SOP标准操作程序-Cho

SOP标准操作程序
胆固醇（货号：OSR6116，OSR6216）
实验原理：
胆固醇的测量主要用于诊断和治疗各种紊乱，包括血液中胆固醇过高，脂类和脂蛋白代谢紊乱。

血清总胆固醇分析已被证明在高脂蛋白血症，动脉粥样硬化症，肝病和甲状腺病的诊断中是有效的1。

总胆固醇和HDL胆固醇，与甘油三酸脂测定结合，为冠心病的预测提供了有价值的信息2。

对皂化的血清提取液总胆固醇的测定使用“胆固醇脱氢酶”开始于Flegg3和Richmond4。

以前，Hernandez，Chaikoff5和Hyun等人6已经分离出了一种胆固醇酯水解酶，这种酶对从胆固醇酯中产生出游离胆固醇是有效的。

最后，在1974年，Allain等人7和Rieschlau等人8将酯酶和氧化酶结合成一种单一的酶试剂，用于测定总胆固醇，这是奥林巴斯AU640胆固醇方法的基础。

奥林巴斯AU640胆固醇试剂已被证明其精确度满足NCEP执行标准。

血清中的胆固醇酯被胆固醇酯酶（CHE）水解，产生的游离的胆固醇被胆固醇氧化酶氧化，同时产生胆烯酮和H2O2，所产生的H2O2与4-氨基安替比林和苯酚形成醌亚胺，产生的颜色在540/600nm吸光度变化与胆固醇的含量成正比。

胆固醇脂酶
胆固醇脂+H2O-------------﹥胆固醇+脂肪酸
胆固醇氧化酶
胆固醇+O2-------------﹥胆烯酮+ H2O2
过氧化物酶
H2O2+4-氨基安替比林+苯酚-------------﹥醌亚胺+ H2O
标本：
病人准备：如果只测定胆固醇，无特殊要求。

类型：血清、肝素或EDTA血浆，标本最好不要溶血。

留取标本后请尽快分离血清/血浆。

血浆不建议使用草酸盐，柠檬酸盐或氟化物之类的抗凝血剂9。

标本稳定性：血清总胆固醇在4℃时稳定至少7天，在-20℃时稳定三个月，在-70℃时可稳定几年9。

仪器与材料:
仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪
材料：奥林巴斯AU640胆固醇
参与反应成份的最终浓度：
磷酸盐缓冲液（PH6.5）103mmol/L
4-氨基安替比林0.31mmol/L
苯酚 5.2mmol/L
过氧化物酶（辣根）≥10KU/L
胆固醇脂酶（念珠菌属）≥0.2KU/L
胆固醇氧化酶（短杆菌属）≥0.2KU/L
其中含有保护剂。

注意：1. 此试剂为体外诊断用。

2. 警告！有毒！含有苯酚，吞服有致命性的危险。

避免与眼睛，皮肤或粘膜接触。

如果外部接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位。

接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。

3. 保护剂为叠氮钠，与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。

试验用试管的直径在12～16mm。

定标液：奥林巴斯定标液（Cat. No. DR0040）。

试剂准备：奥林巴斯AU640的胆固醇是即开即用的。

无需特殊准备。

执行参数（性能参数）：以下数据是根据奥林巴斯AU640胆固醇已经建立的程序。

精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的一贯的方法13，AU640批内精密度小于3%，总精密度小于3%。

用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

方法学比较：
血清：奥林巴斯AU640胆固醇（方法1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法2），共同做183个病人标本。

相关系数达到0.9998，回归方程如下：
胆固醇方法1=（胆固醇方法2×0.989）+0.3
病人结果数值分布：22～488 mg/dL
敏感度：在奥林巴斯AU640生化分析仪上每分钟变化1.1毫吸光度为1 mg/dL。

