Cyr61在结肠癌血管生成中的作用及临床意义

Cyr61在结肠癌血管生成中的作用及临床意义
唐琼兰;李海刚;沈溪明;何欣欣;曾韵洁;肖治宇
【摘要】目的研究Cyr61蛋白在人结肠癌血管生成中的作用及临床意义.方法采用免疫组织化学染色法检测人结肠癌肿瘤组织中Cyr61、VEGF和VEGFR2的表达情况,用CD34单克隆抗体标记血管内皮细胞,并计算肿瘤微血管密度(MVD),用SPSS10.0软件分析Cyr61与VEGF、VEGFR2及肿瘤MVD的相关性.结果(1)Cyr61、VEGF及VEGFR2在50例人结肠癌肿瘤组织中阳性表达率分别为90.0%、70.0%和60.0%,明显高于正常结肠组织
(P=0.002,P=0.000,P=0.001);(2)Cyr61、VEGFR和VEGFR2蛋白阳性表达组微血管密度较阴性表达组高(P＜0.05);(3)与临床Ⅰ～Ⅱ期或无淋巴结转移病例比较,临床Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴结转移的病例Cyr61、VEGF和VEGFR2蛋白表达率较高(P＜0.05),Cyr61表达与临床分期和淋巴结转移呈正相关
(r=0.333,r=0.308,P=0.018,P=0.030);(4)Cyr61蛋白表达与VEGF和VEGFR2的表达呈正相关(r=0.364,r=0.408,P=0.009,P=0.003).结论 Cyr61可促进结肠癌肿瘤血管生成,其作用机制可能与VEGF/VEGFR2通路有关.
【期刊名称】《岭南现代临床外科》
【年(卷),期】2010(010)004
【总页数】4页(P245-248)
【关键词】结肠癌;富含半胱氨酸61;血管生成
【作者】唐琼兰;李海刚;沈溪明;何欣欣;曾韵洁;肖治宇
【作者单位】510120,广东广州,中山大学孙逸仙纪念医院病理科;510120,广东广州,中山大学孙逸仙纪念医院病理科;510120,广东广州,中山大学孙逸仙纪念医院病理科;510120,广东广州,中山大学孙逸仙纪念医院病理科;510120,广东广州,中山大学
孙逸仙纪念医院病理科;510120,广东广州,中山大学孙逸仙纪念医院普外科
【正文语种】中文
【中图分类】R735.3
结肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，近年来其发病率呈上升趋势。

结肠癌的发生、发展有多因素参与［1－2］。

研究发现结肠癌肿瘤组织中富含半胱氨酸61（cysteine rich 61，Cyr61）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达上调［3－4］。

近年来，Cyr61在肿瘤血管生成中
的重要作用备受关注。

众所周知，VEGF在肿瘤血管生成中处于核心地位，是目前已知活性最强、专属性最高的血管生成因子。

在前期工作基础上，本研究采用免疫组织化学染色法对50例人结肠癌肿瘤组织进行Cyr61、VEGF和血管内皮生长因
子受体2（vascular endothelial growth factor recePtor 2，VEGFR2）表达的
检测，并分析Cyr61与VEGF、VEGFR2及肿瘤微血管密度（microvessel density，MVD）的相关性，旨在探讨Cyr61在人结肠癌血管生成中的作用及临
床意义。

1 材料和方法
1.1 一般资料
收集中山大学孙逸仙纪念医院病理科2005年1月～12月诊断的临床病理资料完
整的结肠癌50例。

肿瘤组织学类型、分化程度及临床分期根据WHO关于结直肠肿瘤分类（2008）［5］进行。

本组病例平均年龄58岁（26－81岁），男性30例，女性20例。

所有患者术前均未接受化疗、放疗或其它针对肿瘤的治疗，术后病理诊断均为结肠腺癌，其中高、中分化35例，低、未分化15例。

Ⅰ期14例，ⅡA期10例，ⅡB期1例，ⅢA
期6例，ⅢB期10例，ⅢC期3例，ⅣA期5例，ⅣB期1例。

淋巴结转移23例。

10例正常结肠组织为对照。

1.2 实验试剂
Cyr61兔抗人多克隆抗体（SC-13100）和VEGFR2鼠抗人单克隆抗体（SC-6251）均购自Santa Cruz Biotech公司；VEGF（ZM-0265）和链亲和素－过氧化物酶（streptavidin-biotin immunoperoxidase，SP）试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司；CD34（GM716510）购自上海基因有限公司。

