长沙健路医学检验所有限公司-九项遗传性耳聋基因检测试剂性能验证报告(全血修改)

长沙健路医学检验所有限公司九项遗传性耳聋基因检测试剂性能验证报告
目录
一、验证目的
二、验证内容和方法
1.对象
2.内容与方法
3.设备
4.实验要求
5.操作程序
三、验证结果
1.阳性符合率
2.阴性符合率
3.空白验证
4.检测重复性
5.检测灵敏度
四、结果说明
五、验证结论
一、验证目的
本实验室计划使用北京博奥生物集团有限公司晶芯®九项遗传性耳聋基因检测试剂盒（微阵列芯片法）[国食药监械（准）字 2013 第 3401518 号]开展相关检测项目，根据《ISO15189：医学实验室-质量和能力的专用要求》，为保证实验室按照厂家所提供的试剂盒或检测系统说明书使用时，能复现生产厂家所宣称的检测性能，按照实验室质量管理计划，对生产厂家提供的试剂盒和检测系统进行了性能验证，报告如下。

二、验证内容与方法
1.对象
1.1晶芯®九项遗传性耳聋基因检测试剂盒（微阵列芯片法）
1.2基因组 DNA 提取试剂盒为北京康为世纪有限公司血液基因组非柱式提取试剂盒（CW0544）
1.3样本：人全血，适用抗凝剂为 EDTA 或枸橼酸钠等，不得以肝素抗凝。

不分病种、检测目的、性别、年龄。

1.4质控品：该试剂盒中均包含正常野生型质控品，同时实验室提供4个已知突变的阳性质控品，以保证结果的准确可靠。

2.内容与方法
根据产品说明书标示的性能指标，验证以下内容：
1.1阳性符合率：已经测序确定为特定突变的核酸4（4例，每种类型突变一例）例，由本实验室使用待评价试剂盒进行测试，结果应与已知结果一致，阳性符合率应达到100%。

1.2阴性符合率：已经测序确定为野生型的核酸2（2例，正常人）例，由本实验室使用待评价试剂盒进行测试，结果应与已知结果一致，阳性符合率应达到100%。

1.3空白验证：用实验室常用灭菌纯水代替样本，由本实验室使用待评价基因检测试剂盒进行1次测试，结果应均为未检出。

1.4检测重复性：取已知结果样本2（2例，涵盖已知阳性一例，阴性一例）份，未知结果样本2（2例，正常人标本）份，由本实验室使用待评价基因检测试剂盒分别进行3次测试，3次检测结果应一致。

1.5检测灵敏度：测量试剂盒中自带核酸浓度，由本实验室使用待评价基因检测试剂盒进行 3 次测试，结果应正确。

3.设备
1.1台式高速离心机
1.2恒温金属浴
1.3涡旋振荡器
1.4分光光度计
1.5PCR扩增仪
1.6水浴锅
1.7晶芯®SlideWasher 24芯片洗干仪
1.8晶芯® LuxScan 10K-B微阵列芯片扫描仪
4.实验要求
1.1实验室要求：严格按照临检中心要求进行分区，保证实验的规范操作和结果的准确可靠。

1.2实验室设备：各项性能指标应在参考范围之内，经工程师调试安装后方可进行常规实验操作。

1.3实验操作人员：应熟悉方法原理与操作，能对样本进行正确处理，并按流程顺利进行DNA 抽提、PCR扩增、芯片杂交、洗片与扫描操作。

1.4实验前，本实验室需按照待评价产品说明书要求建立实验检测条件，并通过阳性对照和阴性对照试验。

1.5严格按照试剂盒说明书要求保存产品及全血样本。

5.操作程序
1.1检测流程：全血标本编号标记→检测前准备→提取 DNA→PCR扩增→芯片杂交→洗片与扫描→输出结果。

1.2检测步骤严格按照相关标准操作规程。

三、验证结果
1.阳性符合率：结果见下表。

操作者徐圳，何婕审核者石坚
操作日期2017年8月17日审核日期2017年8月18日样本号测序结果本实验室检测结果（基因型）
1 235 del C杂合突变235 del C杂合突变
2 538 C > T杂合突变538 C > T杂合突变
3 299_300 del AT杂合突变299_300 del AT杂合突变
4 2168 A > G杂合突变2168 A > G杂合突变
阳性样本号1原始数据显示：
阳性样本号2 原始数据显示：
阳性样本号4原始数据显示：
本实验室4个样本分别检测1次，结果与测序完全一致，阳性符合率100%。

