FHIT及DCP4在胃癌中的表达及其临床意义

目录
中文摘要 (1)
英文摘要 (3)
英文略缩表 (6)
前言 (7)
材料与方法 (9)
1.一般资料 (9)
2.主要试剂 (9)
3.主要仪器与设备 (10)
4.指标检测方法 (10)
5.结果判定 (11)
6.统计与分析 (11)
结果 (11)
讨论 (15)
结论 (24)
展望 (24)
参考文献 (26)
附录图片 (33)
个人简介 (37)
致谢 (38)
综述 (39)
一、中文摘要
FHIT及DCP4在胃癌中的表达及其临床意义
目的：探讨FHIT和DCP4在胃癌中的表达与临床病理特征及在胃癌发生、发展方面的意义。

方法：应用免疫组织化学染色SP法及半定量分析的方法，检测30 例癌周边 粘膜 组织标本和82例胃癌中DCP4和FHIT的表达。

分析与胃癌 病理的 分级、临床分期、淋巴结转移的关系。

结果：1 DCP4和FHIT蛋白在胃癌组织中阳性表达率
FHIT蛋白在胃癌组织中阳性表达率下降（47.56%），与对照组比较有显著差异(p＜0.05）。

年龄≥60岁阳性表达率增高(57.41%)，与年龄＜60岁比较有显著差异(p＜0.05）。

男性与女性阳性表达率比较有无显著差异(p＞0.05）。

高、中、低分化的胃癌组织中其阳性表达率分别为75.00%、69.76%和17.14%，不同分化胃癌组织比较，低分化与高分化、中分化与低分化有显著差异(p＜0.01），高分化与低分化比较无显著差异(p＞0.05）。

Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期和Ⅳ期胃癌组织中其阳性表达率分别为95.65%、57.14%、、26.67%和6.67%,不同临床分期阳性表达率之间比较，Ⅰ期与Ⅲ期、Ⅳ期有显著差异(p＜0.01)，Ⅱ期与Ⅳ期有显著差异(p＜0.01)；Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅱ期与Ⅲ期、Ⅳ期与Ⅲ期比较无显著差异(p＞0.05)。

在有淋巴结转移胃癌组织中其阳性降低（34.69%），与无淋巴转移比较有显著性差异(p＜0.01)。

DCP4蛋白在胃癌组织中阳性表达率下降 (42.68%),与对照组比较有显著差异(p＜0.01）。

年龄≥60岁，其阳性表达率增高 (44.44%)，与年龄＜60岁比较无显著差异(p＞0.05）。

男性阳性表达率为47.69%，女性阳性表达率为23.53%，两者比较有无显著差异(p＞0.05）。

高中低分化的胃癌组织中其阳性表达率分别为75.00%、58.14%和20.00%，不同分化胃癌组织比较，低分化与中分化有显著差异(p＜0.01），高分化与低分化、中分化与高分化比较无显著差异(p＞0.05）。

Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期和Ⅳ期胃癌组织中其阳性表达率分别为82.61%、35.71%、30.00%和13.33%,不同临床分期阳性表达率之间比较，Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期有显著差异(p＜0.05或p＜0.01)，Ⅱ期与Ⅲ期、Ⅱ期与Ⅳ期、Ⅳ期与Ⅲ期无显著差异 (p
＞0.05)。

在有淋巴结转移胃癌组织中其阳性表达率为降低（36.73%）,与无淋巴转移比较无显著性差异(p＞0.05)。

2 胃癌不同临床分期FHIT和DCP4蛋白PI值比较
不同临床分期胃癌的FHIT和DCP4蛋白表达PI值显著降低，与正常对照组比较有显著差异（p＜0.01)；不同临床分期胃癌FHIT蛋白表达PI值之间比较，随着临床分期增加，PI值下降，Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅰ期与Ⅲ期、Ⅰ期与Ⅳ期、Ⅱ期与Ⅲ期、Ⅱ期-Ⅳ期均有显著差异（p＜0.01），Ⅲ期与Ⅳ期无显著差异（p＞0.05）。

不同临床分期胃癌DCP4蛋白表达PI值之间比较，随着临床分期增加，PI值下降，Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅰ期与Ⅲ期、Ⅰ期与Ⅳ期、Ⅱ期与Ⅲ期、Ⅱ期-Ⅳ期、Ⅱ期与Ⅳ期均有显著差异（p＜0.05或p＜0.01）
3 胃癌不同病理分级FHIT和DCP4蛋白PI值比较
不同病理分级的胃癌FHIT表达PI值显著降低，与正常对照组比较有显著差异（p＜0.01）；随病理分级的升高, FHIT表达减弱，不同病理分级的胃癌之间比较，低分化与高分化、低分化与中分化有显著差异（p＜0.01），中分化与高分化无显著差异（p＞0.05）。

