怎样正确制作定量分析的标准曲线
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这里“相当的浓度”是指标准管的实际含量经换 算所对应的样本浓度 (未稀释)。 换算系数依照样本 溶液的稀释倍数与报告单位而定。 如血清总蛋白定
量测定 (Fo lin2酚试剂法) 中, 蛋白标准液浓度为 0. 2m g mL , 血清稀释 500 倍, 报告单位为 g dL , 则换 算系数= 100×500÷1000, 下表显示各标准管蛋白 质的实际含量与“相当的浓度”。
(2) 制作标准曲线时, 应选择操作技术熟练的技 术人员, 每个浓度管最好平行作三只, 以便观察和分 析测定中的偶然误差。
(3) 每个标准管的实际浓度应在微量范围, 即 10- 4～ 10- 7g mL ; 测得 A 值应在分光光度计的有效 读数范围, 即 0. 05～ 0. 5 之间。
( 4) 各个标准管所“相当的浓度”应具有代表性 和观察意义, 其中应包含具有临床意义的变异最低 值和最高值, 如血清总蛋白含量为 6～ 8g dL。
将标准曲线中横坐标的实际含量换算为“相当
的浓度”, 是对浓度单位的二次定义。这样, 以样本管
读数 (A 值) 查找标准曲线求得试样含量的过程就变 得更加直观和便捷。
(5) 对标准曲线要经常用已知浓度的试样通过
测定加以核对, 发现标准曲线不准时, 要重新制作。
采用直接对比法, 即在相同条件下分别测得A 样 和 A 标, 然后按下列公式计算出试样含量:
α 收稿日期: 2000- 10- 08 作者简介: 管 斌 (1957- ) , 男, 湖北武汉人, 副教授。
·64·
江汉大学学报 (医学版) 第 30 卷
的交点均匀分布在直线两侧。
(7) 实际的标准曲线可能引进了恒定偏差, 其直 线方程式为:
A = a+ K C
其中 a 是直线在 A 轴上的截距 (表示恒定偏
1 标准曲线法的正确制作方法
(1) 事先按测定项目的要求和原理配制一系列 浓度不同的 (等差的) 标准溶液, 分别测定其吸光度, 然后以浓度 (C ) 为横坐标, 以吸光度 (A ) 为纵坐标, 绘成标准曲线。 以后测定试样时, 忽需作标准管, 在 相同条件下直接测定样本管的吸光度, 即可从标准 曲线上查得试样溶液的浓度。
(上接 62 页)
[ 17 ] Bohnen JM A , So lom k in J S, D ellinger EP, et al. Guidelines fo r clin ical care: an ti2infective agen ts fo r in tra2abdom inal infection [J ]. A rch Surg, 1992, 127:
紫外—可见分光光度法主要应用于定量分析方 面。 物质定量分析的基础是 L am bert2B eer 定律, 即 溶液中溶质的吸光度 (A ) 与溶质的浓度 (C )、液层的 厚度 (L ) 成正比。 在使用紫外—可见分光光度法进 行定量分析时, 常采用标准曲线法。标准曲线法具有 简化重复操作、确定该项分析的浓度范围、避免系统 误差等优点, 正确制作标准曲线是保证检测质量的 关键。
蛋白质标准液 (mL ) 蛋白质实际含量 (m g) 测得吸光度 (A 值) 相当的浓度 (g dL )
试管编号 123456 0 0. 2 0. 4 0. 6 0. 8 1. 0 0 0. 04 0. 08 0. 12 0. 16 0. 20 调零 0. 09 0. 18 0. 27 0. 36 0. 45 0 2 4 6 8 10
(3) 标准曲线的原始制图上, 要记载被测物质的 名称、制作者的姓名、制作日期及所用仪器的编号, 以便查对。
标准曲线法是生物化学定量分析的常用方法之 一, 但往往由于操作者缺乏必要的质量控制知识而 出现较大的实验误差。 本作者总结在生物化学实验 室工作的经验和教训, 尝试全面阐述标准曲线制作 的要领, 旨在有效提高生物化学定量分析的准确度 和精密度。
∑-
-
(C - C ) (A - A )
K=
∑(C - C ) 2
=∑CBiblioteka -∑C ·∑An
∑ ( C ) 2
∑C 2-
n
-
∑ -
A
∑C
a= A - K C = n - K n
2 注意事项
(1) 对试样测定时, 所用试剂批号与制备曲线时 不同, 要重新制作标准曲线。 (2) 对试样测定时, 要使用该项标准曲线制备时所应 用的分光光度计, 否则会引进仪器测量误差。
1标准曲线法的正确制作方法1事先按测定项目的要求和原理配制一系列浓度不同的等差的标准溶液分别测定其吸光度然后以浓度c为横坐标以吸光度a为纵坐标绘成标准曲线
第 30 卷第 1 期 2002 年 3 月
·医学教育·
江汉大学学报 (医学版)
Journa l of J ianghan Un iversity (M ed ica l Ed ition)
Vol. 30 No. 1 M ar. 2002
怎样正确制作定量分析的标准曲线
管 斌
(江汉大学 医学与生命科学学院生物化学教研室, 湖北 武汉 430016)
关键词: 定量分析; 标准曲线
α
中图分类号: Q 5- 3 文献标识码: B 文章编号: 1009- 1777 (2002) 01- 0063- 02
83. [ 18 ] Schein M , A ssalia A , B achus H. M in im al an tibio tic
h terapy after em ergency abdom inal surgery: a gro spective study[J ]. B r surg, 1994, 81: 989.
