一、实验课程的性质和目的

一、实验课程的性质和目的
生物化学是一门实验性学科，其所有的知识均来源于实验。

生物化学实验教学是生物化学教学的重要组成部分，因此，生物化学实验课是医学本科生的重要必修课之一，是其它医学各科的重要基础。

生物化学实验课主要内容包括生物大分子的制备、分光分析、层析、电泳、离心分离等各项技术，学生通过实验课学好这些技术知识不仅能培养和提高学生的总体素质，同时也为其将来参加医学工作、科研奠定必要的基础。

本着加强基本理论知识学习、强化基本实验技能训练和加强基础课与后续课、临床课联系，培养综合性、创新性医学人才的原则，我们的实验课教学有以下目的：(1)培养锻炼科学的思维方法、实事求是的科学态度和严谨的科学作风，提高分析问题和解决问题的能力。

(2)通过实验加深对理论的理解，学习掌握基本的生化实验技能与实验方法，为今后的学习和研究打下一定的基础。

(3)通过开设综合性、设计性实验，培养学生的综合能力和创新精神。

二、实验教学的主要内容与要求
实验一 (1)生化实验基本操作
(2)血清蛋白的定量---考马斯亮蓝法
【目的要求】
1．掌握生化实验的基本操作技术。

玻璃仪器的洗涤
2．掌握吸量管、移液器的使用
3．掌握试管中液体的混匀法
4．掌握分光光度法原理及分光光度计的使用
5．学习用考马斯亮蓝染色法来测定蛋白质含量的原理及方法
6．了解常见的测定蛋白质含量的方法
【实验时数】3学时
【实验内容】
1. 介绍玻璃仪器的洗涤、吸量管、移液器的使用、试管中液体的混匀法
2. 讲述分光光度法原理及分光光度计的使用方法
3. 标准曲线绘制
4. 样本蛋白含量的测定
【实验方法】
1．示教吸量管、移液器的使用及分光光度计的使用方法
2．以标准曲线法进行血清蛋白含量的测定
实验二 (1)血清蛋白电泳
(2)蛋白质等电点测定
【目的要求】
1．学习并掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理及操作。

2．了解如何测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。

3．通过实验加深对蛋白质两性解离和等电点的理解。

4．初步学会测定蛋白质等电点的方法。

【实验时数】3学时
【实验内容】
1.电泳前准备
2.电泳
3.染色及漂洗
4．配制不同pH的缓冲溶液
5．观察酪蛋白在不同的pH缓冲溶液中的沉淀量
【实验方法】
1．以醋酸纤维薄膜对血清蛋白进行电泳分离
2．沉淀法测定酪蛋白的等电点
实验三 (1)分子筛层析（凝胶过滤）
(2)课堂讨论：蛋白质理化性质及实际应用，蛋白质与疾病
【目的要求】
1.熟悉Sephadex分子筛层析的原理及基本方法
2.通过课堂讨论，加深对蛋白质理化性质、蛋白质与疾病的关系的认识【实验时数】3学时
【实验内容】
1．凝胶溶胀
2．装柱
3．上样
4．洗脱及分部收集
5．绘制洗脱曲线
6．讨论蛋白质理化性质及实际应用、蛋白质与疾病的关系
【实验方法】
1．Sephadex凝胶过滤法分离兰色葡聚糖和重铬酸钾
2．组织课堂讨论
实验四碱性磷酸酶Km值的测定（综合性实验）
【目的要求】
1．通过实验加深底物浓度的变化对酶促反应速度的影响这一理论的认识。

2．学习酶的Km值测定原理和方法并了解Km值在酶动力学研究中的意义。

【实验时数】3学时
【实验内容】
1.实验原理：Michaelis-Menten方程；Lineweaver-BurK方程
2.操作：注意：试剂量要准确；准确保温时间。