不同病理分级的胃癌DCP4表达PI值显著降低，中分化、低分化与正常对照组比较有显著差异（p＜0.01），高分化与正常对照组比较无显著差异（p＞0.05）；随病理分级的升高, DCP4表达下降，不同病理分级的胃癌之间比较，低分化与高分化、低分化与中分化有显著差异（p＜0.01），中分化与高分化无显著差异（p＞0.05）。

结论：1. DCP4和FHIT蛋白表达异常与胃癌临床分期、病理分级、淋巴转移存在一定内在联系，其中FHIT蛋白表达异常与年龄有一定关系；
2. DCP4和FHIT蛋白是胃癌临床重要生物学指标,参与胃癌的发生和发展, 检测DCP 4和FHIT蛋白表达对判断胃癌的恶性程度及预测预后有重要参考价值。

关键词：胃癌 胰腺癌缺失因子4 脆性组氨酸三联体 临床分期 病理分级 淋巴转移
Abstract
The Expression of DCP4 and FHIT in Gastric Carcinoma and Its Clinic Value
Objective: To research the expression of fragile histidine triad（FHIT）and in similar to mot hers against decapentaplegic homologue-4（DCP4)
gastric carcinomas,as well as the correlations with several clinicopathologic, formation of the ascites and demonstrative prognostic parameters,and to investigate the significance.
Methods: FHIT and DCP4 protein expressions were examined by immuno- histochemical staining (SP)and hemiquantity calculation in 82 cases of gastric carcinomas and 30 cases of mucomembrane tissues of carcinomas ambitus.The correlation between FHIT and DCP4 protein expressions and pathological grades and clinical stages in gastric carcinoma were analysed.
Results: 1）The positive rate of FHIT and DCP4 protein expression in gastric tissue The positive rate of FHIT protein expression was is lower （47.56%）in gastric carcinoma, there was significant between in gastric carcinomas and control group(p＜0.05). The positive cases of FHIT protein expression was higher（57.41%）over sixty years, there was significant between over sixty years and below sixty years group(p＜0.05). The positive rate of FHIT protein expression was 46.15% in male，there was no significant between in male and female (p＞0.05).The positive rate of FHIT protein expression was 75.00%，69.76% and 17.14% in among well-, moderate- and poor- differentiated gastric carcinoma，there was significant between in well-differentiated and poor-differentiated，moderate- differentiated and poor-differentiated gastric carcinomas (p＜0.01). there was no significant between in well- differentiated and moderate-different- tiated (p＞0.05).The positive rate of FHIT protein expression
was 95.65%，57.14%，26.67% and 6.67% at Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ and Ⅳ stages in gastric carcinoma，there was significant between at Ⅰ and Ⅲ stages,Ⅰ and Ⅳ stages and ⅡandⅣ stages in gastric carcinomas (p＜0.01)，there was no significant between at Ⅰ and Ⅱ stages,Ⅱ and Ⅲ stages and Ⅲand Ⅳ stages in gastric carcinomas (p＞0.05). The positive rate of FHIT protein expression was lower（34.69%）in lymph node metastasis, there was a significant difference between lymph node metastasis and no lymph node metastasis (p＜0.01).
The positive rate of DCP4 protein expression was is lower （42.68%）in gastric carcinoma, there was significant between in gastric carcinomas and control group(p＜0.01). The positive cases of DCP4 protein expression was higher（44.44%）over sixty years, there was no significant between over sixty years and below sixty years
group(p＞0.05). The positive rate of DCP4 protein expression was 47.69% in male，23.53% in female ,there was no significant between in male and female (p＞0.05).The positive rate of DCP4 protein expression was 75.00%，58.14% and 20.00% in among well-, moderate- and poor- differentiated gastric carcinoma，there was significant between in moderate- differentiated and poor-differentiated gastric carcinomas (p＜0.01). there was no significant between in well- differentiated and moderate-different- tiated and well-differentiated and poor-differentiated gastric carcinoma (p＞0.05).The positive rate of DCP4 protein expression was 82.61%、35.71%、30.00% and 13.33% at Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ and Ⅳ stages in gastric carcinoma，there was significant between at Ⅰ and Ⅲ stages ，Ⅰ and Ⅳ stages and ⅠandⅡstages in gastric carcinomas (p＜0.05 or p＜0.01)，there was no significant between at Ⅱand Ⅲ stages ，Ⅱ and Ⅳ stages and Ⅲand Ⅳ stages in gastric carcinomas (p＞0.05).The positive rate of DCP4 protein expression was lower （36.73%）in lymph node metastasis, there was no significant difference between lymph node metastasis and no lymph node metastasis (p＞0.05).
