自体骨髓间充质干细胞治疗溃疡性结肠炎疗效分析

自体骨髓间充质干细胞治疗溃疡性结肠炎疗效分析
杨波;赵振林;樊强
【摘要】
Objective:Todiscussandconcludetheclinicaleffectiveness,reliabilityandsafety ofmesenchymalstemcells ( MSC)on ulcerative colitis( UC). Methods:The methodology adopted in this thesis is a comparison between cell treatment group(7 cases)and drug treatment group(10 cases)such that are distributed randomly according to the principle of voluntar-iness. The 17 cases are chosen from clinical UC during October 2012 and June 2013 at the department of General Surgery in the Second Clinical Hospital of Shanxi Medical University. The total of 17 cases are approved by the Hospital Ethics Commit-tee,and the informed consents are signed by the related patients and their families. The cell treatment group uses autologous cells that have been amplified in vitro,and multipoint-injected under local submucosal with direct enteroscope view. The in-jection volume is about 1. 0 × 107 cells per point,with every 30 days per injection,3 injections in all. Drug treatment group takes standardized drug treatment. Results:Five cases have reached complete remission,2 cases partial remission,with 100%effective rate. The results of drug treatment group are:6 cases have reached complete remission,3 partial remission but 1 no re-mission,with 90% effective rate. Follow-up visit in 3 to 14 months to cell treatment group shows:none of the 5 cases with complete remission have reoccurrence and neither of the 2 cases with partial remission have
aggravation. While to the drug treatment group,3 out of the 9 cases with complete or partial remission have reoccurrence in the second month and another 4 have reoccurrence in the third,fifth and tenth month respectively. Conclusion:MSC treatment is effective,reliable and safe.%目的：探讨自体骨髓间充质干细胞（ MSC）治疗溃疡性结肠炎（ UC）的临床有效性、可靠性及安全性。

方法：选择2012年10月—2013年6月收治的临床确诊溃疡性结肠炎患者17例，经医院伦理委员会批准，与患者及家属签署知情同意书，根据自愿原则随机分为细胞治疗组7例和药物治疗组10例。

细胞治疗组采用自体骨髓间充质干细胞经体外培养扩增细胞，并在肠镜直视下局部黏膜下多点注射，每点注射细胞量约1.0×107个，每间隔30 d注射1次，共注射3次；药物治疗组采用规范化药物治疗。

结果：细胞治疗组达完全缓解5例，部分缓解2例，有效率100%。

药物治疗组达完全缓解6例，部分缓解3例，无缓解1例，有效率90%。

随访3～14个月，细胞治疗组完全缓解的5例中无一例复发，另外2例症状无加重。

药物治疗组9例中3例第2个月复发再次治疗，另4例分别在第3，5，10个月再次复发。

结论：自体骨髓间充质干细胞治疗溃疡性结肠炎是一种可靠、安全、有效的方法。

【期刊名称】《临床医药实践》
【年(卷),期】2015(000)007
【总页数】5页(P493-497)
【关键词】骨髓间充质干细胞;溃疡性结肠炎;治疗
【作者】杨波;赵振林;樊强
【作者单位】山西医科大学第二临床医学院，山西太原 030001;山西医科大学第二临床医学院，山西太原 030001;山西医科大学第二临床医学院，山西太原030001
【正文语种】中文
【中图分类】R574.62
溃疡性结肠炎(UC)是一种目前病因尚不明确、主要临床表现为累及结、直肠的慢性非特异炎症性疾病。

