超滤法测定黄芩苷的血浆蛋白结合率
醋酸纤维素纳滤膜的制备方法解析
[54]发明名称醋酸纤维素纳滤膜的制备方法[57]摘要本发明公开了一种醋酸纤维素纳滤膜的制备方法，包括以下步骤：1）将醋酸纤维素放入溶剂中搅拌，然后再加入非溶剂添加剂搅拌，最后静置，得铸膜液；2）将上述铸膜液刮制成250u m厚度的湿膜，然后静置在空气中；3）将上述步骤处理后的湿膜浸入蒸馏水中进行凝胶浴处理，得到不对称膜；4)将上述不对称膜依次经乙醇水溶液交换和纯环己烷交换处理后，得醋酸纤维素纳滤膜。
利用本发明方法所制得的纳滤膜通量大、分离效果明显。
权利要求书第1／1页1、一种醋酸纤维素纳滤膜的制备方法，其特征是包括以下步骤：1)、将醋酸纤维素放入溶剂中搅拌22～26小时，然后再加入非溶剂添加剂搅拌2～5小时，最后静置65～75小时，得铸膜液；2)、于10～30℃温度和50～75%相对湿度条件下，将上述铸膜液刮在洁净玻璃板或无纺布上制成250ltm厚度的湿膜，再使湿膜静置在空气中进行溶剂的挥发，静置时间为1～30分钟；3)、将上述挥发处理后的湿膜浸入5～25℃蒸馏水中进行凝胶浴处理，直至湿膜充分凝胶；得到不对称膜；4)、将上述不对称膜依次经体积浓度为30 --70%乙醇水溶液交换和纯环己烷交换处理后，得醋酸纤维素纳滤膜。
2、根据权利要求1所述的醋酸纤维素纳滤膜的制备方法，其特征是：所述步骤1）中溶剂与醋酸纤维素的用量比为100 ml：8～20g，溶剂与非溶剂添加剂的体积比为4～25:1。
3、根据权利要求2所述的醋酸纤维素纳滤膜的制备方法，其特征是：所述步骤1）中的溶剂为丙酮、1，4一二氧六环、四氢呋喃或氯仿。
4、根据权利要求3所述的醋酸纤维素纳滤膜的制备方法，其特征是：所述步骤1）中的非溶剂添加剂为水、甲醇或乙醇。
说明书醋酸纤维素纳滤膜的制备方法技术领域本发明涉及一种醋酸纤维素纳滤膜的制备方法。
背景技术膜分离技术是一项新兴的物质分离提纯和浓缩工艺，可在常温下连续操作，无相变；大规模生产中有节能、环保的优势；尤其适宜加热易变性的热敏性物质，因而在食品、医药、水处理等领域发展迅猛。
液质联用结合超滤法测定美罗培南或亚胺培南的血浆蛋白结合率[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202110077970.1(22)申请日 2021.01.20(71)申请人 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院）地址 100191 北京市海淀区花园北路49号申请人 中国食品药品检定研究院(72)发明人 王晨 张现化 杨平 翟所迪 许明哲 赵荣生 杨丽 张斗胜 崇小萌 王立新 姚尚辰 王欣 (74)专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限公司 11002代理人 黄爽(51)Int.Cl.G01N 30/06(2006.01)G01N 30/88(2006.01)(54)发明名称液质联用结合超滤法测定美罗培南或亚胺培南的血浆蛋白结合率(57)摘要本发明提供液质联用结合超滤法测定美罗培南或亚胺培南的血浆蛋白结合率，本方法将液相色谱串联质谱检测技术与超滤法相结合，分别测定血浆中美罗培南或亚胺培南的总浓度，以及超滤液中药物的游离浓度。
在处理样本时加入了MOPs稳定剂，解决了药物稳定性差的问题，进而使测定结果更加准确。
本发明可快速、高通量测定药物的蛋白结合率，尤其适用于不稳定的药物分子。
权利要求书2页 说明书9页 附图7页CN 112684075 A 2021.04.20C N 112684075A1.液质联用结合超滤法测定美罗培南或亚胺培南的血浆蛋白结合率的方法，其特征在于，包括：1)取空白血浆，加入MOPs缓冲液，再加入不同浓度的药物溶液，配制成不同浓度的含药血浆样本；再向其中加入内标溶液，涡旋混匀后加入乙腈，涡旋混匀后离心，取上清液加入乙腈混匀，用于HPLC‑MS/MS检测；以美罗培南或亚胺培南峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，美罗培南或亚胺培南的浓度为横坐标，进行回归分析，建立针对血浆中药物总浓度的标准曲线①；2)取空白血浆，加入MOPs缓冲液，将体系转移至超滤管中，于15‑30℃6000～10000g离心20‑30min，收集空白超滤液；向空白超滤液中加入不同浓度的药物溶液，配制成不同浓度的含药超滤液样本；再向其中加入内标溶液，涡旋混匀后加入乙腈，涡旋混匀后离心，取上清液加入乙腈混匀，用于HPLC‑MS/MS检测；以美罗培南或亚胺培南峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，美罗培南或亚胺培南的浓度为横坐标，进行回归分析，建立针对血浆中游离药物浓度的标准曲线②；3)将步骤1)中的空白血浆替换成待测血浆，将待测血浆分成A、B两等份，血浆A用于测定血浆中药物总浓度，血浆B用于测定血浆中游离药物浓度；4)取血浆A，加入MOPs缓冲液混合，加入内标溶液，涡旋混匀后加入乙腈，涡旋混匀后离心，取上清液加入乙腈混匀，进行HPLC‑MS/MS检测，测定待测血浆中美罗培南或亚胺培南的峰面积，代入上述标准曲线①，得到待测血浆的药物总浓度；5)取血浆B，加入MOPs缓冲液混合，将体系转移到超滤管中，于15‑30℃6000～10000g离心20‑30min，收集超滤液；向超滤液中加入内标溶液，涡旋混匀后加入乙腈，涡旋混匀后离心，取上清液加入乙腈混匀，进行HPLC‑MS/MS检测，测定待测血浆的超滤液中美罗培南或亚胺培南的峰面积，代入上述标准曲线②，得到待测血浆的游离药物浓度；按照式I)计算出待测血浆中美罗培南或亚胺培南的血浆蛋白结合率：血浆蛋白结合率＝(药物总浓度‑游离药物浓度)/药物总浓度×100％式I)其中，步骤1)和2)中所述的空白血浆是指来自同一个体、不含美罗培南或亚胺培南的血浆；所述MOPs缓冲液的配制方法如下：将3‑(N‑吗啉)丙磺酸半钠盐2g，溶于10ml水中；所述内标溶液为MEM‑d6溶液。
超滤技术在中药注射剂中的应用研究进展
