一种收率高的胆红素提取方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911313397.9
(22)申请日 2019.12.19
(71)申请人 平顶山市慧鑫源生物科技有限公司
地址 467000 河南省平顶山市石龙区夏庄
村北
(72)发明人 石汉生　石东东　
(51)Int.Cl.
C07D 207/44(2006.01)
(54)发明名称一种收率高的胆红素提取方法(57)摘要本发明公开了一种收率高的胆红素提取方法，涉及胆红素提取技术领域，包括以下步骤：步骤1：取动物胆切块；浸泡冲洗速冻，破碎成粉末；步骤2：将动物胆粉移至离心管中，加入乙醇以及乙酸乙酯等体积混合液超声混合，待混合均匀后进行离心处理；步骤3：离心结束后取上清液，过滤得动物胆渣，将动物胆渣乙醇浸泡、超声和微波处理，半透膜过滤，得过滤液；步骤4：将过滤液和上清液合并得提取液，并随后向提取液中加入NaOH与乙醇、提取剂，浸提、减压蒸馏、抽滤清洗即得。

本发明的胆红素提取方法可以使得胆红素的提取率达到0.0158%以上,其纯度也在96%以上，大大地提高了成品胆红素的品质，有效地满
足了目前市场对高价值胆红素的需求。

权利要求书1页 说明书4页CN 110903232 A 2020.03.24
C N 110903232
A
1.一种收率高的胆红素提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：取新鲜的动物胆均匀地切成块状；采用温度为36-38℃、质量浓度为70～80％的NaCl溶液浸泡动物胆块3～5天，浸泡结束后，将动物胆块取出冲洗充分后，将动物胆块干燥至含水量在10-15%，随后将干燥后动物胆块放入密闭容器中，采用液氮设备速冻160-180s，之后将冷冻处理后的动物胆块及时破碎成粉末状，粒度控制在小于等于600μm；
步骤2：将步骤1得到的粉末状动物胆再通过液氮设备速冻处理，之后将动物胆粉移至离心管中，加入质量浓度为75％的乙醇以及乙酸乙酯等体积混合液超声混合，待混合均匀后进行一次离心处理；之后对离心管进行升温加热，控制管内温度在50-60℃，并加入质量浓度为30-40%的盐酸溶液，对管内混合物二次离心处理30-35min；
步骤3：离心结束后取上清液，过滤得动物胆渣，将动物胆渣加入70-80％乙醇浸泡40-50min，先后依次进行超声和微波处理，超声时间为60-70min，超声温度设定为40-45℃，超声功率设定为60-80W；微波功率设定为600-800W，微波时间为30-40min，之后使用半透膜进行过滤，得过滤液；
步骤4：将所述过滤液和上清液合并得提取液，并随后向提取液中缓慢加入质量浓度为15％NaOH与乙醇等体积混合液，期间充分搅拌，直至PH至控制在5-6之间，之后再向提取液中加入提取剂浸提处理50-60min，随后减压蒸馏回收提取剂，并在温度为90-100℃条件下水浴加热35-45min，最后加入相当于提取液质量3-5倍的乙醇浸提处理70-80min，减压蒸馏回收乙醇，抽滤清洗即得胆红素纯品。