病变段肠黏膜及黏膜下层反复发作性糜烂、溃疡、纤维化，致正常肠黏膜结构破坏，久而久之病变段肠管发生“去结肠化”改变，失去重吸收水电解质能力。

临床表现为反复发作的腹泻、黏液脓血便伴腹痛、里急后重等。

其并发症预后差，易引起急性肠穿孔，曾被世界卫生组织(WHO)列为现代难治性疾病之一。

病程超过8 年以上罹患癌变的风险明显增高。

目前，针对UC的治疗主要还是依赖于药物治疗，例如柳氮磺胺吡啶、糖皮质激素和免疫抑制剂等单一或联合口服，或者复方栓剂肛塞治疗轻、中、重度UC。

往往仅能获得短暂疗效，需长期服用，全身不良反应明显。

现今随着生物治疗技术迅猛发展，骨髓间充质干细胞(MSC)移植治疗为UC的治疗带来新的曙光。

骨髓间充质干细胞是一群类似成纤维细胞、无造血功能的干细胞，它具有高度可塑性和可移植性。

MSC在特定条件下能诱导分化形成多种非造血组织细胞，有助于组织损伤的修复，并成功的用于循环系统、骨关节、自身免疫相关疾病的治疗中。

基于国内外大量的动物实验和临床试验研究，以及自身丰富的临床经验，我院率先开展了自体骨髓间充质干细胞治疗溃疡性结肠炎的试验性研究。

笔者将细胞治疗7 例和药物规范化治疗10 例进行对照分析。

报告如下。

1.1 一般资料
选择山西医科大学第二临床医院普通外科于2012年10月—2013年6月符合UC
诊断标准的临床确诊病例共17 例。

经我院伦理委员会批准和患者及家属签署知情同意书，根据自愿原则随机分为细胞治疗组7 例和药物治疗组10 例。

17 例中男13 例，女4 例，男女之比为3.25∶1。

年龄37～62 岁，其中细胞治疗组平均47.7 岁，药物治疗组平均42.9 岁。

病程5～18 年。

病变累积范围根据蒙特利尔
分类[1]：直肠型(E1型)4 例(23.5%)，左半结肠型(E2型)7 例(41.2%)，广泛结肠
型(E3型)6 例(35.3%)；根据临床分型本组均为慢性复发型。

病变根据内镜下黏膜
形态分为活动期(A期)，缓解期(L期)，慢性活动期(CA期)。

本组17 例均为CA期(100%)；根据改良Trueloves和witts病变严重程度分型标准[2]：轻度5 例(29.4%)，中度3 例(17.6%)，重度9 例(52.9%)。

细胞治疗组：轻度E2型CA期
1 例，中度E3型CA期1 例，重度E1型CA期1 例，E2型CA期
2 例，E3型CA期2 例。

1.2 细胞制备
选择干细胞治疗组患者，在手术室无菌条件下，从患者髂后上棘穿刺抽取骨髓血约100 mL，加肝素抗凝后带入实验室，Percoll(1.073×10-3g/L)密度梯度离心，取中间单核细胞层，以低糖DMEM洗涤2 次，放入培养皿中培养24 h(为防止细胞液感染可加入两性霉素B、硫酸链霉素等)利用骨髓间充质干细胞贴壁的物理原理，弃去培养液，留下的贴壁细胞主要是骨髓间充质干细胞。

此后每2～3 d换一次培养皿。

待细胞培养数量达到治疗需要时，经流式细胞仪检测细胞表面标志物，MSCs均一表达CD13，CD29，HLA-2，阳性率分别为99.97%，98.46%和
94.27%；CD34，CD45，HLA-DR阴性。

1.3 治疗方法
干细胞治疗组：对经入院治疗一般情况初步改善的患者给予营养支持治疗后，认为患者达到耐受肠镜观察治疗前提后，在内镜室和消化内科协同参与下，将前期收集并培养好的自体骨髓间充质干细胞与生理盐水稀释混匀，制成细胞悬液。

在电子结
肠镜直视下利用4 mm黏膜下注射针于结、直肠病变周围黏膜下分点注射，每点
注射1 mL细胞悬液约含1.0×107个细胞，30 d后再次结肠镜检查并注射细胞1 次，连续治疗3 次。

药物治疗组：根据2012年炎症性肠病广州共识意见[3]，分轻、中、重治疗。

轻度：单纯口服柳氮磺胺吡啶或者激素治疗；中度：对氨基水杨酸联合糖皮质激素或者免疫抑制剂，或者联合激素保留灌肠；对于病情重、发展快的溃疡性结肠炎患者，在一般治疗基础上加静脉滴注激素和免疫抑制剂，严格内科治疗仍无效者需手术治疗。

1.4 疗效评定标准
完全缓解：临床症状完全消失，结肠镜复查肠黏膜红润，血管清晰，无溃疡和脓苔，病理检查隐窝炎症消退，黏膜恢复；有效：临床症状基本消失，结肠镜复查黏膜轻度炎症表现或假息肉；无效：临床症状、结肠镜复查和病理检查均无改善。

