发酵工艺学实验指导
发酵食品与酿造工艺学实验指导
发酵与酿造食品工艺学实验指导书食品科学与工程实验室徐君飞实验一腐乳的加工1、实验目的1.1 掌握豆腐乳发酵的工艺过程。
1.2 观察豆腐乳发酵过程中的变化。
2、原理豆腐乳是我国独特的传统发酵食品，是用豆腐发酵制成。
民间老法生产豆腐乳均为自然发酵，现代酿造厂多采用蛋白酶活性高的鲁氏毛霉或根霉发酵。
豆腐坯上接种毛霉，经过培养繁殖，分泌蛋白酶、淀粉酶、谷氨酰胺酶等复杂酶系，在长时间后发酵中与腌坯调料中的酶系、酵母、细菌等协同作用，使腐乳坯蛋白质缓慢水解，生成多种氨基酸，加之由微生物代谢产生的各种有机酸与醇类作用生成酯，形成细腻、鲜香的豆腐乳特色。
早在公元5世纪的北魏古籍中，就有关于腐乳生产工艺的记载“于豆腐加盐成熟后为腐乳”。
明李晔的《蓬栊夜话》亦云：“黟（移）县人喜于夏秋间醢腐，令变色生毛随拭之，俟稍干……”。
千百年来，腐乳一直受到人们的喜爱。
这是因为经过微生物的发酵，豆腐中的蛋白质被分解成小分子的肽和氨基酸，味道鲜美，易于消化吸收，而腐乳本身又便于保存。
腐乳品种多样，如红豆腐乳、糟腐乳、醉方、玫瑰红腐乳、辣腐乳、臭腐乳、麻辣腐乳等。
品种虽多，但酿造原理相同。
发酵豆制品营养丰富，易于消化，在发酵过程中生成大量的低聚肽类，具有抗衰老、防癌症、降血脂、调节胰岛素等多种生理保健功能，对身体健康十分有利。
具有降低血液中胆固醇浓度、减少患冠心病危险的功能。
发酵豆制品中含有丰富的苷元型异黄酮，它是大豆和豆腐中原有的异黄酮经发酵转化的，但比原有的异黄酮功能性更强，且更易吸收。
60克豆豉、60克豆酱或100克腐乳就含有50毫克的高活性异黄酮，达到美国食品与药物管理局推荐预防冠心病的每日摄取量。
具有降血压功能。
国外已经用大豆蛋白化学分解的办法生产降血压肽的保健食品，我们的实验发现中国的传统豆豉、腐乳就含有高活性的降血压肽。
其实大豆在发酵时，微生物要首先把大豆蛋白分解为更小的分子，这就是所谓的肽。
具有预防骨质疏松症功能。
发酵食品工艺六大实验
发酵食品工艺六大实验引言发酵是一种利用微生物代谢产物来改变食品性质的传统食品加工方法，已经在人类的饮食中存在了几千年。
通过发酵，食品中的一些成分会发生转化，从而产生出独特的风味、口感和营养特性。
发酵食品工艺的实验是研究发酵过程中微生物活性以及对食品品质的影响的重要方法。
本文将介绍发酵食品工艺中的六个主要实验，包括酵母发酵实验、乳酸菌发酵实验、酸奶制作实验、豆豉制作实验、酱油酿造实验和葡萄酒酿造实验。
每个实验都将详细介绍所需材料、步骤和实验结果。
实验一：酵母发酵实验材料：•酵母•糖•水•发酵容器步骤：1.将一定量的酵母、糖和水混合在发酵容器中。
2.将发酵容器密封，并放置在适宜的温度下。
3.观察发酵液中气泡的产生和发酵液的膨胀情况。
4.记录发酵时间和发酵液的味道特征。
实验结果：•发酵过程中，酵母会利用糖分解产生二氧化碳和乙醇。
•发酵液会产生气泡，并逐渐膨胀。
•发酵液会具有酒精味道。
实验二：乳酸菌发酵实验材料：•乳酸菌培养基•酸奶样品•培养皿步骤：1.将乳酸菌培养基倒入培养皿中。
2.从商业酸奶样品中取一定量涂抹在培养皿的表面。
3.将培养皿密封，放置在适宜的温度下。
4.观察培养皿中乳酸菌的生长情况。
5.记录乳酸菌生长的时间和培养皿中的酸奶味道特征。
实验结果：•培养皿中会出现白色或黄色的菌落。
•培养皿中的酸奶样品会发酵产生酸味。
实验三：酸奶制作实验材料：•牛奶•酸奶菌种•酸奶制作器步骤：1.将牛奶加热至80℃，然后快速冷却至40℃。
2.加入酸奶菌种到牛奶中，并充分搅拌均匀。
3.将混合好的牛奶和菌种倒入酸奶制作器中。
4.将酸奶制作器密封并放置在适宜的温度下，静置6-8小时。
5.取出制作好的酸奶，放入冰箱冷藏。
实验结果：•经过发酵，牛奶会变酸，具有酸奶的口感和酸味。
•酸奶中的乳酸菌有益于肠道健康。
实验四：豆豉制作实验材料：•黄豆•豆豉菌种•盐步骤：1.将黄豆浸泡在水中约8小时，然后将水倒掉。
2.锅中加入适量水，将黄豆煮熟。
2013-2014第一学期发酵工艺学实验指导书
2013-2014第一学期发酵工艺学实验指导书第一篇：2013-2014第一学期发酵工艺学实验指导书实验一酸奶的制作一、实验目的1.通过酸奶的制作，了解乳酸发酵的基本原理。
2.掌握酸奶的制作技术。
二、实验原理酸奶是鲜奶经过乳酸菌发酵而制成的乳制品，具备鲜奶的全部营养成分。
酸奶含有人体必需的蛋白质、脂肪、维生素、矿物质、乳糖酶和活性乳酸菌等。
酸奶是采用优质纯鲜牛奶加入白糖均质,经超高温灭菌后接入乳酸菌发酵后制成的一种发酵型乳制品。
在发酵过程中,鲜牛奶中的酪蛋白遇酸凝固,成为有弹性的凝块,颜色乳白、气味清香、酸甜可口,别具一番风味。
乳酸菌具有把奶类中的乳糖，分解成乳酸的功能，称为乳酸发酵。
在形成乳酸的同时也产生其他一些酸类物质，从而导致了PH 值的下降，当达到乳类蛋白质的等电点时（如牛奶蛋白质的等电点约在PH4.5 左右），引起蛋白质的沉淀，使原来流动性较大的乳类，因凝固作用而变成类似果冻的胶状物，称之为“凝乳”。
三、实验试剂与器皿1.菌种：嗜热乳酸链球菌、保加利亚乳酸杆菌，乳酸菌种也可以从市场销售的各种新鲜酸乳或酸乳饮料中分离；2.培养基：脱脂乳粉或全脂乳粉、鲜牛奶、蔗糖；3.恒温水溶锅、酸度计、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、培养箱、酸乳瓶(200～280mL)、培养皿、试管、300mL三角瓶。
四、实验方法与步骤1．酸奶的制作1.1将1%-2% 脱脂乳于80～85℃ 灭菌10～5min，同时加入5%--6%蔗糖，充分混合，然后冷却至35～40℃，作为制作饮料的培养基质。
1.2将纯种嗜热乳酸链球菌、保加利亚乳酸杆菌及两种菌的等量混合菌液作为发酵剂，均以2%～5%的接种量分别接入以上培养基质中即为饮料发酵液，亦可以市售鲜酸乳为发酵剂。
接种后摇匀，分装到已灭菌的酸乳瓶中，随后将瓶盖拧紧密封。
1.3把接种后的酸乳瓶置于40--42℃恒温箱中培养3～4h。
培养时注意观察，在出现凝乳后停止培养。
然后转入4～5℃的低温下冷藏24h以上。
食品发酵工艺学实验指导-15秋
《食品发酵工艺学实验》指导书食品科学与工程学院食品工程教研室2015年5月实验一 小型机械搅拌通风发酵罐的使用及操作演示一、实验目的1. 了解小型自控发酵罐的结构和工作原理。