2) The PI of FHIT and DCP4 protein expression at various clinical stages in gastric carcinoma
The PI of FHIT and DCP4 protein expression is lower at various clinical stages
in gastric carcinoma than that in control(p＜0.01). On the other hand ,the PI of FHIT and DCP4 protein expression were decreased accompanied with more stages in gastric carcinomas,there was a significant difference about the PI of FHIT protein expression at various clinical stages（besides Ⅲstage and Ⅳstage, p＜0.01）, there was significant difference about the PI of DCP4 protein expression at various clinical stages（p＜0.05 or p＜0.01）.
3) The PI of FHIT and DCP4 protein expression at various pathologic grades in gastric carcinoma
The PI of FHIT protein expression is lower at various pathologic grades in gastric carcinoma than that in control(p＜0.01),the PI of DCP4 protein expression is lower at various pathologic grades in gastric carcinoma than that in control(besides well-differentiated,p＜0.01). On the other hand ,the PI of FHIT and DCP4 protein expression were decreased accompanied with more grades in gastric carcinomas,there was a significant difference about the PI of FHIT protein expression in various pathologic grade（besides moderate- and well-differentiated, p＜0.01）, there was a significant difference about the PI of DCP4 protein expression in various pathologic grades（besides moderate- and well-differentiated, p＜0.01）.
Conclusion: 1) There was significant relationship between FHIT and DCP4 protein expression and clinical stages, various pathologic grades, lymphatic metastasis.There was significant relationship between FHIT and age.
2) FHIT and DCP4 protein were significant clinical parameter in gastric carcinoma, may be involved in progression of gastric carcinoma, examination of FHIT and DCP4 protein expression was of great value in understanding the degree of malignancy ,and evaluating prognosis of the disease.
Key words Gastric carcinoma/ Similar to mot hers against decapentaplegic homologue-4（DCP4）/ Fragile histidine triad (FHIT) /Clinical stage / Pathological grade/ Lymphatic metastasis
英 文 略 缩 表
（abbreviations）
英文缩写 英文全名 中文全名
APC adenomatous polyposis coli 腺瘤性结肠息肉病
CDK4 DCC DPC4
ECM FHIT cyclin dependent kinase4
deleted in colorectal carcinoma
deleted in pancreatic cancer,
locus4
extracellular matrix
fragile histidine triad
细胞周期素依赖性激酶4
结直肠癌缺失基因
胰腺癌缺失基因
细胞外基质
脆性组氨酸三联体
HIT histidine triad 组氨酸三联体 LOH loss of heterozygaity 杂合性缺失
MSI microsatellite instability 微卫星不稳定 MMP-2 matrix metallop roteinase-2 基质金属蛋白酶-2 MMP-9 matrix metallop roteinase-9 基质金属蛋白酶-9 MTS1 multiple tumor suppressor 1 多肿瘤抑制基因1
PBS PI PTEN
SP phosphate-buffered saline
positive index
phosphatase and tensin homology
deleted on chromosome ten
streptavidin-perosidase
磷酸缓冲液
阳性指数
第10号染色体同源缺失
性磷酸酶-张力蛋白基因
链霉菌抗生物素蛋白-过
氧化物酶
DCP4 SYK similar to mot hers against
decapentaplegic homologue-4
spleen tyrosine kinase
胰腺癌缺失因子4
脾酪氨酸激酶
TGF-β transforming growth factor-beta 转化生长因子β TIMPs tissue inhibitor of
metalloproteinases
组织金属蛋白酶抑制剂
TNF-α Tumor necro -sis factor-α 抑制肿瘤坏死因子-α VEGF vascular endothelial growth
factors
血管内皮生长因子
FHIT及DCP4在胃癌中的表达及其临床意义
1前 言
胃癌（gastric carcinoma）是世界范围内发病率仅次于肺癌的恶性肿瘤,居消化道恶性肿瘤发病率及死亡率的第一位。

