酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维的测定
饲料中的粗纤维、NDF、ADF和ADL含量的快速测定方法
１ 聚酯纤维滤网袋法测定饲料中的粗纤维含量的方法
１ ． １ 适 用 范 围
本方法适用于粗纤维含量 大￣ １ ０ ｇ ／ ｋ ｇ （ １ ％） 的饲料 。
１ ． ２ 测 定 原 理
单 、方便 、快速 和准确度 的特 点 ，可 以进 行纤维成 分 的
山东 畜牧兽 医
２ ０ １ ５年第 ３ ６ 卷
饲 料 中的粗纤维 、Ｎ Ｄ Ｆ 、Ａ Ｄ Ｆ 和Ａ Ｄ Ｌ含量的快速测定方法
张 崇玉 王保 哲 张桂 国 （ 山东 农业大学动物科技学院 山东 泰安 ２ ７ １ ０ ０ ０ ）
尹朋 辉 路 绪 明 （ 泰安市新农方舟饲料有 限公 司 山东 秦安 ）
１ － ３ ． ６ 聚酯纤维滤 网袋
甲 酸 乙二 醇 酯 ，细 丝 的 直 径 为 ３ ４ ￣ ｍ） 织 成 孔 径 为２ ０ ｕ ｍ的 均 匀一致 的聚酯超 细网后 ，制成为５ ｃ ｍｘ ６ ｃ ｍ长 方 形 的 聚
牛采 食量 及瘤 胃的健康 。挑食 是很 多奶牛场 牛群酸 中毒 的导致原 因，首 先是粗饲料 质量差 ，其 次是Ｔ ＭＲ 搅 拌不 够细 不均 匀 ，加 料顺序 、拌料 时 间、加料 数量没有 严格 按 照配方操 作 ，这 样奶牛 很容 易挑 食 。每 天来检测 Ｔ ＭＲ 的粗 细度 可有效地 减少饲养 管理 中的误差 。（ ３ ）Ｔ ＭＲ的 投料 量 、剩 料量 和采食 量每天 都要跟 踪 ，及 时调整 ，奶 牛每 天吃 多少 喂多少 。每天 一成不变 的按 照配方 投料也 是不对 的 ，有时奶 牛吃完还想吃 就没 了 。奶牛最 后ｌ ｋ ｇ 干
批量快速测定 。
纤维素、半纤维素、木质素测定
纤维素含量的计算：纤维素=ADF（%）－经72%硫酸处理后的残渣（%）酸性洗涤木质素（ADL）含量的计算：ADL（%）=残渣（%）－灰分（硅酸盐,%）酸性洗涤木质素和酸不溶灰分（AIA）测定的优化：把酸性洗涤纤维置于50ml烧杯中，加入5ml 72%硫酸，20℃水解3h，然后加水45ml，室温过夜，次日用已称恒重的3号砂芯漏斗过滤，水洗残渣至pH6.5，于60℃烘干，称重。
把剩余残渣在马福炉中550℃经2.5h灰化，测得灰分重量。
洗涤优化：经过实际试验，发现中性洗涤纤维测定和酸性洗涤纤维测定中用丙酮冲洗这步效果不大，测量精度要求不高时，可省略。
方法一：化学滴定法（我们测定出来的结果较文献报道偏低）（一）纤维素含量的测定1.0.1N2.K（2）（3）（4）（5）（6）（7）定，用去（8）（9）1. 0.5%淀粉，2.（1）（2）5min （3）（4）（5）（6）（7）（8）（9）移液管吸取10mL滤液，加入10mL碱性铜试剂，盖好在沸水中煮15min（10）冷却，加入5mL草酸-硫酸混合液，加入0.5mL 0.5%淀粉，用0.01N硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失，用去b mL（11）取10mL碱性铜试剂，加5mL草酸-硫酸混合液，再加10mL滤液，加入0.5mL 0.5%的淀粉，0.01N硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失，用去a mL（12）生物质中半纤维素的含量计算公式x% = 0.9×100 [ 248－（a－b）]（a－b）/10000×10×n（三）木质素含量的测定1. 所需溶液1%醋酸，丙酮，73%硫酸，10%氯化钡溶液，0.5N重铬酸钾溶液，浓硫酸，0.1 N硫酸亚铁铵溶液，试亚铁灵指示剂。
2. 实验步骤（1）标定新配的0.1N硫酸亚铁铵溶液, 滴定度为K（2）称取自然风干的生物质粉末0.05-0.1g，数值为n（3）装入离心管，加入10mL 1％醋酸，摇动5min混匀（4）离心，用5mL 1％醋酸洗沉淀（5）加丙酮3-4mL，在摇荡的情况下浸泡3min，洗三次（6）用玻璃棒将沉淀沿管壁分散开，将离心管放热水中使沉淀充分干燥（7）在干燥沉淀中加入73％硫酸3mL，用玻璃棒搅匀，挤压成均匀的浆液（8）室温下放置一夜（9）加入10mL蒸馏水，搅匀，置沸水中5min（10）冷却，加入0.5mL 10%氯化钡溶液，搅匀，离心，倒出清液，分别用10mL蒸馏水冲洗沉淀两次，每次要混匀原理：生物质（浒苔、锯末和玉米秸秆）在加热的情况下用醋酸和硝酸的混合液处理，在这种情况下，细胞间的物质被溶解，纤维素也分解成单个的纤维，木质素、半纤维素和其它的物质也被除去。
饲料分析与检测实验：（VanSoest）中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定方法
实验六、（Van Soest）中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定方法【学习目标】了解饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定意义，掌握饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）检测的原理、实验方法，并注意对测定结果的分析和讨论。
一、目的传统的粗纤维测定方法存在着明显的缺点，即所测得的结果包括部分半纤维素和纤维素，以及大部分木质素在内的一组复合物，又因为有部分半纤维素和少量纤维素、木质素溶解于酸碱溶液中，被计算到无氮浸出物中去了。
因此，传统方法测得的饲料中粗纤维和无氮浸出物的含量均不能反映出饲料本身被家畜利用的真实情况。