2.根据权利要求1所述的收率高的胆红素提取方法，其特征在于，在步骤1中，所述动物胆为牛胆、猪胆或鸡胆中的任一种。

3.根据权利要求1所述的收率高的胆红素提取方法，其特征在于，在步骤2中，所述乙醇以及乙酸乙酯等体积混合液的比重为动物胆粉的10-12%。

4.根据权利要求1所述的收率高的胆红素提取方法，其特征在于，在步骤2中，所述一次离心转速不低于3000rpm，一次离心时间不少于6-8min。

5.根据权利要求1所述的收率高的胆红素提取方法，其特征在于，在步骤2中，所述盐酸溶液的比重为动物胆粉的6-8%。

6.根据权利要求1所述的收率高的胆红素提取方法，其特征在于，在步骤3中，所述70-80％乙醇体积为动物胆渣的4-6倍。

7.根据权利要求1所述的收率高的胆红素提取方法，其特征在于，在步骤4中，所述15％NaOH与乙醇等体积混合液的比重为提取液的6-10%。

8.根据权利要求1所述的收率高的胆红素提取方法，其特征在于，在步骤4中，所述提取剂为氯仿。

9.根据权利要求1所述的收率高的胆红素提取方法，其特征在于，在步骤4中，所述提取剂的比重为动物胆粉的15-25%。

权　利　要　求　书1/1页CN 110903232 A
一种收率高的胆红素提取方法
技术领域
[0001]本发明涉及胆红素提取技术领域，具体涉及一种收率高的胆红素提取方法。

背景技术
[0002]胆红素是胆色素的一种，它是胆汁中的主要色素，呈橙黄色，它是体内铁卟啉化合物的主要代谢产物，有毒性，可对大脑和神经系统引起不可逆的损害，但也有抗氧化剂功能，可以抑制亚油酸和磷脂的氧化，胆红素是临床上判定黄疸的重要依据，也是肝功能的重要指标。

从胆红素的生理功能和药理作用来看，它是可以在医药、食品、保健品和化妆品中广泛应用的，胆红素作为在生理上有重要意义的抗氧化剂，它是一种具有防御疾病和抗衰老等作用的天然色素，它在食品中的应用，一方面可以作为着色剂，天然食用色素，另一方面，可以用作防止脂肪、维生素A、C和E等氧化的抗氧化剂；胆红素-白蛋白复合物，胆红素的琼脂糖脂，牛磺酸，番红花色或红色的胆红素锌盐，红色的胆红素硒盐等，都可以在抗衰老的保健品或化妆品中应用，其鲜艳的颜色自然又是美容的佳品。

近年来，随着胆红素的功能不断的被开发利用，各种提取方法也层出不穷，但是由于传统的提取方法成本投资高，工艺复杂不易掌握，并且由于提取方法的不合理导致从牛胆汁中提取的胆红素含量低，收率低，难以满足目前市场的巨大需求，因此，急需寻求一种能有效提高收率的提取方法。

发明内容
[0003]针对上述问题，本发明提供了一种收率高的胆红素提取方法。

[0004]为了达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现的：
一种收率高的胆红素提取方法，包括以下步骤：
步骤1：取新鲜的动物胆均匀地切成块状；采用温度为36-38℃、质量浓度为70～80％的NaCl溶液浸泡动物胆块3～5天，浸泡结束后，将动物胆块取出冲洗充分后，将动物胆块干燥至含水量在10-15%，随后将干燥后动物胆块放入密闭容器中，采用液氮设备速冻160-180s，之后将冷冻处理后的动物胆块及时破碎成粉末状，粒度控制在小于等于600μm；
步骤2：将步骤1得到的粉末状动物胆再通过液氮设备速冻处理，之后将动物胆粉移至离心管中，加入质量浓度为75％的乙醇以及乙酸乙酯等体积混合液超声混合，待混合均匀后进行一次离心处理；之后对离心管进行升温加热，控制管内温度在50-60℃，并加入质量浓度为30-40%的盐酸溶液，对管内混合物二次离心处理30-35min；
步骤3：离心结束后取上清液，过滤得动物胆渣，将动物胆渣加入70-80％乙醇浸泡40-50min，先后依次进行超声和微波处理，超声时间为60-70min，超声温度设定为40-45℃，超声功率设定为60-80W；微波功率设定为600-800W，微波时间为30-40min，之后使用半透膜进行过滤，得过滤液；
步骤4：将所述过滤液和上清液合并得提取液，并随后向提取液中缓慢加入质量浓度为15％NaOH与乙醇等体积混合液，期间充分搅拌，直至PH至控制在5-6之间，之后再向提取液中加入提取剂浸提处理50-60min，随后减压蒸馏回收提取剂，并在温度为90-100℃条件下
水浴加热35-45min，最后加入相当于提取液质量3-5倍的乙醇浸提处理70-80min，减压蒸馏回收乙醇，抽滤清洗即得胆红素纯品。

