PCR技术在医学检验中应用

3. 延伸 (Extension):
将反应体系温度升至DNA聚合酶的最佳
扩增温度（72 ℃），与模板DNA结合的引
物在DNA聚合酶的作用下，以 dNTP作为反 应原料，以引物的 3′ 端开始，按碱基配对与 半保留复制原理，合成一条与模板DNA链互 补的新DNA链。
上述 3 步为一个循环，每经过一个循 环，样本中的DNA量应该增加一倍，新形 成的链又可成为新一轮循环的模板，重复 以上3步，根据需要的量，经过25～40个循 环，DNA可扩增106 ～ 109 倍。 在PCR反应中，每一个循环都以前一循环 完成后的所有产物为模板，因此，扩增产 物是以指数方式增长的（2n）。
2. 退火 (复性) (Annealling):
将体系温度突然将温度降至（55 ℃左 右）后寡核苷酸引物与模板DNA单链上的 互补序列杂交（按碱基互补配对原则结合） 。同时，体系中的部分DNA聚合酶被激活 ，一旦引物与模板杂交，DNA聚合酶就结 合到杂交序列上使引物开始沿着模板DNA 延伸。这一步对扩增产物特异性有重要的决 定作用；
扩增的特异性取决于引物与模板DNA的 特异性结合，一个典型的 PCR 反应包括，“ 变性 - 退火 - 延伸”的多个循环 , 其一般反应过 程为：
1. 变性 (Denaturation)：
将体系加热至(95℃， 30″)使模板DNA 互补双链间的氢键断而解离成为两条单链 DNA，以便他与引物结合，为下轮反应做准 备。
PCR 的基本反应步骤个循环
退火
55˚C
三 PCR反应体系的组成
在常规的PCR反应中，体系通常有模板 ，引物，缓冲液，脱氧核苷酸，DNA聚合 酶，Mg+和K+等成分组成。
二、PCR的原理：
用于扩增位于两段已知序列之间的 DNA
片段，类似于天然DNA的复制过程。
以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别
与模板 5 ′ 末端和 3 ′ 末端互补的寡核苷酸片
段为引物，在 DNA 聚合酶的作用下，按照半 保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新 的 DNA 合成，重复这一过程 ，即可使目的 DNA片段得到扩增。
PCR技术在医学检验中应用
检验科
主要内容： 1.PCR的定义； 2.PCR的基本原理； 3.
一、PCR的定义：
PCR（polymerase chain reaction) ： 聚合酶链式反应，又称体外 DNA 扩增技 术。是近年来发展起来的一种体外扩增 特异DNA片段的新技术。
PCR技术：1985年由美国的Kary Mullis 首创，可以将微量目的DNA片段扩增一百万 倍以上。 优点：敏感度高、特异性强、产率高、重复 性好以及快速简便等，广泛应用于微生物学 、考古学、法医学及体育等领域，并已普及 到许多普通实验室，大大简化了传统的分子 克隆技术，从而比较容易地对目的基因进行 分析、鉴定。