而范氏洗涤纤维分析法则能弥补这些不足，可以准确地获得植物性饲料中所含的半纤维素、纤维素、木质素以及酸不溶灰分的含量，这在纤维素的分析测定中是一项非常重要的改革。
二、原理植物性饲料如一般饲料、牧草的粗纤维经中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）分解，则大部分细胞内容物溶解于洗涤剂中，其中包括脂肪、糖、淀粉和蛋白质，统称为中性洗涤剂溶解物（NDS），而不溶解的残渣为中性洗涤纤维（NDF），这部分主要是细胞壁部分，如半纤维素、纤维素、木质素、硅酸盐和极少量的蛋白质。
酸性洗涤剂可将中性洗涤纤维（NDF）中各组分进一步分解。
植物性饲料可溶于酸性洗涤剂部分称为酸性洗涤剂溶解物（ADS），主要有中性洗涤剂溶解物（NDS）和半纤维素，剩余的残渣称为酸性洗涤纤维（ADF），其中含有纤维素、木质素和硅酸盐。
此外，由中性洗涤纤维（NDF）与酸性洗涤纤维（ADF）值之差即可得到饲料中半纤维素的含量。
酸性洗涤纤维经72.0%的硫酸消化，则纤维素被溶解，其残渣为木质素和硅酸盐，所以，从酸性洗涤纤维（ADF）值中减去72.0%硫酸消化后残渣部分即为饲料中纤维素的含量。
将经72.0%硫酸消化后的残渣灰化，灰分则为饲料中硅酸盐的含量。
而在灰化中逸出的部分即为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
酸性洗涤纤维和木质素测定的国际标准
外 都小 于 １％ ０ 这些 数据可 与 Ｎ Ｆ法获得 的数 据 Ｄ
相 比。这可能 是小麦 Ａ Ｆ含量低 的原 因。表 １中 Ｄ
定 人员拿 到 的样 品 ， 号从 １ １ ． 盲重 复 的 ． 标 ～２是 不 用识 别样 品种类 ２ ２个 参 与研 究 的实 验 室 中 ．８个 用 Ｆ ｓ １ ｏｓ的
最 近 已 由 国际 分 析 师 协会 （ Ｏ Ｃ） 国际 标 准 化 Ａ Ａ 、
组 织 （ ｏ） 欧洲标 准化 委员会 （ Ｅ 联合 发布 。 ｉ 及 ｓ Ｃ Ｎ）
（ ） 次分 析 ６个 样 品 的萃取 和过 滤 系统 是 ２一
集成 的
（） ３ 用抗凝 结 的快速真 空过 滤系统 。 （ ） 系统 同时 加 热 和 加试 剂 与 水 时 ． 试 ４当 与 剂 的接 触最小 （ ） 剂加 入 系统 也可 简单 地 冲洗 粘 在仪 器 ５试
壁 的样 品
青贮料 青贮料
了。这个 标准也认 为 Ｆｂ ｒ ｃ系统是 一个 有效选 ｉｅ ｅ ｔ
择 。与 常规 的手 工操 作 （ 在烧 杯 中回流 ） 比较 ， 相 Ｆｂ ｒ ｃ 置 的优 点可 以总结 如下 ： ｉｅｔ 装 ｅ （ ） 转 移 样 品 可 改 进 准 确 和精 确度 ； 样 １不 称 品人 钳锅并 保 留到整个分 析过 程 。
Ｎ Ｆ测 定 国 际 标 准 化 方 法 （ Ｎ ＩＯ １ ９ ６２ ０ ） Ｄ Ｅ Ｓ ３ ０ ： ８ ０
１ 材 料 和 方 法
图 １ Ｖ ｎ Ｓ ｅ ｔ 洗 涤 纤维 体 系 ａ ｏｓ 的
１ 样 品 和 实验 室 ． １
选 择 用 作 研 究 的 样 品是 ： 末 、 麦 、 饲 锯 小 牛 料、 豆粕 粉 、 叶草 青贮 料和青 草青 贮料 。分析 三
滤袋法测定酸性洗涤纤维
滤袋法测定酸性洗涤纤维(ADF)A. 试剂(a) 酸性洗涤剂溶液：称取20 g十六烷三甲基溴化胺（CTAB），溶于1000 mL已标定过的 0.50 mol/L硫酸溶液中，加热搅拌使其溶解。
(b) 0.50 mol/L硫酸溶液：取49 g (约27 mL)浓硫酸，慢慢加入已装有500 mL水的烧杯中，冷却后注入1000 mL容量瓶中，加水至刻度，标定。
(c) 丙酮：无色，并且蒸发后无残渣。
B. 安全注意(a) 丙酮易燃，操作时应在通风橱中进行，避免吸入或与皮肤接触。
将滤袋放入烘箱之前，要确保滤袋完全干燥，丙酮完全挥发。
(b) CTAB对黏膜有刺激，因此操作时要带防尘口罩和手套。
C.设备(a) 消化装置- ANKOM 220纤维分析仪。
(b) 滤袋- ANKOM F57滤袋。
(c) 封口机(d) 干燥器(e) 分析天平-精确至0.1mg(f) 电热干燥箱(g) 耐溶剂记号笔D. 步骤(a) 滤袋和样品的准备1)用耐溶剂的记号笔给滤袋编号，称重(m 1)。
2) 直接准确称取0.5g (± 0.05 g制备好的样品 (m ) 于滤袋中。
样品需要粉碎过1mm筛。
3)在距离滤袋上边缘大约5 mm用封口机封口。
然后将样品在滤袋中展平，均匀分布。
4)至少取一个空白滤袋(C1)，同时做空白测定。
5) 一次最多可以在滤袋架上放24个滤袋。
无论放置滤袋数量多少，9层滤袋架上托盘要全部使用，每层放三个滤袋。
层与层之间错开120度。
然后将装有滤袋的支架放入纤维分析仪消煮器中，然后在顶部将金属压锤放上，以确保消煮过程中不浮起。
6) 样品含有大豆产品或脂肪超过5% - 将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，盖好盖子。
摇动容器10次，浸泡10 min。
然后更换新的丙酮，重复上述操作一次。
最后将滤袋取出，放在网筛上凉干。
例外：烘烤大豆–由于烘烤大豆的特殊性，需要采用改进后的下面脱脂方法。
将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，盖好盖子。
范氏纤维素测定方法
原理：采用范氏（Van Soest）的洗涤纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）原理:植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。