超滤技术在中药注射剂中的应用研究进展作者：李德成来源：《环球市场信息导报》2018年第06期本文对超滤技术进行了简单的介绍，针对超滤技术在中药注射剂中的应用展开了深入的研究分析，结合本次研究，发表了一些自己的建议看法，希望可以提高超滤技术在中药注射剂中应用有效性。
在中药注射剂研究发展过程中，展开了大量的临床以及药效学等研究，为中药注射剂在临床上的应用提供了大量的数据支撑。
当前中药注射剂在设计应用中仍存在有热原污染、乙醇用量大以及生产周期长等缺陷，所生产的产品很难快速适应市场需要，需要花费较高生产成本，产品质量无法得到有效保证。
超滤技术的出现能够实现对这一问题的有效解决，将超滤技术应用在中药注射剂的研究中，不仅能够使中药注射剂质量得到提高，同时还能为超滤技术在中药制剂方面的应用提供参考和示范，本文就此展开了研究分析。
1.超滤技术中药注射剂在提取过程中存在有非常多蛋白质、淀粉、树脂等杂质，注射剂的刺激性以及澄明度会受到非常大的影响。
超滤膜孔径在50-10000时，能够截留1-20nm，相当于300-300000分子量蛋白质以及化合物，还能截留相同直径的胶体等。
选择1-30000截留分子量超滤膜，能够确保有效成分顺利通过，截留数万至数百万分子量杂质，能够起到保留有效成分，去除杂质的作用。
2.超滤技术在中药注射剂中的应用2.1超滤技术的应用优势中药注射剂生产主要是将中药中的有效成分富集在一起，将其中的杂质去除，尤其是将其中的大分子杂质去除，使中药注射剂澄明度有显著提高，实现对其不良反应发生率的有效控制。
以往的水提醇醇沉法在实际应用中需要较长的生产周期，很难实现对有机溶媒的高效回收，消耗非常多能源，损失大量有效成分，很难保证产品质量，环境污染问题较为突出。
超滤技术在实际应用中有着以下几个方面的应用优势：第一，不需要对前煮液进行加热或者冷却处理，能够直接过滤，降低中间生产环节，节约能耗；第二，膜本身能够直接灭菌，性能易恢复，灭菌彻底；第三，在中药成分方面有着非常高的分离效率，能够将其中细菌、色素等非药效成分去除，使中药注射剂的澄明度以及纯度有显著的提高；第四，能够很大程度上缩短工序，降低产品生产成本，减少产品生产周期，能够实现连续性操作，在大规模生产方面有着非常好的应用效果；第五，不仅适合单方中药，同样也适合复方中药。
黄芩苷的研究概况
综述黄芩中黄芩苷的研究概况一前言黄芩苷(baicalin)是由唇形科植物黄芩Scutellariabaicalensis Georgi 的干燥根中提取的一种黄酮类化合物。
其原植物主要产于东北、河北、山西、河南、陕西、内蒙古等地,以山西产量最大,河北承德产的质量最好。
黄芩味苦,性寒。
归肺、肝、胆、大肠、小肠经。
功能清热燥湿,泻火解毒,止血,安胎[1]。
黄芩苷是黄芩的主要有效成分之一,是黄芩及其制剂的主要质量控制指标成分,据药理学研究报道,黄芩苷具有抗微生物、抗变态反应、降压和镇静、利胆、保肝和解痉等作用[2]。
本文对黄芩苷的最新研究现状作一综述。
二药理作用研究概况黄芩苷(baicalin)是唇形科植物黄芩(scutellaria baicalensisgeorgi)的有效成分之一,属葡萄糖醛酸苷类,水解后产生黄芩素和葡萄糖醛酸,具有清热解毒、抗炎、利胆、降压、利尿、螯合金属离子、抗变态反应等多方面的作用[3]。
近年来随着国际上对黄芩苷研究的持续升温以及认识的逐步深入,认为黄芩苷在清除氧自由基、减轻组织的缺血再灌注损伤、调节免疫、促进细胞凋亡以及抗肿瘤和HIV等多方面均有作用。
1 解热作用发热是一个多环节多因素参与的复杂过程，若其中某些因素、环节被抑制或阻断，则可防止体温升高，从而产生解热效应。
目前。
对于黄芩苷解热机制方面的研究报道甚少。
综合近几年研究发现，黄芩总提物及单一活性成分(黄芩苷野黄芩苷)在整体动物实验、方面表现出显著的解热作用，且在一定剂量下其作用强度可高于以临床剂量折算的阿司匹林[4]。
2 抗炎作用张罗修等[5]报道了黄芩苷对刺激剂Ca2+载体A23187诱导大鼠腹腔巨噬细胞PGE2的合成有抑制作用，这可能提示了黄芩苷抗炎作用的部分机理。
陈先福等[6]应用兔感染性脑水肿模型，测定了黄芩苷、川芎嗪、甘露醇对血清和脑脊液(CSF)中磷脂酶A2 活性的抑制作用及改善脑水肿关系，结果显示黄芩苷与川芎嗪均可抑制磷脂酶A2 活性和脂质过氧化，从而减轻脑水肿、降低颅内压。
黄芩苷提取和测定方法研究
分光光度法（ｓｐｅｅｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ） 其原理利用了不同中药所含成分的不饱和度有差异，
而致其紫外吸收曲线的形态、峰位、峰强度存在的差异。本 法主要又分为常规分光光度法、导数光谱法（一阶、二阶， 四阶）、多波长光谱法（双波长，三波长、多波长）、差示分光 法、正交函数光谱法。常规分光光度法主要是将待测物通 过在紫外灯下定位，然后经一定溶剂洗脱，在分光光度计上 测定吸收度来计算含量。现就目前较为常用的几种分光光 度法作以下简述。 ２．１．１导数广谱（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｐｅｃｔｒａ）微分光谱，属紫外吸 收光谱派生的分支之一，用于定性鉴别与定量测定，特别对 于混合物以及中药、中成药的分析，可排除杂质及复方药物 或分解产物的干扰，不经分离而直接测定。随阶数增加，分 辨率增加，灵敏度下降，通常一阶、二阶导数光谱应用较多。 有人¨刈用一阶导数光谱法测定消炎颗粒中黄芩苷的 含量，以２６２ｎｍ波长处的振幅作为定量信息，该法可不经 复杂的分离提取，同时能消除其它药物和辅料的影响。徐 氏等¨２１用二阶导数光谱法测定葛根芩连微丸中的黄芩苷 含量，以无水乙醇为溶剂，测定波长定为２７４ｎｍ，黄芩苷在 ５～１５１比ｇ／ｍＬ浓度范围内线性关系良好，其测定值与薄层 色谱扫描法、反相高级液相色谱法相近。本法快捷准确，且 元水乙醇廉价无毒。
ｗｉｔｈ ｓｉｎｇｌｅ ｂｌｉｎｄ ｌ＂ｅｓｅａｌ℃ｈ ｉｎ ｍａｃｈｉｎｅ ｍｅｔｈｏｄ， ｔｈｅ
提取方法 黄芩苷的提取方法最为传统的为酸沉淀法，该法主要