2. 掌握小型自控发酵罐的操作及应用。
二、 实验原理发酵罐是为一个特定生化反应的操作提供良好而满意环境的容器，是工业发酵常用设备中最重要、应用最广泛的设备，是连接原料和产物的桥梁，也是多种学科的交叉点。
对于一个有价值的工业生产菌株，要尽快将其应用于工业生产中，为了掌握工业生产的实际情况，需要在实验室条件下对目的菌株进行小型发酵罐的扩大培养和目的产物生成量的实验，从而掌握该菌株的发酵参数和调控规律，更好的为工业生产服务。
实验室使用的小型发酵罐，其容积一般在500L 以下，一般5L 以下用耐压玻璃制作罐体，10L 以上用不锈钢制作罐体。
发酵罐配备有控制器和各种电极，可以自动调节试验所需的培养条件。
为了了解发酵过程中菌体的生长及对培养基的利用情况，需在发酵过程中定时的取样测定。
包括测定不同时期发酵所得菌体的生物量和发酵液中残留还原糖的变化。
三、实验内容（一）发酵罐系统结构组成介绍及操作演示现代化的发酵罐系统通常由罐体、控制系统、无菌空气产生系统和蒸汽1、发酵罐罐体机械部分和控制系统罐体机械部分及控制系统是发酵罐系统的主体部分。
发酵罐的罐体部分主要由罐体、搅拌器和挡板、消泡器、联轴器和轴承、空气分布装置、换热装置等构成。
（1）罐体图1 机械搅拌通风发酵罐罐体的机械结构示意图罐体由罐身、罐顶、罐底组成，罐身一般为圆柱体，中大型发酵罐罐顶、罐底多采用椭圆形或碟形封头通过焊接和罐身连接，小型发酵罐罐底一般也采用椭圆形或碟形封头通过焊接和罐身连接，罐顶却多采用平板盖和罐身用法兰连接。
为了便于清洗，小型发酵罐罐顶设有清洗用的手孔。
中、大型发酵罐则装设有快开人孔。
罐顶装有视镜及灯镜，进料管，补料管、排气管、接种管和压力表接管，排气管应尽可能靠近罐顶中心位置。
发酵食品工艺学实验指导书讲解
实验一腐乳制作一、实验目的1.理解和掌握腐乳的加工原理。
2.掌握腐乳的酿造过程和工艺要点。
二、实验原理豆腐乳是我国独特的传统发酵食品，是用豆腐发酵制成。
民间老法生产豆腐乳均为自然发酵，现代酿造厂多采用蛋白酶活性高的鲁氏毛霉或根霉发酵。
豆腐坯上接种毛霉，经过培养繁殖，分泌蛋白酶、淀粉酶、谷氨酰胺酶等复杂酶系，将豆腐中的有效物质分解，同时在长时间后发酵中与添加的辅料一起形成腐乳特有的色、香、位、体。
三、实验材料与设备1. 菌种：毛霉斜面菌种2.实验材料：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA），葡萄糖，纱布，无菌水，豆腐坯，红曲米，面曲，甜酒酿，白酒，黄酒，食盐等。
3.仪器和器具250mL三角瓶，接种针，小笼格，喷枪，小刀，带盖广口玻瓶，恒温培养箱，。
四、实验方法与步骤1.工艺流程毛霉斜面菌种→扩大培养→孢子悬浮液→豆腐坯→接种→培养→晾花→加盐→腌坯→装瓶→后熟→成品2.操作要点2.1孢子悬液制备（1）毛霉菌种的扩培：将毛霉菌种接入PDA斜面培养基，于25℃培养2-3d进行活化；将斜面菌种转接到盛有种子培养基的三角瓶中，于20-25℃培养6-7d，要求菌丝饱满、粗壮，孢子生长旺盛，备用。
种子培养基：取大豆粉与大米粉质量比为1:1混合，装入三角瓶中，料层厚度为1-2cm，加入5%水。
加纱布包口，0.1MPa灭菌30min。
（2）孢子悬液制备：于上述三角瓶中加入无菌水100mL，充分震摇，用无菌双层纱布过滤，滤渣倒回三角瓶，再加100mL无菌水洗涤1次，合并滤液于第一次滤液中，装入喷枪贮液瓶中供接种使用。
2.2 接种孢子用刀将豆腐坯划成4.1cm×4.1cm×1.6cm的块，将笼格经蒸汽消毒、冷却，用孢子悬液喷洒笼格内壁，然后把划块的豆腐坯均匀竖放在笼格内，块与块之间间隔2cm。
再用喷枪向豆腐块上喷洒孢子悬液，使每块豆腐周身沾上孢子悬液。
2.3培养与晾花将放有接种豆腐坯的笼格放入培养箱中，于20-25℃下培养，最高不能超过28℃。
发酵工程技术实验指导书
发酵工程技术实验指导书用课程：酵工程技术目录实验一酵母菌的分离和纯化 (1)实验二果酒制作及酒精度测定 (3)实验三乳酸菌的分离和鉴别 (6)实验四酸奶制作以及感官鉴评 (9)实验五土壤中产醋酸菌种的分离筛选 (11)实验六发酵型虾酱的生产实验及氨基酸态氮的测定 (13)实验一酵母菌的分离和纯化一、实验目的用酵母的生理生化和生态学特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
二、实验原理多数酵母菌为腐生，其生长最适pH为4.5～6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。
酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。
用酵母菌喜欢酸性环境的特点（酸性条件则可以抑制细菌的生长），常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液，然后在固体培养基上用划线法分离纯化。
三、实验材料及试剂1、成熟葡萄或苹果等果皮2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯（200 g）、葡萄糖（20 g）、琼脂（20 g）、蒸馏水（1000ml），分装三角瓶。
配制方法：1）先将马铃薯去皮，切片，称200 g并加蒸馏水1000ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至1000ml，制成20%的马铃薯汁。
（2）在20%的马铃薯汁中加入琼脂，煮沸溶化，加入葡萄糖，搅拌均匀，制成的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，补足水分。
（3）在115℃条件下高压灭菌20分种。
3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：料：马铃薯（200 g）、葡萄糖（20 g）、乳酸（5mL）、pH5.5、蒸馏水（1000mL），分装三角瓶。
4、0.1%美蓝染液：0.1g美蓝溶于100mL蒸馏水中。
5、生理盐水四、主要仪器设备压蒸汽灭菌器、天平、恒温培养箱、显微镜、酒精灯、电炉、1ml的无菌吸管、18*180mm试管、培养皿、接种针、载玻片、盖玻片、牛皮纸（报纸）、绳线、菜刀、案板、纱布、烧杯、玻璃棒、超净工作台等。