1.5 复发或加重评价
经治疗后得到有效控制或者完全缓解后症状再次发作或者加重，表现为左下腹疼痛、腹泻、水样便、脓血、里急后重等症状加重，结肠镜下愈合的黏膜充血、水肿、细颗粒状，脓性渗出、出血，或者是原有病变处弥漫性糜烂、溃疡。

病理表现：黏膜及黏膜固有层慢性炎症细胞和中性粒细胞浸润；隐窝炎性改变或者脓肿，上皮增生，腺体变形、数量减少或消失，杯状细胞减少和潘氏细胞化生；黏膜糜烂或者溃疡，肉芽组织增生，息肉、纤维化。

1.6 统计学方法
经SPASS软件21.0版分析，比较了治疗前后腹泻次数，干细胞治疗组与药物治
疗组治疗缓解后3，6，14 个月的随访腹泻次数，分析数据服从正态分布和方差齐(α=0.1检验水准)，治疗前后比较和细胞治疗与药物治疗比较结果均显示
P<0.05(α=0.05检验水准)，差异有统计学意义。

经过规范化的细胞和药物治疗3 个月后，细胞治疗组5 例达完全缓解，药物治疗
组6 例达完全缓解，缓解率64.7%；细胞治疗组2 例有效，药物治疗组3 例有效，有效率29.4%；药物治疗组1 例无效，无效率5.9%。

随访3～14 个月，干细胞
治疗组5 例中无一例复发，另2 例症状无加重。

药物治疗组9 例中3 例早期复发
再次治疗，另4 例分别在第3，5，10个月再次复发，复发率77.8%。

细胞与药
物治疗前腹泻次数为每天(7.72±3.12)次，治疗后为每天(2.48±1.55) 次，治疗前
后比较，差异有统计学意义(P<0.001)。

本组17 例病程均持续超过5 年，病理学检查显示黏膜固有层弥漫性慢性炎细胞、中性粒细胞及淋巴细胞浸润，隐窝炎性改变，腺体变形、数量减少，黏膜糜烂、溃疡、脱落(见图1、图2)。

经内镜检查结肠黏膜充血、水肿、细颗粒状，脓性渗出、出血，弥漫性糜烂、溃疡等(见图3、图4)。

经细胞治疗和规范药物治疗后症状基
本缓解，腹泻次数由治疗前的每天(72±3.12) 次降低到治疗后的(2.48±1.55) 次。

其中干细胞治疗组更为明显，治疗前每天(10.07±1.97) 次，治疗后为每天
(2.23±0.90) 次。

规范化药物治疗组治疗前每天(6.08±2.69) 次，治疗后为每天(2.66±1.85) 次。

1 个月后细胞治疗组患者经内镜复检可见结肠黏膜脓性渗出及出血症状明显改善，肠壁轻度水肿(见图5，图6)。

2 个月后细胞治疗组患者经内镜
复检可见肠壁水肿消退(见图7，图8)。

随访3～14 个月发现，细胞治疗组症状较稳定，药物治疗组症状有明显复发或加重。

由此可见，细胞治疗较规范化药物治疗有更好的稳定性。

Amati等[4]研究认为机体免疫系统功能异常是引起溃疡性结肠炎最重要原因。

有
研究证明[5]抑郁分数高的人局部或系统免疫功能低下，发生溃疡性结肠炎的比例
明显增高。

徐艳华等[6]研究证明，发生溃疡性结肠炎的肠段黏膜固有层内白介素(IL)-1β，IL-6，IL-8，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)明显高于正常水平。

目前已经有研
究证实，大部分UC患者血清中存在抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)[7]。

综上可见，局部或系统免疫功能异常是溃疡性结肠炎发生发展的重要原因。

MSCs的局部免疫
调节和黏膜修复功能是治疗溃疡性结肠炎的关键[8]。

病变段肠黏膜内免疫功能异常促使了溃疡
性结肠炎的发生与发展。

研究表明，局部免疫发生异常后，局部内皮细胞和巨噬细胞释放细胞因子增多，在趋化因子作用下炎性细胞浸润。

浸润的炎性细胞释放细胞因子再次趋化炎性细胞浸润和活化，最终导致炎症发生，并成瀑布式放大[9]。

IL-6是广泛促炎性细胞因子，可以促进B，T细胞活化与增殖，促进免疫球蛋白合成和细胞毒性T细胞反应。

IL-8是中性粒细胞强有力的活化和趋化因子[10]。

MSCs 可以通过直接细胞接触或释放可溶性细胞因子间接调节局部微环境中DC成熟，抑制DC向成熟转化，降低其抗原递呈能力。

MSCs可以抑制B细胞增殖和活化，研究表明MSCs与B细胞共培养后，B细胞表面标记分子CXCR4，CXCR5和CXCR7表达显著降低，并且对CXCL12，CXCL13的趋化性降低[11]。