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２．１．２
应用膜技术浓缩黄芩苷提取液的研究
１ 材料 与仪器
１１ 膜 材 料 ．
微滤膜选用聚丙烯 （ Ｐ Ｐ ）卷式膜组件 ，膜孔径为 ０ ／ ．， ５ ｍ。超滤膜为聚丙烯睛／ 聚砜 （Ａ ／Ｓ Ｐ ＮＰ ）
共混超滤膜 ，截 留分子量 １ ０ （ ０ 华南理工大学轻化工所提供 ）。纳滤膜采用芳香族酰胺膜材料Ｎ ０ Ｗ
２ ４ 华南理工大学轻化工所提供 ）。 ００（ 超滤和纳滤设备 由广州洁圣膜技术有 限公司设计和制造 。
缩 ，存在着药液焦化、有效成分损失大 、能耗高、设备维护 困难等 问题 。采用膜 分离技术浓缩黄芩 苷提取液，操作颇为简便 ，在常温下进行，无相变过程 ，大大节约了能耗 ，降低 了成本。超滤与纳 滤等膜分离技术，可根据 中药提取液中的分子特性不同，将不 同分子量的有效物质分离 ，显著提高 分离效率忙 。另外，黄芩苷对温度 比较敏感 ，采用膜法分离浓缩黄芩苷提取液 ，在常温下进行 ，物
是黄酮类化合物 ，主要有黄芩苷 （ ａ ａ ｎ Ｂ ｉ ｌ ）、汉黄芩素 （ ｏ ｏ ｉ）、汉黄芩苷 （ ｏ ｏ ｏｉｅ ｃｉ ｗ ｇｎ ｎ ｗ ｇ ｎ ｓ ）、 ｄ
黄 芩新 素 Ｉ、 ｌ （ｋ ｌ ａ ｆ ｖ ｎ Ｉ）等 。 Ｉ ｓｕｌ ｐ ａｏ ｅＩ、 Ｉ ｃ ｌ
目前 ，国内对黄芩苷有效成分的提取 多采用加热真空蒸发等传统工艺进行黄 芩苷有效成分的浓
３ 东 莞 亚 洲 制药 有 限 公 司 ，广 东 东莞 ５ ３ １ ） ． ２０ ０
摘 要 ：开展 室温 下微 滤一超 滤一 纳滤 多级膜 浓缩 黄芩苷提 取 液的研 究 ，采 用Ｈ Ｌ 法测定 了黄芩苷在 ＰＣ 不 同膜过程 的透 过液 和 浓缩 液 中的分 布情 况 ．研 究结果 表 明： 多级 膜分 离浓缩 法可 以除 去黄 芩苷提 取液 ５％的水分 ，黄 芩苷 的保 留率 为９ ％，浓缩 比为２ 倍 ，在 常温 下多级膜 浓缩 分 离黄芩 苷提取 液是可行的 ． ５ ６ ． ４
黄芩中黄芩甙和黄芩素提取、分离纯化的研究进展
黄芩中黄芩甙和黄芩素提取、分离纯化的研究进展梁英1,2，韩鲁佳2*(1.黑龙江八一农垦大学，大庆 163319；2.中国农业大学工学院，北京100083)摘要：黄芩甙和黄芩素是中药黄芩的主要有效成分，其具有广泛的药理活性。
除传统意义上的抗炎、抗病毒及解热和保肝作用外，近年来对其抗氧化、抗HIV-1病毒的研究日趋深入。
本文综述了黄芩甙和黄芩素的提取、分离纯化的研究进展，并对各种方法进行了分析和评述，指出了以往工艺的不足和存在的问题，提出了今后的设想及展望。
关键词：黄芩甙；黄芩素；提取；分离纯化中图分类号：文献标识码：文章编号：1 引言中草药是我国医药学中的一个重要组成部分，已据有上千年的历史。
黄芩是唇形科植物黄芩（Scutellaria Baicalensis Georgi）的干燥根，最早收载于《神农本草经》，列为草根药的中品。
黄芩甙(baicalin)和黄芩素(baicalein)为黄芩的主要有效成分。
具有抗氧化、抗炎、抗变态、抗菌、抗癌、抗病毒、清热、利尿、镇静、降压、保肝、利胆等作用。
我国多年来对黄芩的利用，主要是将黄芩经简单处理，以切片形式作中药制剂利用，或将黄芩直接与其它中草药配伍制成复方制剂。
这种使用方法不能充分发挥黄芩的药用价值，造成资源的浪费。
中药现代化的重要内容之一是中药生产过程中提取浓缩、分离纯化等关键单元技术的现代化。
因而研究黄芩中黄酮类物质的提取浓缩、分离纯化日渐受到国内外学者的关注。
如何从黄芩中将有效成分充分提取出来，如何提高提取率和含量是关键问题。
目前，随着新技术在药收稿日期：基金项目：国家“十五”科技攻关子课题资助(2002BA514A-12-3)作者简介：梁英（1964—），女（汉），中国农业大学，博士生，从事农产品加工与贮藏工程研究．E-mail：ly64034@通讯作者：韩鲁佳，教授，博士生导师，现代精细农业系统集成研究教育部重点实验室主任，E-mail：hanlj@材成分提取、分离纯化方面的研究和应用，新方法和新技术不断出现。
液质联用超滤法测定注射用复方荭草_省略_荭草素及野黄芩苷的血浆蛋白结合率_黄勇
基金项目：国家科技重大专项课题（2008ZX09101-021）；国家自然科学基金资助项目（30860366）；贵州省科技计划重大专项项目（黔科合重大专项字［2007］6010号）作者简介：黄勇，男，硕士，副教授研究方向：天然药物活性物质基础及药动学*通讯作者：王永林，男，教授，博士生导师研究方向：：gywyl@液质联用超滤法测定注射用复方荭草中原儿茶酸、异荭草素及野黄芩苷的血浆蛋白结合率黄勇，陈慧，郑林，何峰，张治蓉，王永林*（贵阳医学院药学院，贵阳550004）摘要：目的测定注射用复方荭草中原儿茶酸、异荭草素及野黄芩苷的血浆蛋白结合率，为临床安全用药提供参考。
方法以超高效液相色谱-质谱联用为检测手段，结合超滤离心法，由于基质背景的差异分别建立血浆样本及超滤液中的含量测定方法考察原儿茶酸、异荭草素及野黄芩苷与血浆蛋白的结合情况。
结果注射用复方荭草在人血浆中浓度为5 100μg ·mL－1时，原儿茶酸、异荭草素及野黄芩苷与血浆蛋白的平均结合率分别为（65.33ʃ0.61）%，（85.97ʃ0.43）%，（90.09ʃ0.28）%。
结论原儿茶酸与血浆具有中等强度的结合，异荭草素及野黄芩苷与血浆结合力较强，它们与血浆蛋白结合能力在考察的浓度范围内无浓度依赖性。
建立的方法灵敏度高，重现性好，操作简单，能够满足定量分析测试要求。
