4×SDS-PAGE浓缩胶缓冲溶液使用说明

SDS-PAGE自制胶操作规程

SDS-PAGE自制胶操作规程一：试剂准备SDS-PAGE电泳所用溶液：30 %聚丙烯酰胺溶液(100 mL)丙稀酰胺(Arc)29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺(Bis)0.8g，加入去离子水定容至100mL，过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。

将商品用的40 %聚丙烯酰胺溶液稀释到浓度为30 %，冰箱4℃保存。

分离胶缓冲液1.5mol/L Tris·HCl，pH8.8：23.23gTirs碱，溶于80mL去离子水中，加入盐酸调节pH值至8.8，定容至150mL。

浓缩胶缓冲液0.5mol/L Tris·HCl，pH6.8： 6.0gTirs碱，溶于60mL去离子水中，加入盐酸调节pH值至6.8，定容至100mL。

10％SDS：2gSDS溶于去离子水中，定容至20mL，加热至68℃助溶。

10％过硫酸铵：0.1g过硫酸铵，溶于1mL去离子水中；现配现用或分装冷冻备用。

TEMED(N-N-N`-N`－四甲基乙二胺)原液，室温保存。

1×Tris-甘氨酸缓冲液(1 L)Tris碱 3.03甘氨酸(电泳级) 14.4gSDS 1g2×SDS凝胶还原型加样缓冲液(5mL)0.25 mol/L Tris-Cl (pH 6.8) 1 mLSDS 0.25g甘油0.189gβ-巯基乙醇 2.5ml(DTT（二硫苏糖醇）0.385g溴酚兰0.001g双蒸水定容到5ml考马斯亮蓝染色液考马斯亮蓝R-250 1.0g甲醇450 mL冰醋酸100 mLddH2O 450 mL考马斯亮蓝脱色液（甲醇脱色液效果好，但有毒性）450mL乙醇（甲醇）450mL冰醋酸100mLddH2O 450mLPH7.4PBS（0.01M）1LKH2PO4 1 mLNa2HPO40.25gNaCl 0.189gKCl 2.5ml二：凝胶配置1 2 3 41．将短玻璃板放在带有边条的长玻璃板上，做成玻璃板夹心。

玻璃板应保持干燥洁净。

SDS-PAGE蛋白电泳手册

蛋白电泳手册SDS-PAGE及Western blot蛋白电泳蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象.根据所采用的支持物不同,有琼脂糖凝胶电泳,淀粉凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳等。

其中,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)由于无电渗作用,样品用量少(1-100μg)，分辨率高，凝胶机械强度大,重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶等优点而受到广泛的应用。

PAGE原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。

聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带。

SDS-PAGE原理SDS是一种阴离子表面活性剂，能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。

因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。

这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。

实验使用过程中，还加入DTT或者***，以打开蛋白间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构。

SDS—PAGE最常采用垂直板不连续系统（分离胶与浓缩胶）。

索引蛋白电泳（SDS-PAGE）……………………电泳试剂总表……………………………………………………制胶………………………………上样及电泳……………………染色蛋白提取蛋白定量Bradford蛋白浓度测定试剂盒使用说明BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明Lowry蛋白浓度测定试剂盒使用说明蛋白分子量标准（图）考马斯蛋白胶快速染色液Western blotWestern blotting DAB检测试剂盒Western blotting ECL化学发光检测试剂盒Western blotting 试剂盒使用说明蛋白电泳试剂（部分试剂可以相互替换）系号货号名称1T8060TRIS 三羟甲基氨基甲烷2G8200Glycine 甘氨酸3S8010SDS 十二烷基硫酸钠4A8080Acrylamide 丙烯酰胺5M8200N,N-Methylene Bisacrylamide甲叉双丙烯酰胺6A8090Ammonium Persulfate 过硫酸胺7D8220DTT 二硫糖醇8M8210β-Mercaptoethanol β-***9T8090TEMED 四甲基***10A101030%丙烯酰胺（29:1）11S10514XSDS-PAGE分离胶缓冲液（PH=8.8）12S10524XSDS-PAGE浓缩胶缓冲液（PH=6.8）13P10164×蛋白上样缓冲液(含β-***)P10154×蛋白上样缓冲液(含DTT)15D10701M DTT16A103010%过硫酸氨17T10201M Tris-HCL (PH6.8)18T10101.5M Tris-HCL(PH8.8)19S101010%SDS20T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液SDS-PAGE如今已形成成熟的方案，实验室可根据自己的情况和习惯来选择试剂。