五、实验方法l、接种：取一小块果皮（不需冲洗），加入到盛装100mL无菌生理盐水的三角瓶中，充分搅拌后，用无菌移液管吸取1mL接入到9mL乳酸马铃薯葡萄糖培养液试管中，置28～30℃，培养24小时。
发酵工艺学实验
小曲酒制作1．实验目的：掌握小曲酒制作工艺技术的操作方法（先培菌糖化后投水发酵法）。
2．工艺特点：发酵前期是固态培菌，有利于根霉的生长和淀粉酶的形成，培菌糖化24 小时，使淀粉浓度降低，有利于酶促反应；后期为半固态发酵，时间约为7天，再蒸馏得成品。
3．实验材料：大米、曲母、不锈钢锅，蒸酒器。
4．工艺流程：大米——浸泡——蒸煮——冷却——接种——培菌——加水发酵——蒸馏——成品白酒。
5．操作要点：（1）大米——浸泡——蒸煮（2）将大米饭摊凉至36℃（3）加入米饭质量1%小曲粉，拌匀。
（4）入缸培菌，包的厚度10-13cm，中间挖一空洞，30-32℃保温培养，最高品温不超过40℃。
培养22h。
（5）发酵培养22h，糖化率70%。
加入原料量1.2倍的水，使糖分含量10%左右，总酸不超过0.7%。
发酵控制品温不超过36℃，发酵时间约7天,酒精含量达12%，残糖接近0，酒醅总酸不超过1.5%。
（6）蒸馏得小曲白酒，低温贮藏一年，勾兑配成成品酒。
干红葡萄酒酿造实验一．实验目的：掌握干红葡萄酒发酵工艺原理和操作技术。
二．实验材料：葡萄、葡萄酒干酵母、蔗糖、偏重亚硫酸钾（或亚硫酸钠），糖度计、pH试纸，不锈钢锅，三角瓶等。
三.工艺流程：葡萄——破碎——成分调整——发酵（加二氧化硫、干酵母）——压榨——后发酵——陈酿、澄清、调配、杀菌、包装——干红葡萄酒。
四．技术要点1、葡萄汁成分调整糖度调整为21，酸度调整为6g/L。
pH3.3——3.5，二氧化硫添加100ppm（偏重亚硫酸钾含二氧化硫57.6%，以50%计）。
2、葡萄酒干酵母添加0.1%干酵母。
3、发酵温度25℃左右发酵4——6天，残糖降至0.5%，渣下沉，过滤压榨。
4、后发酵添加二氧化硫30——50ppm，温度18——25℃，发酵。
5、过滤、澄清、热处理、，过虑、灌装、杀菌、瓶装、成品。
五、思考题1、二氧化硫在果酒酿造中的作用。
P1652、为什么要进行后发酵？P171豆酱的加工一．实验目的：掌握豆酱的发酵工艺原理和操作技术。
发酵工程实验指导
实验一淀粉酶生产菌的筛选一、实验目的学习淀粉酶产生菌的筛选方法。
二、实验原理淀粉酶在酿造、纺织、食品加工、医药等领域有广泛用途。
淀粉酶是一类淀粉水解酶的统称，它能将淀粉水解成糊精等小分子物质并进一步水解成麦芽糖或葡萄糖，淀粉被水解后，遇碘不再变蓝色，因此可根据淀粉培养基上透明圈的大小来判断所选菌株的淀粉酶活力。
三、实验用品1．样品淀粉含量丰富的土样。
2．培养基肉汤培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，加水至1000ml，pH7.0。
121℃灭菌20min。
初筛平板培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，可溶性淀粉2g，琼脂18g，加水至1000ml，pH7.4。
121℃灭菌20min。
Lugol碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml。
先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘溶解于碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水即可。
3．器材高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，电子天平，电炉，恒温振荡器，恒温培养箱；烧杯，量筒，三角瓶，培养皿，移液管，洗耳球，试管，试管架，接种针，涂布棒。
四、实验方法1．培养基制备：配制肉汤培养基45ml，分装于250ml三角瓶中，纱布封口，灭菌。
配制初筛平板培养基350ml，分装于500ml三角瓶中，封口膜封口，灭菌。
2．倒平板：将融化的初筛平板培养基冷却至50～60℃，以无菌操作法倒至已灭菌的培养皿中，至盖满底部。
冷却凝固待用。
3．样品预处理：取5g土样接入45ml肉汤培养基中，30℃摇床振荡15min制成土壤悬液，此时的稀释度为10-1。
另取4支试管，分别记作10-2、10-3、10-4、10-5共5个梯度，每支试管内加入9mL 无菌水。
用无菌移液管从三角瓶中吸取1mL土壤悬液，加入到10-2试管中混匀，再从此试管中吸取1mL加入到10-3试管中，依此类推直至10-5试管。
4．平板涂布分离：分别从不同稀释度的试管中吸取0.1ml悬液，均匀涂布于初筛培养基平板上，于30℃培养24～48h。
食品发酵工艺学实验指导-15秋
《食品发酵工艺学实验》指导书食品科学与工程学院食品工程教研室2015年5月实验一小型机械搅拌通风发酵罐的使用及操作演示一、实验目的1. 了解小型自控发酵罐的结构和工作原理。
2. 掌握小型自控发酵罐的操作及应用。
二、实验原理发酵罐是为一个特定生化反应的操作提供良好而满意环境的容器，是工业发酵常用设备中最重要、应用最广泛的设备，是连接原料和产物的桥梁，也是多种学科的交叉点。
对于一个有价值的工业生产菌株，要尽快将其应用于工业生产中，为了掌握工业生产的实际情况，需要在实验室条件下对目的菌株进行小型发酵罐的扩大培养和目的产物生成量的实验，从而掌握该菌株的发酵参数和调控规律，更好的为工业生产服务。
实验室使用的小型发酵罐，其容积一般在500L以下，一般5L以下用耐压玻璃制作罐体，10L以上用不锈钢制作罐体。
发酵罐配备有控制器和各种电极，可以自动调节试验所需的培养条件。
图1 机械搅拌通风发酵罐罐体的机械结构示意图为了了解发酵过程中菌体的生长及对培养基的利用情况，需在发酵过程中定时的取样测定。
包括测定不同时期发酵所得菌体的生物量和发酵液中残留还原糖的变化。
三、实验内容（一）发酵罐系统结构组成介绍及操作演示现代化的发酵罐系统通常由罐体、控制系统、无菌空气产生系统和蒸汽1、发酵罐罐体机械部分和控制系统罐体机械部分及控制系统是发酵罐系统的主体部分。
发酵罐的罐体部分主要由罐体、搅拌器和挡板、消泡器、联轴器和轴承、空气分布装置、换热装置等构成。