关键词：原儿茶酸；异荭草素；野黄芩苷；血浆蛋白结合率；超滤法；液质联用；基质效应中图分类号：R917文献标志码：A文章编号：1001－2494（2011）15－1200－05Determination of Plasma Protein Binding Rates of Protocatechuic Acid ，Isoorientin and Scutellarin in Com-pound Hongcao Freeze-Dried Powder for Injection by Ultrafiltration Combined with UPLC-ESI-MS /MS HUANG Yong ，CHEN Hui ，ZHENG Lin ，HE Feng ，ZHANG Zhi-rong ，WANG Yong-lin *（School of Pharmacy ，Guiy-ang Medical College ，Guiyang 550004，China ）ABSTRACT ：OBJECTIVETo determine the plasma protein binding rates of protocatechuic acid ，isoorientin and scutellarin inCompound Hongcao freeze-dried powder for injection by ultrafiltration method for providing on the safe use of medication.METHODS Ultrafiltration combined with liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-ESI-MS /MS ）was employed to determine the protein binding rats of protocatechuic acid ，isoorientin and scutellarin in the compound hongcao freeze-dried powder.When determining the concentrations of the 3compounds ，2kinds of matrix as plasma and buffer solution were chosen.RESULTS The average human protein binding rates of protocatechuic acid ，isoorientin and Scutellarin were （65.33ʃ0.61）%，（85.97ʃ0.43）%and （90.09ʃ0.28）%with the drugplasma concentrations of 5，10，25，50and 100μg ·mL －1，respectively.CONCLUSION The current studyshows the medium binding ability of protocatechuic acid and high binding ability of isoorientin and scutellarin to plasma protein．The method has high sensitivity ，good reproduction ，with simple management thus fulfilling the requirement.The plsma protein bindings of the three compounds were independent of the investigated concentrations.KEY WORDS ：protocatechuic acid ；isoorientin ；scutellarin ；plasma protein binding rate ；ultrafiltration ；UPLC-ESI-MS /MS ；matrix effect注射用复方荭草（冻干粉针）为贵州民族用药基础上研制的中药新药，目前已完成Ⅲ期临床，本方由黔产荭草和灯盏细辛两味中药经现代制剂工艺研制而成，具有化瘀通络，活血止痛功能，临床用于冠心病、心绞痛、心血瘀阻证等［1-2］。
黄芩苷的提取分离及结构鉴定
黄芩苷的提取分离及结构鉴定概论黄芩及其有效成分黄酮类化合物具有广泛的药理活性,除了传统意义上的抗炎、抗变态、抗病毒等生物活性之外,近年来对其抗氧化、抗肿瘤和抗HIV21病毒的研究日趋深入,开发黄芩及其活性成分作为抗血栓、降血压、治疗冠心病和糖尿病以及防治肿瘤和艾滋病药物的前景十分广阔。
目前，国内对黄芩苷提取工艺有较多报道，其提取方法主要有温浸法、煎煮法、微波法、超滤法，超声法等，但如何提高黄芩苷收率和纯度一直是实际生产中存在的问题，缺乏对整个工艺条件进行全面研究，因此，有必要对影响黄芩苷提取工艺及其影响因素作一全面探讨。
本实验拟对水提酸沉法进行探讨，研究黄芩苷的提取工艺，并对其稳定性进行考察，旨在为生产实践中大规模提取生产黄芩苷提供理论基础。
一、文献综述1.1 黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）基源：唇形科植物黄芩的干燥根。
产地：产于河北、辽宁、陕西、山西、山东、内蒙古、黑龙江等。
功能主治：味苦、性寒，能清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎。
主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。
化学成分:含多种黄酮类化合物,主要为黄芩苷,黄芩素,汉黄芩苷,汉黄芩素,黄芩新素Ⅰ,Ⅱ,去甲汉黄芩素,7-甲氧基黄芩素,7-甲氧基去甲基汉黄芩素,等.此外还有挥发油,苯乙醇糖苷类成分等.其成分含量与根的新老及不同炮制方法有关。
临床应用：呼吸道感染、急性扁桃体炎、急性咽炎、肺炎及痢疾等病。
1.2 黄芩苷（Baicalin）图一黄芩苷分子式分子式：C21H18O11分子量：446.37熔点：223-225℃理化性质：本品为淡黄色结晶粉末,易溶于N,N-二甲基甲酰胺、吡啶。
微溶于热水、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠。
难溶于甲酸、乙酸、丙酮，几乎不溶于水、乙醚、苯、氯仿等。
在植物中以盐的形式存在，含量约4.0%～5.2%黄芩苷为淡黄色晶体，熔点223℃，不溶于水，难溶于甲醇、乙醇、丙酮，可溶于热醋酸，易溶于二甲基甲酰胺、吡啶等碱性溶液。