在不同的国家或地区其发病率和病死率存在着较大差异。

我国属胃癌高发国家,其发病率与死亡率均居全身恶性肿瘤前列,近年发病率有增高趋势,据最新的调查资料显示,胃癌的病死率在各种恶性肿瘤病死率中位于肺癌、肝癌之后排在第3 位[1]。

胃癌侵袭和转移渠道丰富而广泛，是造成预后不良, 死亡率居高不下的重要原因。

恶性肿瘤的侵袭与转移机制相当复杂，目前认为肿瘤间质中的血管生成和细胞外基质的降解。

影响胃癌分期和预后的因素较为复杂,有肿瘤生长方式、组织学类型、肿瘤细胞黏附性、临床分期、癌基因表达、浆膜层受浸润及淋巴结转移等。

首先,从大体分期上看,早、中和晚期胃癌的预后差异很大。

尽管目前胃癌的诊断和治疗技术已有很大进展, 因早期阶段临床症状不明显, 尚无有效的诊断筛查手段, 确诊时大多已为晚期,其总的预后并无明显改观,5年生存率仅20%，这是因为在确诊时67%的患者已伴有局部扩散或远处转移[2]。

因此，探讨胃癌发生、发展的分子机制,做到早期预防、早期诊断和早期治疗及预后的判断有着十分重要的意义，寻找新的治疗靶点以及有效的治疗方式成为目前研究的热点。

众多研究表明，胃癌是一类多基因疾病,是由于端粒酶激活、癌基因激活或抑癌基因失活等引发的多因素、多阶段及多基因变异的综合病变过程。

癌基因、抑癌基因的突变和错配是肿瘤发生发展重要机制之一[3]。

尽管癌基因的活化是促使肿瘤发生的关键因素之一，但抑癌基因的失活在肿瘤发生、发展过程中可能起到更加常见、更加重要的作用，是抑制肿瘤发生和转移重要基因，其研究对控制肿瘤转移有重要意义[4-6]。

抑癌基因（tumor suppressor gene）是一类抑制细胞增生，从而抑制肿瘤形成的基因。

它们是隐性基因，突变能导致功能丧失,失去抑制细胞增生的能力，导致肿瘤的形成[7]。

目前已分离克隆的抑癌基因有Rb、p53、p16、p33ING1、nm23、TIMP、KAI1、APH、MCC、APC、DCC、BRCA1，2、DPC4、DCP4、VHL等，最近被认
为候选抑癌基因的有FHIT、PTEN/MMAC1/TEP1、SyK、Runx3、E2cadherin等。

根据抑癌基因的作用机制可分为三种:⑴DNA修复基因有MSH2、MLH1、BRCA1和BRCA2，其中MSH2和MLH1属于DNA错配基因。

⑵通过调节信号而转导而抑制细胞增生的抑癌基因有APC、DCP4、PTEN、PTCH。

⑶应答细胞周期关卡的基因有RB、P53、APC、P16。

脆性组氨酸三联体基因( fragile histidine triad,FHIT)是1996年Ohta 等[8]利用定位克隆技术及外显子捕获法找到的一个新基因, 定位于染色体
3p14.2区域内，因该基因编码的蛋白与具有组氨酸三联体结构的HIT( histidine triad)蛋白高度同源,而且该基因跨越最常见的脆性位点,故命名为脆性组氨酸三联体基因。

FHIT存在于大多数正常组织中，在多种肿瘤组织和细胞系中发现FHIT基因有结构及表达异常的报道[9-11]，和胃癌、肺癌、乳腺癌、肠癌、胰腺癌等有关。

研究发现, FHIT基因在人类多种恶性肿瘤及多种恶性肿瘤细胞系中呈现高频率的纯合缺失、杂合缺失(loss of heterozygosity,LOH)或异常转录, 而其表达的蛋白都有不同程度的减少甚至缺失，提示该基因是一个抑癌基因。

因此，FHIT基因被拟定为抑癌基因并成为近年来的研究热点。

胰腺癌缺失因子4 ( similar to mot hers against decapentaplegic homologue-4 ,DCP4),原名称DCP4(deleted in pancreatic carcinoma locus 4, DPC4)，最初是作为胰腺癌新的肿瘤抑制因子发现的，其基因定位于染色体
18q21.1，被认为是一个候补肿瘤抑制基因，在胰腺癌中的突变率约为50%[12]。

后来发现其表达缺失与多种恶性肿瘤的发生发展有关，其主要功能是参与转化生长因子β（TGF-β）超家族的细胞内信号转导，在TGF-β超家族的信号转导途径中处于中枢地位。

一旦DCP4功能失活或表达下降，TGF-β信号通路就会中断，最终导致肿瘤的发生。

近年来研究发现，其他消化道肿瘤如结肠癌、胆囊癌、肝癌等组织中亦有DCP4 表达的下降。

而其与胃癌发生发展关系的研究目前尚不多见，因此通过免疫组化的方法检测胃癌组织DCP4的表达，来分析DCP4与胃癌及其临床病理学间的关系。

抑癌基因的作用机制广泛，主要有应答细胞周期关卡，发现及修复DNA损伤，蛋白质通过泛素化途径降解，抑制细胞分化与迁移。

FHIT基因作为一种抑癌基因，其改变与多种肿瘤的发生发展密切相关，其主要表现为染色体的缺失、重排，
极少出现点突变。

然而，肿瘤的发生是一个多步骤且牵涉到多重基因事件的复杂过程, FHIT基因在肿瘤的发生发展中的具体分子生物学机制及与其它致癌因素的关系还不清楚，FHIT基因与肿瘤的临床病理关系尚存在争议，随着对该基因的生理功能及其与肿瘤生物学行为关系的深入研究，FHIT基因治疗将有望成为治疗肿瘤的有效方法之一。

DCP4在众多肿瘤中缺失或突变，尤其是在消化系肿瘤，发挥抑癌基因功能。

最近，DCP4与肿瘤进展和转移相关的现象正在得到关注，但是这方面的研究还远远不够。

目前对DCP4的研究尚待深入：关于DCP4所调节的靶基因及其调控因素还不清
楚，研究DCP4如何通过介导肿瘤分子细胞动力学变化而影响肿瘤细胞的运动、侵袭和转移，对于阐明肿瘤发展的机制和提供新的防治策略有重要意义。

