维生素B6对异烟肼在家兔体内药物动力学过程的影响

维生素B6对异烟肼在家兔体内药物动力学过程的影响
目的探讨维生素B6对异烟肼在家兔体内药物动力学过程的影响。

方法将40只家兔随机分为4组，第一组家兔口服（灌胃）给药异烟肼；第二组家兔同时灌胃给药异烟肼和维生素B6；第三组家兔先灌胃给药异烟肼，0.5 h后灌胃给药维生素B6；第四组家兔先灌胃给药异烟肼，1 h后灌胃给药维生素B6。

于给药后相同时间点对颈总动脉采集的血样进行分析。

结果应用3P87软件对各个模型进行拟合，异烟肼的药物动力学过程属于二房室模型。

维生素B6的存在导致了异烟肼在家兔体内的分布相与消除相的药物动力学过程显著改变，各药物组tmax、Cmax、K10、t1/2（a）、t1/2（α）、t1/2（β）、AUC0→7、Vβ、Vc、Cl 等药动学参数均有显著性差异，其中，第一、二、三、四组tmax分别为1、1、2、3 h，Cmax分别为264.28、398.62、266.13、817.29 μg/ml。

结论异烟肼不宜与维生素B6同时服用。

标签：异烟肼；维生素B6；药物动力学；紫外分光光度法
异烟肼口服后1～2 h达最高血药浓度，易进入各种体液、组织及排泄物中，50%～70%的代谢物随尿排出[1-3]。

异烟肼早期的抗菌活性与其给药剂量密切相关，给药剂量越大，抗菌活性越高，剂量越小，抗菌活性越低。

异烟肼在体内经细胞色素P450氧化成为具有肝脏毒性的无活性代谢物。

代谢易受肝P450酶的影响，因此人体对异烟肼乙酰化的速度与遗传有关，种族、个体之间差异较大[4-5]。

正常人日服4 mg/kg异烟肼，6 h后，快速乙酰化代谢者血药浓度降至0.8 mg/ml。

维生素B6口服后经胃肠吸收，原型药与血浆蛋白几乎不结合，转化为活性产物磷酸吡哆醛，可较完全地与血浆蛋白结合，血浆半衰期可长达15～20 d[6-7]。

本品在肝内代谢，经肾排出。

磷酸吡哆醛可透过胎盘，并经乳汁泌出[8]。

异烟肼是抗结核的首选药，国内外大量研究对其药理、毒副作用、体内乙酰化等问题进行了探讨，近年来其生物利用度也有一些相关报道。

一般认为，长期或大剂量服用异烟肼可使体内维生素B6减少，故以往临床上常将维生素B6与异烟肼配伍，以预防后者引起的周围神经炎等不良反应[9]，目前对此看法尚不一致。

二者是否可以配伍，如何配伍也各具己见，二药配伍后对主药异烟肼的体内药物动力学的影响也未见报道。

为探讨维生素B6对异烟肼体内药物动力学的影响，本文将两药经家兔口服后，测定了不同时间异烟肼的血药浓度，求出有关参数，并与单用异烟肼对照组进行比较，探讨维生素B6对异烟肼在家兔体内药物动力学过程的影响。

1 材料与方法
1.1 仪器与试药
TU-1810紫外-可见分光光度计，T6紫外-可见分光光度计，北京普析通用仪
器有限责任公司；电子分析天平（万分之一），梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；TDL80-2B台式离心机（4000 r/min），上海安亭科学仪器厂。

异烟肼标准品、维生素B6标准品，由长春市应用化学研究所提供；异烟肼片（0.1 g×100片），成都锦华药业有限责任公司；维生素B6片（每片0.1 g），东北制药总厂；肝素钠注射液（2 ml=12 500 U），天津生物化学制药有限公司；硫酸锌、氢氧化钡均为分析纯，由天津市精细化工研究所生产。

1.2 实验动物
家兔40只，雌雄各半，6个月龄左右，体重（3.0±0.2）kg，吉林大学实验动物中心，SCXK-（吉）2008-0004。

1.3 给药方案
将40只家兔随机分为4组，第一组为对照组，第二、三、四组为实验组。

第一组家兔只灌胃给药异烟肼；第二组家兔同时灌胃给药异烟肼和维生素B6；第三组家兔先灌胃给药异烟肼，0.5 h后灌胃给药维生素B6；第四组家兔先灌胃给药异烟肼，1 h后灌胃给药维生素B6。

每只家兔均于给药前采血1 ml，并于给药后的0.5、1.0、1.5、2、3、4.5、7 h各采血1 ml。

取出血样于离心管中在3000 r/min下离心3 min，用微量移液器吸取血浆400 μl，加入0.12 mol/L的氢氧化钡溶液3.5 ml，摇匀，放置10 min，再各加2%硫酸锌溶液3.5 ml，摇匀，放置10 min，蒸馏水2.6 ml，静置5 min，在3000 r/min下离心处理3 min后吸取上清液，用T6紫外分光光度计测出吸光度值，以测得的浓度的自然对数lnC对时间t作图。

1.4 血浆标准曲线的制备
精密称取105℃干燥2 h至恒重的异烟肼标准品20 mg，置100 ml烧杯中，加蒸馏水适量，使之完全溶解，并转移到100 ml容量瓶中，用适量蒸馏水清洗烧杯和玻璃棒3次，将液转入容量瓶，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，制成200 μg/ml 的储备液，置凉暗处保存备用[13]。