最新UPLC法测定黄芩提取物中黄芩苷和黄芩素的含量--论文
武汉轻工大学毕业设计（论文）论文题目：UPLC法测定黄芩提取物中黄芩苷和黄芩素的含量Determination of BaicaLin and BaicaLein inScuteLLarein by UPLC method2015年6月目录摘要 (1)Abstract (3)第一章绪论 (4)1. 黄芩的研究进展 (4)1.1黄芩的药理作用 (4)1.2黄芩的有效成分 (5)1.3黄芩的检测方法 (5)2.研究内容 (8)3. 研究意义 (8)3.1禽类 (8)3.2猪 (9)3.3 反刍动物 (10)第二章实验研究 (11)1. 材料方法 (11)1.1 实验材料 (11)1.2 实验方法 (12)2．方法学验证 (13)2.1系统适应性 (13)2.2标准曲线及线性关系考察 (14)2.3精密度试验 (15)2.4稳定性试验 (16)2.5重复性试验 (17)2.6加标回收率的测定 (18)3．黄芩的提取液含量测定 (18)4．讨论 (18)5．试验方法的优缺点 (19)5.1缺点 (19)5.2优点 (20)参考文献 (21)致谢 (24)摘要建立用超高效液相色谱（UPLC）同时测定黄芩中黄芩苷、黄芩素的方法。
方法:将适量黄芩提取液溶于甲醇，于100mL容量瓶中定容，配成黄芩供试品溶液。
检测方法：Waters 超高效液相色谱仪，色谱柱为ACQUITY UPLC®BEH C18 (2.1×50mm ,1.7um) ，流动相为乙腈（流动相C），0.05% 磷酸（流动 D ）；0～0.68min ,30%C,70%D；0.68～1.02min,30%→40% C,70% →60%D;1.02～1.36min ，40% →65% C，60% →35% D;1.36～2.30min,30%C ,40%D的梯度洗脱。
流速为0.61mL/min，柱温30℃，紫外检测波长为278nm，进样量为0.02µL。
研究黄芩苷提取方法和高效液相含量测定情况分析
研究黄芩苷提取方法和高效液相含量测定情况分析作者：井子伊禧来源：《中国化工贸易·下旬刊》2019年第06期摘要：目的：本次主要对黄芩苷在实验之中的提取方法展开分析，了解HPLC（高效液相）含量的相关测定状况。
方法：经正交实验设计，考查指标为黄芩苷总量，应用最佳的提取方法，应用HPLC法对黄芩苷的含量展开相应的测定。
结果：提取的次数对水煎煮提取的工艺产生的极为明显的影响，其中提取的时间和溶剂倍数并没有明显的差异。
考虑提取时间、能源成本，最佳水煎煮提取方法是药材量水煎煮的12倍，进行三次，每次1小时。
在转移率实验之中，平均转移率超过77.5%，RSD为1.60%;提取方法合理且稳定。
在工艺验证实验之中，黄芩苷含量为89.9%，RSD为1.15，筛选的工艺合理且稳定，可进行控制。
在0.04655-0.4655ug 范围之内其线性关系良，其加样回收率超过99.0%。
讨论：这种提取黄芩苷的方法稳定且合理，在实验中的可实践性高。
应用HPLC进行含量测定，可保障数据结果的准确性和精准性，且实验重复性佳，可在黄芩提取物含量控制之中应用该方法。
关键词：HPLC;黄芩苷;含量测定;提取方法黄芩为唇形科植物，黄芪本身可起到泻火解毒、清热燥湿、安胎以及止血的效果。
黄芩中主要是以黄芩苷、黄芩苷元以及汉黄芩素等成分，其中黄芩苷是最为有效的成分，主要可起到抗过敏、抗肿瘤和抗炎的效果。
近些年来，临床的研究发现黄芩苷可有效的对HIV病毒感染、复制产生阻止作用，成为了艾滋治疗的有效药物[1]。
为了保障黄芩能够更好的被利用，本次主要是应用黄芩苷总量作为本次的考察指标，对黄芩苷在实验之中的提取方法展开分析，了解HPLC（高效液相）含量的相关测定状况。
1 仪器和试药1.1 儀器本次主要是应用高效液相色谱仪、超声波清洗仪、旋转蒸发仪、循环水真空泵、真空干燥箱、电子恒温水浴锅。
应用的试剂为：乙醇、磷酸、氢氧化钠、盐酸、水（超纯水）、甲醇。
血浆蛋白结合率测定方法
血浆蛋白结合率测定方法概述血浆蛋白结合率测定方法是一种常用的方法，用于测定药物在血浆中与蛋白结合的程度。
通过测定药物在游离态和结合态的浓度，可以评估药物在体内的运输、分布和代谢情况。
本文将详细介绍血浆蛋白结合率测定方法的原理、步骤和常见应用。
原理血浆蛋白结合率是指药物与血浆中蛋白质结合的比例。
药物结合蛋白后，其在体内的分布和活性会受到影响。
通常，药物结合蛋白的能力由血浆蛋白结合率来衡量，该值可以在体外通过离体试验进行测定。
血浆蛋白结合率的测定方法基于药物与血浆中蛋白质结合形成的平衡。
平衡时，药物分子在游离态和结合态之间动态转化。
测定方法通常采用离体试验，将药物与血浆混合，使其达到平衡。
然后，通过分离游离态和结合态的药物，测量它们的浓度，计算血浆蛋白结合率。
步骤血浆蛋白结合率的测定方法包括以下步骤：1.准备血浆样本：从动物或人体中采集血液样本，并离心制备血浆。
血浆应在低温下保存，避免离心后的样本冻结。
2.混合血浆和药物：将已知浓度的药物与血浆混合，制备不同药物浓度的混合液。
应根据所需测定的药物浓度范围合理选择浓度。
3.平衡：将混合液置于适当的平衡条件下，如恒温摇床或恒温水浴中。
平衡时间取决于药物的特性，一般为数小时。
4.分离游离态和结合态：平衡后，使用适当的方法分离游离态和结合态的药物。
常用的分离方法包括离心、超滤和凝胶过滤等。
5.测量药物浓度：分离后的样品可以通过高效液相色谱法、串联质谱法或放射性测定等方法测量药物浓度。
对于放射性标记的药物，还可以使用放射计数方法。
6.计算血浆蛋白结合率：根据游离态和结合态药物的浓度，计算血浆蛋白结合率。
结合率计算公式为结合态药物浓度除以总药物浓度的百分比。
应用血浆蛋白结合率是评估药物相互作用、药物代谢和毒性的重要指标。
它可以帮助理解药物在体内的活性、分布和排泄情况，为药物的临床应用提供依据。
以下是血浆蛋白结合率测定方法的一些常见应用：1.药物相互作用研究：药物与其他药物或生物分子的相互作用可能影响其结合蛋白能力。