因此通过研究胃癌组织中FHIT和DCP4蛋白的表达情况，探讨其与胃癌的发生、组织学分化程度、临床分期、治疗和预后等临床病理因素的关系，分析它们在胃癌发生、发展中的作用，进而揭示其在临床应用中的前景有着非常重要的意义。

2材料与方法
2.1 一般资料
收集巢湖市第一人民医院2009年1月～2010年2月收治的经手术切除且临床资料完整的82例胃癌和30例癌周粘膜组织蜡块标本,术前未做过化疗和放疗。

患者男性65例,女性17例,平均年龄61.48±10.0岁,年龄范围29～79岁。

①年龄,大于60岁54例,小于60岁28例；②病理分级, 高分化4例, 中分化43例, 低分化35例；③淋巴结转移49例,无淋巴结转移33例；④TNM分期,Ⅰ期23例, Ⅱ期14例, Ⅲ期30例，Ⅳ期15例。

取材处为肿瘤组织中心部位及周边部。

标本均经10%甲醛溶液固定,梯度酒精脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋。

同时取癌周粘膜30例作为对照组。

2.2 主要试剂
免疫组化染色所需即用型鼠抗人FHIT和DCP4单或多克隆抗体、抗原修复液
Ⅰ、SP试剂盒、DAB显色剂、APES、0.1MPBS(pH7.2-7.4)、0.01M枸橼酸盐缓冲液均购自北京中杉生物技术开发公司，其余如二甲苯、乙醇、甲醛等化学药品（分析纯）购自合肥天安博生化试剂经营部。

2.3 主要仪器与设备
FA2004型电子天平（上海天平仪器厂生产）；101-A恒温干燥箱（宁波自动化仪表厂）；TB－718自动包埋机(泰维电子设备有限公司)；LEICA ASP200自动切片机（LEICA公司）；TK-218I恒温摊片烤片机(泰维电子设备有限公司)；OLYMPUS VANOX显微镜（日本OLYMPUS光学工业株式会社）；LEICA RM2135自动脱水机（LEICA公司）； JD-801形态学显微图像分析系统（南京捷达科技发展有限公司）；S-3C型精密pH计（上海雷磁仪器厂）。

2.4 指标检测方法
FHIT和DCP4采用免疫组织化学染色链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法（streptavidin-perosidase，SP）法,用已知的阳性片作阳性对照。

严格按试剂盒说明操作，其步骤如下：①载玻片与防脱片剂处理：将新买的载玻片用清洁剂浸泡过夜，自来水充分冲洗，浸泡液浸泡过夜，自来水充分冲洗，95%乙醇浸泡4h，取出擦净，60℃烤干，无尘环境中备用。

选用APES，临用前用丙酮1:50稀释，干净玻片浸泡30s，取出后略干燥（时间约5min），再用纯丙酮涮洗2次，捞出后置烘箱58-60℃约30-60min。

②石蜡切片厚4μm，脱蜡至水。

③滴加内源性过氧化物酶阻断剂，室温10-20min，蒸馏水洗3次，抑制内源性过氧化物酶。

④将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液（pH6.0），电炉加热至沸腾后断电，间隔5min后，反复2次。

室温冷却后0.1MPBS（pH7.3）洗涤2次。

⑤滴加山羊非免疫血清，封闭非特异性的结合位点，室温20min，甩去多余液体，不洗。

⑥分别滴加适当稀释的第一抗体FHIT和DCP4（1:150），置于湿盒中，4℃过夜，阴性对照采用正常山羊血清替代第一抗体进行。

0.1MPBS（pH7.3）洗涤2次，每次5min。

⑦滴加生物素标记山羊抗兔IgG，37℃30min，0.1M PBS（pH7.3）洗涤2次，每次5min。

⑧滴加SP，37℃30min, 0.1M PBS（pH7.3）洗涤2次，每次5min。

⑨DAB显色：使用DAB 显色试剂盒，取1ml蒸馏水，加试剂盒中A、B、C试剂各1滴，混匀后加至切片，室温显色，镜下控制反应时间，约在5-20min。

蒸馏水洗涤。

⑩苏木紫轻度复染，约10s,流水冲洗，盐酸酒精适度分化，脱水、透明、封片,显微镜观察。

2.5 结果判定
FHIT和DCP4分析统计方法：FHIT和DCP4染色以胞浆出现棕黄或棕褐色染色为阳性标记，I FHIT和DCP4蛋白以大于5%以上细胞质出现淡黄至棕黄色颗粒为阳性表达。

使用南京捷达JD-801图像分析系统, 在200倍视野下观察染色切片中5个具有代表性的视野。

对FHIT和DCP4蛋白的染色结果进行定量观察。

经测量可获得测定面积、阳性反应面积及相应的灰度值。

按公式计算阳性指数
( Positiv-eindex ,PI) PI=阳性灰度值×阳性反应面积/测定面积，取均值，数据以(x±s) 表示,PI 越大,表达强度越高。