SDS-PAGE电泳的标准操作规程

SDS-PAGE电泳的标准操作规程（编号：039）1、目的及适用范围SDS-PAGE电泳的分离原理，是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS）按重量比结合成复合物，使蛋白分子所带的负电荷远远超过天然蛋白分子的净电荷，消除了蛋白分子的电荷效应，使蛋白按分子大小分离，主要用于蛋白质分子量的测定、蛋白质混合组分的分离和蛋白质亚基组分的分析等方面。

2、主要仪器恒压或恒流电源、垂直板、制胶模具3、试剂及配制方法试剂配制方法或要求H2O 电阻率不低于18.2 MΩ.cm1.5 M Tris-HCl 1.5 moL/L Tris-HCl缓冲液，pH 8.830% Acrylamide 30% 丙烯酰胺溶液（避光保存）10% SDS 10% SDS溶液10% APS 10% 过硫酸铵溶液（临用前配制）TEMED TEMED溶液1 M Tris-HCl 1 moL/L Tris-HCl缓冲液，pH 6.815.1g、甘氨酸94 g、SDS 5 g，水稀释至1 L，pH 8.35×电极缓冲液 Tris2×Loading buffer 100 mM Tris-HCl（pH6.8）、4% SDS、0.2% 溴酚蓝、20% 甘油，用于非还原SDS-PAGE电泳，如用于还原SDS-PAGE电泳，则再加2% β-巯基乙醇5×Loading buffer 250 mM Tris-HCl（pH6.8）、10% SDS、0.5% 溴酚蓝、50% 甘油，用于非还原SDS-PAGE电泳，如用于还原SDS-PAGE电泳，则再加5% β-巯基乙醇考马斯亮蓝染色液 0.1%考马斯亮蓝R250、25%异丙醇、10%冰醋酸，水稀释至1 L考马斯亮蓝脱色液醋酸100 mL、乙醇50 mL、水850 mL4、操作步骤4.1 制胶：取合适的密封垫片和两块已清洁的干燥的玻璃板，组装成灌胶的模具，按下表制成分离胶，灌入模具内一定高度（一般离玻璃板上端3.5 cm），小心加水或异丙醇封顶（约0.5 cm高），室温下聚合（温度不同，聚合时间不同，20℃大约需30 min）。

SDS-PAGE标准操作规程

SDS—PAGE标准操作规程一、试剂（一)储存液(1)2M Tris-HCl （pH8.8),100ml称取24.2g Tris碱；加50ml蒸馏水;缓慢的加浓盐酸至pH8.8（约加4ml）；让溶液冷却至室温，pH将会升高;加蒸馏水至100ml.(2)1M Tris—HCl（pH6.8）,100ml称取12。

1g Tris碱；加50ml蒸馏水；缓慢的加浓盐酸至pH6。

8（约加8ml）；让溶液冷却至室温，pH将会升高；加蒸馏水至100ml.(3)10%(w/v)SDS，100ml。

室温保存称取10g的SDS；加蒸馏水至总量为100ml.(4)50%（v/v）甘油，100ml倒取50ml 100%的甘油；加入50ml蒸馏水。

(5)1%(w/v)溴酚蓝，10ml称取100mg溴酚蓝；加蒸馏水至10ml，搅拌直到完全溶解；过滤除去聚合的染料。

（二)工作液(1)30％（w/v)丙烯酰胺/0。

8%（w/v）双丙烯酰胺30g丙烯酰胺0.8g双丙烯酰胺注意：未聚合的丙烯酰胺是一种皮肤刺激物和神经毒素，操作时必须戴手套在通风柜操作，加蒸馏水至100ml,缓慢搅拌直至丙烯酰胺粉末完全溶解，过0.45μm滤膜。

可在4℃存放数月。

(2)4×Tris-Cl/SDS (pH8。

8 1。

5M Tris-Cl Containing 0.4%SDS)91g Tris base2g SDS加水300ml,用1N HCl调pH至8.8,再加水至500ml过0.45μm滤膜，4℃存放(3)4×Tris-Cl/SDS (pH6.8 0.5M Tris—Cl Containing 0.4%SDS)6。