平衡透析法测定血浆蛋白结合率原理
平衡透析法测定血浆蛋白结合率原理平衡透析法是一种常用于测定血浆蛋白结合率的方法。
其原理基于蛋白分子在溶液中的扩散作用和分子量的关系，通过将待测药物与已知浓度的标准品一起置于半透膜袋中，并将其与血浆进行透析，来确定药物与蛋白结合的比例。
透析过程中，血浆和标准品溶液被分离，仅通过半透膜袋中的孔隙扩散，使分子量较小、不与蛋白结合的药物从袋内逐渐传至袋外溶液中，而分子量较大、与蛋白结合的药物则被限制在袋内。
透析过程中，袋内外溶液中药物的浓度差异会逐渐减小，最终达到平衡状态。
而蛋白结合率即为血浆蛋白与药物结合的比例，可通过测定透析前后血浆和袋外溶液中药物的浓度来计算。
具体操作时，首先选择适宜的透析膜和袋，确保其孔隙能够限制大分子量的蛋白从袋内扩散至袋外，而小分子量的药物能够通过。
然后将待测药物与已知浓度的标准品分别与血浆混合，使其达到预先的浓度，并分别装入透析袋中。
透析过程中，透析袋的外侧装有生理盐水或缓冲液，以维持透析过程的渗透平衡。
袋外溶液中会有少量的药物扩散进袋内，但袋内溶液中的浓度会随时间逐渐增加，直到逐渐趋于平衡。
透析完成后，分别测定透析前后的袋内和袋外溶液中药物的浓度。
对袋内和袋外溶液中的药物浓度进行测定可以使用各种方法，如高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、液相-质谱联用法（LC-MS）等。
通过测定透析前后溶液中药物浓度的变化可以计算出药物的蛋白结合率。
常用的计算公式为：蛋白结合率（%）=（透析前浓度-透析后浓度）/透析前浓度 ×100此外，还可以根据药物在透析过程中的质量平衡和强弱电解质的物质平衡来进行更加精确的计算。
例如，在透析过程中，电解质也会参与扩散，影响透析结果，因此需要对电解质进行校正。
平衡透析法可以应用于测定药物与血浆蛋白的结合率，以了解药物在体内的分布和代谢。
通过测定药物的蛋白结合率，可以预测药物与蛋白的结合强度，并帮助解释药物在体内的药效和毒性。
此外，平衡透析法还可以用于评价药物相互作用对蛋白结合的影响。
平衡透析法测定血浆蛋白结合率原理
平衡透析法测定血浆蛋白结合率原理平衡透析法是一种常用的测定血浆蛋白结合率的方法。
该方法基于溶质在溶液中的扩散速率与浓度差之间的平衡关系，通过透析膜实现血浆蛋白与溶液中的游离药物间的扩散平衡，从而测定血浆蛋白与药物结合的程度。
平衡透析法的原理可以分为以下几个步骤：1. 准备试剂和设备：首先需准备好透析膜和与透析膜相配套的透析袋或透析仪器。
透析膜通常采用具有较高透析效率和具有较低非特异性结合药物的材料，如高分子材料或特殊化学合成材料。
同时，还需要准备好待测的血浆样本和药物工作溶液。
2. 确定透析条件：透析条件的选择对测定结果有重要影响。
一般来说，透析时间、血浆与药物溶液的比例和透析温度是影响透析效果的重要因素。
根据待测药物的特性和目的，通过实验选择适当的透析条件。
3. 开展透析实验：将待测的血浆样本与药物工作溶液按一定比例混合，并置于透析袋内，再将透析袋置于含有透析缓冲液的容器中。
透析缓冲液一般为理想的生理缓冲液，能够保持透析过程中的温度和pH值稳定。
4. 实验平衡：通过控制透析缓冲液的体积和流速，使得待测药物在袋内和袋外的浓度达到平衡并稳定。
透析过程中，透析膜上发生溶质的扩散，药物在血浆中的游离形式和与蛋白结合的形式在透析膜的两侧进行相互转化，最终达到浓度平衡。
5. 取样分析：透析达到平衡后，在透析袋和透析袋外取样，分别测定血浆中未结合和已结合药物的浓度。
测定方法多种多样，如高效液相色谱法或质谱法。
通过计算血浆中已结合药物与总药物的比例，即可获得血浆蛋白结合率。
平衡透析法对血浆蛋白结合药物的测定具有很多优势。
首先，该方法简单、快速、精确，可以同时测定多种药物的血浆蛋白结合率。
其次，平衡透析法能够模拟体内药物与蛋白质相互作用的环境，具有较高的可比性和预测能力。
此外，该方法适用于各种类型的药物和生物样本，包括人血浆、动物血浆以及体外模型中的血浆。
需要注意的是，平衡透析法也存在一些局限性。
首先，透析过程中可能发生蛋白质沉积或非特异性与透析膜结合的现象，可能会导致测定结果的偏差。
黄芩提取物中黄酮类成分血浆蛋白结合率的测定
黄芩提取物中黄酮类成分血浆蛋白结合率的测定冯志强;韩坚;谢智勇;廖琼峰;张蕾【摘要】Aim To establish a RP-HPLC method for determination of concentration of four major flavonoids, namely baicalin ( BL ), wogonoside ( WL ), wogonin ( W ) and oroxylin A ( OA ), in the total flavonoids extract of scutellaria baicalensis Georgi in rat plasma and to study the plasma protein binding rate. Methods The equilibrium dialysis was carried out to determine the plasma protein binding rate of the target compounds. The plasma samples were extracted by protein precipitation with methanol. With the use of maackiain as the internal standard, the concentration of the multicomponent inside and outside the dialysismembranes was determined by HPLC method. Results The plasma protein binding rates of baicalin and wogonoside decreased with increasing of concentration in a concentration-dependent manner( BL: 82.03% →77.25% →67. 