将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
溶剂配制：中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）：准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14O8Na2•2H2O，分析纯）和6.8g硼酸钠（Na2B4O7•10H2O，分析纯）放入烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，分析纯）和10ml乙二醇乙醚（C4H10O2，分析纯）；再称取4.56 g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，分析纯）置于另一烧杯中，加入少量蒸馏水微微加热溶解后，倒入前一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000ml，其中pH 值约为6.9~7.1（pH值一般勿需调整）；1N硫酸：量取约27.87 ml浓硫酸（分析纯，比重1.84，98%），徐徐加入已装有500ml 蒸馏水的烧杯中，冷却后注入1000ml容量瓶定容，标定；酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）：称取20g十六烷三甲基溴化铵（CTAB，分析纯）溶于1000ml1N硫酸，必要时过滤；操作步骤：准确称取1.0000g样品（通过40目筛）置于直筒烧杯中，加入100 ml 酸性洗涤剂和数滴十氢化萘及0.5g无水亚硫酸钠。
将烧杯套上冷凝装置于电炉上，在5~10min内煮沸，并持续保持微沸60min。
趁热用已知重量的玻璃坩埚抽滤，并用沸水反复冲洗玻璃坩埚及残渣至滤液呈中性为止。
饲粮中中性洗涤纤维的研究进展
饲粮中中性洗涤纤维的研究进展近年来，尽管动物营养学家已把研究的重点放在了纤维性物质上，但长期以来对饲粮纤维（Fiber）的认识并不统一，对饲粮纤维的认识很不全面，对其定义至今还有争议。
在比较常用的粗纤维（CF）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）或非淀粉多糖（NSP）等指标中，许多人认为NDF是目前表示纤维最好的指标，因为NDF涵盖了被认为是组成纤维的大多数物质。
本文拟从饲粮中中性洗涤纤维的定义出发，就其构成成分以及由不同分析方法得到的纤维组分的化学组成及其在动物营养中的作用进行讨论。
1 中性洗涤纤维的定义和成分从营养学的观点来看，饲粮中中性洗涤纤维的成分包括以下几种（见表1）。
NDF是对植物细胞壁或纤维成分的一种测量指标，根据Van Soest（1967）提出的洗涤纤维分析方法，所测得的NDF主要包括纤维素、半纤维素和木质素等成分，即由不溶性的非淀粉多糖和木质素所组成，能够较准确地反映纤维的实际含量[1]。
在细胞壁的构成中，与NSP和木质素相连的蛋白质（细胞壁镶嵌蛋白或细胞壁蛋白）是细胞壁的重要构成成分。
这种蛋白质主要是一种高度不溶的糖蛋白——伸展蛋白，单胃动物对其消化率低，因此，这类蛋白质也被认为是饲粮纤维的构成成分（Annison, 1993）[2]。
2 中性洗涤纤维的分析方法在建立NDF分析方法时，Van Soest认为，应将饲料划分为可消化和不完全消化的两部分。
用新的纤维分析方法进行分析时可消化的部分应是可溶的；而不完全消化（不可溶）的部分则被称为“纤维”（Van Soest和Moore，1965）[1]。
其基本方法是：在含有3%十二烷基硫酸钠（SDS）和19% EDTA（pH=7的磷酸缓冲液）的中性洗涤剂中煮沸样品，所得到的残渣减去灰分即为NDF。
在测定高淀粉含量样品的NDF时，应加入α-淀粉酶处理（Schaller，1977）[3]。
测定NDF的目的是分析饲料原料中细胞壁成分，但未能回收所有的水溶性纤维物质，包括细胞壁中的果胶物质，只包含了细胞壁中的纤维素、绝大多数半纤维素和木质素及与细胞壁相嵌的蛋白质和矿物质等。
饲料中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)快速测定方法在生产中的应用
表 3 饲料原料的 DE 估测值和实测值
饲料 名称
干物质 （%）
（粗白%蛋质）
消（蛋化%白）率
可（蛋消%白）化
粗脂肪 （%）
粗灰分 （%）
中洗纤维 （%）
酸洗纤维 （%）
中性性碳（洗水%涤化）可合溶物
（KD估cEa测l值/kg）
（KD实cEa测l值/kg）
玉米 86
8.7
87
7.57 3.6
1.4
9.3
小麦麸和次粉： - ， ME=3501.1 44.78NDF % ， ， 。 n=48 P<0.01 r=0.9992
年第 卷 2021 42
表 1 原料的 NDF 含量及其变异范围
项目 批次数（n） 范围（%） 平均数（%） 变异系数（%）
玉米 小麦次粉 细麦麸 粗麦麸
20
20
12
28
6.3~10.1 18.4~35.3 32.9~37.9 32.9~56.0
测定。
关键词：中性洗涤纤维；酸性洗涤纤维；快速测定
中图分类号：S816.9
文献标识码：B
文章编号： （ ） 1007-1733 2021 07-0020-05
饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维 （ADF）含量是饲料营养成分的重要指标，它是 饲料中的纤维成分，NDF 和 ADF 指标与饲料质 量密切相关，它越来越广泛地应用到饲料营养价 值评定中，在近几年颁布的《中国饲料成分和营 养价值表》中均有 NDF 和 ADF 指标。NDF 的测 定是饲料用中性洗涤剂煮沸处理 1 h 后，试样中 的蛋白质、脂肪、淀粉和糖等溶解，再用石油 醚、丙酮除去脂肪，剩余不溶解的残渣称为 NDF，它包括试样中全部的半纤维素、纤维素、 木质素及少量硅酸盐等杂质。ADF 的测定是饲料 样品经酸性洗涤剂煮沸处理 1 h 后，饲料中的脂 肪、蛋白质、淀粉和半纤维素等成分被溶解，再 用石油醚、丙酮除去脂肪，剩余的不溶性残渣称 为 ADF，其中包括试样中全部的纤维素、木质素 和少量的酸不溶灰分等成分。NDF 和 ADF 的区 别是前者含有半纤维素，半纤维素含量等于 NDF % 减去 ADF % 含量，因此，NDF 和 ADF 的测定还可以进一步准确地测定出饲料中半纤维 素、纤维素和木质素成分的含量，准确测定饲料 中的各种纤维成分对评定饲料营养价值具有重要 意义。
5饲料粗纤维测定
酸性洗涤剂溶解物（ADS） （半纤维素）
残渣 （木质素和硅酸盐）
溶解物 （纤维素）
Van Soest纤维素
分析方案
烧尽（逸出） 酸性洗涤木质素（ADL）
残渣 （灰分、硅酸盐）
滤袋技术在纤维测定中的应用
滤袋技术（FBT）是20世纪90年代初发展起来的一 种简便易行，高效准确分析技术。 该项技术目前主要应用于饲料和食品中粗纤维 （CF），中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维 （ADF）的测定。 1993年美国康奈尔大学和加拿大共同合作，开发了 Ankom纤维测定仪，获得专利。 自1996年以来，在世界上75个国家广泛的应用（美 国、法国、加拿大、意大利、澳大利亚等）。
一滴防泡沫剂（不宜过多， 过多使测定结果偏高）；用 蜡笔在液面处划一刻度线， 同时加玻璃盖或连接回流冷
电 炉 消 煮
凝管；
抽滤布氏漏斗、高角烧杯
2 ）将高角烧杯立即放电炉上加热，在 1-2 分 钟内沸腾，然后用小火继续沸腾 30 分钟（ 保持沸腾状态）；
注意：在加热过程中，使
溶液保持浓度不变，如有
H2SO4溶液ML 20
NaOH溶液毫升数 20
2、硫酸（H2SO4）溶液配制：
﹡配制1000ML 0.255 N H2SO4 取多少毫升？ 量取7ML H2SO4 溶于1000ML蒸馏水中。 ﹡标定H2SO4溶液（用0.315 N NaOH 标准溶液） 量取20MLH2SO4溶液—加2滴0.2%甲基橙指 示剂，用0.315 N NaOH 溶液滴定ML数？ （16ML） N H2SO4=NaOH当量浓度×消耗NaOH ML = 0.315×16 = 0.252
测定原理（续）
应用酸性洗涤剂可将NDF各组分进一步细
反刍动物常用饲料的体外消化率
反刍动物常用饲料的体外消化率曹香林;陈建军;郑琛【摘要】为有效利用当地饲料资源,提高反刍动物配合日粮的利用效率和生产性能,选用西北地区常见的棉籽蛋白、玉米啤酒糟、苹果渣、玉米皮、甜菜粕、菜粕和苜蓿等7种反刍动物常用饲料原料,采用应用滤袋的两级离体消化法对干物质（DM）、有机物（OM）、粗蛋白质（CP）、酸性洗涤纤维（ADF）和中性洗涤纤维（NDF）的体外消化率进行测定。
结果表明,甜菜粕的干物质体外消化率（IVDMD）、有机物体外消化率（IVOMD）和粗蛋白质体外消化率（IVCPD）显著高于其他样品（P〈0.05）,玉米啤酒糟的IVDMD、IVOMD、IVCPD、中性洗涤纤维体外消化率（IVNDFD）和酸性洗涤纤维体外消化率（IVADFD）都处于较低水平。
【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2012(040)003【总页数】3页(P150-152)【关键词】反刍动物;两级离体消化;饲料;体外消化率;滤袋【作者】曹香林;陈建军;郑琛【作者单位】^p【正文语种】中文【中图分类】S816.7评定反刍动物饲料消化率最早采用表观消化率法，但后来根据反刍动物代谢的特点发现，该法存在着严重缺陷。
随着反刍动物营养研究的深入，反刍动物饲料评定方法也不断进步和完善，如瘤胃降解与非降解蛋白质体系的提出和发展等。
目前，评定反刍动物饲料消化率的方法主要有3种，即活体法、尼龙袋法和体外法，并从常用的消化代谢试验、尼龙袋试验等又衍生出了人工瘤胃试验、产气量法、移动尼龙袋法［1］。
体外试验以其操作简便、不需要动物、测定时间短、成本低、易于标准化等特点受到青睐。
目前应用较多的体外方法有活体外产气法［2］、两级离体消化法［3］及活体外消化率测定法［4］等。
西北地区常见的反刍动物饲料原料包括棉籽蛋白、棉粕、玉米啤酒糟、苹果渣、玉米皮、甜菜粕和菜粕等，饲料资源丰富。
为有效利用当地饲料资源，提高反刍动物配合日粮的利用效率和生产性能，笔者于2009年3月利用两极离体消化法并结合滤袋技术，对这些原料的消化率进行测定，以期为反刍动物的饲料配制提供参考。
《烟草及烟草制品 中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、酸洗木质素的测定 洗涤剂法》(报批稿)
7.2.4.3将热浸提后的试样和坩埚放在纤维分析仪的冷浸提单元上，用丙酮(6.10)冲洗剩余物3次，确保剩余物与丙酮充分混和，至滤出液无色为止。
7.2.4.4抽干后将坩埚和剩余物放入（105±2）℃烘箱中烘干3～4h至恒量。在干燥器中冷却后称量。再烘干30min，冷却，称量，直至两次称量之差小于0.002g。记录坩埚和剩余物的总重为m5。
7.2.4 中性洗涤纤维的测定
