R K测高技术应用简介T
CBR介绍
车辆ECU控制策略 此两值进行比较判断
朱志鹏 2005-4 8
CBR控制策略
而且CBR系统的默认模式为关闭模式时还可以提高发动机冷启动的性能 以及满足较高的排放要求。但是在点火瞬间，滑板是打开的，其目的是为了 增加足够的进气量，在点火成功后又再次关闭。 从下图我们可以基本看出在发动机转速范围内CBR系统的开关情况。
朱志鹏
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蝶阀式CBR系统执行过程
蝶阀型执行情况与滑板型类似，只是一个通过旋转运动来打开和关闭气道， 一个通过滑动来打开和关闭气道；其它控制基本差不多，都是通过真空执行 器来完成的。 下图为蝶阀式真空控制型的CBR系统执行机构零件
朱志鹏
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CBR控制策略
CBR系统滑板的打开和关闭是根据实际工况所需要的扭矩来决定的。 CBR系统的默认模式为关闭模式，从设计上来说，这样可以保证真空执 行器起始位置时不需真空控制，整个机构没有受力要求，从控制上来说， CBR本身就是为了控制低负荷时的燃烧，起先就是要关闭半个气道的。 当我们踩下油门时，ECU先算出实际需要的扭矩值，然后跟标定地最大 扭矩值比较，得出一个数值，然后根据这个数值来判断是不是需要把滑板 打开或关闭。
滑板式CBR系统开关状态
朱志鹏
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滑板式CBR系统执行过程
当发动机要求CBR系统工作的时候，首先由ECU向真空控制阀发出信号， 于是真空控制阀打开，从真空罐或真空泵的真空就进入到真空执行器，于是 真空执行器内部真空度也随之改变，弹簧机构开始运作，从而使摇臂转动， 滑板移动，从而起到打开和关闭气道的作用。 下图为滑板式真空控制型的CBR系统执行机构零件
朱志鹏
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PTC热敏电阻基础知识
热敏电阻得物理特性与表示热敏电阻得物理特性用下列参数表示：电阻值、B值、耗散系数、热时间常数、电阻温度系数。
1、电阻值：R〔Ω〕电阻值得近似值表示为：R2=R1exp[1/T2-1/T1]其中：R2：绝对温度为T2〔K〕时得电阻〔Ω〕R1：绝对温度为T1〔K〕时得电阻〔Ω〕B：B值〔K〕2、B值：B〔k〕B值就是电阻在两个温度之间变化得函数，表达式为：B= InR1-InR2 =2、3026(1ogR1-1ogR2) 1/T1-1/T2 1/T1-1/T2其中：B：B值〔K〕R1：绝对温度为T1〔K〕时得电阻〔Ω〕R2：绝对温度为T2〔K〕时得电阻〔Ω〕3、耗散系数：δ〔mW/℃〕耗散系数就是物体消耗得电功与相应得温升值之比。
δ= W/T-Ta = I² R/T-Ta其中：δ：耗散系数δ〔mW/℃〕W：热敏电阻消耗得电功〔mW〕T：达到热平衡后得温度值〔℃〕Ta：室温〔℃〕I：在温度T时加热敏电阻上得电流值〔mA〕R：在温度T时加热敏电阻上得电流值〔KΩ〕在测量温度时，应注意防止热敏电阻由于加热造成得升温。
4、热时间常数：τ〔sec、〕热敏电阻在零能量条件下，由于步阶效应使热敏电阻本身得温度发生改变，当温度在初始值与最终值之间改变63、2％所需得时间就就是热时间系数τ。
5、电阻温度系数：α〔%/℃〕α就是表示热敏电阻器温度每变化1ºC，其电阻值变化程度得系数〔即变化率〕，用α=1/R·dR/dT 表示，计算式为：α = 1/R·dR/dT×100 = -B/T²×100其中：α：电阻温度系数〔%/℃〕R：绝对温度T〔K〕时得电阻值〔Ω〕B：B值〔K〕PTC热敏电阻发热元件一、PTC热敏电阻得简介：PTC热敏电阻发热元件就是现代以至将来高科技尖端之产品。