1.3 免疫组织化学染色及结果判断
采用SP法。

Cyr61、VEGF、VEGFR2和CD34的工作稀释度分别为1∶600、
1∶100、1∶500和1∶50。

抗原修复方法参照试剂说明书进行。

以乳腺浸润性导管癌组织为阳性对照，以PBS代替第一抗体作为空白对照。

Cyr61、VEGF和VEGFR2以胞质呈棕黄色为阳性，CD34以血管内皮细胞的细胞膜棕黄色为阳性。

每一种标记的阳性细胞数＞25%为阳性（＋），阳性细胞数≤25%为阴性（－）。

参照文献［6］介绍方法对CD34染色切片进行观察，计算MVD。

1.4 统计学方法
采用SPSS10.0统计软件。

两均数比较用t检验，两率比较用χ2检验，相关性分
析用spearman等级相关分析方法，当P＜0.05时有统计学意义。

2 结果
50例人结肠癌肿瘤细胞中，Cyr61、VEGF和VEGFR2的阳性率分别为90.0%、70.0%和60.0%（图1），与正常结肠组织比较，χ2分别为9.600、16.800和12.000，P值分别为0.002、0.000和0.001，差异具有统计学意义（表1）。

结
果说明：人结肠癌肿瘤组织中，Cyr61、VEGF和VEGFR2表达明显高于正常结肠组织。

图1 结肠癌肿瘤组织中Cyr61、VEGF、VEGFR2及CD34的表达
SPX200A.Cyr61；B.VEGF；C.VEGFR2；D.CD34
表1 Cyr61、VEGF及VEGFR2在肿瘤组织及正常结肠组织中的表达?
2.1Cyr61、VEGF和VEGFR2表达与肿瘤微血管密度的关系
所有人结肠癌肿瘤组织中均有CD34标记阳性的血管，平均MVD为26.752。

Cyr61蛋白阳性表达组微血管密度最低为8.5，最高为70.8，平均值（mean±SD）为27.986±12.8，Cyr61蛋白阴性表达组微血管密度最低为5.6，最高为34.2，
平均值（mean±SD）为15.635±11.3，两组比较，t＝2.066，P＜0.05，差异具
有显著性，说明Cyr61蛋白表达水平高者微血管密度。

VEGF蛋白阳性表达组微血管密度最低为3.2，最高为70.8，平均值（mean±SD）为30.255± 8.9，与VEGF蛋白阴性表达组（18.597±7.3）比较，t＝4.463，P＜0.001，差异具有显著性；VEGFR2蛋白阳性表达组微血管密度最低为9.5，最高
为70.8，平均值（mean±SD）为31.238±5.1，与VEGFR2蛋白阴性表达组（20.024±6.4）比较，t＝4.463，P＜0.001，差异具有显著性，说明VEGF和VEGFR2阳性表达病例肿瘤MVD高。

2.2Cyr61、VEGF和VEGFR2的表达与结肠癌临床病理特征的关系
35例高、中分化结肠癌病例Cyr61、VEGF和VEGFR2的阳性表达率分别为
85.7%、57.1%和42.9%，15例低、未分化结肠癌病例均表达Cyr61、VEGF和VEGFR2蛋白，两组比较，χ2分别为2.381、9.184和和14.286，P值分别为
0.123、0.002和0.000。

结果显示：Cyr61的表达与分化程度无关，而低、未分
化结肠癌肿瘤组织中VEGF和VEGFR2在的表达阳性率显著高于高、中分化结肠癌，VEGF和VEGFR2的表达与细胞分化程度有关。

临床Ⅰ～Ⅱ期病例Cyr61、VEGF和VEGFR2的阳性率分别为80.0%、40.0%和32.0%，Ⅲ～Ⅳ期病例阳性率分别为100.0%、100.0%和88.9%，两两比较，χ2分别为5.556、21.429和16.333，P值分别为0.018、0.000和0.000，差异具有统计学意义。

结果提示：Cyr61、VEGF和VEGFR2表达与结肠癌的临床分期有关，分期愈晚，Cyr61、VEGF和VEGFR2阳性表达率愈高。

23例伴有淋巴结转移的病例均表达Cyr61和VEGF，87.0%（20／23）的病例表达VEGFR2，与无淋巴结转移组比较，P值均小于0.05，说明Cyr61、VEGF和VEGFR2表达与结肠癌的淋巴结转移有关。

