虎杖水提液利胆保肝作用研究

虎杖水提液利胆保肝作用研究
吴德跃;吴俊标;周玖瑶;林芊杏;曾丹;林辉
【摘要】目的：初步研究虎杖水提液的利胆保肝作用。

方法以大鼠胆管插管法，十二指肠给药，记录给药前1h，给药后1，2，3和4 h胆汁流量及胆汁中胆红素（TBIL）和胆固醇（CHO）含量，观察虎杖水提液利胆作用；采用腹腔注射CCl4橄榄油溶液复制小鼠急性肝损伤模型，检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）含量，观察其对肝的保护作用。

结果虎杖水提液可增加大鼠胆汁分泌量（P＜0．05或 P＜0．01）；可明显降低CCl4模型小鼠血清ALT 和AST 含量（P＜0．05或 P＜0．01）。

结论虎杖水提液具有利胆和保肝作用。

%Objective To investigate the choleretic and liver-protective effect of Rhizoma Polygoni cuspidati aqueous extract .Meth-ods Choleretic effect of Rhizoma Polygoni cuspidati aqueous extract was evaluated by the method of bile duct intubation and duo-denal administration to rats .The bile
flow ,total bile total bilirubin(TBIL) and cholesterol(CHO) secretion were recorded at 1 h before administration and 1 ,2 ,3 and 4 h after administration .In addition ,to examine the protective effect of Rhizoma Polygoni cuspidati on the liver ,acute liver injury model was made in mice with CCl4 olive oil solution .The levels of glutamic pyruvic trans-aminase(ALT ) and glutamic oxaloacetic transaminase (AST ) in serum were determined .Results Aqueous extract of Rhizoma Polygoni cuspidati increased the bile secretion significantly in rats (P<0 .01 or
P<0 .05) ,meanwhile ,significantly reduced the ALT and AST levels in the acute liver injury model mice incluced by CCl 4 (P<0 .01 or
P<0 .05) .Conclusion Aqueous extract of Rhizoma Polygoni cuspidati has choleretic and liver-protective effect .
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】2014(000)002
【总页数】3页(P167-169)
【关键词】虎杖;利胆作用;保肝作用;急性肝损伤
【作者】吴德跃;吴俊标;周玖瑶;林芊杏;曾丹;林辉
【作者单位】广州中医药大学，广州 510006;广州中医药大学，广州 510006;广州中医药大学，广州 510006;广州中医药大学，广州 510006;广州中医药大学，广州 510006;广州中医药大学，广州 510006
【正文语种】中文
【中图分类】R965
肝胆疾病是目前困扰人类的常见疾病之一，对该病的治疗，中医强调辨证论治，针对慢性胆道感染、胆石症之肝阴不足型，采用疏肝利胆、养肝柔肝法予以施治[1-2]。

虎杖为蓼科蓼属多年生草本植物虎杖(Polyonum cuspidatum Sieb.et Zucc)的干燥根茎和根，性味苦寒，归肝、胆、肺经，具有祛风利湿、祛痰止咳、清热解毒、活血化淤、保肝利胆等作用。

药理研究表明，虎杖具有强心、扩血管、抑制血小板聚集、改善微循环、抗休克、镇咳平喘、抗氧化、增加胆汁分泌等作用[3]。

本实验采用大鼠胆总管插管术以及小鼠四氯化碳急性肝损伤法，研究虎杖水提液对大鼠胆汁流量以及小鼠急性肝损伤的影响，以探讨虎杖水提液的利胆保肝作用。

1 仪器与材料
1.1 仪器 EL204分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司，型号：JB/T 5374-1991)；T1000型电子天平(常熟市双杰测试仪器厂)；紫外分光光度计(北京谱析通用仪器有限公司，型号：T6)；酶标仪(深圳雷杜生命科学股份有限公司，型号：RT-2100C)；热恒温水箱(上海一恒科技有限公司，型号：CU-600)；Thermo 移液枪(型号：ZX57483)；离心机：多管架自动平衡离心机(赛特湘仪离心机仪器有限公司，型号：TDZ5-WS )。