它被广泛应用于轻工、住宅、交通、航天、农业、医疗、环保、采矿、民用器械等，它与镍、铬丝或远红外等发热元件相比，具有卓越得优点。
掩模板光刻工艺研究
第一章绪论光掩膜简介光掩膜版(Pho tom as k)又称光罩，是在含有金属薄膜的玻璃基板(Bl an k s)上形成复杂几何图形(G eo m etry)的图形转移母板即俗称的M a sk。
在半导体的曝光制程中，利用光掩膜版以及曝光的手段就能够在硅基板上形成电路图形。
集成电路设计公司工艺完成产品版图的开发后，将原始设计数据交付专业的晶片代工厂进行器件制造。
由于考虑到生产效率和制造工艺中需要加入的一系列复杂的校正和补偿处理，通常来说在量产阶段，一般工厂直接不会采用此设计数据直接用于曝光工艺。
光掩膜板的制造基于原始设计图形，加入光学临近效应补偿，通过计算机辅助系统处理，使用激光或电子束曝光的手法将经过修正后的设计图形移植到透光性能良好的石英基板，经过后续蚀刻和检验修补工艺的这类石英基板就叫做光掩膜板。
图1.1光掩膜样品这一部分是从版图到w afer制造中间流程衔接的关键部分，是流程中造价最高的一部分，也是限制最小线宽的瓶颈之一。
光掩膜除了应用于芯片制造外，还广泛的应用与像L C D，P C B等方面。
常见的光掩膜的种类有四种，铬版(c hrom e)、干版，凸版、液体凸版。
主要分两个组成部分，基板和不透光材料。
基板通常是高纯度，低反射率，低热膨胀系数的石英玻璃。
铬版的不透光层是通过溅射的方法镀在玻璃下方厚约0.lum的铬层。
铬的硬度比玻璃略小，虽不易受损但有可能被玻璃所伤害。
应用于芯片制造的光掩膜为高敏感度的铬版。
干版涂附的乳胶，硬度小且易吸附灰尘，不过干版还有包膜和超微颗粒干版，其中后者可以应用于芯片制造。
光掩膜的作用光掩膜板同时包含了设计者的版图信息和必要的晶片代工厂工艺修正信息，工厂通过光刻工艺将这些掩膜板的图形投影到硅片上，进行大规模重复性量产，这个过程就与现代印刷工业类似，光掩膜板相当于印刷母板。
由于在制作过程中存在一定的设备或工艺局限，光掩膜的上图形并不可能与设计图象完全一致，这就是说在后续的硅片制造过程中，掩膜板上的制造缺陷和误差也会伴随着光刻工艺被引入到芯片制造进程。
NTC热敏电阻特性参数基本知识
NTC热敏电阻特性参数基本知识热敏电阻分为两类,分别为:1.NTC负温度系数热敏电阻2.PTC正温度系数热敏电阻热敏电阻的物理特性用下列参数表示：电阻值、B值、耗散系数、热时间常数、电阻温度系数。
电阻值：R〔Ω〕电阻值的近似值表示为：R2=R1exp[1/T2-1/T1]其中： R2：绝对温度为T2〔K〕时的电阻〔Ω〕R1：绝对温度为T1〔K〕时的电阻〔Ω〕B： B值〔K〕B值：B〔k〕B值是电阻在两个温度之间变化的函数，表达式为：B= InR1-InR2 =2.3026(1ogR1-1ogR2)1/T1-1/T2 1/T1-1/T2其中： B： B值〔K〕R1：绝对温度为T1〔K〕时的电阻〔Ω〕R2：绝对温度为T2〔K〕时的电阻〔Ω〕耗散系数：δ〔mW/℃〕耗散系数是物体消耗的电功与相应的温升值之比δ= W/T-Ta = I2 R/T-Ta 其中：δ：耗散系数δ〔mW/℃〕W：热敏电阻消耗的电功〔mW〕T：达到热平衡后的温度值〔℃〕Ta: 室温〔℃〕I: 在温度T时加热敏电阻上的电流值〔mA〕R: 在温度T时加热敏电阻上的电流值〔KΩ〕在测量温度时，应注意防止热敏电阻由于加热造成的升温。
热时间常数：τ〔sec.〕热敏电阻在零能量条件下，由于步阶效应使热敏电阻本身的温度发生改变，当温度在初始值和最终值之间改变63.2％所需的时间就是热时间系数τ。
