LC_MS_MS法结合谱库检索测定猪组织中三聚氰胺及其同系物

( 1. 珠海出入境检验检疫局, 广东 珠海 519015; 2. 华南农业大学兽医学院, 广东 广州 510642)
摘要: 采用 M RM IDA EPI 谱库检索模式建 立了猪组织中三聚氰胺及其同系物的液相色谱 电喷雾串联 质谱多残留检测方法, 结合谱库检索功能同时实现了 定性定量分析。组织样品经 2% 三氯 乙酸、10% 乙酸铅 和乙腈 混 合 溶 液 提 取, Sepuco l EN V I CA RB 柱 净 化, 三 聚 氰 胺 及 其 同 系 物 的 线 性 范 围 为 10 ~ 5 000
1 实验部分
1. 1 仪器与试剂 Agilent 1200 高效 液 相色 谱 仪; AP I 4000
Q T rap 三重四 极质谱仪, 配 有电喷 雾离子 源; Agilent 固相 萃 取仪; JOUAN M R23i 离 心 机; Zymark T urboVap LV 浓缩站; 恒温水浴振荡 器等。
( 1. Zhuhai Entr y & Ex it I nsp ection and Quar antine Bur eau, Zhuhai 519015, China; 2. College of Veter inar y M edicine, South China A gr icultur al Univers ity , Guangz hou 510642, China)
127
42*
84
100
- 32
- 55
100
- 15
- 55
三聚氰酸
85 128. 1
42*
100
- 14
- 50
100
- 31
- 50
三聚氰酸 13 C3
131
43. 1*
100
- 26
- 50
三聚氰胺 15N3
130
87*
100
28
90
注: * 表示子离子被用于定量分析
ESI 模式 + + + +
Sepucol E、三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰
胺、三聚氰酸标准品( 纯度大于 99% ) : 德国 Dr. Ehrenst orf er 公司 产品; 三聚 氰胺 内标 ( m ela m ine 15 N 3 ) 和三聚氰酸内标 ( cy anuric acid 13 C3 ) ( 纯度 大于 98. 0% ) : 加拿 大 T o ronto r esearch chem icals 公司产品。上述标准品用少量二甲基 亚砜溶解, 甲醇( 色谱纯) 定容, 配制成 1 g L- 1 标准储备液, 再根据需要稀释成适当的标准工作 液, 于 4 ! 下保存, 乙酸铵、乙腈等均为色谱纯; 所用试剂除注明外均为分析纯; 水为超纯水。 1. 2 色谱条件
收稿日期: 2009 12 21; 修回日期: 2010 05 11 作者简介: 蔡勤仁( 1974~ ) , 男, 博士, 高级工程师, 从事食品安全研究。E mail: mr. cai@ vip. 163. com
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质谱学报
第 31 卷
三聚氰胺有多种同系物, 如三聚氰酸( cy a nuric acid) 、三聚 氰酸一酰胺 ( am melide) 、三聚 氰酸二 酰 胺 ( ammeline) 和环 丙 氨 嗪 ( cy rom a zine) 等, 其结构式示于图 1。食品和药物管理局 ( FDA) 在引起宠物中毒的食品中检出了以下三 聚氰 胺 同 系 物: 三 聚 氰 胺 8. 4% 、三 聚 氰 酸 5. 3% 、三聚氰酸一酰胺 2. 3% 、三聚氰酸二酰胺 1. 7% 以及脲基三聚氰胺和甲基三聚氰胺等[ 1] , 这些同系物是导致宠物中毒的直接原因。目前, 国内外同时检测三聚氰胺及其同系物的方法报
分析物
母离子/ ( m/ z ) 子离子/ ( m/ z ) 驻留时间/ ms 碰撞能/ eV 去簇电压/ eV
85*
100
27
90
三聚氰胺
127. 1
68
100
40
90
灭蝇胺
125*
100
27
90
167
85
100
27
90
86*
100
24
90
三聚氰酸二酰胺
128. 1
69
100
40
90
三聚氰酸一酰胺
L。 1. 3 质谱条件
离子源: ESI; 雾 化气 65 mL m in- 1 , 气 帘 气 20 mL min- 1 , 辅助加热气 70 L m in- 1 , 辅 助加热气温度 700 ! , 碰撞气 5 mL m in- 1 , 以 上 4 种气体均为氮气; Q1 和 Q3 均为 单位分辨 率; ESI 模式、去簇电压 ( declust ering po tential, DP) 、驻留时间( dw ell t ime) 和碰撞能 ( collisio n ener gy, CE) 等质谱参数列于表 1。 1. 4 LC MS/ MS 谱库
道不多, 美国 FDA 和我国国家标准都是采用气 质联用 法 检 测奶 粉 中 三 聚 氰胺 及 其 同 系 物。 Muiz V alencia 等[ 2] 采用液相色谱测定了大米浓
