RBM10,Caspase-9和内皮一氧化氮合成酶(eNOS)在早中期胚胎蜕膜组织的表达

部分基质细胞胞质。② Casp a s e - 9 在 孕 鼠 8.5 d 的 蜕 膜 组 织 中 表 达 高 于 6.5 d 、9.5 d (P < 0.05);
R B M 1 0 在 孕 鼠 8.5 d 的子宫蜕膜中表达高于6.5 d ,且 在 8.5 d 时达高峰后下降，9.5 d 时的表达低于
妊 娠 过 程 极 其 复 杂 ，子 宫 蜕 膜 化 作 为 整 个 妊 娠 周 期 的 关 键 步 骤 ，是 胚 胎 植 入 成 功 的 前 提 并 决 定 着 后 期 滋 养 细 胞 的 侵 袭 程 度 ，在 一 定 程 度 上 对 后 期 胚 泡着床、胎 盘 形 成 等 一 系 列 过 程 起 到 精 确 调 控 作 用 111。细胞为适应机体生长发育的需求而进行的自 我 淘 汰 过 程 称 为 凋 亡 ，这 种 程 序 性 细 胞 死 亡 模 式 补 充了经典的半胱天冬氨酸蛋白酶介导的凋亡模 式 [2]，而且细胞凋亡在整个妊娠周期中都发挥了极 其重要的作用。R B M 1 0 基 因 是 位 于 X 染色体上的 R N A 结 合 蛋 白 和 凋 亡 相 关 基 因 的 剪 接 调 节 剂 [3]。 R B M 1 0 的表达诱 导 细 胞 凋 亡 、抑 制 细胞增殖[4i，在 细胞凋亡的进程中,caspase- 9 作为线粒体凋亡通路 的起始因子，caspase- 9 的释放可激活下游的凋亡因 子 ，最终导致活化的半胱天冬蛋白酶发生层叠级联反 应 引 发 细 胞 凋 亡 [5]。故 本 实 验 研 究 探 讨 R B M 10、 caspase-9和 e N O S 在孕鼠早中期蜕膜组织表达及意义。
雌鼠进人发情周期时将雌雄鼠按4 : 1 合 笼 ，第 2 天清晨进行察看，看到白色阴道栓即确定为孕鼠， 记 为 妊 娠 第 1 天 ，随 机 抽 取 6.5~9.5 d 孕鼠进行取 材 。采用颈椎脱臼法将孕鼠处死，于腹部正中线耻 骨联合上方0.5 c m 处切开暴露子宫及输卵管，用手 术器械将子宫颈及输卵管剪断并且将其完整取出， 同 时 将 断 端 结 扎 ，标 本 放 置 人 包 埋 液 中 固 定 保 存 ，标 注日期、序号。 1.3.2免 疫 组 织 化 学 检 测 3 6 % 的中性甲醛固定子 宫 组 织 24 h , 石 蜡 包 埋 组 织 后 连 续 切 片 （5 p m ) ，
8.5 c U P c O .O S ) ;e N 0 S 在孕鼠蜕膜化的6.5 d 、8.5 d 和 9.5 d 呈弱阳性表达，且 8.5 d 时的表达水平高
于 9.5 d (P <0.05)。结论:ca Spase-9、R B M 1 0 和 e N O S 可能参与了子宫早中期蜕膜化过程及胚胎组织
①
基 金 项 目 ：广 西 自 然 科 学 基 金 项 目 （2016GXNSFAA380319); 桂 林 市 科 学 研 究 与 技 术 开 发 项 目 （20 1 3 0 4 1 6 -3 ) 。
② 作 者 简 介 ：闰 风 智 （1993— ) , 女 ，山 西 长 治 人 ，2 0 1 8 年 山 西 医 科 大 学 晋 祠 学 院 临 床 医 学 专 业 本 科 毕 业 ，现 为 桂 林 医 学 院 基 础 医
1 . 2 实验材料 R B M 10、caspase- 9 以 及 内 皮 型 一 氧 化 氮 合 酶
(e N O S )的 兔 抗 鼠 多 克 隆 抗 体 （均 购 自 北 京 中 杉 金 桥 ）；瑞氏染液（安 徽 雷 根 生 物 ）；中 性 树 胶 （珠海贝 索生物）；乙 醇 ，石 蜡 ，福 尔 马 林 D A B ( 北 京 中 杉 金 桥 ）；包埋器、石蜡切机、染色操作台、恒温水浴锅;显 微 镜 （日本奥林巴斯）。 1 . 3 实验方法 1.3.1受孕与组织标本采集将昆明小鼠放人桂林 医 学 院动 物房 伺养 1 周 后 ，于 第 1 天晚上用阴道脱 落 物 做 阴 道 脱 落 细 胞 检 查 ：用 消 毒 棉 签 粘 取 少 量 生 理 盐 水 轻 轻 插 入 雌 鼠 阴 道 轻 转 一 圈 ，取 出 棉 签 涂 抹 在载玻片上，滴 加 2~3滴 甲 醇 固 定 ,待 载 玻 片 风 干 后 ，滴 加 2 滴 瑞 氏 染 液 染 色 3 m i n ,再 滴 加 P B S 缓冲 液 （P H = 7.0)混 匀 ，10 m i n 后 ，轻甩去掉玻片上染液， 自来水冲洗30 s ，自然风干后封片，显 微 镜 下 观 察 。 以观察到阴道脱落细胞中出现大量角化上皮细胞， 并且极少见炎症细胞者为合笼最佳时机小鼠。
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第 2 期 闰风智等：R B M 10，CaSpase-9和内皮一氧化氮合成酶（eNOS)在早中期胚胎蜕膜组织的表达第 3 4 卷
闫风智過，刘 瑶 ％蒋 立 、任 亚 萍 ° ® , 杨 森 b，卢德杰b ( 桂林医学院a .基础医学院;b .临床医学院；c .组织学胚胎学教研室，广 西 桂 林 541199)
摘 要 目 的 ：研 究 R B M 10,caspase-9和 e N O S 在早中期胚胎蜕膜组织中的表达及意义。方法 ：通过培
的生长与分化调控。
关键词：胚胎 ；说 膜 ；R B M 10;caspase-9;内皮一氧化氮合成酶
中图分类号：R 322
文 献 标 志 码 ：A
文 章 编 号 ：1008-2409(2021)02-0025-05