7.2.4.1称取约2g石英砂（6.14）放入石英过滤坩埚中，然后准确称取约0.5g脱脂后试样（7.2.3），记作m4，放置于石英砂上面。将盛有样品的石英坩埚放置在纤维分析仪（5.7）的热浸提单元上，在热浸提单元中加入约100mL中性洗涤剂（6.15）和25mgα-高温淀粉酶（6.13），并加入1.0mL正辛醇（6.9）作为消泡剂，快速加热至沸，并调整功率保持微沸状态1h。
检测限
定量限
中性洗涤纤维
0.26
0.86
酸性洗涤纤维
0.17
0.57
酸洗木质素
0.17
0.57
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
YC/T31烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法
6.1772％硫酸溶液（质量分数）。
7
7.
按YC/T31进行试样的制备。
7.
7.2.1 测定次数
每个试样应平行测定两次。
7.2.2 水分的测定
按YC/T31进行试样含水率的测定。
范式纤维素测定法
附录Ⅱ Van Soest法测定物料中纤维素、半纤维素和木质素的含量原理:植物性样品经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
植物性样品经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。
将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
材料：烘干至恒重粉碎并过筛（40目）的水葫芦及其它植物样品试剂：十二烷基硫酸钠（AR）、乙二胺四乙酸二钠(AR)、无水磷酸氢二钠(AR)、硫酸(AR)、十六烷三甲基溴化铵(AR)、乙二醇乙醚(AR)、十氢化萘、无水亚硫酸钠(AR)、丙酮(AR)。
一、实验内容（一）溶剂的配制1、中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）的配制：准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14O8Na2•2H2O，分析纯）和6.8g硼酸钠（Na2B4O7•10H2O，分析纯）放入烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加入30.0g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，分析纯）和 10ml乙二醇乙醚（C4H10O2，分析纯）；再称取4.56 g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，分析纯）置于另一烧杯中，加入少量蒸馏水微微加热溶解后，倒入前一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000ml，其中pH 值约为6.9~7.1（pH值一般勿需调整）；2、1N硫酸溶液的配制：量取约27.87 ml浓硫酸（分析纯，比重1.84，98%），徐徐加入已装有500ml 蒸馏水的烧杯中，冷却后注入1000ml容量瓶定容，标定；3、酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）的配制：称取20g十六烷三甲基溴化铵（CTAB，分析纯）溶于1000ml1N硫酸，必要时过滤；4、72%硫酸溶液的配制：（浓硫酸：水=36:13）（二）测定过程详细操作步骤1.中性洗涤纤维测定准确称取1.0000g样品（通过40目筛）置于直筒烧杯中，加入100ml中性洗涤剂。
不同方法测定饲料中的中性洗涤纤维与酸性洗涤纤维含量分析
不同方法测定饲料中的中性洗涤纤维与酸性洗涤纤维含量分析李博，张丹丹，程景，靳光，王栋才，孙锐锋，徐芳，梁圆，张元庆*（山西农业大学（山西省农业科学院）动物科学学院，山西太原 030032）摘 要：本试验采用传统滤袋代替ANKOM滤袋测定饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）含量，并以滤袋法验证结果，旨在校正ANKOM纤维仪测定结果，探索一种简单方便、节约成本的饲料NDF、ADF测定方法。
试验采用滤袋法、ANKOM纤维仪法、ANKOM纤维仪（传统滤袋）测定13种饲料（小麦秸、构树、连翘、苜蓿、苜蓿青贮、全株玉米青贮、豆科青贮、精料、白酒糟、豆粕、玉米胚芽饼、DDGS、喷浆玉米）中的NDF、ADF含量。
结果表明：经过配对样本T检验分析，ANKOM纤维仪法、ANKOM纤维仪（传统滤袋）与滤袋法相比较，以及ANKOM纤维仪（传统滤袋）与ANKOM纤维仪法比较，NDF、ADF测定结果差异均不显著；以滤袋法校正的ANKOM纤维仪法和ANKOM纤维仪（传统滤袋）测定饲料中的NDF、ADF含量建立的回归公式分别为NDF滤袋法=-1.46+1.064NDF ANKOM（R2=0.923，P<0.001），NDF滤袋法=0.786+0.993NDF ANKOM（传统滤袋）（R2=0.884，P<0.001）；ADF滤袋法=0.545+1.026ADF ANKOM（R2=0.954，P<0.001），ADF滤袋法=1.176+0.996ADF ANKOM（传统滤袋）（R2=0.936，P<0.001）。
可见，使用传统滤袋代替ANKOM滤袋测定饲料NDF、ADF含量是可行的。
关键词：ANKOM纤维仪法；饲料；中性洗涤纤维；酸性洗涤纤维中图分类号：S816 文献标识码：A DOI编号：10.19556/j.0258-7033.20200413-01传统测定饲料中粗纤维（CF）的方法是经过稀酸、稀碱处理后烘干可得，此方法测定的结果仅包括部分纤维素、半纤维素和木质素，测得的结果会低于实际测定结果[1]。