电阻温度系数：α〔%/℃〕α是表示热敏电阻器温度每变化1oC，其电阻值变化程度的系数〔即变化率〕，用α=1/R?dR/dT 表示，计算式为：α = 1/R?dR/dT×100 = -B/T2×100其中：α：电阻温度系数〔%/℃〕R：绝对温度T〔K〕时的电阻值〔Ω〕B： B值〔K〕热敏电阻是开发早、种类多、发展较成熟的敏感元器件．热敏电阻由半导体陶瓷材料组成，利用的原理是温度引起电阻变化．若电子和空穴的浓度分别为n、p，迁移率分别为μn、μp，则半导体的电导为：σ=q（nμn pμp）因为n、p、μn、μp都是依赖温度T的函数，所以电导是温度的函数，因此可由测量电导而推算出温度的高低，并能做出电阻-温度特性曲线．这就是半导体热敏电阻的工作原理．热敏电阻包括正温度系数（PTC）和负温度系数（NTC）热敏电阻，以及临界温度热敏电阻（CTR）．它们的电阻-温度特性如图1所示．热敏电阻的主要特点是：①灵敏度较高，其电阻温度系数要比金属大10～100倍以上，能检测出10-6℃的温度变化；②工作温度范围宽，常温器件适用于-55℃～315℃，高温器件适用温度高于315℃（目前最高可达到2000℃），低温器件适用于-273℃～55℃；③体积小，能够测量其他温度计无法测量的空隙、腔体及生物体内血管的温度；④使用方便，电阻值可在0.1～100kΩ间任意选择；⑤易加工成复杂的形状，可大批量生产；⑥稳定性好、过载能力强．由于半导体热敏电阻有独特的性能，所以在应用方面，它不仅可以作为测量元件（如测量温度、流量、液位等），还可以作为控制元件（如热敏开关、限流器）和电路补偿元件．热敏电阻广泛用于家用电器、电力工业、通讯、军事科学、宇航等各个领域，发展前景极其广阔．一、PTC热敏电阻PTC（Positive Temperature Coeff1Cient）是指在某一温度下电阻急剧增加、具有正温度系数的热敏电阻现象或材料，可专门用作恒定温度传感器．该材料是以BaTiO3或SrTiO3或PbTiO3为主要成分的烧结体，其中掺入微量的Nb、Ta、Bi、Sb、Y、La等氧化物进行原子价控制而使之半导化，常将这种半导体化的BaTiO3等材料简称为半导（体）瓷；同时还添加增大其正电阻温度系数的Mn、Fe、Cu、Cr的氧化物和起其他作用的添加物，采用一般陶瓷工艺成形、高温烧结而使钛酸铂等及其固溶体半导化，从而得到正特性的热敏电阻材料．其温度系数及居里点温度随组分及烧结条件（尤其是冷却温度）不同而变化．钛酸钡晶体属于钙钛矿型结构，是一种铁电材料，纯钛酸钡是一种绝缘材料．在钛酸钡材料中加入微量稀土元素，进行适当热处理后，在居里温度附近，电阻率陡增几个数量级，产生PTC效应，此效应与BaTiO3晶体的铁电性及其在居里温度附近材料的相变有关．钛酸钡半导瓷是一种多晶材料，晶粒之间存在着晶粒间界面．该半导瓷当达到某一特定温度或电压，晶体粒界就发生变化，从而电阻急剧变化．钛酸钡半导瓷的PTC效应起因于粒界（晶粒间界）．对于导电电子来说，晶粒间界面相当于一个势垒．当温度低时，由于钛酸钡内电场的作用，导致电子极容易越过势垒，则电阻值较小．当温度升高到居里点温度（即临界温度）附近时，内电场受到破坏，它不能帮助导电电子越过势垒．这相当于势垒升高，电阻值突然增大，产生PTC效应．钛酸钡半导瓷的PTC效应的物理模型有海望表面势垒模型、丹尼尔斯等人的钡缺位模型和叠加势垒模型，它们分别从不同方面对PTC效应作出了合理解释．实验表明，在工作温度范围内，PTC热敏电阻的电阻-温度特性可近似用实验公式表示：RT=RT0expBp（T-T0）式中RT、RT0表示温度为T、T0时电阻值，Bp为该种材料的材料常数．PTC效应起源于陶瓷的粒界和粒界间析出相的性质，并随杂质种类、浓度、烧结条件等而产生显著变化．最近，进入实用化的热敏电阻中有利用硅片的硅温度敏感元件，这是体型且精度高的PTC热敏电阻，由n型硅构成，因其中的杂质产生的电子散射随温度上升而增加，从而电阻增加．PTC热敏电阻于1950年出现，随后1954年出现了以钛酸钡为主要材料的PTC热敏电阻．PTC热敏电阻在工业上可用作温度的测量与控制，也用于汽车某部位的温度检测与调节，还大量用于民用设备，如控制瞬间开水器的水温、空调器与冷库的温度，利用本身加热作气体分析和风速机等方面．下面简介一例对加热器、马达、变压器、大功率晶体管等电器的加热和过热保护方面的应用。
Kraken海洋声学模型及其声传播与衰减的数值试验