17% ; WL: 82. 24%→ 76. 08% →69. 87% ), while were not the same of wogonin and oroxylin A. The average plasma protein bingding rates of wogonin and oroxylin A were ( 89. 66 ± 1. 19 )% and ( 88. 56 ± 1. 87 )% , respectively. Conclusions The HPLC method established in the paper is simple, sensitive, little interfe-rential and stable. The four major compounds in the total fla-vonoids extract of scutellaria baicalensis Georgi have high capacity in binding plasma protein in rat in vitro.%目的建立同时测定黄芩总黄酮部位中4 种黄酮类成分在大鼠血浆中药物浓度的方法,并测定其体外血浆蛋白结合率.方法平衡透析法测定黄芩黄酮类成分血浆蛋白结合率,以高丽槐素为内标,生物样本用甲醇沉淀蛋白进行预处理,采用HPLC法测定4种黄酮类成分在透析内、外液中的浓度.结果在低、中、高3 种浓度下,黄芩苷(BL)和汉黄芩苷(WL)的血浆蛋白质结合率随给药浓度的增大而降低(BL:82.03%→77.25%→67.17%;WL:82.24%→76.08%→69.87%),而汉黄芩素(W)和千层纸素A(OA)则呈现非质量浓度依赖性,其平均血浆蛋白结合率分别为(89.66±1.19)%、(88.56±1.87)%.结论该文所建立的测定方法简便、灵敏、专属性强.4个黄酮类成分在大鼠体外均有较高的血浆蛋白结合率.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2012(028)002【总页数】4页(P286-289)【关键词】黄芩;黄芩苷;汉黄芩苷;汉黄芩素;千层纸素A;血浆蛋白结合率;平衡透析法【作者】冯志强;韩坚;谢智勇;廖琼峰;张蕾【作者单位】广州中医药大学中药学院,广东,广州,510006;中山大学药学院,广东,广州,510080;广州中医药大学中药学院,广东,广州,510006;中山大学药学院,广东,广州,510080;广州中医药大学中药学院,广东,广州,510006;广州中医药大学中药学院,广东,广州,510006【正文语种】中文【中图分类】R-332;R282.71;R284.1;R341;R969.1黄芩(Radix Scutellariae)为唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的干燥根，主要活性成分为黄酮类化合物［1］。
血浆蛋白结合率测定方法
血浆蛋白结合率测定方法引言血浆蛋白结合率是指药物在血浆中与蛋白质结合的比例，它对药物的药效、药代动力学和药物相互作用等方面具有重要的影响。
因此，准确测定血浆蛋白结合率对于药物研发、药物治疗和临床用药具有重要意义。
本文将介绍常用的血浆蛋白结合率测定方法。
方法一：离体血浆蛋白结合率测定法离体血浆蛋白结合率测定法是最常用的方法之一。
该方法利用离体血浆，即从人体采集血液样本后，在离体条件下进行实验测定。
具体步骤如下：1. 采集血液样本：在严格的无菌条件下，采集人体血液样本，并将其离心分离得到血浆。
2. 加入药物：将待测药物加入血浆中，使其与血浆中的蛋白质结合。
3. 分离游离药物：通过离心等方法，将游离的药物与结合的药物分离开来。
4. 测定结合率：测定分离得到的游离药物和总药物的浓度，计算血浆蛋白结合率。
方法二：体外血浆蛋白结合率测定法体外血浆蛋白结合率测定法是在体外条件下进行的实验测定。
相比于离体法，该方法更接近实际体内情况。
具体步骤如下：1. 准备血浆样本：将采集的血液样本离心分离得到血浆。
2. 加入药物：将待测药物加入血浆中，使其与血浆中的蛋白质结合。
3. 分离游离药物：通过超滤或离心等方法，将游离的药物与结合的药物分离开来。
4. 测定结合率：测定分离得到的游离药物和总药物的浓度，计算血浆蛋白结合率。
方法三：体内血浆蛋白结合率测定法体内血浆蛋白结合率测定法是在活体动物体内进行的实验测定。
该方法可以更真实地反映药物在体内的结合情况。
具体步骤如下：1. 给予药物：将待测药物给予实验动物，使其进入动物体内。
2. 采集血液样本：在一定时间内，采集动物的血液样本，并分离得到血浆。
3. 分离游离药物：通过超滤或离心等方法，将游离的药物与结合的药物分离开来。
4. 测定结合率：测定分离得到的游离药物和总药物的浓度，计算血浆蛋白结合率。
方法比较与应用以上三种方法各有优缺点，适用于不同的研究目的和实验条件。
离体法操作简单，适用于初步筛选药物结合率；体外法更接近体内情况，适用于药物代谢动力学研究；体内法最贴近实际情况，适用于药物临床前研究。
实验二药物血浆蛋白结合率测定
实验二药物血浆蛋白结合率测定前言：药物血浆蛋白结合率是药物与血浆蛋白结合的量占药物总浓度的百分率，是药物代谢动力学的重要参数之一。
它影响药物在体内的分布、代谢与排泄，从而影响其作用强度和时间，并往往与药物的相互作用及作用机制等密切相关。
研究药物血浆蛋白结合率的方法包括常规的平衡透析法、超滤法、超速离心法、凝胶过滤法、分配平衡法、稳定同位素-GC-MS法、光谱技术等。
本实验主要通过采用平衡透析法对药物血浆蛋白结合率进行测定，对于新药研究开发和指导临床合理用药都具有重要意义。
关键词：血浆蛋白结合率平衡透析法磺胺嘧啶【实验原理】平衡透析法的基本原理是将蛋白置于一个隔室内，用半透膜将此隔室与另一隔室隔开。
蛋白等大分子不能通过此半透膜，但系统中游离配基可自由通过。
