细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法之欧阳与创编

细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法
一、常用培养基
1、LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1NNaOH （～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

2、SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g 1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。

分成100ml 的小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

3、SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

4、TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。

冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g 的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。

高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

5、2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1NNaOH （～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

6、YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L 后，高压灭菌。

建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

二、常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生
长培养基。

羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解0.1g卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解0.25g氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml）溶解0.05g萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养
基。

四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解0.1g四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。

分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

小技巧：如配制10mg/ml卡那霉素，先在盐水瓶或血清瓶加入10ml 双蒸水，高压，冷却后加入0.1g卡那霉素，混匀，滤膜过滤到试管中，再以1ml/管分装到EP管中待用。

抗生素储存液工作浓度(mg/ml)保存条件严紧型质粒(ug/ml)松驰型质粒(ug/ml)氨苄青霉素50(溶于水)-20℃20 60羧苄青霉素50(溶于水)-20℃2060氯霉素34(溶于乙醇)-20℃25170卡那霉素10(溶于水)-20℃1050链霉素10(溶于水)-20℃1050四环素5(溶于
利福平配法：
浓度：50 mg/ml
配制量：50ml
配制方法：
1．称取2.5g 利福平置于50ml塑料离心管中。

2．加入40ml甲醇，振荡充分混合溶解之后定容50ml，可以涡旋。

3．过滤灭菌后，小份分装（1-2ml每管）后，置于－20℃保存。

4.配制时每毫升可加入～5滴10 N NaOH以助溶。

若以DMSO做溶剂，可不滴加NaOH。