2.6 统计与分析
x±表示, 双侧显著性水准α使用SPSS12.0 统计软件包, 计量资料以s
=0.05。

两样本比较应用t 检验、率间比较用χ2 检验。

3结果
3.1 胃癌FHIT和DCP4蛋白阳性表达率比较
FHIT蛋白在癌周粘膜组织中表达阳性细胞阳性颗粒位于细胞胞浆内，其阳性表达率为73.33%(22/8)；在胃癌组织中FHIT蛋白表达减弱,阳性颗粒位于细胞胞浆内，其阳性表达率为47.56%(39/43),与对照组比较有显著差异(χ2 ＝5.882,p＜0.05）。

年龄≥60岁，其阳性表达率为57.41%(31/23)，年龄＜60岁，其阳性表达率为28.57%(8/20)，两者比较有显著差异(χ2 ＝6.148 ,p＜0.05）。

男性阳性表达率为46.15%(30/35)，女性阳性表达率为52.94%(9/8)，两者比较有无显著差异(χ2 ＝0.249,p＞0.05）。

在高分化胃癌组织中其阳性表达率为75.00%(3/1), 在中分化胃癌组织中其阳性表达率为69.76%(30/13), 在低分化胃癌组织中其阳性表达率为17.14%(6/29)，不同分化胃癌组织比较 ,低分化与高分化、中分化与低分化有显著差异(χ2 ＝8.828,p＜0.01；χ2 ＝21.501,p＜0.01），高分化与中分化比较无显著差异(χ2 ＝0.124 ,p＞0.05）。

在Ⅰ期胃癌组织中其阳性表达率为95.65%(22/1), 在Ⅱ期胃癌组织中其阳性表达率为57.14%(8/6),在Ⅲ期胃癌组织中其阳性表达率为26.67%(8/22),在Ⅳ期胃癌组织中其阳性表达率为 6.67%(1/14),不同临床分期阳性表达率之间比较，Ⅰ期与
Ⅲ期、Ⅳ期有显著差异(χ2 ＝22.492；χ2 ＝26.480，p＜0.01)，Ⅱ期与Ⅳ期有显著差异(χ2 ＝6.945，p＜0.01)；Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅱ期与Ⅲ期、Ⅳ期与Ⅲ期比较无显著差异(χ2 ＝0.283；χ2 ＝3.831；χ2 ＝1.406，p＞0.05)。

在无淋巴结转移胃癌组织中其阳性表达率为66.67%(22/11),在有淋巴结转移胃癌组织中其阳性表达率为34.69%(17/32), 阳性表达率降低，与无淋巴转移比较，有显著性差异(χ2 ＝8.083, p＜0.01)。

阴性对照组FHIT蛋白无表达。

见表1，图1-11。

DCP4蛋白在癌周粘膜组织中表达阳性细胞阳性颗粒位于细胞胞浆内，其阳性表达率为76.67%(23/7)；在胃癌组织中DCP4蛋白表达减弱,阳性颗粒位于细胞胞浆内，其阳性表达率为42.68%(35/47),与对照组比较有显著差异(χ2 ＝10.160,p＜0.01）。

年龄≥60岁，其阳性表达率为44.44%(24/30)，年龄＜60岁，其阳性表达率为39.29%(11/17)，两者比较无显著差异(χ2 ＝0.201 ,p＞0.05）。

男性阳性表达率为47.69%(31/34)，女性阳性表达率为23.53%(4/13)，两者比较有无显著差异(χ2 ＝3.216,p＞0.05）。

在高分化胃癌组织中其阳性表达率为75.00%(3/1), 在中分化胃癌组织中其阳性表达率为58.14%(25/18), 在低分化胃癌组织中其阳性表达率为20.00%(7/28)，不同分化胃癌组织比较，低分化与中分化有显著差异(χ2 ＝11.600,p＜0.01），高分化与低分化、中分化与高分化比较无显著差异(χ2 ＝3.176；χ2 ＝0.006 ,p＞0.05）。

在Ⅰ期胃癌组织中其阳性表达率为82.61%(19/4), 在Ⅱ期胃癌组织中其阳性表达率为35.71%(5/9),在Ⅲ期胃癌组织中其阳性表达率为30.00%(9/21),在Ⅳ期胃癌组织中其阳性表达率为13.33%(2/13),不同临床分期阳性表达率之间比较，Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期有显著差异(χ2 ＝5.508， p＜0.05；χ2 ＝12.425，p＜0.01；χ2 =14.933，p＜0.01),Ⅱ期与Ⅲ期、Ⅱ期与Ⅳ期、Ⅳ期与Ⅲ期无显著差异 (χ2 ＝0.144；χ2 ＝0.947；χ2 ＝0.737，p＞0.05)。

在无淋巴结转移胃癌组织中其阳性表达率为51.52%(17/16),在有淋巴结转移胃癌组织中其阳性表达率为36.73%(18/31), 阳性表达率降低，与无淋巴转移比较无显著性差异(χ2 ＝1.761, p＞0.01)。

