(第五册)生化室作业指导书

ISO15189质量管理体系范本文件（第五册）
生化室作业指导书
文件编号：PYK-3-SH-01~61
第I版
编制：郭莎莎
审核：郭莎莎
批准：杨到凤
生效日期：2016年6月1日
濮阳市第二人民医院检验科
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修订页
血清总胆红素(T-BIL)测定
1. 实验原理
血清中的胆红素分为直接（结合）胆红素和间接（未结合）胆红素。

大多数方法是在1883年Ehrlich提出的重氮法胆红素测量法1，一些改良的方法已被用来增进反应。

这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应，生成一种有颜色的化合物，而间接胆红素需要一种溶剂，如表面活性剂后才能进行反应。

申能总胆红素试剂是改良的重氮法。

使用一种稳定的重氮盐，2,4-二氯苯胺重氮盐（DCA），与胆红素反应，形成红色偶氮化合物，它在540nm吸光度最大。

在540/600nm时的吸光度与标本中总胆红素的浓度成正比。

胆红素+DCA 红色偶氮化合物
表面活性剂
2. 标本：
2.1 病人准备：无特殊要求。

最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。

2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。

3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。

4. 标本运输：常温条件下避光保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。

6. 实验材料
6.1 试剂：申能总胆红素试剂盒（141 0817170 1 试剂1＋试剂2）
6.1.1 试剂组成
试剂1：6×64 ml
磷酸缓冲液40mmol/L
氯化钠9g/L
表面活性剂,稳定剂适量
试剂2：6×16 ml
2,4-二氯苯胺重氮盐1mmol/L
盐酸30mmol/L
表面活性剂适量
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存
试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂有效期为18个月。

试剂2必需避光保存。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用，不要入口，毒性还末确定；警告！腐蚀剂！不要入口；避免和眼睛，皮肤或衣服接触，如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。

6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件。

8.2仪器操作步骤：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪操作规程.SOP文件。

9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以TruCal U复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以μmol/L报告。

手工测定计算方法为：
△Au
总胆红素(μmol/L) = ×校准液浓度
△As
12. 参考值范围：
婴儿：出生24小时内＜150μmol/L
出生第2天22-193μmol/L
出生第3天12-217μmol/L
出生第4～6天 1.7-216μmol/L
儿童：＞一个月 3.4-17μmol/L
成年人： 1.7-21μmol/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。

根据好的实验室经验，每个实
验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义：胆红素是血红蛋白的降解产物。

游离胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。

在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。

在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。

溶血（肝前黄疸）、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。

人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert 综合症。

由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使60～70%的婴儿血液出现总胆红素增高。

常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。

直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。

14. 操作性能
14.1 线性范围：1.2～513μmol/L
14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法5，AU680批内精密度小于3%或SD≤0.07，总精密度小于5%或SD≤0.10。

用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

T-BIL检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x-0.00mol/L；r=1.000。

14.4 灵敏度：本试剂的检测限为1.2μmol/L。

14.5 病人结果可报告范围：1.2～513μmol/L
15. 超出范围结果处理：本法线性上限为513μmol/L。

如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。

16. 病危报警值的处理当新生儿血清标本测定结果总胆红素〉340μmol/L时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。

17. 方法局限性
17.1 本法线性上限为513μmol/L。

如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。

17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，血红蛋白浓度≤5.00g/L，甘油
三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。

18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。

19. 参考文献
1. Thomas L ed. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt:TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.192-20
2.
2. Tolman KG, Rej R. Liver function. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.1125-77.
3. Rand RN, di Pasqua A. A new diazo method for the determination of bilirubin. Clin Chem 1962;6:570-8.
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。

血清直接胆红素（D-BIL）测定
1. 实验原理
直接胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐形成重氮化合物，在酸性条件下呈红色。

2. 标本：
2.1 病人准备：无特殊要求。

最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。

2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。

3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。

4. 标本运输：常温条件下避光保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。

6. 实验材料
6.1 试剂：申能总胆红素试剂盒：141 0827170 1 试剂＋试剂2
6.1.1 试剂组成
试剂1：16×64ml
EDTA-Na2 0.07mmol/L
氯化钠 6.6g/L
氨基磺酸 70mmol/L
试剂2：6×16ml
2,4-二氯苯胺重氮盐 0.09mmol/L
盐酸 130mmol/L
EDTA-Na2 0.02mmol/L
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂有效期为18个月。

试剂2必需避光保存。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。

警告！腐蚀剂！不要入口。

避免和眼睛，皮肤或衣服接触。

如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟。

接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。

6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7. 仪器：奥林巴斯AU680生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2 仪器操作步骤：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪操作规程.SOP文件
检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法以TruCal U复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以μmol/L报告。