3.结果：作图并求出Km值。

【实验方法】
双倒数作图法测定碱性磷酸酶的Km值
实验五碱性磷酸酶活力测定
【目的要求】
1．掌握酶活力测定的基本方法，加深对酶的激活与抑制的理解。

2．熟悉酶活力单位、总酶活力、酶的比活力的含义及计算方法。

【实验时数】3学时
【实验内容】
1．标准曲线制作
2．样品碱性磷酸酶活力测定
【实验方法】
标准曲线法测定碱性磷酸酶的活力
实验六 (1)乳酸脱氢酶及辅酶的作用
(2)细胞色素体系的作用及其抑制
【目的要求】
1．掌握乳酸脱氢酶及辅酶的作用
2．了解粗制乳酸脱氢酶酶蛋白及辅酶的提取方法
3．掌握细胞色素体系的作用及氰化物对细胞色素氧化酶的抑制作用【实验时数】3学时
【实验内容】
1．肌匀浆、心肌匀浆的制备
2．NAD+的粗提
3．乳酸脱氢酶酶蛋白的制备
4．观察乳酸脱氢酶及辅酶的作用
5．观察细胞色素体系的作用及氰化物的抑制作用
【实验方法】
1．体外甲烯蓝还原法观察乳酸脱氢酶及辅酶的作用
2．体外对苯二胺氧化法观察细胞色素体系的作用及其抑制作用
实验七最适酶活性条件的实验设计
【目的要求】
1．通过实验加深理解pH对酶活力的影响
2．了解酶的最适pH的实验设计方法
【实验时数】3学时
【实验内容】
1．样品的收集和稀释
2．配制一系列不同的pH缓冲溶液
3．预实验：探索底物（淀粉）、样品（唾液淀粉酶）的合适用量
4．观察唾液淀粉酶在不同pH缓冲溶液中的活力高低，确定其最适pH 【实验方法】
淀粉水解法观察唾液淀粉酶在不同pH缓冲溶液中的活力
实验八 (1)胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响
(2)尿糖定性检验
【目的要求】
1．观察胰岛素及肾上腺素对家兔血糖浓度的影响。

2．掌握血糖、尿糖测定方法。

【实验时数】3学时
【实验内容】
1．动物准备
2．注射激素前取血
3．注射激素
4．注射激素后取血
5．测定血糖
6．尿糖定性检测
【实验方法】
1．葡萄糖氧化酶法测定血糖的含量
2．铜还原法检测尿糖
实验九（1）血清总胆固醇的测定
（2）血清尿素的测定
【目的要求】
1．了解血清胆固醇的测定方法，并联系胆固醇在体内的重要性认识其临床意义。

2．了解血清尿素氮测定的方法及临床意义。

3．复习尿素的生成机制及其意义。

【实验时数】3学时
【实验内容】
1.实验原理
2.操作：测定血清总胆固醇及尿素
【实验方法】
1．胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的含量
2．二乙酰一肟法测定血清尿素含量
实验十 (1) 血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性的测定
(2) 尿酮体定性检验
(3) 尿蛋白定性检验
【目的要求】
1．熟悉血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的方法。

2．掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的临床意义。

3．熟悉尿酮体测定的方法。

4．掌握尿酮体测定的临床意义。

5．熟悉尿蛋白测定的方法及临床意义。

【实验时数】3学时
【实验内容】
1．标准曲线绘制：
2．样品ALT活性测定
3．尿液酮体的检测
4．尿蛋白的检测
【实验方法】
1．赖氏法测定血清ALT活力
2．亚硝基铁氰化钠法测定尿酮体
3．加热醋酸法测定尿蛋白
实验十一血清物质代谢的变化及其在临床上的应用
【目的要求】
通过课堂讨论，加深对蛋白质、核酸、糖、脂类、维生素、微量元素等的代谢及其与临床的关系的认识
【实验时数】3学时
【实验内容】
讨论蛋白质、核酸、糖、脂类、维生素、微量元素等的代谢及其与临床的关系
【实验方法】
组织课堂讨论
实验十二外周血白细胞DNA提取
【目的要求】
1．熟悉DNA提取的原理。

2．学习DNA提取的操作方法。

【实验时数】3学时
【实验内容】
1.提取外周血白细胞
2.破碎外周血白细胞
3．抽提DNA
4．沉淀DNA
5．溶解DNA
【实验方法】
酚/氯仿法提取外周血白细胞DNA
实验十三分子生物学实验录象
【目的要求】
了解分子生物学常用的实验技术
【实验时数】3学时
【实验内容】
1．PCR
2．分子杂交
3．基因克隆
4．转基因动物
【实验方法】
观看录象。