第27卷第1期2009年1月海洋科学进展ADVANCES IN MA RIN E SCIENCEVol.27 No.1January,2009 K raken海洋声学模型及其声传播与衰减的数值试验3李佳讯1,张 韧1,3,王彦磊2,黄志松1,张丽华3(1.解放军理工大学气象学院,江苏南京211101;2.解放军61741部队,北京100081;3.空军上海指挥所气象中心,上海200433)摘 要:针对射线、简正波、PE、FFP等传播模型的算法原理及其适用的海洋环境,建立了以Kraken声学模型计算软件为基础的海洋声场数值预报系统。
应用该预报系统对4组典型的海洋声场进行了数值试验,结果表明:在相同的海面和海底边界条件下,声场分布是由声速剖面和声源位置决定的。
在负梯度声场中,所有声线都折向海底,在极限声线外产生阴影区。
声源位于声道轴附近的温跃层中会产生波导传播。
用射线理论解释了上述现象的成因,指出了其实际应用价值。
关键词:Kraken模型;传播损失;声场预报;声纳探测中图分类号:P733.21 文献标识码:A 文章编号:167126647(2009)0120051208海水是一种导电介质。
辐射向海洋的电磁波会被海水介质本身所屏蔽,极大部分的能量以涡流损耗的形式被海水吸收,使电磁波在海水中的传播距离有限。
而声波在海水中传播时的损耗要比电磁波小得多,因而声波是能够在海水介质中进行远距离信息传输的有效载体。
研究声波在海洋中的传播,是理解和预测所有其他水声现象的基础。
而海洋声场的数值计算和预报是进行海洋混响、噪声、反演、匹配场处理、声层析等研究的基础,是现代声纳设计使用中的重要课题。
根据海洋环境因素对声场的制约,可以建立物理模型和数学模型,把可测得的海洋环境参数值代入计算机程序完成数值计算和有关场值的预报[1]。
目前所发展的声场数值预报方法主要有射线算法、简正波算法、抛物方程(PE)算法和快速声场程序法(FFP)等[2,3]。
PROLINE PROMASS 40科氏力质量流量测量系统 操作指南
2 . 1 . 2传 感 器 铭 牌
图 2: Prom as s F 传 感 器铭 牌说 明 (示 例) 1、 订货 代码/系 列号 ：见 订货 确认 单 上 对 于每 个字 母 和 数 字 含 义 的 描述 2、 标定 因子: 2 .50 0; 零 点: -6 3、 仪表 公称 直径: D N25 / 1 "
请注 意以 下几点： ·对 于用 于爆 炸 危险 场合 的仪 表， 操 作 手 册 内 必须 包括 独立 的 “Ex文 件 ”。 必
须 严格 遵守 本操作手册 和该 相关 文件中 的规 定，Ex文 件开 始部分 将指 明相 关 认 证和 证书 的 标 志 （ 欧 洲， 美国 ，加 拿 大） Ex 欧 洲 FM 美 国 SA 加 拿大 ·测 量仪 表遵 守 安全 操作 要求 ，符 合E N61 010， E N 61 3 26/ A1 ( EMC要 求)和
2 . 2 C E标 记 ， 一致 性 声明
本仪表设计 符合 工程实际，满足最高安全 要求。出厂前经过测 试达到安全操作 标 准 ， 本 仪 表遵 循符 合E N610 10“ 测量 、 控 制 、调 节和 实 验 室 用 电 气 设 备的 保 护 措 施 ” 和E N61 326 /A 1（EM C要 求 ） 的 标 准和 规则 。 本操作手 册 中描 述的 测量 系统 遵循EC导则 的要 求，E+H确认 本仪 表通 过测 试 并贴 上C E标记 。
提示： 所 有功能的详细描述，请查 阅“ 功能描述” 手册
第5页 第9页 第17页 第27页 第23页 第25页
故障 排除
如果 启动 后或 操作中发生 故障，要 从第35页 的检查 表开 始做 起。 这可 以使 你直 接找到问题 的原因和 修复 方法。
GPS_RTK的技术方法探讨与对策_杨文府