手工测定计算方法为：
△Au
直接胆红素(μmol/L) =--------×校准液浓度
△As
12. 参考值范围：≤6.8 mol/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。

根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义：胆红素是血红蛋白的降解产物。

游离胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。

在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。

在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。

溶血（肝前黄疸）、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。

人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert综合症。

由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使60～70%的婴儿血液出现总胆红素增高。

常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。

直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。

14. 操作性能
14.1 线性范围：1.7～171 mol/L
14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法5，AU680批内精密度小于4%或SD≤0.04，总精密度小于5%或SD≤0.07。

用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对85个样品进行DBIL检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.95x+0.68μmol/L；r=0.995。

14.4 灵敏度：1.7 mol/L。

14.5 病人结果可报告范围：1.7～171μmol/L
15 超出范围结果处理本法线性上限为171 mol/L。

样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。

16. 病危报警值的处理无。

17. 方法局限性
17.1 本法线性上限为171 mol/L。

样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。

17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。

血红蛋白浓度≥0.50g/L将产生干扰。

18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。

19. 参考文献：
Tietz, N.W.(Ed), Fundamentals of Clinical Chemistry, 3rd Edition, W.B. Saunders,1987.
Van den Bergh, A. and Mueller, P., Biochem Z,77:90,1916
NCCLS, Interference Testing in Clinical Chemistry, EP7-P,1986.
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 4th Edition, AACC Press, 1995. NCCLS, Evaluation Protocol EP5-T2,1992.
Rand, R. N., DI Pasque, A., Clin Chem 1962; 8: 570
Henry, J., Cannon, D. C., Winkelmann, J. V., Clinical chemistry, principles and technics, Harper & Row Publishers Ins., Hagerstown Maryland, 1974:1042
Thomas, L.: Labor and diagnose, 4th edition, Die Medizinische Verlagsgesellschaft, Marburg, 1992: 235
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。

血清总蛋白液体(TP)双缩脲法测定
1.实验原理
双缩脲比色终点法。

在碱性条件下，蛋白与铜离子生成紫蓝色复合物。

显色强度和蛋白浓度成正比。

OH—
蛋白质+ Cu2+ -------------﹥紫红色复合物
2. 标本采集
2.1 病人准备：无特殊要求。

最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。

2.2 类型：血清或血浆。

3. 标本存放20～25℃保存可稳定6天；4～8℃保存可稳定4周；-20℃保存至少可稳定1年。

4. 标本运输室温条件下运输
5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。

6. 实验材料:
6.1 上海申能总蛋白测定试剂盒货号：14223171701 试剂1＋试剂2
6.1.1 试剂组成
试剂1（R1）：6×64ml
氢氧化钠80 mmol/L
酒石酸钾钠12.8 mmol/L
试剂2（R2）：6×16ml
氢氧化钠100 mmol/L
酒石酸钾钠16 mmol/L
碘化钾15 mmol/L
硫酸铜 6 mmol/L
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂有效期为24个月。

试剂不可冰冻。

开盖后应避免污染。

6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：试剂中含有氢氧化钠，不可入口！如与皮肤及粘膜接触，请立即用大量
水冲洗。

使用试剂时应采取必要的防护。

6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以TruCal U复合校准品总蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以g/L报告。

12. 参考值范围[g/L]
成人：66～88
儿童/青少
男女
年：
1～30天42～62 41～63
1～6个月44～66 47～67
6个月～1岁56～79 55～70
1～18岁57～80 57～80
（注：各实验室应有自己的参考范围。

）参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。

根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义：总蛋白检测对于多种疾病的诊断都有价值。

肝脏蛋白合成缺陷、肾功能损伤引起蛋白丢失、肠道吸收不良或营养不良时总蛋白浓度下降。

而在慢性炎症疾病、肝硬化和脱水时总蛋白浓度升高。

14. 操作性能
14.1 线性范围：0.5～150g/L
14.2 精密度：重复性的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU680批内重复性小于3%，总不精密度小于3%。

用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对68个样品进行TP 检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x-0.7g/L；r=0.997。

14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.5g/L。

14.5 病人结果可报告范围0～150g/L，如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。

15. 超出范围结果处理：本法线性上限为150g/L。

如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。

16. 病危报警值的处理无。

17. 方法局限性
17.1 本法线性上限为150g/L。

如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。

17.2 干扰物质：静脉滴注大量右旋糖酐的病人血清或血浆，使用双缩脲方法的检测结果会明显增高，请选用其它方法（如凯氏定氮法）；当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，胆红素浓度≤684μmol/L，血红蛋白浓度≤5.00g/L，甘油三酯浓度≤11.3mmol/L时没有观察到干扰
18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。