05g Tris base0.4g SDS加水40ml，用1N HCl调pH至6。

8，再加水至100ml过0.45μm滤膜，4℃存放(4)10％过硫酸铵APS0.1g过硫酸铵1ml蒸馏水长期不用应-20℃干燥分装保存，临用前再加D。

磷酸盐-SDS电泳缓冲液(4×)

北京雷根生物技术有限公司
磷酸盐-SDS 电泳缓冲液(4×)
简介：
磷酸盐-SDS 电泳缓冲液(4×)由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、SDS 等组成，用于SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳，使用时需用蒸馏水或去离子水稀释4倍后使用。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、用蒸馏水或去离子水稀释到1×后使用。

注意事项：
1、如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关：编号
名称PE0165
Storage 磷酸盐-SDS 电泳缓冲液(4×)
500ml RT 使用说明书1份编号
名称DC0032
Masson 三色染色液NA0034
Tris-硼酸电泳缓冲液(5×TBE)PE0025
SDS-PAGE 蛋白加样缓冲液(5×)PT0001
BCA 蛋白定量试剂盒PT0013
考马斯亮蓝快速染色液PW0053
Western 抗体洗脱液(碱性)TO1013丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 比色法)。

SDS-PAGE电泳注意事项

SDS-PAGE电泳的操作规程一、样品处理取适量体积的样品溶液（样品含约为0.5-5ug），加入5×样品缓冲液，用振荡器混匀，于95℃水浴中煮5分钟，并于离心机中12000r/min离心5分钟待上样用，煮完后室温冷却。

非还原不用煮。

二、配制凝胶溶液和灌胶A、预先计算好所需浓度胶的体积及配胶所需要的各种试剂的体积，按这些数据依次加入试剂并混匀，然后灌入预先装好并且用双蒸水试漏过的板层中（先是分离胶），在胶的上面加一小层水饱和的异丁醇，置于平整的桌面让其自然凝固。

B、待分离胶凝固后（以胶与异丁醇界面有折射为准），到掉上层的异丁醇，用双蒸水冲洗三次并用吸水纸吸干。

然后灌入预定浓度的、按步骤A配制的浓缩胶，插入加样梳（注意赶走气泡），平置于水平桌面，自然凝固。

C、待凝固后，放置1小时使胶充分交联凝固。

三、电泳1、拔掉梳子，用双蒸水冲洗加样孔，去除杂质及未凝固的胶溶液，然后装好电泳装置，加入电泳缓冲液（如阴阳极缓冲液不同，需要分别加入相应的缓冲液，另外，阴阳极电泳缓冲液不要混在一起）2、用20ul的微量加样枪上样。

3、电泳开始时，恒压模式下用80V的电压电泳，待指示剂溴酚蓝进入分离胶时，把电压提高到130-150V左右，直到溴酚蓝快走出分离胶时，终止电泳，切断电源，拆下凝胶分别切下上、下角标记胶的方向及区别是哪一块胶。

4、清洗胶架、玻璃及其他附件。

四、染色、脱色及结果的分析与保存1、把剥下的胶浸入染色液中，放在脱色摇床上摇1小时。

2、取出凝胶块，用蒸馏水冲洗干净，然后置于脱色液中脱色，摇荡脱色直到底色基本脱完。

3、脱完色的胶用凝胶成像系统照相并进行数据分析处理。

一、试剂的使用与管理1、30%的丙烯酰胺贮存液（棕色瓶中保存）、pH8.8的缓冲液、PH6.8的缓冲液、10%的AP、TEMED用完后请放回4℃冰箱。

2、2×上样缓冲液，用完后请存放于-20℃冰箱的指定位置。

3、中分子量marker请按照说明书配制，配制后于95℃水浴中煮5分钟，冷却后离心，分装到eppendorf管中，每管10 U L。

SDS-PAGE电泳相关溶液的配置

电泳相关溶液的配置：1、30%丙稀酰胺混合溶液（100ml）：称取29g丙稀酰胺和1g bis丙稀酰胺，用水溶解定容到100ml，过滤，4摄氏度保存一个月。

2、5×SDS电极缓冲液：称取Tris base15.1g，甘氨酸94.g，SDS 5.g 加dH2O定容至1000ml。

3、2×样品缓冲液（10ml）：甘油2ml，溴酚蓝0.0202g，1MTris·Cl （pH6.8）1ml巯基乙醇0.14ml，10%SDS 4ml。

4、染色液的配制（1000ml）:用量筒分别量取250ml甲醇或者乙醇、80ml乙酸；在电子天平上称取0.125%考马斯亮蓝R250 1.25g，再将其一一加到1000ml锥形瓶中，用蒸馏水加以补足至1000ml。