（1）罐体罐体由罐身、罐顶、罐底组成，罐身一般为圆柱体，中大型发酵罐罐顶、罐底多采用椭圆形或碟形封头通过焊接和罐身连接，小型发酵罐罐底一般也采用椭圆形或碟形封头通过焊接和罐身连接，罐顶却多采用平板盖和罐身用法兰连接。
为了便于清洗，小型发酵罐罐顶设有清洗用的手孔。
中、大型发酵罐则装设有快开人孔。
罐顶装有视镜及灯镜，进料管，补料管、排气管、接种管和压力表接管，排气管应尽可能靠近罐顶中心位置。
发酵工程技术实验指导书
发酵工程技术实验指导书适用课程：发酵工程技术目录实验一酵母菌的分离和纯化 (1)实验二果酒制作及酒精度测定 (3)实验三乳酸菌的分离和鉴别 (6)实验四酸奶制作以及感官鉴评 (9)实验五土壤中产醋酸菌种的分离筛选 (11)实验六发酵型虾酱的生产实验及氨基酸态氮的测定 (13)2实验一酵母菌的分离和纯化一、实验目的应用酵母的生理生化和生态学特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
二、实验原理大多数酵母菌为腐生，其生长最适pH为4.5～6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。
酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。
利用酵母菌喜欢酸性环境的特点（酸性条件则可以抑制细菌的生长），常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液，然后在固体培养基上用划线法分离纯化。
三、实验材料及试剂1、成熟葡萄或苹果等果皮2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯（200 g）、葡萄糖（20 g）、琼脂（20 g）、蒸馏水（1000ml），分装三角瓶。
配制方法：（1）先将马铃薯去皮，切片，称200 g并加蒸馏水1000ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至1000ml，制成20%的马铃薯汁。
（2）在20%的马铃薯汁中加入琼脂，煮沸溶化，加入葡萄糖，搅拌均匀，制成的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，补足水分。
（3）在115℃条件下高压灭菌20分种。
3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：原料：马铃薯（200 g）、葡萄糖（20 g）、乳酸（5mL）、pH5.5、蒸馏水（1000mL），分装三角瓶。
4、0.1%美蓝染液：0.1g美蓝溶于100mL蒸馏水中。
5、生理盐水四、主要仪器设备高压蒸汽灭菌器、天平、恒温培养箱、显微镜、酒精灯、电炉、1ml的无菌吸管、18*180mm试管、培养皿、接种针、载玻片、盖玻片、牛皮纸（报纸）、绳线、菜刀、案板、纱布、烧杯、玻璃棒、超净工作台等。
五、实验方法l、接种：取一小块果皮（不需冲洗），加入到盛装100mL无菌生理盐水的三角瓶中，充分搅拌后，用无菌移液管吸取1mL接入到9mL乳酸马铃薯葡萄糖培养液试管中，置28～30℃，培养24小时。
发酵工程实验实验指导书
发酵工程实验实验指导书发酵工程实验指导书（2022年版）宁波大学海洋学院二千零二十一点零九发酵工程实验指导书目录实验一乳酸菌的分离与初步筛选实验实验2实验三实验4实验五实验6乳酸菌的初步鉴定实验乳酸菌菌种保藏实验乳酸菌的培养与发酵实验乳酸菌发酵产物的分析与测定发酵罐操作培训发酵工程实验指导书（2021版）实验一乳酸菌的分离与初步筛选一、实验目的及要求1.掌握从环境样品中分离所需微生物的一般操作。
2.掌握平板划线分离应变的原理和操作方法。
3.掌握透明圈法获得单菌落菌株的原理。
2、实验原理自然样品中存在混杂的微生物，通过选择性培养基及样品稀释使形成细胞分散液，再通过固体培养基在合适的培养条件下培养形成单菌落，由此得到分离的纯培养菌株。
乳酸菌最基本的代谢特性是发酵产酸，待分离样品在合适的培养基和培养条件下，乳酸菌在特定设计的培养基中由于生长产酸产生溶钙形象，从而在培养基中产生透明圈，透明圈直径大小可反映菌落生长产酸量的大小，而不是乳酸菌或不产生酸积累的细菌不能产生透明圈。
三、实验器材1.使用单独的样品（泡菜、各种泡菜、酸奶、植物汁等）；2.培养基：MRS培养基或改良乳酸菌分离培养基；无菌水；3、器皿与设备：培养皿、移液管、试管、三角瓶、接种环、涂布棒、超净工作台、天平、采样瓶，培养箱等4、方法和步骤1。
分离样品的采集和采样说明：结合乳酸菌的特性（文献综述），获得乳酸菌在自然界或相关产品中的分布规律，设计样品的采集范围。
采集样品经适当保存或立即处理。
2、菌种的分离称取5g或5ml样品？将其添加到45 ml无菌三角烧瓶中（最好30℃恒温处理20分）？充分振动（包括玻璃珠）使其自然沉淀？用1ml移液管将1ml上清液悬浮液吸入9ml无菌水试管中？连续稀释10次至10-4~10-5？用移液管将1ml细菌悬浮液移到含有碳酸钙的MRS培养基中，并均匀涂抹？30℃恒温培养2~3天？观察菌落，挑出生长良好的带透明环的可疑乳酸菌单菌落，转移到普通乳酸菌培养基的倾斜试管中，对菌株进行编号，在30℃恒温下培养1~2天，并在4℃冰箱中保存，以备生长后使用。
发酵工程实验指导课件
（通过产酸特性直接鉴定）
发酵工程实验指导
7
实验三 乳酸菌菌种的培养与保藏
分离得到的乳酸 菌菌株（编号）
斜面移接与 培养(每一株）
注意点： 注明菌种编号与日期；
如Lcd131,Lcd132；
（例：陈丹，第一组第3位同学）
第一阶段结束，总结
安排一周完成
发酵工程实验指导
1株保藏 1株待以下
实验用
8
发酵工程实验指导
2
实验内容设计
第一部分：乳酸菌的分离、筛选与保藏
第二部分：乳酸菌的培养与发酵测定
附上：实验原始记录 实验一：实验准备 实验二：乳酸菌的分离与筛选 实验三：菌种培养与保藏 实验四：乳酸菌的发酵培养 实验五：乳酸菌发酵测定与产物分析
实验报告撰写基本格式
一、实验目的与意义及原理等 二、材料与方法（或步骤） 三、结果与分析 问题回答
发酵工程实验指导
9
第二部分 实验四 乳酸菌培养与发酵测定
总实验流程
实验乳酸 菌菌株
斜面移接 活化
菌种移接至发酵 三角瓶，培养