纤维素、半纤维素、木质素测定
原理采用范氏（Van Soest）的洗涤纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）原理: 植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。
将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
试剂的配制中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）：准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14O8Na2•2H2O，分析纯）和6.8g硼酸钠（Na2B4O7•10H2O，分析纯）放入烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，分析纯）和 10ml乙二醇乙醚（C4H10O2，分析纯）；再称取4.56 g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，分析纯）置于另一烧杯中，加入少量蒸馏水微微加热溶解后，倒入前一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000ml，其中pH 值约为6.9~7.1（pH值一般勿需调整）； 1N 硫酸：量取约27.87 ml浓硫酸（分析纯，比重1.84，98%），徐徐加入已装有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后注入1000ml容量瓶定容，标定；酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）：称取20g十六烷三甲基溴化铵（CTAB，分析纯）溶于1000ml1N硫酸，必要时过滤；中性洗涤纤维测定准确称取1.0000g样品（通过40目筛）置于直筒烧杯中，加入100ml中性洗涤剂和数滴十氢化萘及0.5g无水亚硫酸钠。
将烧杯套上冷凝装置于电炉上，在5~10min内煮沸，并持续保持微沸60min。
煮沸完毕后，取下直筒烧杯，将烧杯中溶液倒入安装在抽滤瓶上的已知重量的玻璃坩埚中进行过滤，将烧杯中的残渣全部移入，并用沸水冲洗玻璃坩埚与残渣，直洗至滤液呈中性为止。
范氏测定纤维素含量法
范氏测定纤维素含量法一、原理采用范氏（Van Soest）的洗涤纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）原理:植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。
将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
二、试剂的配制中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）：准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H 14O8Na2•2H2O，分析纯）和6.8g硼酸钠（Na2B4O7•10H2O，分析纯）放入烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，分析纯）和1 0ml乙二醇乙醚（C4H10O2，分析纯）；再称取4.56 g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，分析纯）置于另一烧杯中，加入少量蒸馏水微微加热溶解后，倒入前一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000ml，其中pH 值约为6.9~7.1（pH值一般勿需调整）；1N硫酸：量取约27.87 ml浓硫酸（分析纯，比重1.84，98%），徐徐加入已装有500 ml蒸馏水的烧杯中，冷却后注入1000ml容量瓶定容，标定；酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）：称取20g十六烷三甲基溴化铵（CTAB，分析纯）溶于1000ml1N硫酸，必要时过滤。
三、操作步骤1、中性洗涤纤维测定准确称取1.0000g样品（通过40目筛）置于直筒烧杯中，加入100ml中性洗涤剂和数滴十氢化萘及0.5g无水亚硫酸钠。
将烧杯套上冷凝装置于电炉上，在5~10min内煮沸，并持续保持微沸60min。
煮沸完毕后，取下直筒烧杯，将烧杯中溶液倒入安装在抽滤瓶上的已知重量的玻璃坩埚中进行过滤，将烧杯中的残渣全部移入，并用沸水冲洗玻璃坩埚与残渣，直洗至滤液呈中性为止。
酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维的测定
附：饲料中中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定（附纤维素、木质素的测定）（一）原理饲料养分的常规测定法中存在的重要缺点之一，是测得饲料的粗纤维与无氮浸出物的数值不能反映饲料的真实情况。
测定时粗纤维不是一种纯化合物，而是几种化合物的混合物，其中主要组成是纤维素、半纤维素与木质素。
纤维素与半纤维素具有相似的营养价值，它们的营养价值对反刍家畜较单胃家畜为高。