加入的先后顺序为：考马斯亮蓝R250，甲醇或者乙醇，蒸馏水，乙酸。

充分混匀后进行过滤，收集滤液备用。

当过滤速度变慢时要更换滤纸，快速过滤完，不可隔夜以免影响染色效果。

5、脱色液（1000ml）:用量筒分别量取250ml甲醇或者乙醇、80ml乙酸、670ml蒸馏水加入烧杯中，待溶液混和均匀后加入盛脱色液的广口瓶；备用。

收集液的SDS-PAGE分析：1、取20ul收集液，加入5×样品缓冲液5ul，在80℃水浴锅中煮5min。

分离胶配方Resolving Gel (10ml)6%8%10%12%15%H2O 5.4 4.7 4.1 3.4 2.430% acrylamide mix 2.0 2.7 3.3454x resolving-gel buffer 2.5 2.5 2.5 2.5 2.520% SDS0.050.050.050.050.0520% APS0.050.050.050.050.05TEMED0.0080.0060.0040.0040.004浓缩胶配方（10ml）H2O 6.9 ml30% acrylamide mix 1.7 ml8x stacking-gel buffer1.25 ml20% SDS0.05 ml20% APS0.05 mlTEMED0.01 ml2、按照上面配方制SDS-PAGE凝胶，安装好电泳仪，在槽中加入电极缓冲液。

蛋白示踪上样缓冲液

•蛋白示踪上样缓冲液（还原，4x）•
保存：-20℃• •
组分说明•
SDS-PAGE loading buffer5•ml•
产品简介
蛋白上样缓冲液(SDS-PAGE loading buffer)是一种经过改良的以溴酚蓝为染料，4倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液,用于常规的 SDS-PAGE蛋白电泳样品上样。