当达到平衡时半透膜两侧自由配基的浓度相等。
若系统中自由配基的总量已知，测定不含蛋白隔室中自由配基的浓度，即可推算与蛋白结合的配基量。
再用重氮化偶合比色测定法对磺胺药的含量进行测定。
其测定原理是具有游离氨基的磺胺药在酸性介质中重氮化后，可与N-(1萘基）乙二胺产生偶合反应生成紫红色偶氮染料，再与同样处理的磺胺药标准液比较，即可求得剩余的亚硝酸影响测定，用氨基磺酸胺分解除去。
【材料与试剂】1. 药物10%磺胺嘧啶钠注射液2. 试剂15%三氯醋酸溶液0.1%亚硝酸钠溶液0.5%氨基磺酸胺溶液0.1%二盐酸N-（1萘基）-乙二胺溶液磺胺嘧啶钠贮存标准液磺胺嘧啶钠应用标准液(3.75ug/ml)3.透析液pH7.4的0.02M 磷酸盐缓冲液，内含0.15M NaCl4. 鸡、兔各3只5. 管状半透膜周长5cm，长约12cm【试剂的配制】1. 0.1%二盐酸N-（1萘基）-乙二胺溶液0.5 g溶于95 %乙醇约400 mL中，再用乙醇稀释至500ml，棕色瓶于冰箱中保存2.贮存标准液取标准品0.125g溶于蒸馏水中，并稀释至1000mL。
如不溶于水，可先溶于0.1 mol/L氢氧化钠25mL中，再加4mol/L硫酸175 mL，用蒸馏水稀释至1000mL。
黄芩苷的提取分离及结构鉴定
黄芩苷的提取分离及结构鉴定概论黄芩及其有效成分黄酮类化合物具有广泛的药理活性,除了传统意义上的抗炎、抗变态、抗病毒等生物活性之外,近年来对其抗氧化、抗肿瘤和抗HIV21病毒的研究日趋深入,开发黄芩及其活性成分作为抗血栓、降血压、治疗冠心病和糖尿病以及防治肿瘤和艾滋病药物的前景十分广阔。
目前，国内对黄芩苷提取工艺有较多报道，其提取方法主要有温浸法、煎煮法、微波法、超滤法，超声法等，但如何提高黄芩苷收率和纯度一直是实际生产中存在的问题，缺乏对整个工艺条件进行全面研究，因此，有必要对影响黄芩苷提取工艺及其影响因素作一全面探讨。
本实验拟对水提酸沉法进行探讨，研究黄芩苷的提取工艺，并对其稳定性进行考察，旨在为生产实践中大规模提取生产黄芩苷提供理论基础。
一、文献综述1.1 黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）基源：唇形科植物黄芩的干燥根。
产地：产于河北、辽宁、陕西、山西、山东、内蒙古、黑龙江等。
功能主治：味苦、性寒，能清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎。
主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。
化学成分:含多种黄酮类化合物,主要为黄芩苷,黄芩素,汉黄芩苷,汉黄芩素,黄芩新素Ⅰ,Ⅱ,去甲汉黄芩素,7-甲氧基黄芩素,7-甲氧基去甲基汉黄芩素,等.此外还有挥发油,苯乙醇糖苷类成分等.其成分含量与根的新老及不同炮制方法有关。
临床应用：呼吸道感染、急性扁桃体炎、急性咽炎、肺炎及痢疾等病。
1.2 黄芩苷（Baicalin）图一黄芩苷分子式分子式：C21H18O11分子量：446.37熔点：223-225℃理化性质：本品为淡黄色结晶粉末,易溶于N,N-二甲基甲酰胺、吡啶。
微溶于热水、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠。
难溶于甲酸、乙酸、丙酮，几乎不溶于水、乙醚、苯、氯仿等。
在植物中以盐的形式存在，含量约4.0%～5.2%黄芩苷为淡黄色晶体，熔点223℃，不溶于水，难溶于甲醇、乙醇、丙酮，可溶于热醋酸，易溶于二甲基甲酰胺、吡啶等碱性溶液。
蛋白质结合率的测定方法
3.微透析法：
微透析法是近年来发展起来的直接 测定体内血浆、组织和其他生理体液中 药物游离浓度的测定方法。具体操作如 下：将一个含透析膜的微透析探针用外 科法植于血管或组织间隙，透析缓冲液 经探针泵入，血液中或组织液中的游离 药物通过浓度梯度扩散经透析膜进入探 针，透析液收集一段时间后便可分析测 定其中药物的游离浓度。近年来，微透 析与高效液相色谱毛细管电泳或质谱等 分析仪器联用在生命过程动态变化的研 究中显示出很好的发展前景。
THANKS
3.微透析法：
优点：是可以在基本不干扰生物体内 正常生命活动的情况下进行实时采样 和在线分析，可连续研究在生理条件 下体内药物与蛋白的结合作用。 缺点：1)只可测定药物的游离浓度， 得不到总浓度或结合药物浓度的信息。 2)受探针性能的影响，药物的回收率 也受到限制，特别是蛋白结合率很高 的疏水性药物，回收率较低的问题很 严重。3)缺少足够灵敏的分析方法。
5.高效前沿分析法(HPFA)：
HPFA以分子排阻原理为基础，是近几年发展起来的一种 能够同时测定药物与蛋白结合平衡中游离药物和总药物浓度 的一种新的色谱方法。HPFA能够避免高效亲和液相色谱(HPAc) 存在的问题，在当今药物蛋白结合的研究中，已成为一种很 有发展前景的技术。特别是采用集高速高效及高选择性优点 于一身的HPcE进行前沿分析可以满足微量样品的测定，这种 方法称为HPCE／FA，是最具活力的分析技术之一。 HPFA不仅可以用来分析药物与蛋白之间的相互作用，而且可 用来研究存在着快速和可逆平衡的任何物质之间的相互作用， 特别是为内源性活性物质的研究提供了快速、准确的分析方 法，因此在药代动力学研究中将具有广阔的应用前景。
5.高效前沿分析法(HPFA)：
优点：1)样品预处理简单，允许直接进样，可以连接到 在线的高效液相色谱或毛细管电泳系统中进行自动分 析。2)所采用的流动相是模拟人体生理环境的磷酸盐缓 冲液，属于水性介质。3)当药物峰与蛋白峰完全分离时， 可同时从药物平台峰的峰面积和峰高计算出总药物浓 度和游离药物浓度。4)串联一个手性高效液相色谱法 (HPLc)柱，或与毛细管电泳手性拆分技术相结合，可分 别得到外消旋体中两个对映体的平台峰，求得蛋白结 合参数。5)具有调节效应相当于药物的富集，大大提高 了样品的检测限，可用于药物蛋白结合率很高、游离 药物浓度极低的药物研究。6)可以分析纳摩尔级的样品， 或进行纳升量样品的测定。HPFA对于分析药物与缺乏 的或较难获得的蛋白质的结合研究是非常有利的。