细胞生长测定
（自选）
（细胞生物量g/L：离心测菌体重量； 混浊度描述）
产酸变化
（测定pH变化：酸度计）
发酵产物乳酸定 性分析（E3）
（薄层层析法）
注意点：
新保存的菌株可直接发接酵工种程实，验指导不必再活化。10Biblioteka 说明发酵培养基的配制
接种3环
培养瓶包扎方法
发酵工程实验指导
11
细胞生长的测定
细胞湿密度：单位体积(ml)发酵液菌体的重量g（湿重）; 方法：取一定量(ml)发酵液，经离心去除上清液，菌
体称重。
细胞浓度：单位体积(ml)活细胞数(cfu)，单位:cfu/ml 方法：取一定量(ml)发酵液，经适当稀释后。倒平板培养
发酵工程试验指导
实验1 KLa 的测定方法氧是难溶气体，在25℃和1个大气压下，纯水中溶解度为0.25 mol/m 3左 右。
在好氧发酵过程中，氧气由气相传递到液相，为微生物消耗。
氧的传递过程 限速阻力位液膜阶段，此时K 1a 是描述氧的传递性能的重要参数。
1.目的掌握利用亚硫酸盐测定容积氧体积传递系数的方法，了解氧传递在好氧发酵 过程中的重要作用。
2原理以Cu 离子为催化剂，溶解于水中的O 2能立即将水中的SO 32-氧化为SO 42-， 其氧化反应的速度几乎与SO 32-浓度无关。
实际上是02 一经溶入液相，立即就被 还原掉。
这种反应特性使溶氧速率成为控制氧化反应的因素。
其反应式如下：Cu2+2Na 2sO 3+O 2—- 2Na 2sO 4剩余的Na 2sO 3与过量的碘作用Na 2sO 3 + I 2 + H 2O -- Na 2sO 4 + 2HI剩余的I 2用标准Na 2s 2O 3溶液滴定。
I 2+ 2N a 2s 2O 3 - N a 2s 4O 6+2N aIA O 2 〜A Na 2sO 3 〜AI 2 - A Na 2s 2O 3可见，每溶解1mo1 O 2,将消耗2mo1 Na 2s 。
3,将少消耗2mo1 12，将多消耗4mo1Na 2s 2O 3。
因此可根据两次取样滴定消耗Na 2s 2O 3的摩尔数之差，计算体积溶氧速率。
公式如下:M ： Na 2s 2O 3 浓度，A t ：两次取样时间间隔，hV 0：取样分析液体积。
将上述N V 值代入公式2二三即可计算出k L a由于溶液中SO 3-2在Cu 2+催化下瞬即把溶解氧还原掉，所以在搅拌作用充分 的式中 丝竺 x 3600 二 900A VM4A tVA tVN V ：两次取样滴定消耗Na 2s 2O 3体积之差，条件下整个实验过程中溶液中的溶氧浓度C=0。
在0.1Mpa（1atm）下，25°C时空气中氧的分压为0.021MPa,根据亨利定律，可计算出C*=0.24mmol/L,但由于亚硫酸盐的存在，C*的实际值低于0.24mmol/L, 因此一般规定C*=0.21mmol/L。
发酵工程实验指导
一、实验目的1、熟悉泡菜加工的工艺流程，掌握泡菜加工技术。
2、在实践中验证理论上泡菜加工中发生的一系列变化。
二、实验原理利用泡菜坛造成的坛内嫌气状态，配制适宜乳酸菌发酵的低浓度盐水（6-8%），对新鲜蔬菜进行腌制。
由于乳酸的大量生成，降低了制品及盐水的PH值，抑制了有害微生物的生长，提高了制品的保藏性。
同时由于发酵过程中大量乳酸，少量乙醇及微量醋酸的生成，给制品带来爽口的酸味和乙醇的香气，同时各种有机酸又可与乙醇生成具有芳香气味的脂，加之添加配料的味道，都给泡菜增添了特有的香气和滋味。
三、实验材料与设备（1）泡菜坛子（2）不锈钢刀（3）案板（4）小布袋（用以包裹香料）等四、实验方法和步骤1、盐水参考配方（以水的重量计）：食盐 6-8%、白酒 2.5%、黄酒 2.5%、红糖或白糖 2%、干红辣椒 3%、草果 0.05%、八角菌香 0.01%、花椒 0.05%、胡椒0.08%、陈皮 0.01% 。
2、工艺流程配制盐水入坛泡制泡菜管理原料预处理（4）泡菜的管理①入坛泡制1-2日后，由于食盐的渗透作用原料体积缩小，盐水下落，此时应再适当添加原料和盐水，保持其装满至坛口下1寸许为止。
②注意水槽：经常检查，水少时必须及时添加，保持水满状态，为安全起见，可在水槽内加盐，使水槽水含盐量达15%-20%。
③泡菜的成熟期限：泡菜的成熟期随所泡蔬菜的种类及当时的气温而异，一般新配的盐水在夏天时约需5-7天即可成熟，冬天则需12-16天才可成熟。
叶类菜如甘蓝需时较短，根类菜及茎菜类则需时较长一些。
六、讨论题影响乳酸发酵的因素有哪些？实验二淀粉水解糖的制备一、目的学习并掌握淀粉水解糖的酶法制备工艺。
二、实验原理发酵生产中，部分产生菌不能直接利用淀粉，也基本上不能利用糊精作为碳源。
因此，当以淀粉作为原料时，必须先将淀粉水解成葡萄糖才能供发酵使用。
在工业生产上将淀粉水解为葡萄的过程为淀粉的“糖化”，所制得的糖液称为淀粉水解糖。
发酵工艺学实验指导
发酵⼯艺学实验指导实验⼀、酿酒葡萄成熟度的控制以及⼊罐发酵⼀、⽬的与要求成熟度是决定葡萄酒质量的重要因素。
通过测定浆果的成熟度，来了解原料的成熟质量，确定各品种的最佳⼯艺成熟度，并以此决定葡萄酒类型和相应的⼯艺条件。
同时简单了解葡萄酒酿制的⼯艺原理。
⼆、试剂与仪器1.pH计、⼿持糖量计、托盘天平、量筒、⽔浴锅、电炉、移液管、锥形瓶、容量瓶、5L玻璃瓶。
2.斐林试剂A、B液，1%次甲基兰，0.1mol/L氢氧化钠溶液、1%酚酞指⽰剂、邻苯⼆甲酸氢钾，95%酒精，盐酸等。
三、⽅法与步骤1.采样：从转⾊期开始每隔5-7天采样⼀次，对于⼤⾯积园，采⽤250株取样法：每株随机取1-2粒果实，并取300—400粒；⾯积较⼩的品种。
可随机取5 - l0穗果实，装⼊塑料袋于冰壶中，迅速带回实验室分析。
简单的成熟度的测定可⽤⼿持糖量计测定，如果是精确的测定可在实验室中采⽤斐林试剂测定。
2.百粒重与百粒体积，随机取100粒果实，称重，然后将其放⼊250ml(或500ml)量筒中，加⼊⼀定体积的⽔，⾄完全淹没果实．读取量筒⽔⾯的读数，减去加⼊时的⽔量，即为百粒体积。
3.出汁率的测定；取100g分选较好的葡萄果粒，⽤纱布挤汁，放⼊⼩烧杯中，⽴即称量；出汁率=葡萄汁重量/葡萄果实重量。
⼲红葡萄酒的发酵⼯艺过程图计算：在发酵结束后还需要再进⾏出汁率的测定。
⾃流汁率(％)=W1/W2 x 100总出汁率(％)=(W1+W2)/ Ws x 100式中W1——葡萄浆⾃流汁的重量，(g)；Ws——试样重量，(g)；W2——经压榨流出的葡萄汁重量，(g)。