见表1，图1-17。

表1胃癌FHIT和DCP4蛋白表达阳性率比较
Tab1 Comparison for positive rate of FHIT and DCP4 protein expression in gastric carcinoma
组别 例数 FHIT DCP4
阳性 阴性 χ2 P 阳性 阴性 χ2 P
对照组 30 22 8 5.882 0.025 23 7 10.160 0.005
胃癌组 82 39 43 35 47
年龄 ≥60 54 31 23 6.148 0.025 24 30 0.201 0.750
＜60 28 8 20 11 17
性别 男 65 30 35 0.249 0.750 31 34 3.216 0.100
女 17 9 8 4 13
分化 高分化 4 3 1 0.124 0.750 3 1 0.006 0.900
中分化 43 30 13 21.501 0.005 25 18 11.600 0.005
低分化 35 6 29 8.828 0.005 7 28 3.176 0.100
分期 Ⅰ期 23 22 1 22.492 0.005 19 4 5.508 0.025
Ⅱ期 14 8 6 6.945 0.010 5 9 0.144 0.750
Ⅲ期 30 8 22 3.831 0.100 9 21 12.425 0.005
Ⅳ期 15 1 14 26.480 0.005 2 13 14.933 0.005 淋巴转移 无 33 22 11 8.083 0.005 17 16 1.761 0.250
有 49 17 32 18 31
3.2胃癌不同临床分期FHIT和DCP4蛋白PI值比较
不同临床分期胃癌的FHIT蛋白表达PI值显著降低，与正常对照组比较有显
著差异（t＝5.53、t＝8.39、t＝20.78、t＝17.92，p＜0.01)； DCP4蛋白表达
PI值显著降低，不同临床分期与正常对照组比较有显著差异（t＝6.45、t＝
12.90、t＝16.51、t＝19.34，p＜0.01）；不同临床分期胃癌FHIT蛋白表达PI
值之间比较，随着临床分期增加，PI值下降，Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅰ期与Ⅲ期、Ⅰ期
与Ⅳ期、Ⅱ期与Ⅲ期、Ⅱ期-Ⅳ期均有显著差异（t=3.25、t=12.5、t=10.7、t=6.56、t=5.77，p＜0.01），Ⅲ期与Ⅳ期无显著差异（t=0.453, p＞0.05）。

不同临床分期胃癌DCP4蛋白表达PI值之间比较，随着临床分期增加，PI值下降，Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅰ期与Ⅲ期、Ⅰ期与Ⅳ期、Ⅱ期与Ⅲ期、Ⅱ期-Ⅳ期、Ⅱ期与Ⅳ期均有显著差异（t=4.46、t=7.48、t=8.71、t=2.10、t=4.18 、t=2.09，p＜0.05或p ＜0.01）。

见表2。

表2胃癌不同临床分期FHIT和DCP4蛋白表达PI值比较
Tab 2 Comparison for PI of FHIT and DCP4 protein expression at various clinical stages in gastric
carcinoma
临床分期 例数 FHIT DCP4
PI PI
正常组 30 82.20±5.74 78.52±5.11
Ⅰ期 23 72.28±7.32﹡﹡ 66.48±8.41﹡﹡
Ⅱ期 14 63.55±8.89﹡﹡ 54.56±6.94﹡﹡
Ⅲ期 30 46.92±7.32﹡﹡ 49.2±8.27﹡﹡
Ⅳ期 15 45.86±7.62﹡﹡ 44.08±6.58﹡﹡
注:与正常对照组比较，﹡p＜0.05, ﹡﹡p＜0.01；
﹡p＜0.05, ﹡﹡p＜0.01 vs control
3.3胃癌不同病理分级FHIT和DCP4蛋白PI值比较
不同病理分级的胃癌FHIT表达PI值显著降低，与正常对照组比较有显著差异（t＝2.87、t＝7.64、t＝17.04，p＜0.01）；随病理分级的升高, FHIT表达减弱，不同病理分级的胃癌之间比较，低分化与高分化、低分化与中分化有显著差异（t＝5.18、t＝8.76, p＜0.01），中分化与高分化无显著差异（t＝0.933, p ＞0.05）；不同病理分级的胃癌DCP4表达PI值显著降低，中分化、低分化与正常对照组比较有显著差异（t＝6.49、t＝10.14，p＜0.01），高分化与正常对照组比较无显著差异（t＝1.42，p＞0.05）；随病理分级的升高, DCP4表达减弱，不
同病理分级的胃癌之间比较，低分化与高分化、低分化与中分化有显著差异（t ＝3.14、t＝5.41, p＜0.01），中分化与高分化无显著差异（t＝1.26, p＞0.05）。

