兔肝Vx2移植癌改良模型的建立-

☞实验研究
兔肝V x -
2移植癌改良模型的建立郭卫平1,刘 燕2,王执民1,张洪新1,曹 伟1,刘毅勇1,樊爱琳1
(1.第四军医大学唐都医院介入放射科,2.眼科,陕西西安 710038
)[摘 要] 目的 建立稳定的兔V x -2移植性肝癌模型,探讨不同植瘤方式的成功率㊂方法 将60只新西兰白兔随机分3组,每组20只㊂观察:①不同方式的成活率;②B 超监测肿瘤生长,并计算肿瘤生长率;③瘤组织形态特征㊂结果 ①改良组植瘤成活率最高(P <0.05),瘤体呈指数性生长;②该瘤在肝组织中呈浸润式生长,其性状与移植于兔其他部位的V x -2鳞状细胞癌特征相似㊂结论 成功建立了兔V x -
2移植性肝癌模型,瘤组织块种植方式成功率明显高于其他方法㊂[关键词] 兔V x -
2;肝癌;模型[中图分类号] R 735.7;Q 95-33 [文献标识码] A [文章编号] 1003-3289(2002)05-0397-03
[基金项目]全军 十五 医学青年基金(01Q 124)㊁第四军医大学科技创新工程(C X 99A 016)及唐都医院科技苗子基金(2000-07
)资助㊂[作者简介]郭卫平(1951-),女,山东冠县人,硕士,主任医师,教授㊂研究方向:肿瘤介入诊疗研究㊂[收稿日期]2001-10-20
T h eB u i l d e r o fR e t r o f i tM o d e l o fV x -2C a r c i n o m a i nR a b b i t L i v e r
a n d t h eD S AI m a g i n g F
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j e c t i v e T o e s t a b l i s hs u i t a b l em e t a s t a t i c r a b b i tV x -
2l i v e r t u m o rm o d e l f o r e x p e r i m e n t a l s t u d y a n d t o p r o b e t h e s u c c e s s r a t e o f d i f f e r e n t t u m o r t r a n s p l a n t e dm e t h o d s .M e t h o d s S i x t y m
a l eN e wZ e a l a n dw h i t e r a
b b i t sw e r e d i v i d e d i n t o 3g r o u p s a t r a n d o m ,20i n e a
c h g r o u p ,t h e n t o o b s e r v e :①T h e s u c c e s s r a t e o f i m p l a n t e
d t u m o r .②T h
e o b s e r v a t i o n o
f g
r o w t h o f t u m o r b y u l t r a s o n o g r a p y a n d c a l c u l a t e t h e g r o w t h r a t e o f t u m o r .③T h e b i o l o g i c a l f e a t u r e s o f t u m o r .R e s u l t s ①T h e s u c -c e s s r a t ew a s t h e h i g h e s t i n r e t r o f i t g r o u p (P <0.05).T h e t u m o r g r e wa s e x p o n e n t i a l c u r v e .②T u m o r g r o w t hw a s i n f i l t r a -
t e d i n t o t h e n o r m a l l i v e r t i s s u e ,w h i c hh a d t h e s i m i l a r b i o l o g i c a l f e a t u r e s o f s q u a m o u s c e l l c a r c i n o m a t h a t t r a n s p l a n t e d i n o t h -e r s i t e s o f r a b b i t s .C o n c l u s i o n I t i ss u c c e s s f u l t os e tu p r e t r o f i tm e t a s t a t i cr a b b i tV x -2l i v e r c a r c i n o m a m o d e l ,t h es u c c e s s r a t e o fm e t h o d t h a t t i s s u em a s s o f t h e t u m o r t r a n s p l a n t e d i s o b v i o u s l y h i g