4.可溶性固形物与pH值；⽤⼿持糖量计测定葡萄汁的可溶性固形物(％)，取20ml汁测pH值。
5.还原糖与总酸：⽤斐林试剂法测定还原糖，⽤碱滴定法测定总酸。
6.果⽪⾊价测定：取20粒果实，洗净擦⼲，撕下果⽪并⽤吸⽔纸擦净⽪上所带果⾁及果汁，然后剪碎，称取0.2克果⽪⽤盐酸⼄醇溶液(1 mol/L盐酸: 95％⼄醇= 15：85)50ml浸泡，浸泡20⼩时左右，然后测定540nm下的吸光度，计算果⽪⾊价(X A x 10)/W (X A——吸光度，W——果⽪重量g)。
发酵工艺学实验
配制培养基
• （1）制备平板分离培养基： 葡萄糖 20g，蛋白胨 20g，酵母抽提物 10g，琼脂 20g，水 1000 mL。 灭菌115℃，20min。每三角瓶分装100mL，灭菌后 倒平板。 • （2）制备斜面保藏培养基：葡萄糖 20g，蛋白胨 20g，酵母抽提物 10g，琼脂 20g， 水 1000mL。 灭菌115℃，20min。每试管分装5mL，灭菌后摆斜 面待用。 • （3）制备种子培养基：葡萄糖 20g，蛋白胨 20g， 酵母抽提物 10g, 水 1000mL。灭菌115℃，20min。 每三角瓶分装30mL，灭菌待用。
双酶法制备淀粉糖
• 酶法糖化投资少，工艺稳定，对设备要求 也不高，产品质量好，消耗小，收率高， 条件温和，对环境影响小。
三、试验材料
• 玉米淀粉、液化型α-淀粉酶（酶活力6000 单位/g），糖化酶（葡萄糖淀粉酶、酶活 力为4-5万单位/g），10%NaOH, 5%Na2CO3, 5%CaCl2。 • 500ml烧杯，pH试纸、秒表，玻璃棒，恒 温水浴锅，电炉，石棉网、温度计、恒温 水浴、手持糖度仪（可溶性固形物）。
倍数B
（三）实验器材
1.菌种
酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬 液
2.器具
显微镜、血球计数板、酒精灯、接种环、无菌 水、吸管、盖玻片、计数器。
（四）实验方法
1.稀释
将酿酒酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，
可不必稀释。
2.镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若
培养基的配制
培养基的制备过程 称量---溶解----调节pH值----过滤---分装及包扎----灭菌----灭菌后试管 摆放斜面
• 1.称量 按照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。 • 配方：牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,琼脂 20.0g,蒸馏水1000ml,pH7.0。 • （蛋白胨易吸潮，称蛋白胨时速度要快。 • 牛肉膏难溶，称量后可提着称量纸一角，在热 的培养基里溶解。）
发酵工艺实验
发酵工艺实验实验一细菌生长曲线的测定1 目的1.1 了解细菌生长曲线特点及测定原理1.2 学习用比浊法测定细菌的生长曲线2 原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。
它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。
这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。
因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。
测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD 值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。
大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20 min分裂一次。
将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个阶段。
以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。
不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。
测定细菌的生长曲线，了解其生长繁殖规律，这对人们根据不同的需要，有效地利用和控制细菌的生长具有重要意义。
3 材料3.1菌种大肠杆菌3.2培养基肉膏蛋白胨培养基3.3 仪器和器具721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。
4 流程种子液→标记→接种→培养→测定5 试验方法5.1、将在种子培养基中培养20 h的培养液3000rpm离心10min 倾去上层液，加入无菌的生理盐水，成均匀液，细胞数系109/m1。
发酵工程技术试验指导书
发酵工程技术实验指导书适用课程：发酵工程技术目录实验一酵母菌的分离和纯化 (1)实验二果酒制作及酒精度测定 (3)实验三乳酸菌的分离和鉴别 (6)实验四酸奶制作以及感官鉴评 (9)实验五土壤中产醋酸菌种的分离筛选 (11)实验六发酵型虾酱的生产实验及氨基酸态氮的测定13实验一酵母菌的分离和纯化一、实验目的应用酵母的生理生化和生态学特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基木方法。
二、实验原理大多数酵母菌为腐生，其生长最适PH为4.5 6,常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。
酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。
利用酵母菌喜欢酸性环境的特点（酸性条件则可以抑制细菌的生长），常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液，然后在同体培养基上用划线法分离纯化。
三、实验材料及试剂1、成熟葡萄或苹杲等果皮2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯（200 g）葡萄糖（20 g）.琼脂（20 g）、蒸懈水（1000ml）,分装三角瓶。