本产品含有两种示踪染料，分别是蓝色的溴酚蓝和红色的派洛宁γ,可实时监控蛋白样品电泳进程。

同时，在凝胶上显现的红色条带可伴随蛋白样品转移至印迹膜上，因此本产品具有检测Western•Blotting 转膜效率的作用。

使用本产品操作简单，用法与普通上样缓冲液相同。

测试效果
操作步骤•
1. 将蛋白示踪上样缓冲液（还原，4x）与蛋白样品按照1：3 的比例混匀。

•
2. 将蛋白样品置于沸水浴中加热3-5 分钟。

•
3. 待蛋白样品充分变性后冷却至室温，离心30 秒。

•
4. 离心后，以微量进样器取适量上清，直接加入SDS-PAGE 凝胶加样孔内。

•
5. 进行常规电泳，当染料到达距离凝胶底端0.5•cm-1•cm 处即可停止电泳。

注意事项•
1.本产品分为还原型和非还原型两种，还原型上样缓冲液中含一定量的巯基乙醇，有
轻微刺激性气味，较易区分。

2.本产品在不同的胶浓度中，红色染料与溴酚蓝泳动的前后顺序会略有不同。

3.本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

4.含巯基的试剂有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

SDSPAGE电泳试剂配制

S D S-P A G E电泳试剂1)30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29.0g，亚甲基双丙烯酰（Bis）1.0g，混匀后加ddH2O，37O C溶解,定容至100mL,棕色瓶存于4O C；2)1.5MTris-HCl(pH8.8)：Tris18.17g加ddH2O溶解,浓盐酸调pH至8.0,定容至100mL；3)1MTris-HCl(pH6.8)：Tris12.11g加ddH2O溶解,浓盐酸调pH至6.8,定容至100mL；4)4?分离胶缓冲液：0.4gSDS溶于1.5MTris-HCl(pH8.8)，定容至100mL；5)4?浓缩胶缓冲液：0.4gSDS溶于1MTris-HCl(pH6.8)，定容至100mL；6)10?电泳缓冲液(pH8.3)：Tris3.029g，甘氨酸14.415g，SDS1g加ddH2O溶解,定容至100mL；7)10%过硫酸铵（Aps,现配）：1gAP加ddH2O至10mL；8)2?SDS电泳上样缓冲液：1MTris-HCl(pH6.8)2.5mL，?-巯基乙醇1.0mL，SDS0.6g，甘油2.0mL，0.1%溴酚兰1.0mL，ddH2O3.5mL；9)考马斯亮兰染色液：考马斯亮兰R2501.25g，甲醇225mL，冰醋酸50mL，ddH2O225mL；10)脱色液:甲醇、冰醋酸、ddH2O以2∶1∶7配制而成；11)分离胶(12.5%):ddH2O4mL，30%储备胶5mL，4?分离胶缓冲液3mL,10%Aps0.1mL(现配)，TEMED(N,N,N’,N’-四甲基乙二胺)10μL；12)浓缩胶（5％）：ddH2O2.65mL，30%储备胶0.85mL，4?浓缩胶缓冲液1.25mL，10%Aps50μL，TEMED5μL。

Tricine（三羟甲基氨基甘氨酸）-SDS-PAGE蛋白质电泳1Tricine-SDS-PAGE蛋白质电泳溶液准备1）正极缓冲液(10×)：14gTris溶于400mL重蒸水,用1.0MHCl调至pH8.9,定容至500mL。

SDS-PAGE配胶试剂盒使用说明书

SDS-PAGE配胶试剂盒使用说明书Cat.No：Lot No：原理：本技术中，待分离的样品在有SDS-PAGE和还原剂的存在下通过加热而变性并被去污剂所包被。

SDS可使蛋白质带上大量的负电荷，其带电荷的多少正好与多肽的长度成正比。

聚丙烯酰胺凝胶上样后，在高电压的作用下，蛋白组分向正极（阳极）迁移。

由于所有的蛋白所带的负电荷与其分子大小成正比，因而蛋白就仅仅根据其分子量的大小不同而被分离—凝胶的分子筛效应。

蛋白质的分子量就可以通过与标准蛋白的凝胶迁移率进行比对而得到。

凝胶电泳后，特定的凝胶条带可以通过染色而观察到，并且可通过被动扩散或电洗脱从凝胶上进行回收。

两种最常用的染色方法是考马斯亮蓝法和银染法，这两种方法的蛋白条带检测灵敏度可分别达到50ng和5ng。

由于考马斯亮蓝法使用简便，并可以对收集的蛋白带作进一步分析，因而较为常用。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳应用范围：1）蛋白质纯度的分析；2）蛋白质分子量的测定；3）蛋白质浓度的测定；4）蛋白质水解的分析；5）免疫沉淀蛋白的鉴定；6）免疫印迹的第一步；7）蛋白质修饰的鉴定；8）分离和浓缩用于产生抗体的抗体的抗原；9）分离放射性标记的蛋白质。

试剂盒组成：1．30%预制聚丙烯酰胺胶（4℃保存）200ml2．1.5M TrisCl（PH=8.8）200ml3．1.0M TrisCl（PH=6.8）50ml4．10%SDS 30ml5．10%过硫酸铵（4℃保存）30ml6．去离子水250ml7．TEMED（4℃闭光保存！）1ml8．5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液250 ml9．考马斯亮蓝染色剂50ml10. 考马斯亮蓝脱色剂250ml5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液用时以去离子水1：4稀释，配成1×-甘氨酸电泳缓冲液工作液。

凝胶的配制：（1）将玻璃板安装固定好切误把玻璃弄坏（2）进行分离胶的配制（3）加入TEMED后立即混匀内容物倒入到固定好的玻璃板中，同时留出灌注浓缩胶所需空间（梳子的齿长再加0.5cm）再在胶液面上小心注入一层水（约2—3mm高）以排除气泡和阻止氧气进入凝胶溶液。

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明书

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明书产品货号：SK6010储存条件：Acr-Bis溶液2-8℃储存，其它常温储存。