h e r t h a n t h e o t h e r t w om e t h o d s .[K e y w o r d s ] R a b b i tV x -
2;L i v e r c a r c i n o m a ;M o d e l 加热化疗可以明显提高某些肿瘤细胞的化疗敏感性[1,2]
,但体外细胞水平的研究条件毕竟与体内千差万别,如何将加
热化疗方法在体内环境下进行研究 介入性热化疗,面临着一个难题
模型㊂目前能够复制的肝癌模型多用裸鼠,因其体积较小,不能模拟在体内肝癌的介入治疗情况,故建立可供介入性实验研究的肝癌动物模型是当务之急㊂作者根据国外文献材料,并在此基础上进行改进,建立了兔V x -2肝癌改良模型,其成功率明显提高,有关结果报告如下㊂
1 材料和方法
1.1材料 ①60只新西兰白兔,体重
2.5~2.7k g /只,雌雄各半,由第四军医大学实验动物中心提供㊂②兔V x -2癌株由日本京都F u n a b a s h i F a r m 公司提供,癌株种类为V x -2鳞状细胞癌㊂1250m A ㊁P o l y d o r o s -100附带D S A 的大功率X 线机(S i e m e n s 公司生产),2/3F M a g 微导管(C o o k 公司,顶端自塑形为 C
形)㊂1.2方法1.2.1V x -2瘤细胞的复苏与培养 取冰冻V x -2瘤细胞悬液,按一般细胞培养技术[3]进行复苏后离心5m i n (800
r /m i n )㊂除去上清液,加入P B S 液用玻璃棒搅匀,
取悬液置于R P M I 1640培养液中,按文献[4]
细胞培养传代,胎盘蓝染色,死㊁活细胞计数,将培养液调制成5ˑ107个/mm 3活细胞
浓度㊂
1.2.2实验动物分组 将新西兰兔随机分为A ㊁B ㊁C 三个处理组,每组20只㊂A 组:X 线透视下,
经股动脉插入导管至胃肝动脉,注入瘤细胞悬液1.0m l
/只㊂B 组:开腹直视下,充分暴露兔肝左中央叶,经肝包膜注入瘤细胞悬液1.0m l
/只㊂C 组(改良法):先将瘤细胞悬液注射到兔后腿外侧肌肉中(1.0
m l /只),肉眼及触诊观察局部长势,2周后形成约1c m 实质
性包块后,切取部分瘤块,取边缘生长旺盛的 鱼肉样 组织,
用眼科剪剪为0.2~0.3mm 3/块,与生理盐水混悬约106
~
108
个瘤细胞/mm 3;开腹直视下,充分暴露兔肝左中央叶,经肝包膜注入生理盐水与瘤块的混悬液约1.0m l
/只㊂缝合兔㊃
793㊃中国医学影像技术 2002年 第18卷 第5期
后腿外侧皮肤,使肌肉剩余瘤株继续生长,留待后续使用㊂1.2.3观察指标①观察不同接种途径的成功率㊂②利用B超监测肿瘤在7㊁10㊁14㊁17㊁21天时的体积变化(V=0.5aˑb2),a和b分别是最大直径和最小直径,并计算肿瘤生长率(t u m o r g r o w t h r a t e,T G R)㊂③瘤组织大体及镜下形态学观察㊂
1.2.4统计学处理 S t u d e n t's t t e s t,M a n n-W h i t n e y U t e s t, P<0.05有统计学意义㊂
2结果
2.1经胃肝动脉注射组植瘤成功率最低,肝实质直接注射瘤细胞组与之比较差别无显著性(P>0.05),肝实质瘤块移植组与另两组比较差别有显著性(P<0.05)(见表1)㊂
表1不同接种途径的成功率(n=20)
接种只数荷瘤只数成功率A2077/20
B201010/20a
C201919/20b
a P>0.05v s g r o u p A,
b P<0.05v s g r o u p B
2.2接种7㊁10㊁14天后的肿瘤体积㊁直径增长缓慢,T G R分别为58.9%㊁61.4%,两者差别无显著性(P>0.05),接种17天的肿瘤体积㊁直径较前增长迅速,T G R为9
3.9%,与前比较差别有显著性(P<0.05),接种21天的肿瘤体积㊁直径较前增长缓慢,T G R为60.6%,与前比较差别无显著性(P> 0.05)(见表2)㊂
表2不同接种时间的肿瘤体积㊁肿瘤直径
及生长率(n=36,췍xʃs)
a(c m)b(c m)V(c m3)T G R(%) 7天0.76ʃ0.030.53ʃ0.060.111ʃ0.030 10天0.97ʃ0.030.66ʃ0.040.213ʃ0.04658.9 14天1.26ʃ0.020.82ʃ0.050.44ʃ0.08861.4a 17天1.67ʃ0.041.20ʃ0.050.852ʃ0.13593.9b 21天2.35ʃ0.131.37ʃ0.072.21ʃ0.26760.6c T G R=(a2b2-a1b1)/a1b1ˑ100%,a P>0.05v s10天,b P<0.05v s14天,c P>0.05v s17天
2.3肿瘤生长规律,肿瘤体积㊁直径呈指数性生长,在接种17天后生长迅速,肿瘤体积增长快于直径增长㊂生长直径与天数关系公式:l n(Y-0.3)=0.1192X-2.109,r=0.999;生长体积与天数关系公式为:l n Y=0.2105X-
