％(RSD=1.2％).结论该研究建立的方法专属性强、重复性好、结果准确可靠,可用于止颤颗粒的质量控制和评价方法.%Objective To establish a HPLC method for the simultaneous determination of mangiferin and paeoniflorin in Zhichan granules.Methods The separation wa s carried on an Agilent Zorbax SB C18 column (4.6 mm × 250 mm,5 μm) and acetonitrile-0.2％acetic acid solution (15∶85) was employed as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL · min-1 with UV detection wavelength at 230nm and the column temperature was kept at
30 ℃.Results The linear ranges of mangiferin and paeoniflorin were
0.05340 ～2.670μg (r =0.9999) and 0.02930 ～1.465 μg (r
=0.9997),respectively.The average recoveries were 99.88％ (RSD =1.6％) and 99.78％ (RSD =1.2％).Conclusions The method is simple and accurate with good specificity and reproducibility,and it can be used for the quality control and evaluation of Zhichan granules.
【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2016(020)012
【总页数】4页(P2266-2269)
【关键词】止颤颗粒;芒果苷;芍药苷;高效液相色谱法;含量测定
【作者】吴飞;洪燕龙;张继全;阮克锋
【作者单位】上海中医药大学中药学院,上海 201203;上海中医药大学中药现代制
剂技术教育部工程研究中心,上海 201203;上海张江中药现代制剂技术工程研究中心,上海 201203;上海中医药大学中药现代制剂技术教育部工程研究中心,上海201203;上海张江中药现代制剂技术工程研究中心,上海 201203;上海中医药大学
中药现代制剂技术教育部工程研究中心,上海 201203;上海张江中药现代制剂技术
工程研究中心,上海 201203;上海中医药大学中药现代制剂技术教育部工程研究中心,上海 201203;上海张江中药现代制剂技术工程研究中心,上海 201203
【正文语种】中文
止颤颗粒来自于上海市中医医院的临床有效经验方，具有益气养阴、熄风清热的功效，主要用于肝肾不足、气血两虚型帕金森病的治疗，能有效改善震颤、肢体僵硬、便秘等症状，无论是单用还是与西药合用，临床效果均较好[1-5]。

方中7味药材，钩藤为君药，炒白芍和知母为臣药。

前期的研究中建立了钩藤碱和异钩藤碱、芍药苷的高效液相色谱法(HPLC)测定方法[6]。

为了提高产品的质量控制水平，针对处
方中2个臣药中的指标性成分，本研究建立了同时测定止颤颗粒中芒果苷和芍药
苷含量的HPLC测定方法，为制定质量标准奠定基础。

1.1 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪，含四元泵、自动进样器、柱温箱、DAD 检测器和Agilent ChemStation色谱工作站(美国安捷伦公司)；XP 205型分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；FA2104N分析天平(上海精密科学仪器有限公
司)；SK5200超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；Milli-Q型超纯水制备
仪(密理博中国有限公司)；TGL-18C型高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.2 试药芒果苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：111607-200402)；芍
药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110736-201035)；止颤颗粒3批(批号分别为150412、150413和150415，均为自制中试规模样品)；冰醋酸、甲醇、乙醇均为分析纯，乙腈为色谱纯，水为超纯水。

2.1 色谱条件 Agilent Zorbax C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈-0.2%冰醋酸溶液(15∶85)为流动相，流速为1.0 mL·min-1，柱温30 ℃，检测波
长230 nm。

2.2 样品溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取芒果苷和芍药苷对照品对照品适量，分别加甲醇制成1.068 g·L-1芒果苷的对照品溶液母液和1.172 g·L-1芍药苷的对照品溶液母液；分别用甲醇稀释制成含芒果苷534.0 mg·L-1和芍药苷29
3.0 mg·L-1的混合
对照品溶液A，含芒果苷53.40 mg·L-1和芍药苷29.30 mg·L-1的混合对照品溶
液B。

2.2.2 供试品溶液的制备取止颤颗粒适量，研细，取约0.4 g，精密称定，置具塞
锥形瓶中，精密加入25 mL稀乙醇，称重，密封，超声30 min，冷却后补足失重，16 000 r·min-1高速离心，取上清液，即得。

