23552334_IAC-UPLC_法测定小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法研究

分析与检测
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）是小麦、玉米等谷物粮食中较为常见的真菌毒素之一，其污染范围也较广。

人类与动物过量摄入DON会引起呕吐、腹泻等急性中毒反应，故DON也称为呕吐毒素；长期食用DON污染的食品也会诱发食管癌、贫血、免疫能力下降等疾病，故科学准确地检测被其污染的粮食及其制品对保护人畜健康至关重要[1]。

GB 5009.111-2016[2]中规定了ID-LC/MS/MS、IAC-HPLC、TLC 及ELISA 4种检测方法，前者对于基层实验室而言，设备使用维护成本较高，后两者则仅适用于定性和半定量检测。

因此，根据检测需求和设备条件建立和验证IAC-UPLC法测定小麦粉中DON的方法非常必要。

1　材料与方法
1.1　材料与试剂
小麦粉为市售。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准物质（坛墨质检，编号72663，批号0871904）。

乙腈、甲醇为色谱纯；聚乙二醇（分析纯）；磷酸盐缓冲溶液（PBS）：称取8.0 g氯化钠、1.2 g 磷酸氢二钠、0.2 g磷酸二氢钾、0.2 g 氯化钾溶解于900 mL水中，用盐酸调节pH至7.0，用水稀释至1 L；实验用水为一级水。

1.2　仪器与设备Waters UPLC超高效液相色谱仪（配PDA检测器）；电子天平（精度 0.000 01 g）；超声波清洗机；离心机；氮吹仪；固相萃取仪；脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱等。

1.3　实验方法
1.3.1　试样前处理
①准确称取25 g粉碎、过筛的试样于具塞三角瓶中，加入5 g聚乙二醇，加入100 mL纯水，摇匀，超声20 min， 经玻璃纤维滤纸过滤后10 000 r/min
下离心5 min，滤液待净化。

②将冷藏
的DON免疫亲和柱恢复至室温，待其
中原有液体流尽后，准确吸取2.0 mL
试样滤液至免疫亲和柱中，控制样液
以1滴/秒的流速过柱，然后依次用
5 mL PBS和5 mL纯水以1滴/秒的流
速淋洗小柱，弃去淋洗液并抽干小柱。

③准确吸取2.0 mL甲醇至上述小柱中，
控制1滴/秒的流速洗脱亲和柱，收
集洗脱液，于50 ℃下氮吹至近干，加
入1.0 mL甲醇+水（20+80，V/V）涡
旋溶解残留物，过0.2 μm滤膜后待测。

1.3.2　标准系列配制
称取0.84 mg DON标准物质，用
乙腈溶解并定容至10.0 mL，配制得
84 μg/mL的标准储备液。

再用甲醇+
水（20+80，V/V）逐级稀释配制成84、
168、420、840、1 680 ng/mL与
4 200 ng/mL的标准系列。

1.3.3　液相色谱条件
液相色谱柱：C18柱（1.7 μm，
100 mm×2.1 mm），柱温35 ℃；流
动相：甲醇+水（20+80，V/V），等
度洗脱，流速0.4 mL/min；检测器：
PDA检测器，波长218 nm；进样体积：
10 μL；定性方法：保留时间；定量方法：
峰面积外标法。

2　结果与分析
2.1　线性关系及检出限
将配制的DON标准系列按照上
述色谱条件测定，以标曲系列点浓度
（x）为横坐标，色谱峰面积（y）为纵坐
标，绘制标准曲线，得回归方程为
y=18x-642，相关系数为0.999 8，表
明线性关系良好。

以3倍信噪比对应的
目标物最低响应浓度为仪器最低检出
限，根据试样处理过程中称样量25 g，
稀释倍数50倍，定容体积1 mL，计
算得本方法检出限为51 μg/kg，低于
国标方法中的检出限。

2.2　加标回收率与精密度
准确称取12份不含DON的阴性
小麦粉试样，分为两组加入不同浓度
水平的标准溶液，其中1～6号试样
中加入107 μg/mL的DON标准溶液
100 μL，7～12号试样中加入107 μg/mL
的DON标准溶液370 μL，按照上述前
处理过程操作、色谱条件测定，考察其
加标回收率与精密度，计算得该方法的
加标回收率为81.4%～100.9%，RSD
为0.05%～0.07%，满足GB/T 27404-
2008的要求。

2.3　实际样品的测定
采用该方法测得某小麦粉中DON
含量为613 μg/kg，为验证本方法的有
效性，在期间精密度条件下由另一位
检验员再次测定，测得其中DON含量
为590 μg/kg，两次测定绝对差值/算
术平均值为3.8%，符合GB 5009.111-
2016的规定。

3　结论
本方法参照国标方法建立的IAC-
UPLC法测定小麦粉中DON的检测方
法，色谱分离效果较好，线性关系良好，
检出限低于国家标准方法，加标回收
率与精密度均符合相关规定，可以满
足小麦粉及其制品中脱氧雪腐镰刀菌
烯醇的检测需求。

参考文献
[1]祭芳,张新明,徐学万,等.镰刀
菌毒素限量及检测方法标准现状研究[J].
农产品质量与安全,2018(4):59-65.
[2]中华人民共和国国家卫生和计
划生育委员会.GB 5009.111-2016 食
品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌
烯醇及其乙酰化衍生物的测定[S].北京:
中国标准出版社,2016.
IAC-UPLC法测定小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法研究
□ 赵　芳　晋中市综合检验检测中心
摘　要：本研究参照国标方法、结合超高效液相色谱仪建立了测定小麦粉中DON的IAC-UPLC法，在84～4 200 ng/mL 范围内线性良好，检出限为51 μg/kg，加标回收率范围为81.4%～100.9%，RSD在0.05%～0.07%，均符合相关标准 规定。

关键词：小麦粉；脱氧雪腐镰刀菌烯醇；免疫亲和柱；超高效液相色谱
Nov. 2020 CHINA FOOD SAFETY 101。