3.701,r= 0.9967㊂
2.4肿瘤形态学观察大体观察:处死荷瘤兔,剖腹见肿瘤在肝实质内呈圆形,结节状,无包膜㊂肉眼:肿瘤结节呈灰白色,鱼肉样,质硬㊂光镜:低倍镜下可见肝内浸润性癌巢,与肝实质无明显边界,间质分界不清,结缔组织较少㊂高倍镜下见瘤细胞体积大,形态不规则,呈不规则排列㊂胞浆丰富,淡红染色㊂核分裂像多见㊂间质内可见淋巴细胞㊁浆细胞浸润㊂电镜(图1):可见瘤细胞呈多形性,大小不等,常见分裂相,细胞间连接较松散㊂核大畸形,核膜清楚,常染色质丰富,染色颗粒较粗,可见核内假性包含物,核仁明显,可见多个核仁㊂胞浆内有丰富的游离核蛋白体㊁散在的线粒体㊁高尔基复合体及分泌颗粒,并可见成束的张力原纤维,提示为中分化鳞癌
㊂
图1兔V x-2肝癌电镜下表现(ˑ5000倍)
3讨论
3.1改良兔肝V x-2移植癌模型的建立 V x-2是一种可移植的瘤株,可接种到兔的肾脏㊁肝脏,肌肉等组织器官内,制成原位肿瘤动物模型[5]㊂V x-2瘤株生物学性质稳定,并具有高转移的特性[5]㊂本实验参考国外文献[6-8]进行改良㊂改良法同另两种接种方式比较,具有接种方法简单㊁成功率高㊁重复性好㊁模型性质稳定的特点,是难得的可供介入实验的肝癌动物模型㊂
3.2V x-2瘤生长特性分析本实验结果显示,瘤株种于肝脏成活后呈指数性生长,2~3周生长最旺盛,为供瘤血管形成期[9,10]㊂4周后肿瘤中心出现变性坏死灶,为供瘤血管稳定期[9,10]㊂6~7周肿瘤中心呈大片液化坏死灶并形成囊腔,为供瘤血管退化期[9,10]㊂故进行肿瘤传代㊁模型制作及进行实验研究时,不宜太晚,一般以4周为宜,以免因肿瘤坏死和转移影响实验结果㊂
3.3V x-2瘤移植途径的探讨建立大型肝癌动物模型是长期困绕介入放射学实验研究的难题㊂目前将瘤株植入兔体的成瘤率仍很低,如何提高植瘤成功率,是本实验的重点㊂本文回顾了国外的文献,对不同移植途径做一比较,证实瘤块移植成瘤率高,其原理同种子与土壤的关系:优良的种子在适宜的土壤条件下才能发芽㊁旺盛生长㊂瘤细胞在体种植成活依赖于两个条件:浓度和环境㊂文献报道[11]瘤细胞浓度最好在106个/mm3以上,局部环境为血供充足,营养丰富的组织,如肌肉㊁肝脏等㊂瘤块移植组,保证了瘤细胞正常生长的浓度,
㊃893㊃C h i n a J M I T M a y2002 V o l18 N o5
组织块成为瘤细胞抵御机体免疫力的屏障,延缓了清除过程,增强了对新环境的适应力,故成瘤率高(19/20
)㊂3.4本模型在介入领域的应用前景 关于肝癌的动物模型,目前国内外报道的多为技术成熟的小鼠和大鼠的肝癌模型等
方面的研究[12,13]
,但小动物模型无法再现在体内介入治疗的
全过程,制约了介入基础研究的进展㊂我们用V x -2瘤株在新西兰兔中建立移植性肝鳞癌改良模型,经实验证实本模型血供主要来自肝动脉,且血供丰富,虽其组织形态㊁生物学特性与原发性肝癌有所不同,但可用作有关肝癌治疗学及肝癌影像学等的临床前期研究㊂本模型为介入方式治疗肝癌的实验研究提供了一种重复性好的大动物模型,对临床评价各种介入治疗方案的疗效及抗癌药物的筛选等均有重要意义㊂
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2t u m o r [J ].C h i n JE x p S u r g ,1998,15(3):244-245.空肠胃柿石并发慢性肠梗阻1例
龙行安
(武警广西总队医院放射科,广西南宁 530003
)[中图分类号] R 445.4;R 574.2 [文献标识码] B [文章编号] 1003-3289(2002)05-0399-01
[作者简介]龙行安(1963-),男,广西人,大专,主治医师㊂
[收稿日期]2002-01-12
患者男,24岁,
因反复出现上腹部疼痛,恶心㊁呕吐80余天,在地方医院反复治疗无好转来我院住院治疗㊂外科检查上腹部肌肉紧张㊁压痛㊁轻反跳痛,初诊为慢性肠梗阻㊂
X 线所见:
立位腹部平片,中上腹部肠管扩张积气明显,胃泡影增大,胃内有潴留物储存,上消化道钡餐检查所见,胃内有7c mˑ8c m 充盈缺损,边缘欠规则㊂空肠中段有三个充盈缺损,约4.5c mˑ
3c m ㊁3.0c mˑ2c m ㊁5c mˑ8c m ,钡剂通过5c mˑ8c m 充盈缺损处完全受阻㊂24
h
复查,受阻部位无改变,诊断为空肠胃柿石(如图)
㊂ 手术所见:
中段空肠以上肠管扩张明显,空肠距屈氏韧带约65~80c m 处,
分别见4.5c mˑ3c m ㊁3.0c mˑ2.5c m ㊁
5.5c mˑ8c m 褐色锥形柿石,胃内7c mˑ8c mˑ
6.5c m 的类圆形柿石㊂
讨论 柿石常好发胃肠内,柿子含有鞣酸,未成熟柿子含量更高,鞣酸与胃内㊁肠内蛋白质结合形成不溶水的鞣酸蛋白沉淀下来,与食物纤维残渣聚合形成大小不等的柿石㊂本例病人80余天前过量进食柿子约1.5k g 所致,通过上述X 线检查结合临床病史,不难作出正确的诊断㊂
㊃
993㊃中国医学影像技术 2002年 第18卷 第5期。