第17卷第4期 测 绘 工 程 V ol .17№.42008年8月 ENGIN EERING OF S URVEYING AND MAPPING Aug .,2008GPS -RTK 的技术方法探讨与对策杨文府,崔玉柱(山西省煤炭地质物探测绘院,山西晋中030600)摘 要:对G PS -R T K 的测量原理、误差分析及参数转换等进行简要阐述,并介绍G PS -R T K 高程测量的方法。
通过高精度全站仪观测数据与G PS -RT K 高程数据进行分析、比较,指出在GPS -RT K 高程测量中应该注意的问题,并针对生产实践中存在的作业问题,找出提高G PS -RT K 高程测量精度的有效措施,旨在增广G PS -R T K 技术的应用前景,提高其测量成果的精度。
关键词:G PS -RT K ;数据分析;高程精度;有效措施中图分类号:P 228 文献标识码:A 文章编号:1006-7949(2008)04-0050-04On analysis and countermeasure of technology and method in the field of GPS -RTKYANG Wen -fu ,CU I Yu -zhu(Coal G eological Geo phy sical Ex plor ation Survey ing &M apping Institute of Shanx i P rov ince ,Jinzhong 030600,China )A bstract :This pape r studies the surveying principle ,erro r analy sis and parameter conve rsion of GPS -RTK briefly ,and introduces the GPS -RT K elev ation survey ing m ethod .Som e questions are pointed o ut that should be paid attention in GPS -RTK elev ation surveying by analy zing and co mparing hig h precisio n total statio n observatio n data w ith GPS -RTK elevatio n m easurement data .Some effective measures of improved GPS -RTK elevatio n m easurement are presented to overco me these pro blems in productive practice .The aim is to w iden the applicatio n of GPS -RTK techno logy and im prov e its m easurement precision .Key words :GPS -RTK ;data analy sis ;elev ation accuracy ;effective measure 收稿日期:2007-04-17作者简介:杨文府(1978～),男,助理工程师. 当前,在测绘工作中,GPS -RTK 以其定位精度高、效率快、不要求点位相互通视、自动化程度高、误差积累小、测绘成果统一、操作简单、全天候等优点,在测绘各个领域被广泛运用。
实时荧光定量PCR技术在转基因检测中的应用_敖金霞
实时荧光定量PCR 技术在转基因检测中的应用收稿日期：2008-03-05基金项目：东北农业大学创新团队项目（CXT004-3-2）作者简介：敖金霞（1977-），女，黑龙江人，博士研究生，助研，主要从事转基因作物基因检测技术方面研究。
*通讯作者：教授，博士生导师，E-mail:gaoxj5390@敖金霞1，高学军1*，仇有文1，郭士成2（1．东北农业大学生命科学与生物技术研究中心，农业部转基因生物产品成分监督检测测试中心，哈尔滨150030；2．东北农业大学生命科学学院，哈尔滨150030）摘要：实时荧光定量PCR 技术是一种新型的核酸定性、定量检测、分析技术。