1.2 试药虎杖购于广州清平市场，经广州中医药大学博物馆张秋镇教授鉴定为蓼科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc)的干燥根茎和根。

虎杖水提液的制备：原药材粉碎成粗粉，8倍量水煎提取2次、滤过，合并滤液，浓缩，制成含生药量为
2.0 g·mL-1水煎剂，置于冰箱4℃备用，临用时稀释至所需质量浓度。

去氢胆酸片(上海医药(集团)有限公司信谊制药总厂，批号20061002)；联苯双酯(北京协和药厂，批号08030203)；四氯化碳(分析纯，广东光华化学有限公司)；药用橄榄油(上海化学试剂站分装厂)；氯化钠(广东省化学试剂工程技术研究开发中心，批号20100730)。

GPT(ALT)试剂盒(批号 20110610)、GOT(AST)试剂盒(批号20110613)、总胆红素测试盒(批号20110523)，以上均为南京建成科技有限公司生产，总胆固醇测定试剂盒(批号2011040003)由浙江东瓯诊断产品有限公司生产。

1.3 动物雄性SD大鼠，SPF级，体质量200～250 g；KM小鼠，SPF级，体质量18～22 g，雌雄各半(均由广州中医药大学动物实验中心提供)，合格证号：SCXK(粤)2008-0020。

2 方法
2.1 虎杖水提液对大鼠的胆汁流量及胆汁成分的影响参照文献方法[4]选用雄性SD
大鼠，随机分成4组，即空白组、去氢胆酸片组(0.1 g·kg-1)、虎杖低剂量组(10 g·kg-1)和虎杖高剂量组(20 g·kg-1)。

实验前12 h禁食不禁水。

用250 g·L-1乌
拉坦腹腔注射麻醉后，仰位固定于固定板上，沿腹中线打开腹腔。

在十二指肠降部肠系膜中找到白色有韧性的胆管，向肝脏方向作“V”形切口，插入带平针头直径为0.7 mm的塑料细管，可见有淡黄绿色胆汁流出，结扎固定塑料管，收集胆汁。

手术后用止血钳夹闭腹壁，以生理盐水纱布覆盖，待稳定20 min后，先收集1 h 胆汁，然后分别由十二指肠给予虎杖低剂量、高剂量水提液、去氢胆酸液，空白组给予等量生理盐水，按10 mL·kg-1给药，给药后4 h内，每隔1 h收集胆汁1次，记录胆汁流量。

按试剂盒方法测定胆汁中胆红素(TBIL) 及胆固醇(CHO)含量。

2.2 虎杖水提液对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠的影响选用SPF级KM小鼠，雌
雄各半，随机分为5组，即空白组、CCl4模型对照组、联苯双酯组(0.025 g·kg-1)、虎杖低剂量(20 g·kg-1)和虎杖高剂量组(40 g·kg-1)。

各组均按0.02 mL·g-1
灌胃给药，每天1次，连续给药10 d，空白组给予等量生理盐水。

除空白组外，
其余各组均分别在第1天和第6天按5 m L·kg-1体质量腹腔注射1.0 mL·L-1的CCl4油剂诱导小鼠急性肝损伤，第11天称体质量，摘除小鼠眼球取血，血液于
4 ℃下，以3 000 r·min-1离心10 min，制备血清备用，后续按试剂盒方法测定AST和ALT的活性，然后处死小鼠，取肝、脾，称其质量，按以下公式计算肝、
脾指数。

肝指数=肝脏质量(mg)/小鼠体质量(g)
脾指数=脾脏质量(mg)/小鼠体质量(g)
3 统计学处理
实验结果经SPSS17.0软件包处理，实验数据均采用均数标准差表示，组间比较采用t检验，P<0.05为有统计学意义。