有效期2年。

产品组成：Components SK6010-50SK6010-250保存条件30%Acr-Bis(29:1)100ml500ml2-8℃分离胶缓冲液100ml500ml RT浓缩胶缓冲液50ml250ml RTAPS（过硫酸铵）5×0.1g5×0.5g RT TEMED1ml5ml RT/避光说明书1份注意：过硫酸铵（APS）为固体粉末，使用前配制成10%APS溶液（0.1g APS加1ml双蒸水；0.5g APS 加5ml双蒸水）。

APS溶液最好现配现用，通常4℃可保存两周，-20℃能保存半年。

产品简介：本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需全部试剂，只需自备蒸馏水，即可制备各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷、安全、实惠。

本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已加入10%SDS，使用时无需另外加入，分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液放置2-8℃可能出现絮状，为SDS析出，常温下放置一会溶液恢复澄清，可继续使用。

因为制备凝胶浓度不同，本品只给出大概制胶数量。

操作步骤：根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。

一、灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表3）1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。

2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。

3．加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层，使凝胶表面保持平整。

4×SDS-PAGE分离胶缓冲溶液

4×SDS-PAGE 分离胶缓冲溶液货号：S1051规格：100ml/500ml保存：室温保存，有效期12个月。

产品说明：本试剂是由Tris 和SDS 混合而成的，主要用于SDS-PAGE 凝胶（变性聚丙烯酰胺凝胶）制备实验。

配制分离胶时，10ml 制胶体系中加入2.5ml（4倍稀释）。

组分浓度Tris-HCl（pH=8.8） 1.5mol/L SDS0.4%（W/V）注意事项：若有白色沉淀析出，可置于37℃水浴，析出溶解后再使用。

根据目标蛋白分子量选取凝胶浓度，按下表配制。

先配分离胶，再配浓缩胶。

（仅供参考）备注：S1052（4×SDS-PAGE 浓缩胶缓冲溶液）配方如下：组分浓度分离胶15%分离胶12%分离胶10%分离胶8%浓缩胶5%总体积10ml 10ml 10ml 10ml 5ml 30%丙烯酰胺(29:1)5ml4ml 3.3ml 2.7ml 0.83ml 4×SDS-PAGE 浓缩胶缓冲溶液1.25ml4×SDS-PAGE 分离胶缓冲溶液 2.5ml 2.5ml2.5ml2.5ml10%过硫酸铵100ul 100ul 100ul 100ul 75ul TEMED 10ul 10ul 10ul 10ul 7.5ul ddH2O 2.4ml 3.4ml 4.1ml 4.7ml 2.84ml 最佳分离范围10-40kD12-60kD20-80kD30-90kD—Tris-HCl（pH=6.8）0.5mol/LSDS0.4%（W/V）本试剂是由Tris和SDS混合而成的，主要用于SDS-PAGE凝胶（变性聚丙烯酰胺凝胶）制备实验。

配制浓缩胶时，10ml制胶体系中加入2.5ml（4倍稀释）。

SDS-PAGE分离胶缓冲液（4×）说明书

SDS-PAGE 分离胶缓冲液（4×）SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)保存条件：2-8℃产品内容网站订购：微信订购：扫一扫右侧二维码服务热线：4006-222-360版本号：12/2015目录号：CW0026S （500 ml ）ComponentCW0026S 500 ml SDS-PAGE Separating Gel Buffer （4×）500 ml产品简介本产品为配制SDS-PAGE分离胶缓冲液，可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷。

产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。

操作步骤根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。

I 灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表2）1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer（4×）分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。

3．加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层，使凝胶表面保持平整。

5．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

II 灌制浓缩胶（各试剂使用量请参考附表3）1．去除覆盖在分离胶上的水层。

2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。

3．加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

5．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

6．静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。

BIORAD电泳仪及SDS-PAGE凝胶电泳操作规范

使用BIO-RAD电泳仪进行SDS-PAGE凝胶电泳的操作规范实验原理根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白，在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移速率主要取决于亚基分子量的大小。

实验所用仪器FR-200A全自动紫外与可见分析装置上海复日科技有限公司电泳仪 BIO-RAD公司TS-1型脱色摇床江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司实验用试剂低分子量蛋白Maker TAKARA4*上样缓冲 TAKARAPagn Blue protein staining solution Fermentas试剂的配制1.贮液的配制（1）凝胶储液取30g丙烯酰胺+0.8g甲叉双丙烯酰胺0.8g ,先用35ml双蒸水溶解，搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至100ml，过滤。