差) ; K 是直线斜率 (吸光系数、相关系数)。
得出标准曲线的实验数据后, 曲线的位置最好
用回归分析法进行确定, 以防用目视主观划线法可
能出现的偏差。回归分析的过程就是根据A 和 C 的
统计数求常数 a 和 K 值的过程。只要求得 a 和 K 的
数值, 直线方程式就被确定。
在直线方程式A = a+ K C 中
C 样 (m g 或 g
dL
)
=
A A
样 ·C 标·V
标
标 · 100 ×试样稀释
V样
倍数
(6) 理想的标准曲线完全遵循B eer 定律:
A = KC 其中 K 为直线斜率 (或吸光系数)。 目视主观划线法简便易行, 但可能造成曲线位
置偏差, 其基本规则是: 纵坐标 (A ) 与横坐标 (C ) 的 最大值取格应大致相等, 使直线斜率接近 45°(K≈ 1) ; 直线从原点出发, 通过尽可能多的交点或使离散
量测定 (Fo lin2酚试剂法) 中, 蛋白标准液浓度为 0. 2m g mL , 血清稀释 500 倍, 报告单位为 g dL , 则换 算系数= 100×500÷1000, 下表显示各标准管蛋白 质的实际含量与“相当的浓度”。
(2) 制作标准曲线时, 应选择操作技术熟练的技 术人员, 每个浓度管最好平行作三只, 以便观察和分 析测定中的偶然误差。
(3) 每个标准管的实际浓度应在微量范围, 即 10- 4～ 10- 7g mL ; 测得 A 值应在分光光度计的有效 读数范围, 即 0. 05～ 0. 5 之间。
( 4) 各个标准管所“相当的浓度”应具有代表性 和观察意义, 其中应包含具有临床意义的变异最低 值和最高值, 如血清总蛋白含量为 6～ 8g dL。
将标准曲线中横坐标的实际含量换算为“相当
的浓度”, 是对浓度单位的二次定义。这样, 以样本管
读数 (A 值) 查找标准曲线求得试样含量的过程就变 得更加直观和便捷。
(5) 对标准曲线要经常用已知浓度的试样通过
测定加以核对, 发现标准曲线不准时, 要重新制作。
采用直接对比法, 即在相同条件下分别测得A 样 和 A 标, 然后按下列公式计算出试样含量:
α 收稿日期: 2000- 10- 08 作者简介: 管 斌 (1957- ) , 男, 湖北武汉人, 副教授。
·64·
江汉大学学报 (医学版) 第 30 卷
的交点均匀分布在直线两侧。
(7) 实际的标准曲线可能引进了恒定偏差, 其直 线方程式为:
A = a+ K C
其中 a 是直线在 A 轴上的截距 (表示恒定偏
1 标准曲线法的正确制作方法
(1) 事先按测定项目的要求和原理配制一系列 浓度不同的 (等差的) 标准溶液, 分别测定其吸光度, 然后以浓度 (C ) 为横坐标, 以吸光度 (A ) 为纵坐标, 绘成标准曲线。 以后测定试样时, 忽需作标准管, 在 相同条件下直接测定样本管的吸光度, 即可从标准 曲线上查得试样溶液的浓度。
(上接 62 页)
[ 17 ] Bohnen JM A , So lom k in J S, D ellinger EP, et al. Guidelines fo r clin ical care: an ti2infective agen ts fo r in tra2abdom inal infection [J ]. A rch Surg, 1992, 127:
紫外—可见分光光度法主要应用于定量分析方 面。 物质定量分析的基础是 L am bert2B eer 定律, 即 溶液中溶质的吸光度 (A ) 与溶质的浓度 (C )、液层的 厚度 (L ) 成正比。 在使用紫外—可见分光光度法进 行定量分析时, 常采用标准曲线法。标准曲线法具有 简化重复操作、确定该项分析的浓度范围、避免系统 误差等优点, 正确制作标准曲线是保证检测质量的 关键。