木质素对全部家畜均不能被消化，但用常规法测定饲料的粗纤维时，饲料中仅有一部分半纤维素和木质素量包括在粗纤维的数值内，其余部分都被计算在无氮浸出物的数值中，且都被认为与糖和淀粉具有同样的消化性能。
由此可见，常规法测得粗纤维的数值不能全部反映饲料中大部分的不消化成分。
由于上述原因，Van Soest氏与其伙伴提出测定饲料中中性洗涤纤维与酸性洗涤纤维的方法，原理为：植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。
将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
（二）试剂1．中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠和6.8g四硼酸钠均放入1000mL刻度烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加30克十二烷基硫酸钠和l0mL乙二醇乙醚，称取4.56克无水磷酸氢二钠置于另一烧杯中，加少量蒸馏水微热溶解后倾入第一个烧杯中，再转入容量瓶中稀释至1000mL，此溶液PH值在6.9-7.1左右(PH值一般不需要调整)。
2．酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）制备称取20g十六烷三甲基溴化铵溶于1000mL2.0 mo l·L-1硫酸溶液中，搅拌溶解，必要时过滤。
饲料粗纤维、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维残渣中各成分的研究
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ
ｄｏｉ：１０．３９６９ ／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１８．０３．０２９
饲料粗纤维、中性洗涤纤维和酸性 洗涤纤维残渣中各成分的研究
刘 磊 李福昌 杨鹏程 张崇玉∗
ＣＦ 残渣中 ＨＣＥＬ 含量（ ％） ＝ 饲料中 ＣＦ 含量－饲料中 ＡＤＦ 含量；
ＣＦ 残渣中 ＣＥＬ 含量（ ％） ＝ 饲料中 ＡＤＦ 含量－ （ 饲料中 ＡＤＬ 含量＋饲料中 ＡＩＡ 含量） ；
收 稿 日 期 ：２０１７ － ０８ － ２８ 基金项目：现代农业产业技术体系建设专项（ ＣＡＲＳ⁃４４⁃Ｂ⁃１） ；山东农业大学青 年科技创新基金项目（ ２０１５—２０１６） ；中 国博士后科学基金 （ ２０１５Ｍ５８０６１） ；山东省“ 双一流” 奖补资金 ห้องสมุดไป่ตู้者简介：刘 磊（ １９８５—） ，男，山东潍坊人，讲师，博士，从事家兔营养与生理代谢研究。 Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｌｉｕｓａｎｓｈｉ１９８５＠ １２６．ｃｏｍ ∗通信作者：张崇玉，副教授，Ｅ⁃ｍａｉｌ： １７２２５１２２＠ １６３．ｃｏｍ
饲料中粗纤维（ ＣＦ） 含量已被广泛地应用于饲 料原料和配合饲料产品标签中的产品成分分析保 证值中［１］ 。 饲料 ＣＦ 是饲料经稀酸、稀碱处理后剩 下的不溶性有机物，包括纤维素（ ＣＥＬ） 、半纤维素 （ ＨＣＥＬ） 、酸性洗涤木质素（ ＡＤＬ） 及少量酸不溶 灰分（ ＡＩＡ） 。 饲料中的各纤维成分在饲料测定 ＣＦ 含量的酸碱煮沸处理过程中，会或多或少地被分 解，饲料中各纤维成分在 ＣＦ 残渣中的含量及回收 率如何？ 一直是人们关心的问题。 Ｖａｓ Ｓｏｅｓｔ 等［２］ 提出的饲料中性洗涤纤维（ ＮＤＦ） 、酸性洗涤纤维 （ ＡＤＦ） 、ＡＤＬ 含量的测定方法被广泛采用，我 国 也制定了相应的国家标准或行业标准［３－５］ 。 随着
酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维的测定
附：饲料中中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定（附纤维素、木质素的测定）（一）原理饲料养分的常规测定法中存在的重要缺点之一，是测得饲料的粗纤维与无氮浸出物的数值不能反映饲料的真实情况。
测定时粗纤维不是一种纯化合物，而是几种化合物的混合物，其中主要组成是纤维素、半纤维素与木质素。
纤维素与半纤维素具有相似的营养价值，它们的营养价值对反刍家畜较单胃家畜为高。
木质素对全部家畜均不能被消化，但用常规法测定饲料的粗纤维时，饲料中仅有一部分半纤维素和木质素量包括在粗纤维的数值内，其余部分都被计算在无氮浸出物的数值中，且都被认为与糖和淀粉具有同样的消化性能。
由此可见，常规法测得粗纤维的数值不能全部反映饲料中大部分的不消化成分。
由于上述原因，Van Soest氏与其伙伴提出测定饲料中中性洗涤纤维与酸性洗涤纤维的方法，原理为：植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。
将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
（二）试剂1．中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠和6.8g四硼酸钠均放入1000mL刻度烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加30克十二烷基硫酸钠和l0mL乙二醇乙醚，称取4.56克无水磷酸氢二钠置于另一烧杯中，加少量蒸馏水微热溶解后倾入第一个烧杯中，再转入容量瓶中稀释至1000mL，此溶液PH值在6.9-7.1左右(PH值一般不需要调整)。