棕色瓶4℃保存一个月。

（2）1 mol/l Tris-HCL (PH 8.8)12.1g Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶解在80ml双蒸水中，用4mol/l盐酸调PH至8.8。

再用双蒸水稀释至100ml，保存在4℃冰箱。

（3）1.0 mol/l Tris-HCL (PH 6.8)6.06g Tris溶解在40ml双蒸水中，用用4mol/l盐酸调PH至6.8。

再用双蒸水稀释至50ml，保存在4℃冰箱。

（4）10%过硫酸铵（APS）0.1g过硫酸铵+1ml双蒸水。

使用前新鲜配制（5）Tris–甘氨酸电泳缓冲液的配制（25mmol/L Tris；250mmol/L甘氨酸(pH8.3)）30.3gTris+ 144.2g甘氨酸+ 10gSDS，双蒸水定容至1L。

每次使用时10倍稀释。

（6）样品缓冲液使用4*SDS-PAGE loading buffer(Takara公司)，上样缓冲与样品比例1:3混匀，之后煮沸5min。

2.凝胶的配制注：上表所标体积为配制两块胶的用量。

若配制一块或多块，可按比例减半或加倍。

具体步骤如下：1、样品制备：40 µL蛋白+5*上样缓冲液10 µL，煮沸5 min，冷却后放冰箱下层保存，备用2、制胶1）用专用的医用棉口罩将胶板擦拭干净，电泳槽清洗干净，组装模具。

SDS-PAGE配胶说明书

4
5
6
7.5
9
10
1.5M Tris-HCL（pH8.8）/mL
3.75
3.75
3.75
3.75
3.75
3.75
10%SDS/μL
150
150
150
150
150
150
AP（过硫酸铵）/μL
150
150
150
150
150
150
TEMED/μL
7.5
7.5
7.5
7.5
7.5
7.5
总体积/mL
15(两块)
3.温度对于胶的凝固时间会有影响，一般温度越低，凝固时间越长。
4.凝胶需要充分的凝固时间，建议胶制好后再多放1小时。
5.当室温较低时，SDS会凝固。可以于37℃加温复溶。
配胶说明：
1.AP需加1800μL水溶解。溶解后的AP如不能很快用完，请于-20℃分装保存，有效期1个月。如放4℃保存，有效期一周。
1.0M Tris-HCL（pH 6.8）
20 mL
G2003-4
10%SDS
5 mL
G2003-5
AP（过硫酸铵）
180 mg×3
G2003-6
TEMED
500 μL
保存条件：
4℃避光保存，整套试剂盒有效期12个月。
注意事项：
1.所有试剂需要复温至室温后方可使用。
2.小于10kDa的蛋白分离建议使用Tricine胶。丙烯酰胺凝胶可能不足以分离。
2.蛋白分子量与凝胶浓度，如下表：
蛋白质分子量范围（kDa）
适宜的凝胶浓度（%）
＜10
15-20
10-40
12-15

sds-page标准方法

SDS-PAGE标准方法如下：1.试剂：准备所需的试剂，包括2M Tris-HCl（pH8.8）、1M Tris-HCl（pH6.8）、10%SDS、50%甘油、1%溴酚蓝、10%过硫酸铵和5×电泳缓冲液等。

2.工作液：制备30%（w/v）丙烯酰胺/0.8%（w/v）双丙烯酰胺的工作液，加蒸馏水至100ml，缓慢搅拌直至丙烯酰胺粉末完全溶解，过0.45μm滤膜。

可在4℃存放数月。

3.凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。

过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。

4.pH8.9分离胶缓冲液：Tris 36.3g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100ml，4℃保存。

5.pH6.7浓缩胶缓冲液：Tris 5.98g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100ml，4℃保存。

6.TEMED（四乙基乙二胺）原液。

7.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制）。

8.考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。

9.操作步骤：制备凝胶贮液、分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液等；按照所需比例配制丙烯酰胺和双丙烯酰胺工作液；加蒸馏水至所需体积；将工作液和Tris碱混合并冷却至室温；加入SDS和TEMED；倒入制胶模具中并插入样品梳；放入电泳槽中加入电极缓冲液；连接电源开始电泳；电泳结束后取下凝胶；用考马斯亮蓝染色液染色；脱色并观察结果。