2.2.3 阴性样品的制备按照工艺[4]进行实验室制备缺知母和炒白芍的阴性样品。

取阴性样品适量，按照“2.2.2”项下方法操作，制得止颤颗粒阴性样品。

2.3 方法学考察
2.3.1 专属性分别精密吸取含芒果苷和芍药苷对照品溶液、止颤颗粒供试品和止颤颗粒阴性样品10 μL，在上述色谱条件下进样分析，结果显示阴性样品不干扰芒果苷(tR=6.7 min)和芍药苷(tR=12.6 min)的测定，色谱图见图1。

2.3.2 线性关系的考察分别精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液B 1.0、2.5、5.0、10.0 μL和混合对照品溶液A 2.5、5.0 μL，分别注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积对进样量进行线性回归，分别得到芒果苷和芍药苷对照品的回归方程。

结果表明芒果苷和芍药苷在0.053 40～2.670 μg和0.029 30～1.465 μg 范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系。

具体数据见表1。

2.3.3 精密度试验精密吸取含芒果苷53.40 mg·
L-1和芍药苷29.30 mg·L-1的混合对照品溶液B 10 μL，重复进样6次。

结果芒
果苷和芍药苷峰面积RSD分别为0.14%和0.8%，结果表明进样精密度良好。

2.3.4 重复性试验取止颤颗粒(批号：150412，下同)0.4 g，按“2.2.2”项下方法处理并测定，平行处理6份，计算样品中芒果苷和芍药苷的平均含量分别为3.540 mg·g-1和5.831 mg·g-1，RSD分别为1.7%和1.2%，结果表明样品测定重复性良好。

2.3.5 稳定性试验取止颤颗粒0.4 g，按“2.2.2”项下方法处理，于0、2、4、6、8、12 h进样测定，芒果苷和芍药苷的RSD分别为0.4%和0.9%，结果表明在室
温放置条件下12 h内供试品溶液中2个成分保持基本稳定。

2.3.6 加样回收率试验取已知含量的供试品0.2 g(批号：150412，芒果苷和芍药
苷的含量分别为3.540 mg·g-1和5.831 mg·g-1)9份，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入质量浓度为1.068 g·L-1的芒果苷对照品溶液0.4 mL(低浓度)、0.7 mL(中浓度)和1.0 mL(高浓度)，以及质量浓度为1.172 g·L-1的芍药苷对照品溶液0.5 mL(低浓度)、1.0 mL(中浓度)和1.4 mL(高浓度)，按“2.2.2”项下方法处理并测定。

回收率结果见表2。

结果表明，此方法芒果苷和芍药苷的的平均回收率为99.88%和99.78%，符合要求。

2.4 样品测定取止颤颗粒3批，按照“2.2.2”项下方法处理并测定芒果苷和芍药
苷的含量，结果见表3。

白芍和知母虽然不是复方中常用的药对，但是在复方中联合使用具有一定的频率[7-9]。

已有研究[8,10]对于芍药苷和芒果苷的分离条件使用梯度洗脱，比较耗时，或者是使用了质谱检测器[9]，对仪器要求较高。

本研究首次建立了中药复方制剂止颤颗粒中芍药苷和芒果苷同时测定的HPLC方法，对仪器要求不高，前处理简单，分析时间短，测定准确，方法学合格，为其他类似复方的定量控制提供借鉴。

本次研究中，测定波长的选择在芍药苷的吸收波长230 nm[11]和芒果苷的吸收波长258 nm[11]之间进行了考察，芍药苷在258 nm下几乎无吸收，而芒果苷在2个波长下的吸收强度接近，最后选择230 nm作为样品测定波长。

在流动相选择方面，笔者参考药材检查条件，芍药苷的流动相比例为乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)，芒果苷的流动相比例为乙腈-0.2%冰醋酸(15∶85)[11]，有机相比例接近，通过比较后选择乙腈-0.2%冰醋酸(15∶85)作为2个成分同时测定的流动相比例，既节约了分析时间，又能保证芒果苷的出峰不受杂质的干扰。

【相关文献】
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