4 实验结果
4.1 虎杖水提液对大鼠的胆汁流量及胆汁成分的影响
4.1.1 对胆汁分泌量的影响结果显示，与空白组比较，虎杖低、高剂量组给药后，胆汁排出量增加，去氢胆酸片组也有增加胆汁流量的作用。

实验结果提示，虎杖具有促进胆汁排出的作用。

见表1。

表1 虎杖水提液对大鼠胆汁分泌量的影响Tab.1 Effect of Rhizoma Polygoni cuspidati aqueous extract on bile secretion in rats ，n=8)注：与空白组比较*P<0.05，**P<0.01组别剂量/g·kg-1胆汁排出量/mL给药前1 h 给药后1 h 给药后2 h 给药后3 h 给药后4 h 空白组0.20±0.04 0.11±0.05 0.12±0.05
0.15±0.10 0.10±0.01去氢胆酸片组0.1 0.23±0.02 0.31±0.10 0.34±0.03∗
0.37±0.05∗ 0.38±0.03∗虎杖低剂量组10 0.36±0.05 0.36±0.06∗∗
0.38±0.09∗∗ 0.37±0.06∗∗ 0.36±0.08∗∗虎杖高剂量组20 0.23±0.06
0.23±0.04∗∗ 0.20±0.05∗∗ 0.18±0.04∗ 0.16±0.05∗∗
4.1.2 对大鼠胆汁中TBIL和CHO的影响结果显示，与空白组比较，虎杖水提液低、高剂量组胆汁中胆红素显著升高，而胆固醇含量显著降低(P<0.01)。

实验结果显示，虎杖水提液对大鼠胆汁成分有一定的影响。

见表2。

4.2 虎杖水提液对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠血清中ALT和AST含量及肝指数和脾指数的影响结果显示，与空白组比较，CCl4模型对照组ALT和AST活性明显升高，说明CCl4小鼠急性肝损伤模型造模成功。

与CCl4模型对照组比较，虎杖低剂量和高剂量组均能显著降低血清ALT和AST活性(P<0.01)且呈一定的量效关系，联苯双酯组也能显著降低血清ALT和AST活性(P<0.01)，同时，对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠肝、脾有一定的影响，但差异不显著。

见表3。

表2 虎杖水煎液对大鼠胆汁中胆红素和胆固醇的影响Tab.2 Effect of Rhizoma Polygoni cuspidati aqueous extract on TBIL and CHO of bile in rats ，n=8)注：与空白组比较*P<0.05，**P<0.01组别剂量/g·kg-1TBIL/ μmol·L-1
CHO/mmol·L-1空白组5.52±0.46 9.34±0.41 去氢胆酸片组
0.111.80±1.09∗∗6.22±0.39∗∗虎杖低剂量组1013.60±0.89∗∗6.42±0.32∗∗虎杖高剂量组2012.06±1.09∗∗7.09±0.72∗∗
表3 虎杖水提液对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠血清中ALT和AST的含量及肝指
数和脾指数的影响Tab.3 Effect of Rhizoma Polygoni cuspidati aqueous extract on ALT，AST in serum and the liver index and spleen index on acute liver injury mice induced by CCl4 ，n=8)注：与空白组比较*P<0.05，
**P<0.01；与CCl4模型对照组比较#P<0.05，##P<0.01组别剂量/g·kg-
1ALT/U·L-1AST/U·L-1 肝指数/mg·g-1 脾指数/mg·g-1 空白组
17.98±4.1039.09±5.5035.79±2.961.71±0.26CCl4模型对照组
44.00±9.77∗∗55.97±13.55∗∗39.22±3.17∗2.06±0.47联苯双酯组
0.0257.54±2.30##19.64±5.85##42.61±10.542.11±0.44虎杖低剂量组
2020.35±4.88##25.95±5.13##46.79±6.95##3.02±0.89##虎杖高剂量组
407.21±2.66##24.56±7.21##41.45±6.822.97±0.64##
5 讨论
肝胆疾病是严重危害人类健康的常见病、多发病，在胆道疾病中，随着胆结石病发病率的快速升高，胆结石的研究也得到日益重视。