[0005]在本发明进一步实施例中，上述动物胆为牛胆、猪胆或鸡胆中的任一种。

[0006]在本发明进一步实施例中，上述乙醇以及乙酸乙酯等体积混合液的比重为动物胆粉的10-12%。

[0007]在本发明进一步实施例中，上述一次离心转速不低于3000rpm，一次离心时间不少于6-8min。

[0008]在本发明进一步实施例中，上述盐酸溶液的比重为动物胆粉的6-8%。

[0009]在本发明进一步实施例中，上述70-80％乙醇体积为动物胆渣的4-6倍。

[0010]在本发明进一步实施例中，上述15％NaOH与乙醇等体积混合液的比重为提取液的6-10%。

[0011]在本发明进一步实施例中，上述提取剂为氯仿。

[0012]在本发明进一步实施例中，上述提取剂的比重为动物胆粉的15-25%。

[0013]本发明具有如下的有益效果：本发明的胆红素提取方法操作简单方便，制取成本低廉，提取稳定，按照本提取方法可以使得胆红素的提取率达到0.0158%以上,其纯度也在96%以上，大大地提高了成品胆红素的品质，有效地满足了目前市场对高价值胆红素的需求。

具体实施方式
[0014]下面结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步描述，以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。

[0015]实施例1
一种收率高的胆红素提取方法，按照以下步骤进行：
步骤1：取新鲜的牛胆均匀地切成块状；采用温度为36℃、质量浓度为70％的NaCl溶液浸泡动物胆块3天，浸泡结束后，将动物胆块取出冲洗充分后，将动物胆块干燥至含水量在10%，随后将干燥后动物胆块放入密闭容器中，采用液氮设备速冻160s，之后将冷冻处理后的动物胆块及时破碎成粉末状，粒度控制在小于等于600μm；
步骤2：将步骤1得到的粉末状动物胆再通过液氮设备速冻处理，之后将动物胆粉移至离心管中，加入质量浓度为75％的乙醇以及乙酸乙酯等体积混合液（比重为动物胆粉的10%）超声混合，待混合均匀后进行一次离心处理，其中离心转速不低于3000rpm，一次离心时间不少于6min；之后对离心管进行升温加热，控制管内温度在50℃，并加入质量浓度为30%的盐酸溶液（比重为动物胆粉的6%），保持以上离心转速不变，接着对管内混合物二次离心处理30min；
步骤3：离心结束后取上清液，过滤得动物胆渣，将动物胆渣加入70％乙醇浸泡40min，70％乙醇体积为动物胆渣的4倍，先后依次进行超声和微波处理，超声时间为60min，超声温度设定为40℃，超声功率设定为60W；微波功率设定为600W，微波时间为30min，之后使用半透膜进行过滤，得过滤液；
步骤4：将上述过滤液和上清液合并得提取液，并随后向提取液中缓慢加入质量浓度为15％NaOH与乙醇等体积混合液（比重为提取液的6%），期间充分搅拌，直至PH至控制在5-6之
间，之后再向提取液中加入提取剂（比重为动物胆粉的15%）浸提处理50min，其中提取剂优选为氯仿，随后减压蒸馏回收提取剂，并在温度为90-100℃条件下水浴加热35min，最后加入相当于提取液质量3倍的乙醇浸提处理70min，减压蒸馏回收乙醇，将得到的胆红素粗品放入抽滤器中，用乙醇反复对胆红素粗品抽滤清洗，直至乙醇为清色为止即得胆红素纯品。