请注意，具体操作方法可能因实验室条件和需求而有所不同。

如有任何疑问或需要进一步了解SDS-PAGE标准方法的具体细节，建议咨询专业技术人员或查阅相关文献资料。

浓缩胶缓冲液安全操作及保养规程

浓缩胶缓冲液安全操作及保养规程浓缩胶缓冲液是一种专业用于缩短聚合物固化时间、降低稠度和增加膜厚度的专用液体材料。

在工业生产、科研实验以及其他应用中，浓缩胶缓冲液都有广泛的应用。

然而，由于其特殊性质，正确的操作过程及保养是十分重要的。

本文将详细介绍浓缩胶缓冲液的安全操作方法和保养规程。

一、操作安全规程1.1 环境安全浓缩胶缓冲液是一种对人体健康有害的化学物质，固体浓缩胶缓冲液更会产生灼伤和吸入毒气，因此，在使用时需要注意以下环境安全事项：1.1.1 操作场所必须通风良好，保持室内空气流通； 1.1.2 使用防护手套等安全防护用品，防止浓缩胶缓冲液接触皮肤； 1.1.3 紧急情况应该设有安全出口或人员疏散路线等应急措施。

1.2 人身安全浓缩胶缓冲液不仅对皮肤有伤害，还有毒性更大的气体，因此，使用时需注意以下人身安全事项：1.2.1 使用者必须佩戴透气性好的口罩或防毒面具； 1.2.2 在操作控制区域内不可以吸烟、喝水、食物或饮料等； 1.2.3 不可直接接触或摆放在易燃材料周围。

1.3 操作规程浓缩胶缓冲液操作前需要仔细核实配置比例，控制温度，避免水分进入。

1.3.1 缓冲液贮存密闭，储存在远离火源的阴凉干燥处； 1.3.2在使用前需要确认胶的性质和生产批号，并按要求检验质量； 1.3.3使用前需要准备好固定容器和液体计量工具，确保配置准确； 1.3.4操作时需保证操作区域内干净整洁； 1.3.5 不可在固化时间内对设备和容器进行移动或冲洗。

二、保养规程2.1 储存注意事项储存浓缩胶缓冲液时需做好以下注意事项：2.1.1 缓冲液需存放于密闭、阴凉、干燥处，防止水分或其他杂质污染； 2.1.2 避免存放在有腐蚀性物质的地方，避免生产事故；2.1.3 需要定期清理并护理贮存容器，避免液体或杂质对容器造成腐蚀。

2.2 清洗保养使用浓缩胶缓冲液后需要进行以下清洗及保养：2.2.1 需要根据温度进行清洗，高温过高可能对胶液质量造成损害；2.2.2 清理固化的缓冲液后，需要进行洗涤与消毒； 2.2.3 对储存容器也需要进行定期清理，避免沉淀或杂质对性能产生影响。

4×蛋白上样缓冲液使用说明

4×蛋白上样缓冲液（含DTT/巯基乙醇）编码品名规格单位北京华越洋生物4×蛋白上样缓冲液 10ml 瓶GT024-10ml4×蛋白上样缓冲液产品简介：本产品适用于SDS-PAGE(SDS-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。

其主要成份为SDS，DTT，溴酚蓝，缓冲盐溶液等。

SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。

DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。

最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。

溴酚蓝用作电泳时的指示剂，可大概指示电泳结束的时间。

4×蛋白上样缓冲液使用说明：1、请按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。

如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。

2、混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。

3、冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。

4×蛋白上样缓冲液注意事项：1、聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右，胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。

请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。

2、本试剂因含DTT，有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4×蛋白上样缓冲液保存：-20℃保存，建议分装冻存，避免反复冻融，自发货之日起至少12个月有效。

SDS-PAGE原理、试剂配制和注意事项

SDS是阴离子去污剂，能断裂分子内和分子间的氢键，破坏蛋白分子的二、三级结构。

作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。

而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使绊胱氨酸残基间的二硫键断裂。

在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS 胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。

SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。

分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。

电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。

2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。

当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。

电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。

蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。

电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。

过硫酸铵（AP）为催化剂，四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。

在聚合过程中，TEMED 催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。

当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。