随着转基因产品大规模商业化，转基因生物的环境安全和食用安全性问题引起了全球范围内广泛的争论和关注。
实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR 反应后不需电泳检测等优点，使RQ-PCR 逐步成为转基因检测的重要工具。
关键词：实时荧光定量PCR ；Taq Man 探针法；SYBR Green I 染料法；转基因检测中图分类号：TS207.3文献标识码：A随着有关转基因成分标签法的建立和对于转基因食品的重视程度及量化要求的提高，定性PCR 因其在转基因检测中的高敏感性差易造成假阳性现象，以及操作误差和一些反应抑制因素带来的假阴性现象，使其已经不能再满足人们的需要。
在这种基础之上实时荧光定量PCR（Real-time quantitative polymerase chain reaction ，RQ-PCR ）发展起来，RQ-PCR 技术不仅实现了对DNA 模板的定量，而且具有灵敏度高、特异性和可靠性更强、能实现多重反应、自动化程度高、无污染性、具实时性和准确性等特点。
目前实时荧光定量PCR 已广泛应用于分子生物学、农业、医学等学科的应用和基础研究领域，并已经在转基因检测中发挥了不可替代的作用[1-2]。
1R Q -PC R 的基本原理实时荧光定量PCR 技术是指在PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监测整个PCR 进程，最后通过标准曲线，对待测样品中的未知模板进行定量分析的方法。
试议公路测量中GPS和RIK技术的应用
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８ ＿ ０ ㈠ Ｚ ￡ Ｘｆ １ ＋ຫໍສະໝຸດ ｓ＼ Ｚ Ａ ｏ／
△ 、 。ＡＺ 为平移参数， △Ｙ 、 ｏ ｉ ｎ为尺度比参数 ， 、 ￡ ｓ为旋转参数。 在转 换 时还要 考虑 转换 区域 的区域 眭 、 间性 和完整性 。 时 ３ Ｒ Ｋ技术在 公路 测量 中的应 用分析 Ｔ
民营科 技
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科技 论坛
试 议 公路测量 中 Ｇ Ｓ和 Ｒ Ｋ技术 的应用 Ｐ Ｉ
赵 升 洋
（ 疆 电力设 计 院勘 测 二 室 ， 疆 乌 鲁木 齐 ８０ ０ ） 新 新 ３０ ０
摘 要 ： 就 Ｒ Ｋ技 术 应 用 的 几个 关键 的 问题 进 行 探 讨 ， 分 析 了 Ｒ Ｋ技 术 在公 路 测 量 中的 应 用前 景 。 简要 Ｔ 并 Ｔ 关 键 词 ： Ｐ ； Ｔ ￣ 路 测 量 ； 态定 位 ； 用前 景 Ｇ Ｓ Ｒ Ｋ； 动 应
，
２ 坐标系统转换参数的求定 ． ３ Ｒ Ｋ流动 站在 实现 实 时提 供用 户 坐标 成 果 的一个 重 要环 节 是 ＷＧ ８ Ｔ Ｓ４ 到地方坐标系的转换参数问题。转换参数的确定是 Ｒ Ｋ技术投入实际使用 Ｔ 的关键。求解转换参数常用的方法是 七参数法， 坐标转换的精度取决于已知 点与待定点的几何关系， 七参数模型为：
３ 应 用 ． １
实 时动 态（ Ｔ 定位 有快 速静态 定位 和动态定 位两 种测 量模 式 ， Ｒ Ｋ） 两种定 位模式相结合 ， 在公路工程中的应用可以覆盖公路勘测 、 施工放样、 监理和 Ｇ Ｓ地理信息系统） Ｉ（ 前端数据采集。 ３１ 快速静态定位模式。要求 Ｇ Ｓ接收机在每一流动站上 ， ．１ ． Ｐ 静止的进行观 测。 在观测过程中， 同时接收基准站和卫星的同步观测数据 ， 实时解算整周未 知数和用户站的三维坐标 ， 如果解算结果的变化趋于稳定， 且其精度已满足 设计要求 ， 便可以结束实时观测。