试剂的贮存：1.当保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。

2.开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。

变质指示：正常的粉红色试剂变色或浑浊度增加，表明试剂已变质，不能继续使用。

校准：
标准液的准备：奥林巴斯定标液（Cat. No. DR0040）。

奥林巴斯定标液是即开即用的，无需特殊准备。

校准程序：每30天需要定标一次。

胆固醇定标程序用奥林巴斯定标物，可追踪到全国科学技术学会（NIST）标准参考材料（SRM）909b1&b2。

当有以下情况时需要重新定标：
1．换试剂批号或出现质控漂移时。

2．当仪器做完保养后。

3．重要零件更换时。

质控：在每一批标本中都应把奥林巴斯水平I与II质控血清（DR0061&62）作为未知标本进行分析。

操作程序（逐步地）：
AU640开机
1.确认两瓶清洗剂有足够的量。

2.打开蒸馏水供应系统的阀门。

3.如果没有设定自动开机，请按分析仪器上的[POWER ON]键。

4.确认打印机为开机并处于联机状态。

5.在[Start Condition]屏幕，输入所需信息，并按F2退出。

6.如果要求输入密码，请输入密码。

7.确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足请添加并在系统状态中的试剂状态检查试剂。

8.在急诊台Wash1的位置的试管中加满一支1N HCL的样品针清洗液。

9. ISE（电极）需要以下步骤定标：
a.在急诊台相应位置放血清/尿高和低值标准液。

b.在系统状态菜单选择ISE状态菜单。

c.选择F5，选定合适的定标条目。

d.定标完成后，确认斜率和因数是否在范围内。

开始分析:
1.把定标、质控、和标本架放在架子传送带上。

2.用鼠标点击屏幕最上方的[START ANAL YZER]图标。

3.点击F2退出键，退回到主屏幕。

分析参数
样品体积3微升稀释水0微升
试剂1体积45微升稀释水180微升
试剂2体积n/a 稀释水n/a
波长540/600 方法End
读点0/27 温度37℃
完整的实验参数与操作程序可以在AU640用户手册中查到。

计算：
无需手工计算，在37℃每个标本的结果自动以mg/dL打印。

报告结果:
参考范围：血清10： 1.9-2.7mg/dL
尿8：24-255mg/24hr
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。

根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

不正常结果的处理程序：根据仪器参数的正常值会打印异常标志。

报告格式：
自动地打印37℃mg/dL的报告，如果以SI单位（mmol/L）报告结果，要乘以0.0259。

操作过程注意事项：
操作过程的限制性：OlympusAU640胆固醇测定的线性范围是25～700 mg/dL。

样品浓度超过线性上限应稀释重做。

在AU640中应用自动重做功能，标本稀释重做后会自动乘以稀释倍数。

超范围的标本也可以在两份生理盐水中加一份血清进行手工稀释，轻轻地混匀，在AU640上当常规标本，结果乘以3。

干扰物质：
研究结果表明胆固醇测定受以下物质干扰10：
乳糜乳糜达到1000mg/dL时影响小于3%
溶血血红蛋白达到500mg/dL时影响小于10%
胆红素胆红素达到8mg/dL时影响小于10%
抗坏血酸抗坏血酸达到8mg/dL时影响小于10%
Olympus的研究结果是根据现时发表的文献，Olympus美国公司正在进行准确性的研究，对于其它物质的干扰，请参看Young发表的文献11。

参考文献：
1.Tietz,N.W.(Ed),Fundamentals of Clinical Chemistry,3rd Edition,W.B.Saunders,1987.
2.Gordon,T.,Castelli,W.P.,Hjortland,M.C.,Kannel,W.B. and Dawber,T.R.,Am J Med
62:707;1977
3.Flegg,H.M.,Ann Clin Biochem,10:79;1973
4.Richmond,W.,Scand J. Clin Invest,29,suppl 126:3.25;1972.
5.Hernandez,H.H. and Chaikoff,I.L.,J Biol Chem, 228:447;1957.
6.Hyum,J.,Kothari,E.,Herm,E.,Treadwell,C.R. and Vahouny,G.V.,J Biol Chem,224:1937;1969
7.Allain,C.C.,Poon L.S.,Chan,C.S.G.,Richmond,W. and Fu,P.C.,Clin Chem 20:470;1974.
8.Rieschlau,P.,Bernt,E. and Gruber,W.,Z Klin Chem Klin Biochem,12:403;1974.
9.Tietz,N.W.(Ed),Clincial Guide to Laboratory Tests,2nd Edition,W.B. Saunders,1990.
10.NCCLS,Interference Testing in Clincial Chemistry,EP7-P,1986.
11.Young,D.S.,Effects of Drugs on Clincial Laboratory Tests,4th Edition,AACC Press,1995.
12.Report from the Laboratory Standardization Panel of the National Cholesterol Education
Program,Clin Chem,34:193,1998
13.NCCLS,Evaluation Protocol EP5-T2,1992.
14.200 blood donors from North Texas.Data on file.。