2.阴性符合率：结果见下表。

操作者徐圳，何婕审核者石坚
操作日期2017年8月17日审核日期2017年8月18日样本号测序结果本实验室检测结果（基因型）
5 试剂盒范围内的九个位点均野生试剂盒范围内的九个位点均野生
6 试剂盒范围内的九个位点均野生试剂盒范围内的九个位点均野生
阴性样本号6原始数据显示：
本实验室2个样本分别分别检测1次，结果与测序完全一致，阴性符合率100%。

3.空白对照：结果见下表
操作者徐圳，何婕审核者石坚
操作日期2017年8月17日审核日期2017年8月18日样本号本实验室检测结果（基因型）
NC 只有QC、PC、MC质控探针信号
本实验室1个空白检测1次，结果与理论结果完全一致，。

4.检测重复性：结果见下表。

操作者徐圳，何婕审核者石坚
操作日期2017年8月17日审核日期2017年8月18日样本号本实验室检测结果（基因型）
1 235 del C杂合突变
5 试剂盒范围内的九个位点均野生
7 试剂盒范围内的九个位点均野生
8 试剂盒范围内的九个位点均野生
阳性样本1重复性第一次原始数据显示：
阳性样本1重复性第二次原始数据显示：
阳性样本1重复性第三次原始数据显示：
本实验检测结果重复3次结果完全一致，重复率100%。

5.检测灵敏度：结果见下表。

操作者徐圳，何婕审核者石坚
操作日期2017年8月17日审核日期2017年8月18日样本号本实验室检测结果（基因型）
试剂盒自带核酸稀释
试剂盒范围内的九个位点均野生（80ng/ul）
试剂盒自带核酸稀释
试剂盒范围内的九个位点均野生（40ng/ul）
试剂盒自带核酸稀释
试剂盒范围内的九个位点均野生（20ng/ul）
样本浓度为80ng/ul样本原始数据显示：
样本浓度为40ng/ul样本原始数据显示：
样本浓度为20ng/ul样本原始数据显示：
本实验检测结果分别检测1次结果完全一致。

四、检测结果说明
本试剂盒用于检测人全血基因组 DNA 中与遗传性耳聋相关的9个突变位点，检测结果可以辅助临床诊断，也可用于流行病学调查及产前筛查、新生儿筛查等领域，试剂盒检测指标如下表：
表1 试剂盒检测指标
基因名称突变位点突变位点描述
GJB2
35 35 del G 176 176 del 16 235 235 del C 299 299 del AT
SLC26A4 IVS7-2 IVS7-2 A>G 2168 2168 A>G
线粒体12S rRNA 1555 1555 A>G 1494 1494 C>T
GJB3 538 538 C>T
GJB2基因编码缝隙连接蛋白26，缝隙连接蛋白调控细胞间的离子交换，耳蜗毛细胞中高表达。

GJB2基因突变相关的耳聋为隐性遗传方式，当发生纯合突变时，影响离子通道正常功能，患者出生即表现出耳聋症状，此突变导致的耳聋预示良好的人工耳蜗移植效果。

SLC26A4基因编码pendrin蛋白，pendrin蛋白属于离子转运体家族，调节细胞膜离子转运。

SLC26A4基因突变相关的耳聋为隐性遗传方式，当发生纯合突变时，患者脑部抗压力变化能力降低，患感冒、头部受打击时，听力急剧下降。

此突变个体应避免颅压增大和使用耳毒性药物，建议使用改善微循环药物和神经营养药治疗。

12S rRNA基因编码产物结构类似细菌16S核糖体RNA，该基因突变携带者使用氨基糖苷类药物会引起耳蜗的ATP合成障碍，导致重度耳聋的发生，因此检出此类突变的个体应终身慎用氨基糖苷类抗生素药物。

同时，由于该基因为
线粒体遗传方式，突变个体的母系家族成员同样需终身慎用氨基糖苷类抗生素药物。

五、验证结论
经验证，本实验室使用北京博奥生物集团有限公司晶芯®九项遗传性耳聋基因检测试剂盒（微阵列芯片法）[国食药监械（准）字 2013 第 3401518 号]的检测符合率、重复性和灵敏度等性能指标能够达到厂家的性能要求，验证通过。