Expressions of RBM10, caspase-9 and eNOS in the decidual issue of early and metaphase embryos®/ YAN Fengzhi"®, LIU Yaoa, JIANG lib, REN Yapingc®, YANG Sen", LU Dejieb/ / a. College of Basic Medicine；b. College of Clinical Medicine, Guilin Medical University, Guilin 541199, China Abstract Objective：T o investigate the expressions a n d significance of R B M 1 0 ,caspase-9 a n d e N O S in the decidual tissue of early a n d m i d - t e r m e m b r y o s . M e t h o d s : T h e decidual tissue of 6.5〜9.5 d e m b r y o w a s obtained b y cultivating pregnant m i c e , a n d tissue paraffin section w a s m a d e . T h e expression level of R B M 10, caspase-9 a n d e N O S in early a n d m i d - t e r m decidual tissues w a s detected b y i m m u n o h i s t o c h e m i c a l technique a n d the i m a g e s w e r e analyzed b y the processing software I m a g e P r o P l u s . Results ：① T h e expression of R B M 10 w a s concentrated in the decidual n u c l e u s , syncytiotrophoblast nucleus a n d uterine glandular cell n u c l e u s , a n d caspase-9 w a s mainly expressed in the epithelial cytoplasm of decidual
学 院 人 体 解 剖 与 组 织 胚 胎 学 硕 士 研 究 生 。 研 究 方 向 ：胚 胎 早 期 发 育 。
③ 通 信 作 者 ：任 亚 萍 , E-mail: yapingrengl@。
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第2 期
华夏医学
第34卷
glandand part of stromal cytoplasm .© the expression level of Caspase-9 in decidual tissue of 8.5 d pregnant rats was higher than that of 6.5 d and 9.5 d pregnant ra ts (P < 0 .0 5 ) ；the expression of RBM10 in decidua tissue of 8.5 d pregnant was higher than that of 6.5 d pregnant rats, and the expression peaked at 8.5 d and then decreased, and it was lower at 9.5 d than 8.5 d ( P < 0 .0 1 ) ;and the expression of eNOS was weakly positive at 6.5 d ,8 .5 d and 9.5 d , and its expression level at 8.5 d was higher than at 9.5 d. Conclusion： Caspase-9, RBM10 and eNOS may be involved in the early and middle-term uterine decidualization and the regulation of growth and differentiation of embryonic tissue. Keywords ： embryos ； decidua；RBM10； caspase-9；eNOS
育孕鼠获得6.5~9.5 d 胚胎蛻膜组织，制作组织蜡块切片。采用免疫组化技术检测R B M 10、caspase-9
和 e N O S 在早中期蜕膜组织中的表达，应 用 I m a g e P r o P l u s 图像处理软件分析图像。结 果 ：① R B M 10
表 达 于 蛻 膜 细 胞 核 ，合 体 滋 养 层 细 胞 核 及 子 宫 腺 上 皮 细 胞 核 ，c a s p a s e - 9 表 达 于 蜕 膜 腺 上 皮 细 胞 质 及
第 34卷第2 期 2021年 4 月
华夏医学 Acta Medicinae Sinica
DOI ： 10.19296/ki.l008-2409.2021-02-007
RBM10，Caspase-9和 内 皮 一 氧 化 氮 合 成 酶 （eNOS)
在早中期胚胎蜕膜组织的表达®
V o l .34 N o .2 A p r .2021
1 材料与方法 1 . 1 实验动物
雌 性 未 交 配 的 昆 明 鼠 3 5 只 （S P F 级 ），鼠龄 (49±2)d ,体重25.0~30.0 g ;雄 性 昆 明 鼠 6 只 ，鼠龄 (56±2)d ，体重40.0~50.0 g 左 右 （均购于湖南斯莱 克景达实验动物有限公司，S P F 级 ）。动物词养于光 照 周 期 为 12 h 开 灯 ，12 h 关灯的明暗变化环境中，每 天 光 照时 间段 为 6 : 0 0 〜18 : 00,相 对湿度35.0%~ 45.0%，室温保 持 24 t 左 右 ，可自由采食、饮水（饮用 水 经 过 消 毒 处 理 ）。本 研 究 获 得 桂 林 医 学 院 实 验 动 物委员会的批准。