缩蛋白中的三聚氰胺及其 3 种同系物; 栾伟[ 3] 研 究了宠物食品中三聚氰胺及三聚氰酸的液相色 谱串联质谱检测方法; 另有鸡蛋、饲料、牛奶等基 质中同时检测三聚氰胺及其同系物残留方法的 报道[ 4 8] 。美国和我国政府都严禁在饲料或食品 中添加三聚氰胺类物质, 但三聚氰胺及其同系物 在牛奶、鸡蛋、鸡肉、猪肉、鱼等动物源性食品中 仍被检出, 因此建立一种同时测定这几种结构相 似的三嗪类化合物多残留方法非常必要。
加入 1. 0 m L 70% 乙腈( 含 0. 1% 甲酸) 溶解残 渣, 涡旋振荡器振荡 1 min, 以 15 000 r m in- 1 离心 5 min, 上清液供液相色谱 串联质谱测定。 1. 6 检测模式
M RM IDA EPI 谱库检索。
表 1 三聚氰胺及其同系物部分质谱参数 Table 1 Partial parameters of MS/ MS analysis for melamine and its homologues
2 结果与讨论
2. 1 样品前处理方法 5 种三聚氰胺类化合物具有不同的 pKa 值,
g kg- 1, 线性关系良好( r > 0. 99) ; 在 10~ 100 g kg- 1 添加水平范围 内, 平均回收率为 94. 2% ~ 99. 9% 、 相对标准偏差为 3. 8% ~ 7. 5% 、方法检出限为 2 g kg - 1 。 关键词: 三聚氰胺; 猪组织; 液相色谱 串联质谱( L C M S/ M S) ; 谱库 中图分类号: O 657. 63 文献标识码: A 文章编号: 1004 2997( 2010) 05 277 06
Abstract: MRM IDA EP I spectral library search m odel w as used t o est ablish a H PL C electr ospray io nizat ion t andem mass spect romet ry met hod f or t he multi residue det ect ion o f melamine and it s homo logues in pig t issues. T he quant it ative and qualit ative analysis of t he targ et analyt es w ere achieved by w it h spect ral library search f unct ion. T issue samples w er e tr eat ed w it h 2% t richloro acetic acid, 10% lead acet at e solut io n and acet onit rile for ex t rac tion, purified w it h Sepucol ENVI CARB column. T he analyt ical method in t he present st udy w as w ell validat ed, and go od result s w ere obt ained w ith respect t o precision, repeat ability and spiked recovery. T he limit of det ect io n is 2 g kg- 1 fo r melam ine and it s hom o logues, and w it h a linear range fro m 10 to 5 000 g kg - 1. T he recoveries are betw een 94. 2% and 99. 9% , and RSDs are bet w een 3. 8% and 7. 5% . Key words: melamine; pig t issues; L C M S/ M S; spect ral libr ary
本研究选择三聚氰胺及其 4 种同系物为研 究对象, 建立相应的液相色谱 串联质谱谱库, 结 合谱库检索建立猪组织中三聚氰胺及其同系物 的 LC MS/ M S 多残留检测方法。
图 1 三聚氰胺及其同系物的结构式与 pKa 值 Fig. 1 Chemical structures and pKa values of melamine and its homologues
第 5期
蔡勤仁等: L C M S/ M S 法结合谱库检索测定猪组织中三聚氰胺及其同系物
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铅和 6 mL 乙腈, 匀浆 30 s, 超声 5 min, 80 ! 加 热 20 min, 以 5 000 r min- 1 离心 5 min, 取 10 mL 上清液过 Sepuco l ENVI CARB 3 mL 小柱 ( 小柱分别用 3 mL 二氯甲烷、甲醇、0. 04% 乙酸 活化) , 再用 3 m L 水淋洗, 抽干, 最后用 10 m L 甲醇洗脱, 收集洗脱液于 45 ! 氮气浓缩至近干,