取已配制的200 μg/ml的标准溶液，分别吸取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml，加蒸馏水使成1.0 ml，然后各加家兔血浆400 μl混匀，各加0.12 mol/L氢氧化钡溶液3.5 ml，摇匀，放置10 min，再各加2%的硫酸锌溶液3.5 ml，蒸馏水2.6 ml，最终配制成2、4、8、12、16、20 μg/ml。

在3000 r/min下离心处理3 min后吸取上清液，于T6紫外分光光度计262 nm时测定吸光度，用试剂加兔血作空白对照。

数据按直线回归方法处理，得到回归方程式，Y=0.030 63X+0.006 456，R2=0.9993。

1.5 方法学考察
1.5.1 方法专属性考察精密称取异烟肼标准品适量，加水制成约20 μg/ml 和10 μg/ml的溶液，以水为空白，并用TU-1810紫外可见分光光度计于200～400 nm波长范围内扫描其吸收光谱，绘制吸收曲线[10]，两个浓度下的异烟肼对照
品水溶液的吸收波长完全相同，据此可以判断异烟肼溶液在200～400 nm下的吸收具备重现性，所以可以选定262 nm作为异烟肼的检测波长。

精密称取105℃干燥2 h至恒重的维生素B6标准品10 mg，置50 ml烧杯中，加蒸馏水适量，使之完全溶解，精密吸取10 ml和5 ml于100 ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，准确配制成20 μg/ml和10 μg/ml的储备液，置凉暗处保存备用[11-12]。

用TU-1810紫外可见分光光度计于200～400 nm下进行吸收波长扫描两个浓度下的对维生素B6标准品水溶液的吸收波长完全相同，据此可以判断维生素B6水溶液在200～400 nm下的吸收具备重现性，而在262 nm下几乎无吸收，对异烟肼的检测无干扰，所以可以选定262 nm作为异烟肼的检测波长。

1.5.2 回收率和精密度试验采用加样回收法，精密称取已知含量的样品细粉，定量加入异烟肼工作标准品制成溶液，以水为空白，用紫外分光光度法在262 nm波长处测定吸收度并计算回收率，求得平均回收率为99.96%（n=6）（表1）。

重复6次测定异烟肼的含量，结果RSD为0.14%（n=6），符合定量分析的要求。

1.5.3 稳定性的考察异烟肼溶液在pH为4～5时稳定，在中性或碱性溶液中易分解，光、热、氧加速分解。

取异烟肼工作对照品，加水制成约20 μg/ml 的溶液，在0、2、4、8 h测定吸光度，结果溶液在8 h内稳定，RSD为1.0%。

1.6 数据处理
应用3P87软件计算药代动力学参数，并用SPSS 17.0统计软件进行方差分析。

2 结果
2.1 各组血药浓度的比较
按所设计的实验方案于规定时间采血处理后进行分析，所得数据见表2，4组家兔血药浓度时间曲线如图1。

2.2 各组药动学参数的比较
各个实验组给药后不同时间点取血测得的血药浓度和时间数据用3P87软件对各个模型进行拟合，并根据AIC最小和理论血药浓度值与实验测定值的相关系数R2最大的原则作为判断标准选择合适的模型，结果显示各个实验组在家兔体内的过程均符合二室模型，所得的各药物动力学参数见表3。

3 讨论
比较图1中4条C-t曲线的分布相可以看出，只给异烟肼的对照组的药物动力学曲线在消除相出现了二次吸收峰，而其他3种给药方案的实验组对应的药物动力学曲线均无二次吸收峰。

这个二次吸收峰是由异烟肼的肠肝循环造成的，因
为只有位于吸收隔室的药物的单向吸收才可以使药物动力学曲线出现极大值，在药物动力学上称为吸收峰。

而位于周边室的药物，因为与在中央室的药物之间存在化学位相等的关系，不会导致异烟肼的血药浓度在消除相出现二次吸收峰。

由此可见，维生素B6可以有效地抑制异烟肼的肠肝循环，也就是说，维生素B6可以作为异烟肼肠肝循环的抑制剂。

这一新的发现对异烟肼及与其结构相似的药物的药理学研究与临床应用提供了新的、极具参考价值的信息。

比较图1中4条C-t曲线的分布相及分布后相可以看出，只给异烟肼的对照组的药物动力学曲线在消除相出现了二次吸收峰，而与维生素B6合并使用的实验组的药物动力学曲线在维生素B6灌胃给药后的1～2 h，异烟肼在家兔体内的血药浓度明显升高，并且在消除相没有因异烟肼的肠肝循环引起的二次吸收峰。

据此可以推断出，维生素B6的存在使异烟肼由血浆向胆汁转运的速率减慢是导致异烟肼在家兔体内的分布相血药浓度升高的主要原因；如果相反，即维生素B6的存在使异烟肼由血浆向周边室运的速率减慢是导致异烟肼在家兔体内的分布相血药浓度升高的主要原因，则与维生素B6合并使用的实验组的药物动力学曲线，不仅会在消除相出现异烟肼的二次吸收峰，而且隔室模型的特征也会发生明显的改变，甚至呈现单隔室模型的特征。

本文首次发现了维生素B6可以抑制异烟肼的肠肝循环，这无疑可以为药理学研究和基础医学研究提供重要的信息，为临床用药制定更加合理的方案提供了有参考价值的药物动力学依据：现在沿用的异烟肼与维生素B6同时服用的临床给药方案，会导致异烟肼在分布相的血药浓度过高。

如果采用隔时合并用药方案，不仅会起到异烟肼与维生素B6同时给药的疗效，还可以减小异烟肼在体内血药浓度变化的幅度，进而可以提高异烟肼临床用药的安全性。

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