见表3。

表3 胃癌不同病理分级FHIT和DCP4蛋白表达PI值比较
Tab 3 Comparison for PI of FHIT and DCP4 protein expression at various pathologic grades in
gastric carcinoma
病理分级 例数 FHIT DCP4
PI PI
正常对照组 30 75.88±6.19 71.94±8.41
高分化 4 66.54±5.33﹡﹡ 65.25±12.55
中分化 43 62.8±7.82﹡﹡ 60.56±6.55﹡﹡
低分化 35 48.01±6.89﹡﹡ 81.95±7.49﹡﹡
注:与正常对照组比较，﹡p＜0.05, ﹡﹡p＜0.01
﹡p＜0.05, ﹡﹡p＜0.01 vs control
4 讨论
胃癌是世界范围内发病率仅次于肺癌的恶性肿瘤,居消化道恶性肿瘤发病率及死亡率的第一位。

我国属胃癌高发国家,其发病率与死亡率均居全身恶性肿瘤前列,近年发病率有增高趋势。

因此,探讨胃癌发生、发展的分子机制,做到早期预防、早期诊断和早期治疗,寻找新的治疗靶点以及有效的治疗方式成为目前研究的热点。

脆性组氨酸三联体基因( fragile histidine triad,FHIT)是1996 年Ohta等[8]利用定位克隆技术及外显子捕获法找到的一个新基因,因该基因编码的蛋白与具有组氨酸三联体结构的HIT( histidine triad)蛋白高度同源,而且该基因跨越最常见的脆性位点,故命名为脆性组氨酸三联体基因。

FHIT存在于大多数正常组织中，在多种肿瘤组织和细胞系中发现FHIT基因有结构及表达异常的报道[9-11]。

研究发现, FHIT 基因在人类多种恶性肿瘤及多种恶性肿瘤细胞系中呈现高频率的纯合缺失、杂合缺失(loss of heterozygosity,LOH) 或异常转录, 而其表达的蛋白都有不同程度的减少甚至缺失，提示该基因是一个抑癌基因。

因
此，FHIT 基因被拟定为抑癌基因并成为近年来的研究热点。

4.1FHIT基因结构与特征
FHIT 基因属于HIT 基因家族,定位于染色体3p14.2 区域内,在染色体上占
据1Mb大小的位置,覆盖FRA3B 脆性位点、肾细胞癌相关性断裂点t ( 3 ; 8 )、抑癌基因PTPRG ( proteinlyrosine phorphalase γgene) 的5′末端及HPV16 整合位点。

FHIT 基因cDNA 长1095 bp ,具有10 个外显子[13], 转录产物为1.1 kb 的mRNA,其5′端含一段长约350bp的非编码区, 包含外显子1－3、外显子5－9 组成的长约500bp 的开放性阅读框架（open reading frame ,ORF），编码由147 个氨基酸残基组成的分子量为16.8kD 的蛋白质。

三个起始外显子1～3 位于t (3 ;8) 断裂着丝粒端前方,外显子5含有蛋氨酸起始密码, HPV16 整合在外显子5′着丝粒侧;外显子6 含有一个ORF内蛋氨酸密码,在外显子5 缺失情况下可用其翻译出不完全的FHIT蛋白。

外显子8 含有HIT核心单元的密码[8]。

随后的3′端有多聚腺苷酸共有序列(polyA consensus sequence) 和一个polyA 尾部。

3 号染色体短臂3p14.2 区域内由aphidicolin 诱导的脆性位点——FRA3B 位于FHIT 基因内
含子4 与5 之间,在FHIT 基因编码的第一个外显子(外显5) 两侧,跨越200～300 kb 区域。

其中第1 ～4 个外显子和第10个外显子只转录不翻译;外显子5 ～9 编码开放性阅读框;外显子5 含有蛋氨酸起始密码子; 外显子6含有1个ORF内蛋氨
酸密码,在外显子5缺失情况下可用其翻译出不完全的FH IT蛋白;外显子8含有编码H IT的核心单元[8]。

Huebner 等[14]在大多数人类肿瘤中发现了围绕FRA3B 位点的FHIT 基因的部分或完全缺失而认为该脆性位点可能是一些肿瘤染色体易位的关键点。

FHIT 基因在结构上有以下几个特征：（1）其内含子大于200bp，其中可能包含有特异的基因序列；（2）含有t（3；8）染色体交叉易位短裂点；（3）几乎所有的外显子以AG结尾，为正常所见的基因剪接序列位点；（4）脆性端粒侧有很多Alu重复序列和( TAA) 15重复序列,可能是DNA复制起点; ⑸FRA3B 脆性区域，外界致癌因素可能攻击此脆性区域，从而诱导肿瘤的发生[15]。

4.2 FHIT蛋白及功能
FHIT基因在人体的所有组织都有表达。

FHIT基因编码的FHIT蛋白由147 个氨基酸组成,定位于细胞浆,由于其序列和HIT蛋白相似,被认为是HIT蛋白家族中的一员。

其109个核心氨基酸与酵母菌Schizo saccharomyces pombe 的Ap4A水解。