[0016]实施例2
一种收率高的胆红素提取方法，按照以下步骤进行：
步骤1：取新鲜的猪胆均匀地切成块状；采用温度为37℃、质量浓度为75％的NaCl溶液浸泡动物胆块4天，浸泡结束后，将动物胆块取出冲洗充分后，将动物胆块干燥至含水量在12%，随后将干燥后动物胆块放入密闭容器中，采用液氮设备速冻170s，之后将冷冻处理后的动物胆块及时破碎成粉末状，粒度控制在小于等于600μm；
步骤2：将步骤1得到的粉末状动物胆再通过液氮设备速冻处理，之后将动物胆粉移至离心管中，加入质量浓度为75％的乙醇以及乙酸乙酯等体积混合液（比重为动物胆粉的11%）超声混合，待混合均匀后进行一次离心处理，其中离心转速不低于3000rpm，一次离心时间不少于7min；之后对离心管进行升温加热，控制管内温度在55℃，并加入质量浓度为35%的盐酸溶液（比重为动物胆粉的7%），保持以上离心转速不变，接着对管内混合物二次离心处理32min；
步骤3：离心结束后取上清液，过滤得动物胆渣，将动物胆渣加入75％乙醇浸泡45min，75％乙醇体积为动物胆渣的5倍，先后依次进行超声和微波处理，超声时间为65min，超声温度设定为42℃，超声功率设定为70W；微波功率设定为700W，微波时间为35min，之后使用半透膜进行过滤，得过滤液；
步骤4：将上述过滤液和上清液合并得提取液，并随后向提取液中缓慢加入质量浓度为15％NaOH与乙醇等体积混合液（比重为提取液的8%），期间充分搅拌，直至PH至控制在5-6之间，之后再向提取液中加入提取剂（比重为动物胆粉的20%）浸提处理55min，其中提取剂优选为氯仿，随后减压蒸馏回收提取剂，并在温度为90-100℃条件下水浴加热40min，最后加入相当于提取液质量4倍的乙醇浸提处理75min，减压蒸馏回收乙醇，将得到的胆红素粗品放入抽滤器中，用乙醇反复对胆红素粗品抽滤清洗，直至乙醇为清色为止即得胆红素纯品。

[0017]实施例3
一种收率高的胆红素提取方法，按照以下步骤进行：
步骤1：取新鲜的鸡胆均匀地切成块状；采用温度为38℃、质量浓度为80％的NaCl溶液浸泡动物胆块5天，浸泡结束后，将动物胆块取出冲洗充分后，将动物胆块干燥至含水量在15%，随后将干燥后动物胆块放入密闭容器中，采用液氮设备速冻180s，之后将冷冻处理后的动物胆块及时破碎成粉末状，粒度控制在小于等于600μm；
步骤2：将步骤1得到的粉末状动物胆再通过液氮设备速冻处理，之后将动物胆粉移至离心管中，加入质量浓度为75％的乙醇以及乙酸乙酯等体积混合液（比重为动物胆粉的12%）超声混合，待混合均匀后进行一次离心处理，其中离心转速不低于3000rpm，一次离心时间不少于8min；之后对离心管进行升温加热，控制管内温度在60℃，并加入质量浓度为40%的盐酸溶液（比重为动物胆粉的8%），保持以上离心转速不变，接着对管内混合物二次离心处理35min；
步骤3：离心结束后取上清液，过滤得动物胆渣，将动物胆渣加入80％乙醇浸泡50min，
80％乙醇体积为动物胆渣的6倍，先后依次进行超声和微波处理，超声时间为70min，超声温度设定为45℃，超声功率设定为80W；微波功率设定为800W，微波时间为40min，之后使用半透膜进行过滤，得过滤液；
步骤4：将上述过滤液和上清液合并得提取液，并随后向提取液中缓慢加入质量浓度为15％NaOH与乙醇等体积混合液（比重为提取液的10%），期间充分搅拌，直至PH至控制在5-6之间，之后再向提取液中加入提取剂（比重为动物胆粉的25%）浸提处理60min，其中提取剂优选为氯仿，随后减压蒸馏回收提取剂，并在温度为90-100℃条件下水浴加热45min，最后加入相当于提取液质量5倍的乙醇浸提处理80min，减压蒸馏回收乙醇，将得到的胆红素粗品放入抽滤器中，用乙醇反复对胆红素粗品抽滤清洗，直至乙醇为清色为止即得胆红素纯品。

[0018]提取率及纯度检测
对上述实施例1-3制取得到的胆红素纯品的提取率及纯度进行检测，并记录于下表1中；
表1
提取率（%）纯度（%）
实施例10.016797.6
实施例20.017098.2
实施例30.015896.1
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。

凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。