一般应用在控制测量 中， 如控制网加密 ， 若 采 用 常规测 量方 法 （ 如全 站仪 测量 ）受 客观 因 素影 响较 大 ， 自然 条件 比较 ， 在 恶劣的地区实施比较困难 ， 而采用 Ｒ Ｋ快速静态测量 ， Ｔ 可起到事半功倍的效 果。单点定位只需要 ５ １ｍｉ， －０ ｎ不及静态测量所需时问的五分之一 ， 在公路测 量 中可以代替全站仪完成导线测量等控制点加密工作。 ３１ 动态定位。测量前需要在一控制点上静止观测数分钟进行初始化工 ．２ ． 作， 之后流动站就可以按预定的采样间隔 自动进行观测 ， 并连同基准站的同 步观测数据， 实时确定采样点的空间位置。 目前其定位精度可以达到厘米级。 公路定线多是在大比例尺（ ｌ０ ｈ ０ ０或 １ ００带状地形图上进行。 ：０ ） ２ 用传统 方法测图， 先要建立控制点， 然后进行碎部测量， 绘制成大比例尺地形图。这 种方法工作量大， 速度漫， 花费时间长。应用 Ｒ Ｋ实时动态定位测量技术可 Ｔ 以完 全克 服这个 观 ， 只需在 沿线 每个 碎部 点 上停 留一 两分 钟 即可获 得每 点的坐标、 高程。结合点特征编码及属性信息， 构成带状所有碎部点的数据， 在室内将｜ 的组合数据导入的计算机， 即可用绘图软件成图。大大降低了测 图难度， 既省时又省力， 非常实用。 动态定位模式在公路勘测阶段有着广阔的应用前景 ，可以完成地形图 测绘 、 中桩测量 、 横断面测量 、 纵断面地面线测量等工作。测量 ２｜ ， ＾ｓ精度就 ４ 可 以达到 １３ｍ， 整个 测量 过 程不 需通 视 ， 着常 规测 量仪 器 （ 全站 仪 ） －ｃ 且 有 如
K1预测值准确性分析及应用考察研究
１ ０
．
Ｋ一 拟 合 系数 ， ／ ｍｉ 。 ｍＬ ｇ・ ｎ
— — — —
２ Ｑ Ｔ 一１ Ｔｑ ｉ ０
：
的集 中程度 、 位置 和煤 的瓦斯解 吸特 征 和突 出危险 临 界值 的确定 。而 是 一 种 瓦斯 解 析 特 征 指 标 ， 由 是 煤 炭科 学研 究总 院重 庆 研究 院多 年 研 究 确定 的 。其 原 理是 取 煤样后 ， ５ｍｎ或 １ ｉ ， 在 ｉ ０ｍｎ内 测定 １ 点 ０个 的每 克煤 的瓦斯 解 吸量 ， 以及测 定前 煤样 暴露 到大 气 中 的时问 ， 根据 巴雷 尔 （ ． Ｂ ｒ ｒ公 式 计 算 ， 出 Ｒ Ｍ． ａｒ ） ｅ 得
其 模 型表 达式 ：
重 庆煤科 院生产 的 ＷＴ Ｃ测 定 仪 ， 取 局 部 综合 防 突 采 措施 的“ 四位 一体 ” 保 障掘进 工作 面 的作业 安全 。 ，：
（） １
工作 面预测 指标 分为两 类 ， 一是 以钻 屑量 为代表 的应力 指标 ， 二是 瓦斯 指 标 。瓦 斯 指 标 分 为两 类 ， 一 类 是钻孔 瓦 斯涌 出初 速度 （ ） 另 一 类 是钻 屑 瓦 斯解 ｑ， 吸量指标 （ 和 ｈ ） 。预 测 效 果 的好 坏 取 决 于应 力
Ｑ 一煤 样 在 测 定 时 间 内 累 计 解 吸 的 瓦 斯
量 ，ｌ ｍ；
比例 常数 。
其后 ， 庆煤科 分 院用此 应用 于煤 与瓦 斯 突出危 重 险性 预 测预 报 中 ， 把 比例 常 数 Ｋ作 为 标 志 所 测 定 并 煤体 突 出危 险性 大小 的特征 指标 。其 模型表 达 式 ：
HPLC法测定硫化促进剂DM的含量
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细胞凋亡、坏死、自噬的检测方法与技术