配制方法:（1）先将马铃暮去皮，切片，称200 g并加蒸他水1000ml,煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸憎水量至1000m1,制成20%的马铃薯汁。
（2）在20%的马铃薯汁中加入琼脂，煮沸溶化，加入葡萄糖，搅拌均匀，制成的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，补足水分。
（3）在115°C条件下高压灭菌20分种。
3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：原料：马铃薯（200 g）、葡萄糖（20 g）、乳酸（5mL）、pH5.5、蒸饰水（lOOOmL）,分装三角瓶。
4、0.1%美蓝染液：O.lg美蓝溶于100mL蒸镭水中。
5、生理盐水四、主要仪器设备高压蒸汽灭菌器、天平、恒温培养箱、显微镜、酒精灯、电炉、1ml的无菌吸管、18*180nmi 试管、培养血、接种针、载玻片、盖玻片、牛皮纸（报纸）、绳线、菜刀、案板、纱布、烧杯、玻璃棒、超净工作台等。
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实验一、酿酒葡萄成熟度的控制以及入罐发酵一、目的与要求成熟度是决定葡萄酒质量的重要因素。
通过测定浆果的成熟度，来了解原料的成熟质量，确定各品种的最佳工艺成熟度，并以此决定葡萄酒类型和相应的工艺条件。
同时简单了解葡萄酒酿制的工艺原理。
二、试剂与仪器1.pH计、手持糖量计、托盘天平、量筒、水浴锅、电炉、移液管、锥形瓶、容量瓶、5L玻璃瓶。
2.斐林试剂A、B液，1%次甲基兰，0.1mol/L氢氧化钠溶液、1%酚酞指示剂、邻苯二甲酸氢钾，95%酒精，盐酸等。
三、方法与步骤1.采样：从转色期开始每隔5-7天采样一次，对于大面积园，采用250株取样法：每株随机取1-2粒果实，并取300—400粒；面积较小的品种。
可随机取5 - l0穗果实，装入塑料袋于冰壶中，迅速带回实验室分析。
简单的成熟度的测定可用手持糖量计测定，如果是精确的测定可在实验室中采用斐林试剂测定。
2.百粒重与百粒体积，随机取100粒果实，称重，然后将其放入250ml(或500ml)量筒中，加入一定体积的水，至完全淹没果实．读取量筒水面的读数，减去加入时的水量，即为百粒体积。
3.出汁率的测定；取100g分选较好的葡萄果粒，用纱布挤汁，放入小烧杯中，立即称量；出汁率=葡萄汁重量/葡萄果实重量。
干红葡萄酒的发酵工艺过程图计算：在发酵结束后还需要再进行出汁率的测定。
自流汁率(％)=W1/W2 x 100总出汁率(％)=(W1+W2)/ Ws x 100式中W1——葡萄浆自流汁的重量，(g)；Ws——试样重量，(g)；W2——经压榨流出的葡萄汁重量，(g)。
4.可溶性固形物与pH值；用手持糖量计测定葡萄汁的可溶性固形物(％)，取20ml汁测pH值。
5.还原糖与总酸：用斐林试剂法测定还原糖，用碱滴定法测定总酸。
6.果皮色价测定：取20粒果实，洗净擦干，撕下果皮并用吸水纸擦净皮上所带果肉及果汁，然后剪碎，称取0.2克果皮用盐酸乙醇溶液(1 mol/L盐酸: 95％乙醇= 15：85)50ml浸泡，浸泡20小时左右，然后测定540nm下的吸光度，计算果皮色价(X A x 10)/W (X A——吸光度，W——果皮重量g)。
7.入罐：分选葡萄果实，剔除病虫、生青、腐烂的果实。
除梗，破碎30%，入罐。
四、结果及分析评价浆果的成熟质量。
实验二、干红葡萄酒发酵的监控一、实验的目的：掌握干红葡萄酒酿造中发酵的监控方法及相关的操作要求。
二、所需仪器及试剂：1. 仪器：5升、10升玻璃瓶，塑料盆，纱布、温度计、比重计、天平、木棍、烧杯、量筒等。
2. 试剂：亚硫酸（6%）、白砂糖、酵母、KHCO3。
三、实验内容1. 酵母、果胶酶的活化：采用工业专用酵母，按照200mg/L的量称取酵母，放入三角瓶中，加入50mL蒸馏水，在40℃条件下活化20分钟。
按照20mg/L称取果胶酶，在40℃左右活化10分钟。
2. 装瓶：装量不超过瓶容的75％，同时按汁量加入50～80mg/LS02搅匀，亚硫酸的浓度为6%，添加量的计算：[葡萄果实×70%×50]/[0.06×1000]。
并加入果胶酶20mg/L(或按说明书)同时取汁测糖、酸、比重、温度。
（注：添加的酵母、果胶酶以及亚硫酸的量都是以葡萄汁的量来计算）。
3.浸渍发酵：每天测两次比重、温度，并定期用木柄压“帽”、用冷水喷淋或在空调室内控温至26～30℃。
5．当比重降至1010～1020时，出酒，同时压榨皮渣，混合、控温18～20℃，进行后发酵管理。
6. 当相对密度降到0.993 - 0.998时（残糖<2g/L时），酒精发酵结束，用KHCO3调整PH≥3. 2，触发苹果酸-乳酸发酵。
7. 贮藏：满瓶、调游离S02为20～30mg/L。
8. 下胶与过滤，自然澄清半年后，用明胶下胶，通过下胶实验确定用量，然后用澄清板过滤。
9. 稳定性试验：检查酒的氧化、铁、铜、色素、微生物稳定性，若需要应进行相应的处理。
10. 装瓶：将酒冷至其冰点以上0.5℃左右，在同温条件下进行澄清、除菌过滤。
并加入5-10 g/L SO2，打塞、卧放贮存。
四、思考与练习如何确定红葡萄酒的皮渣分离时间？试验三、葡萄酒发酵结束的理化指标的测定一、实验目的：了解如何确定葡萄酒酒精发酵的结束，同时对葡萄酒进行分离和封装，转入后发酵阶段。
熟悉各个理化指标的测定方法。
二、所需要的仪器和试剂：1. 电炉，蒸馏装置，胶带，酒精计(0-40%)(V/V)2. 费林试剂，0.1N氢氧化钠，酚酞指示剂（1%），次甲基蓝指示剂，量筒，葡萄糖5g/L。
三、实验步骤：1.还原糖的测定2.总酸的测定3.挥发酸的测定：挥发酸小于1g/L。
4.酒度的测定：量取50mL酒样，移入圆底烧瓶中，加入100mL 蒸馏水，连接酒精蒸馏装置，加热蒸馏，直到蒸出的液体大约100毫升时，用蒸馏水定容至100mL，然后用酒精计测定酒精度,并且还要测定相应的温度，记录温度和酒精度。
四、讨论1.在酒精度的测定中需要进行校正。
学会如何校正读数。