19. 参考文献
1. Thomas L, editor. Clinical laboratory diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.644-7.
2. Johnson Am, Rohlfs EM, Silverman LM. Proteins. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999.p.477-540.
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。

血清白蛋白（ALB）溴甲酚绿（BCG）法测定
1.实验原理
在pH值 4.2时，白蛋白和溴甲酚绿染料结合产生蓝绿色复合物，在630nm处比色，颜色的深度与白蛋白浓度成正比。

pH4.2
白蛋白+溴甲酚绿--------------绿色化合物
2. 标本采集
2.1 病人准备：无特殊要求。

最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。

2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆。

3. 标本存放留取标本后请尽快分离血清/血浆。

在室温条件下（15～25℃）可以稳定一周，在冰箱保存的条件下（2～8℃）稳定一个月，-20℃保存至少可以稳定3个月。

4. 标本运输室温条件下运输
5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。

6. 实验材料:
6.1 上海申能白蛋白测定试剂盒（货号：11202271701，8×70ml）
6.1.1 试剂组成
柠檬酸盐缓冲液pH 4.2 30mmol/L
溴甲酚绿(BCG) 0.26mmol/L
表面活性剂适量
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂有效期为24个月。

试剂不可冰冻。

开盖后应避免污染。

6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：避免试剂与皮肤及粘膜接触。

6.2 校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以TruCal U复合校准品白蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。

手工测定计算方法为：
Au
白蛋白(g/L)= ×校准液浓度
As
12. 参考值范围
成人35～52g/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。

根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义：白蛋白是血浆中多种物质重要的结合与运输蛋白，并是维持血浆渗透压的主要组分。

血清白蛋白可用于众多疾病的诊断。

血清白蛋白升高通常见于脱水的。

血清白蛋白降低多见于营养不良、肾脏疾病，肝脏疾病，感染性疾病，严重的烧伤和癌症。

白蛋白的定量测定有助于对肝脏疾病如肝硬化的诊断与监视。

此外，白蛋白量反映了个体的健康与营养状况，因此可用于营养不良的诊断及老年住院患者的预后评估。

14. 操作性能
14.1 线性范围2～60g/L
14.2 精密度：重复性的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU680批内重复性小于3%，总不精密度小于3%。

用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对59个样品进行ALB 检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x-1.1g/L；r=0.998
14.4 灵敏度：2g/L。

14.5 病人结果可报告范围：2～60g/L，如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。

15. 超出范围结果处理本法线性上限为60g/L。

如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。

16. 病危报警值的处理
17. 方法局限性
17.1本法线性上限为60g/L。

如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。

17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，胆红素浓度≤684μmol/L，血红蛋白浓度≤4.00g/L，甘油三酯浓度≤5.63mmol/L时没有观察到干扰。

18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。

19. 参考文献
1.DOUMAS, B., WATSON, W. A., BIGGS, H. G., CLIN CHIM ACTA 1971; 31: 87-96
2. WEBSTER, D., CLIN CHIM ACTA 1974; 53: 109-115
3. TIETZ, N. W.: TEXTBOOK OF CLINICAL CHEMISTRY, 2N D EDITION, W. B. SAUNDERS COMPANY, PHILADELPHIA, 1994: 703
4.AACC Press Friendman,R.B.,and Young,D.S.,Effects of Disease on Clinical Laboratory Tests,2n d Edition,1989.
5.Rodkey,F.L.,Clin Chem,2:478;1965
6.Doumas,B.T.,Watson,W.A.and Biggs,H.G.,Clin Chem Acta 31:87-96,1971.
7.Tietz,N.W.,Clinical Guide to Laboratory Tests,2n d Edition,W.B.Saunders,1990.
8.NCCLS,Interference Testing in Clinical Chemistry,EP7-P,1986.
9.Young,D.S.,Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests,4t h Edition,AACC Press,1995.
10.NCCLS,Guideline EP5-T2,1992.
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。

血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定
1.实验原理
国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。

ALT
L-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸
LDH（乳酸脱氢酶）
丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD+ + H2O
加入磷酸吡哆醛（P-5-P）是为了稳定ALT活性，避免样品中因内源性磷酸吡哆醛不足造成测定结果假性偏低。