中医认为，情志不畅、饮食不洁、虫积可引起肝胆疏泄失常，脾胃运化失司，肝胆气郁，郁久化热，湿浊内生，煎熬成胆石；西医认为，胆汁成分和理化性状的改变是胆石形成中主要的基本的因素，因此，治疗胆石症的主要出发点是利胆消炎。

采用大鼠胆管插管法观察药物的利胆作用是实验常用的方法，结果稳定可靠[5]，故本实验采用该法，从大鼠胆汁流量、胆汁中胆红素含量、胆固醇量3个方面去验证虎杖水提液是否具有利胆功能。

表1结果显示，虎杖水提液低、高剂量给药后，大鼠胆汁流量增加，其中低剂量组增加较明显(P<0.01)，药后2 h达到峰值，表明虎杖水提液具有利胆的作用，且对胆
汁成分有一定的影响。

成功复制实验性肝损伤模型是研究和探知肝胆疾病的病因、病理生理和保肝药物的研发及作用原理的前提和基础，目前，实验性肝损伤动物模型的复制主要有生物性、化学性、免疫性和酒精性等方法，其中化学性肝损伤模型是目前常用的肝炎模型，中毒机制研究也较为深入，而在化学性诱导中，CCl4肝损伤动物模型是研究护肝
药物最常用的病理模型之一，其机制为：CCl4进入人体经肝药酶P450激活，产
生三氯甲烷自由基和氯自由基，与肝细胞生物膜上的脂质起过氧化反应，生成脂质过氧化物，同时引起Ca2+的内流，使细胞膜结构和功能受到破坏，导致肝细胞中ALT和AST释放入血，从而使得血清中ALT和AST含量增加，因此，血清中AST和ALT活性可以作为肝损伤的判定指标[6-9]。

本实验模型小鼠血清中AST
和ALT含量显著高于空白组(P<0.01)，表明此时肝细胞已受损伤，通过CCl4诱
导复制的小鼠急性肝损伤模型成功。

从表3可看出，与模型组比较，各给药组血
清中AST和ALT均明显降低(P<0.01)，且虎杖水提液组随着剂量的增加，血清酶活性降低得越显著，显现出一定的量效关系，同时，对小鼠肝脾质量有一定影响，尤其虎杖低剂量给药后，小鼠体质量增加较明显，提示虎杖水煎剂对CCl4导致的小鼠急性肝损伤ALT和AST的升高有显著的抑制作用，提示其对CCl4导致的小
鼠急性肝损伤具有一定的保护作用，其机制可能与清除过氧化脂质有关。

本实验通过对虎杖不同质量浓度提取物的药效学研究及比较，进一步证实了虎杖的利胆和保肝作用，有助于祖国传统中药虎杖的扩大利用与再开发，为临床治疗与预防肝胆疾病提供了可靠的依据，但其作用机制还有待进一步研究。

【相关文献】
[1] 洪嘉禾.实用中医肝病学[M].上海:上海中医药大学出版社，1993:539.
[2] 朱培庭.实用中医胆病学[M].北京:人民卫生出版社，1999:121-272.
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[5] 李兰芳，金亚宏，原桂东，等.茵陈蒿汤分煎、合煎对利胆及腹腔巨噬细胞吞噬功能影响的比较研究[J].中国实验方剂学杂志，1998，4(4):39-41.
[6] 刘丹，汤海峰，张三奇，等.虎杖浓缩片对小鼠实验性肝损伤的保护作用[J].时珍国医国药，2007，18(12):3034-3035.
[7] 高晚霞，罗丽丹，陈舒丽，等.虎杖对大鼠急性四氯化碳肝损伤保护作用的量效关系[J].咸宁学院学报:医学版，2007，21(3):215-217.
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[9] Oehoa B，Syn W K，Deigado I，et al.Hedgehog signaling is critical for normal liver regeneration after partial hepatectomy in mice[J].Hepatology，2010，51(5):1712-1723.。