蛋白质标准液 (mL ) 蛋白质实际含量 (m g) 测得吸光度 (A 值) 相当的浓度 (g dL )
试管编号 123456 0 0. 2 0. 4 0. 6 0. 8 1. 0 0 0. 04 0. 08 0. 12 0. 16 0. 20 调零 0. 09 0. 18 0. 27 0. 36 0. 45 0 2 4 6 8 10
(3) 标准曲线的原始制图上, 要记载被测物质的 名称、制作者的姓名、制作日期及所用仪器的编号, 以便查对。
标准曲线法是生物化学定量分析的常用方法之 一, 但往往由于操作者缺乏必要的质量控制知识而 出现较大的实验误差。 本作者总结在生物化学实验 室工作的经验和教训, 尝试全面阐述标准曲线制作 的要领, 旨在有效提高生物化学定量分析的准确度 和精密度。
∑-
-
(C - C ) (A - A )
K=
∑(C - C ) 2
=∑CBiblioteka -∑C ·∑An
∑ ( C ) 2
∑C 2-
n
-
∑ -
A
∑C
a= A - K C = n - K n
2 注意事项
(1) 对试样测定时, 所用试剂批号与制备曲线时 不同, 要重新制作标准曲线。 (2) 对试样测定时, 要使用该项标准曲线制备时所应 用的分光光度计, 否则会引进仪器测量误差。
1标准曲线法的正确制作方法1事先按测定项目的要求和原理配制一系列浓度不同的等差的标准溶液分别测定其吸光度然后以浓度c为横坐标以吸光度a为纵坐标绘成标准曲线
第 30 卷第 1 期 2002 年 3 月
·医学教育·
江汉大学学报 (医学版)
Journa l of J ianghan Un iversity (M ed ica l Ed ition)
Vol. 30 No. 1 M ar. 2002
怎样正确制作定量分析的标准曲线
管 斌
(江汉大学 医学与生命科学学院生物化学教研室, 湖北 武汉 430016)
关键词: 定量分析; 标准曲线
α
中图分类号: Q 5- 3 文献标识码: B 文章编号: 1009- 1777 (2002) 01- 0063- 02
83. [ 18 ] Schein M , A ssalia A , B achus H. M in im al an tibio tic
h terapy after em ergency abdom inal surgery: a gro spective study[J ]. B r surg, 1994, 81: 989.
差) ; K 是直线斜率 (吸光系数、相关系数)。
得出标准曲线的实验数据后, 曲线的位置最好
用回归分析法进行确定, 以防用目视主观划线法可
能出现的偏差。回归分析的过程就是根据A 和 C 的
统计数求常数 a 和 K 值的过程。只要求得 a 和 K 的
数值, 直线方程式就被确定。
在直线方程式A = a+ K C 中
C 样 (m g 或 g
dL
)
=
A A
样 ·C 标·V
标
标 · 100 ×试样稀释
V样
倍数
(6) 理想的标准曲线完全遵循B eer 定律:
A = KC 其中 K 为直线斜率 (或吸光系数)。 目视主观划线法简便易行, 但可能造成曲线位
置偏差, 其基本规则是: 纵坐标 (A ) 与横坐标 (C ) 的 最大值取格应大致相等, 使直线斜率接近 45°(K≈ 1) ; 直线从原点出发, 通过尽可能多的交点或使离散