(如心肌梗死、肝病和特别监护病人的结果)[1]
2. 标本：
2.1 病人准备：12小时禁食。

2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。

3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。

6. 实验材料
6.1 试剂申能ALT测定试剂盒（货号：141 27017170 1 试剂1 6×64ml试剂2 6×16ml）
6.1.1 试剂组成
试剂1（R1）：
Tris缓冲液pH 7.5 100mmol/L
L-丙氨酸500mmol/L
LDH（乳酸脱氢酶）≥1200U/L
试剂2（R2）：
a-酮戊二酸15mmol/L
NADH 0.18mmol/L
磷酸吡哆醛试剂：
Good’s 缓冲液pH9.6 0.7mmol/L
磷酸吡哆醛0.09mmol/L
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。

不可入口！避免接触皮肤及粘膜。

应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2 仪器操作步骤：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以TruCal U复合校准品ALT校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。

12. 参考值范围[4]
不含磷酸吡哆醛含磷酸吡哆醛
女性<31U/L 10～35U/L
男性<41U/L 10～50U/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。

根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义[1,2]：丙氨酸氨基转移酶（ALT）旧称谷丙转氨酶（GPT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST）旧称谷草转氨酶（GOT）。

它们是氨基转移酶类的典型代表。

氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给 -酮酸的反应。

ALT是肝脏的特异性酶，仅在肝胆疾病时显著升高。

而AST水平的升高和心肌或骨骼肌损伤，以及肝组织损害等都有关。

因此同时进行ALT和AST的检测，可用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。

AST/ALT比率用于肝病的鉴别诊断。

比率<1预示中度的肝损伤；比率>1和严重肝病有关，常见慢性肝病。

14. 操作性能
14.1 线性范围4～800U/L
14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU680批内精密度小于3%，总精密度小于3%。

用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

不含磷酸吡哆醛
含磷酸吡哆醛
14.3 方法学比较：不含磷酸吡哆醛
本公司不含磷酸吡哆醛的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对78个样品进行ALT 活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00U/L；r=0.999。

含磷酸吡哆醛
本公司含磷酸吡哆醛的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对80个样品进行ALT 活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00U/L；r=0.994。

14.4 灵敏度：本试剂的检测限为4U/L。

14.5 病人结果可报告范围4U/L-800U/L
15. 超出范围结果处理本法对ALT活力检测的最大ΔA/min在340、334nm为0.16,在365nm为0.08。

当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1：9稀释，重新测定，结果乘以10。

16. 病危报警值的处理
17. 方法局限性
17.1 本法对ALT活力检测的最大ΔA/min在340、334nm为0.16,在365 nm为0.08。

当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1：9稀释，重新测定，结果乘以10。

17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，胆红素浓度≤684μmol/L，血红蛋白浓度≤4.00g/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。

18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。

19. 参考文献
1.Thomas L. Alanine aminotranSHerase(ALT), Aspartate aminotranSHerase(AST). In: Thomas L, editor. Clinical Laboratory Diagnostics. 1s t ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.55-65.
2.Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3r d ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721.
3.Bergmeyer HU, Horder M, Rej R. International Federation of Clinical Chemistry (IFCC) Scientific Committee, Analytical section: approved recommendation (1985) on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 3. IFCC method for alanine aminotranSHerase(L-alanine: 2-oxoglutarate aminotranSHerase, EC 2.6.1.2). J Clin Chem Clin Biochem 1986; 24:481-95.
4. Lorentz K, Rohle G, Siekmann L. Einfuhrung der neuen Standardmethoden 1994 zur Bestimmung der katalytischen Enzymkonzentrationen bei 37℃. DG Klinische Chemie Mitteilungen 1995;26:190-2.
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。

血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定
1. 实验原理：国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。

L-天门冬氨酸+ -酮戊二酸A S T草酰乙酸+L-谷氨酸
草酰乙酸+ NADH +H+MDH苹果酸脱氢酶L-苹果酸+NAD++H2O
2. 标本：
2.1 病人准备：12小时禁食。

2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。

3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～25℃保存：<10%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定3个月。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。

6. 实验材料
6.1 试剂：申能AST测定试剂盒（货号：141 26017170 1 试剂1：6×64ml；试剂2：6×16ml）
6.1.1 试剂组成
试剂1（R1）：
Tris缓冲液pH7.8 80mmol/L
L-天门冬氨酸240mmol/L
MDH(苹果酸脱氢酶) ≥600U/L
LDH(乳酸脱氢酶) ≥600U/L
试剂2(R2)：
a-酮戊二酸12mmol/L
NADH 0.18mmol/L
磷酸吡哆醛试剂：
Good’s缓冲液pH9.6 0.7mmol/L
磷酸吡哆醛0.09mmol/L
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存
试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。