2．酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）制备称取20g十六烷三甲基溴化铵溶于1000mL2.0 mo l·L-1硫酸溶液中，搅拌溶解，必要时过滤。
饲料中中性洗涤纤维
饲料中中性洗涤纤维(NDF)的测定1 范围本标准规定了饲料中饲料中中性洗涤纤维(NDF)的测定方法。
本标准适用于各种单一饲料和配合饲料。
本标准不适用于无机盐类饲料添加剂。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1 饲料采样3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1中性洗涤纤维（NDF）neutral detergent fiber用中性洗涤剂去除饲料中的脂肪、淀粉、蛋白质和糖类等成分后，残留不溶解物质的总称。
4 原理饲料如一般饲料、牧草和粗纤维在一定温度下，经中性洗涤剂处理，可洗涤分解大部分细胞内容物，如脂肪、淀粉、蛋白质和糖类等，不溶解的残渣为中性洗涤纤维（NDF），包括构成细胞壁的半纤维素、纤维素、木质素和少量硅酸盐等杂质。
5 仪器和设备5.1 植物样品粉碎机或研体。
5.2 试验筛：孔径0.42mm（40目）。
5.3 分析天平：分度值0.0001g。
5.4 电热恒温箱。
5.5 高温电阻炉。
5.6 消煮器：配冷凝球600mL高型烧杯或配冷凝管的三角烧瓶。
5.7 玻璃砂漏斗（G2）。
5.8 干燥器：无水氯化钙或变色硅胶为干燥剂。
5.9 抽滤装置：抽滤瓶和真空泵或水抽泵。
5.10 100mL量筒。
6 试剂和溶液本标准所用水，一律指GB/T 6682-1992中的三级水，化学试剂为分析纯。
6.1 十二烷基硫酸钠。
6.2 乙二胺四乙酸二钠（EDTA二钠盐）。
6.3 四硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）。
6.4 无水磷酸氢二钠。
6.5 乙二醇乙醚。
6.6 正辛醇（消泡剂）。
6.7 丙酮。
6.8 α-高温淀粉酶6.9 中性洗涤剂（3％十二烷基硫酸钠溶液）：称取18.61g 乙二胺四乙酸二钠和6.8g 四硼酸钠（Na 2B 4O 7·10H 2O ），放入100mL 烧杯中，加适量蒸馏水溶解（可加热），再加入30g 十二烷基硫酸钠和10mL 乙二醇乙醚；同放入1000mL 烧杯中，加入少量水加热溶解后，称取4.56g 无水磷酸氢二钠置于另一烧杯中，加蒸馏水加热溶解，冷却后将上述两溶液转入1000mL 容量瓶并用水定容。
范氏中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维测定的实验方案1(修改)
饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）和木质素（ADL）的测定实验方案实验原理纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）。
植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
中性洗涤纤维经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
2 所需试剂十二烷基硫酸钠溶液（中性洗涤剂）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA，化学纯）、四硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）、磷酸氢二钠、乙二醇乙醚、十六烷基三甲基溴化铵、硫酸、丙酮，无水亚硫酸钠，十氢化萘，95%乙醇3 所需仪器分析天平：感量0.0001 g、容量瓶、锥形瓶、滴定管、移液管、洗瓶、洗耳球、滴管、量筒。
粗纤维测定仪（SLQ-6）、古氏坩埚、干燥器（以氯化钙或变色硅胶为干燥剂）、酸度计4 试剂的配制4.1 30g/L十二烷基硫酸钠（中性洗涤剂）溶液。
称取18.61g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，化学纯）和6.81g四硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）和10mL已二醇乙醚同放入1000mL烧杯中，加入少量水加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠。
称取11.9644g磷酸氢二钠（含12水），置于另一烧杯中，加入少量水，微微加热溶解后倾入第一个烧杯，稀释至1000mL。
此溶液PH在6.9-7.1 .4.2 20g/L十六烷三甲基溴化铵（酸性洗涤剂）溶液。
称取20g十六烷三甲基溴化铵，溶于1000mL已经标定过的0.5mol/L硫酸溶液中，搅动溶解，必要时过滤。
4.3 0.5 mol/L硫酸溶液。
称取49g（27.87mL）浓硫酸，慢慢加入已有500mL水的烧杯中，冷却后注入1000mL容量瓶中，定容，标定。
（4.3.1标定硫酸的方法：称量1.6g在270-300℃灼烧至恒重的基准无水碳酸钠，称准至0.0001g。
溶解50mL水中，加入10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，用配制好的硫酸溶液滴定至溶液有绿色变为暗红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。