MSCs可以通过多重作用机制抑制T细胞增殖，通过改变调节性Th1/Th2细胞比例，抑制效应T细胞活化和细胞毒T细胞作用，从而抑制了相关细胞因子(如IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-ɑ)释放，抑制局部炎症反应发生[12-14]。

通过对细胞治疗组多次结肠镜复查，MSCs治疗后局部炎症反应明显降低，溃疡面呈瘢痕修复，黏膜覆盖，隐窝处炎症消失。

病理检查显示慢性炎症细胞减少[15]。

由此可见，MSCs治疗UC 是最为理想的治疗方法，并且可以获得较长时间的稳定期，截至目前，国内外有关MSC治疗溃疡性结肠炎的实验性研究有关报道不在少数，但是有关临床性试验的MSC移植治疗溃疡性结肠炎的报道并不多。

我院率先开展利用MSC治疗溃疡性结肠炎尚处于探索阶段，还存在治疗例数较少、随访时间短、代表性差等诸多方面的不足。

尽管短期内未曾发现有与治疗相关不良反应，但是仍然需要更多同仁的验证和大量、随机、多中心的临床试验和更长期的随访观察来证实其治疗的有效性、安全性和可靠性。

【相关文献】
[1]陈隆典，欧阳建，张晓琦，等.自体干细胞移植治疗难治性炎症性肠病 10 例回顾与随访[J].中华
消化杂志，2008，28(7)：476-479.
[2]段进粮.骨髓间充质干细胞移植治疗溃疡性结肠炎的实验研究[D].广州：广州医学院，2006：45-46.
[3]中华医学会消化病学分会炎症性肠病协作组.对我国炎症性肠病诊断治疗规范的共识意见[J].胃肠病学，2007(12)：488-495.
[4]Amati L，Caradonna L，Jirillo E，et al.Immunological disorders in inflammatory bowel disease and immunotherapeutic implications[J].Ital J Gastroenterol Hepatol，1999，31(4)：313-325.
[5]薛如意，张顺财.造血干细胞移植治疗炎症性肠病进展[J].国际消化杂志，2007，27(3)：162-166.
[6]徐艳华，丁建伟，陈晓云，等.间充质干细胞移植促进炎症性肠病肠道组织修复的研究进展[J].重庆医学，2011，40(3)：293-295.
[7]江学良，孙自勤，权启镇，等.非清髓脐带血干细胞治疗激素抵抗型溃疡性结肠炎[J].中华消化杂志，2009(29)：47.
[8]桑力轩，刘汉立，姜敏.溃疡性结肠炎发病机制研究进展[J].世界华人消化杂志，2007，15(20)：2 249-2 254.
[9]Rutgeerts P，Van Assche G，Vermeire S.Review article：Infl iximab therapy for infl ammatory boweldisease-seven years on[J].Aliment Pharmacol Ther，2006，23(4)：451-463.
[10]Lichtenstein G R，Abreu M T，Cohen R，et al.American gastroen terologicalAssociation Institute technical review on corticosteroids，immunomodulators，and infliximab in inflammatory bowel disease[J].Gastroenterology，2006，130(3)：940-987.
[11]张承韶，杨利民，张其亮，等.大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及生物学特性[J].山东医药，2007，47(5)：26-27.
[12]邬振国.中西药结合治疗慢性溃疡性结肠炎 32 例临床分析[J].吉林医学，2011，32(23)：4 804.
[13]陈隆典，欧阳建，张晓琦，等.自体干细胞移植治疗难治性炎症性肠病 10 例回顾与随访[J].中华消化杂志，2008，28(7)：476-479.
[14]Papp M，Norman G L，Altorjay I，et al.Utility of serological markers in inflammatory bowel diseases：gadget or magic?[J].World J Gastroenterol，2007，13(14)：2 028-2 036.
[15]谢硕，李建军.四神丸超微颗粒剂保留灌肠治疗中度溃疡性结肠炎脾肾阳虚证 58 例[J].中国中医药现代远程教育，2010，8(15)：17-19.。