实验四啤酒的感官品评一、外观：（共10分）1．色泽：淡黄带绿，淡黄色、淡金黄色（5分）2．透明度：清亮透明，有光泽，无明显悬浮物（5分）二、泡沫（共20分）1．起泡性：泡沫高度至杯子的1/2-2/3 （5分）2．外观性：泡沫洁白细腻（5分）3．泡持性：5分钟（5分）4．附着力：饮后泡沫挂在杯子内壁上（5分）三、香气（共20分）1．具有新鲜酒花香气（5分）2．无老化味和氧化味（5分）3．无生酒花味（5分）4．无其他怪味、异味和腥味（5分）四、口味（共50分）1．口味纯正（1）无明显双乙酰味和高级醇及发酵副产物味（11分）（2）无麦皮味，酵母味（4分）2．协调爽口（1）饮后协调爽口，柔和，愉快，无刺激辛辣味（7分）（2）枯萎愉快，饮后迅速消失，无后苦涩味（6分）（3）无焦糖味及可发酵性糖类的甜味（5分）3．杀口力强，饮后有强烈的刺激清爽感（7分）4．口味纯正，饮后感到酒味纯正，口味不单调、不淡薄（10分）实验一、乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验一、实验目的1.了解酸乳中乳酸菌分离原理2. 学习并掌握乳酸菌饮料中乳酸菌菌数的检测方法。
二、实验原理活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量的依据。
由于乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等，一般的肉汤培养基难以满足其要求。
测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。
要提高检出率，关键是选用特定良好的培养基。
采用稀释平板菌落计数法，检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。
三、实验材料1.培养基改良MC培养基(Modified Chalmers培养基)2.仪器和器具无菌移液管（25ml,1ml），无菌水（225ml带玻璃珠三角瓶，9ml试管），无菌培养皿，旋涡均匀器。
恒温培养箱。
四、实验方法流程：酸奶→稀释→制平板→培养→检查计数1.样品稀释先将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25ml加入盛有225ml无菌水的三角瓶中，在旋涡均匀器上充分振摇，务必使样品均匀分散，即为10-1的样品稀释液，然后根据对样品含菌量的估计，将样品稀释至适当的稀释度。
2.制平板选用2~3个适合的稀释度，培养皿贴上相应的标签，分别吸取不同稀释度的稀释液1ml置于平皿内，每个稀释度作2个重复。
然后用溶化冷却至46℃左右的改良MC 培养基倒平皿，迅速转动平皿使之混合均匀，冷却成平板。
3.培养和计数将平皿倒置于40℃恒温箱内培养24~48h，观察长出的细小菌落，计菌落数目，按常规方法选择30~300个菌落平皿进行计算。
五、结果1.指示剂显色反应乳酸菌的菌落很小，1~3mm，园形隆起，表面光滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黄色。
由于产酸菌落周围能使CaCO3产生溶解圈，酸碱指示剂呈酸性显色反应。
2.镜检形态必要时，可挑取不同形态菌落制片镜检确定是乳杆菌或乳链球菌。
保加利亚乳杆菌呈杆状，成单杆、或双杆菌或长丝状。
嗜热链球菌，呈球状，成对、或短链、或长链状。
3.计数结果公式：平均菌落数×稀释倍数八、思考1.为什么乳酸菌的检测关键是选用特定良好的培养基？2.培养基中为什么要加CaCO3？实验二、发酵制品中大肠菌群的测定一、实验目的1、学习食品中大肠菌群检测程序、方法；2、掌握食品中大肠菌群检测结果的报告方式。
二、实验原理大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
三、实验材料1、设备和材料温箱、水浴锅、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻片、接种针2、培养基及试剂乳糖—胆盐发酵管、乳糖发酵管、蛋白胨水、靛基质试剂、麦康凯、伊红美蓝琼脂（EMB）、远腾氏琼脂、革兰氏染色液3、样品发酵香肠四、实验方法与步骤1、采样及稀释①以无菌操作将检样25g放于含有225ml灭菌生理盐水，用均质器，以8 000～10000r/min 的速度处理1min，做成1∶10的均匀稀释液。
②用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇混匀，做成1：100的稀释液，换用1支1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液③根据食品卫生要求或对检验样品污染情况估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。
也可直接用样品接种。
2. 乳糖初发酵试验即通常所说的假定试验。
其目的在于检查样品中有无发酵乳糖产生气体的细菌。
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1ml及1ml以下者，用单料乳糖发酵管。
每一个稀释度接种3管，置（36±1）0C温箱内，培养（24±2）h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产生者，则按下列程续进行3.分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂板或麦康凯琼脂平板上，置（36±1）0C温箱内，培养18h~24h，然后取出，观察菌落形态并作革兰氏染色镜检和复发酵试验。
4.乳糖复发酵试验即通常所说的证实试验，其目的在于证明从乳糖初酵管试验呈阳性反应的试管内分离到的革兰氏阴性无芽胞杆菌，确能发酵乳糖产生气体。
在上述的选择性培养基上，挑取可疑大肠菌群1~2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置（36±1）0C的温箱内培养（24±2）h，观察产气情况。
凡乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠杆菌阳性；凡乳糖发酵管不产气或革兰氏染色为阳性，则报告为大肠杆菌为阴性。