2.3Cyr61与VEGF、VEGFR2的关系
在阳性表达Cyr61蛋白的人结肠癌肿瘤组织中，VEGF和VEGFR2的阳性表达率分别为75.6%和66.7%，与Cyr61蛋白阴性表达组比较，χ2分别为6.614和8.333，P值分别为0.010和0.004，差异具有显著性；VEGF蛋白阳性表达组VEGFR2的阳性表达率为74.3%，与VEGF蛋白阴性表达组比较，χ2＝9.921，P ＝0.002具有统计学意义。

用spearman等级相关分析Cyr61蛋白表达与VEGF、VEGFR2表达、细胞分化程度、临床分期和淋巴结转移的相关性，r分别为0.364、0.408、0.218、0.333和0.308，P值分别为0.009、0.003、0.128、0.018和0.030，结果也证明
Cyr61蛋白表达与VEGF、VEGFR2表达、临床分期和淋巴结转移呈正相关。

用spearman等级相关分析VEGF蛋白表达与VEGFR2、细胞分化程度、临床分期和淋巴结转移的相关性，r分别为0.445、0.429、0.655和0.604，P值分别为0.001、0.002、0.000和0.000。

VEGFR2与细胞分化程度、临床分期和淋巴结转移的相关性分析，r分别为0.535、0.572和0.508，P值均为0.000。

结果表明VEGF和VEGFR2表达与人结肠癌肿瘤细胞分化程度、临床分期和淋巴结转移呈正相关。

3 讨论
Cyr61基因属于CCN家族成员，是一个重要的信号传导因子，主要参与调控细胞增殖、转化、粘附和迁移及诱导血管生成［7］。

近年来，Cyr61基因在各种恶性肿瘤中的作用已成为国内外研究的热点之一，在肿瘤的发生发展过程中，Cyr61
基因主要与肿瘤细胞的增殖、转化和迁移以及肿瘤细胞的生长调节及血管形成有关［8］。

研究结果发现，Cyr61和VEGF及其受体VEGFR2（KDR）在结肠癌肿瘤组织中广泛表达［3－4，9］。

结果提示：Cyr61表达上调可能是结肠癌发生的重要分子事件。

因此，Cyr61基因在结肠癌中发生和发展中的作用机制值得我们进
一步研究。

目前发现Cyr61基因参与血管形成的可能机制为：（1）Cyr61直接促进血管内皮细胞增殖和新生血管形成［10］；（2）Cyr61通过与整合素αⅤβ3结合促进内
皮细胞粘附、迁移、增殖和新生血管形成［11］；（3）Cyr61与VEGF相互调控，并通过VGEF／VEGFR2信号通路促进肿瘤血管形成及微血管密度增加，VEGF和VEGFR2结合并激活后将细胞膜／细胞质激酶级联反应信号传递到细胞核内，进而引起内皮细胞的一系列变化，包括内皮细胞粘附、迁移、增殖、存活，最终导致新生血管形成［12－13］。

本研究在对50例结肠癌的研究中发现：结肠癌肿瘤组织中Cyr61、VEGF和VEGFR2阳性表达率高，而正常结肠组织呈阴性或极少数细胞表达。

Cyr61蛋白阳性表达组VEGF和VEGFR2的阳性表达率分别为75.6%和66.7%，Cyr61蛋白表达与VEGF和VEGFR2的表达呈正相关（r＝0.364和0.408，P＝0.009和
0.003），结果表明Cyr61与VEGF／VEGFR2信号通路有关。

同时研究发现，Cyr61、VEGFR和VEGFR2蛋白阳性表达组微血管密度较对照组高，差异具有显
著性。

上述结果显示：Cyr61可促进结肠癌肿瘤血管生成，其作用机制可能与VEGF／VEGFR2通路有关。

以肿瘤血管内皮细胞为靶点抑制肿瘤血管生成从而阻断肿瘤血液供应已成为当前抗肿瘤生长和转移的研究热点，其中VEGF／VEGFR2信号转导通路在肿瘤血管生成起主要作用，阻断该信号通路，能够抑制实体瘤的生长和转移［14］。

因此，采用多种分子生物学方法深入研究Cyr61在结肠癌新生血管形成中的分子机制，将为开发血管生成抑制剂治疗提供新的思路和手段。

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