第２８卷第６期Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．６滨州学院学报Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｎｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ２０１２年１２月Ｄｅｃ．，２０１２细胞凋亡、坏死、自噬的检测方法与技术收稿日期：２０１２－０４－２８第一作者简介：卢建美（１９８６—），女，山东滨州人，硕士，主要从事生物化学与分子生物学研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｔｅｒ．１８６０＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ．卢建美，赵云峰（曲阜师范大学生命科学学院，山东曲阜２７３１６５） 摘 要：目前普遍认为细胞的死亡途径有细胞凋亡、细胞坏死及自噬３种，其中细胞凋亡一直是医学界为治疗癌症而不懈努力研究的方向，而自噬是近几年研究的热点．现对这３种死亡方式及其各自的检测方法作一简要概述． 关键词：凋亡；坏死；自噬；检测方法 中图分类号：Ｑ ２５５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－２６１８（２０１２）０６－０１１４－０７１ 凋亡、坏死及自噬的概述１．１ 细胞凋亡细胞凋亡现象由Ｋｅｒｒ在１９６５年首次发现，并在１９７２年首次提出这一概念．细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏ－ｓｉｓ）是一个主动的由基因决定的自动结束生命的过程．在细胞凋亡过程中，细胞膜反折包裹断裂的染色质片段或细胞器与胞体分离，形成众多的凋亡小体，随后凋亡小体被邻近的细胞吞噬，整个过程中细胞膜保持完整，无内容物溢出，从而不会引起炎症反应．细胞凋亡同增殖一样，是维持机体细胞数量动态平衡的基本措施．在胚胎发育阶段通过细胞凋亡清除多余的和已完成使命的细胞，保证了胚胎的正常发育；在成年阶段通过细胞凋亡清除衰老和病变的细胞，保证了机体的健康．细胞凋亡调控紊乱会导致一系列疾病的发生，如自身免疫病，阿尔茨海默病等．对细胞凋亡的研究除了有助于阐明一系列免疫病的病发机制外，还能为肿瘤治疗提供新的疗法，即重建肿瘤细胞的凋亡信号传递系统，抑制肿瘤细胞生存基因的表达，使肿瘤细胞走向凋亡，而不引起炎症反应，从而不会影响机体健康．这也正是细胞凋亡的研究如此受关注的原因．１．２ 细胞坏死细胞坏死是极端的物理化学因素或严重的病理性刺激引起的细胞损伤和死亡．坏死过程中细胞器膨胀变形，染色质随机降解，细胞膜发生渗漏，导致细胞内容物释放到胞外，从而引起炎症反应．此外，未得到及时清除的凋亡细胞也会发生胞膜破裂溶解、胞浆外泄并引发炎症反应的现象，即发生继发性坏死，这在体外培养细胞及巨噬细胞发生功能障碍的机体中较为常见．细胞坏死曾被认为是偶然的不能控制的退化，但近期的研究表明，细胞坏死可能是细胞“程序性死亡”的另一种形式，具有包括引发炎症反应在内的重要生理功能．当细胞凋亡不能正常发生而细胞必须死亡时，坏死作为凋亡的“替补”方式被采用．１．３ 细胞自噬１９６２年，Ａｓｈｆｏｒｄ和Ｐｏｒｔｅｒ在人肝细胞中首次观察到自噬（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）［１］．自噬，即自体吞噬，是一种存在于正常细胞和病态细胞中的非选择性降解机制，是细胞内长寿蛋白降解的主要途径．它的主要作用是在应激状态下为细胞生长代谢提供必要的大分子物质和能量，并清除细胞内过剩或有缺陷的细胞器．在癌症治疗中，自噬是一把双刃剑，既能抑制肿瘤细胞的生存又能产生促生存效应，造第６期卢建美，赵云峰 细胞凋亡、坏死、自噬的检测方法与技术成治疗抵抗［２］．如何调节自噬使其发挥肿瘤抑制活性，成为肿瘤治疗的新靶点，这是近几年研究的热点，所以对于自噬的检测也成了一种迫切需要．１．４ 三者之间的关系细胞凋亡、坏死和自噬是３种不同的细胞死亡方式，共同维持着机体的自我平衡，在肿瘤发生发展中起重要的作用．一直以来，自噬被认为是一种细胞生存的机制，随着研究的深入，发现自噬具有双重性，首先是作为细胞的保护机制防止细胞死亡，但是当自噬达到一定水平就会促使细胞走向凋亡［３］．因此自噬通常先于凋亡，进而启动凋亡．而当发生凋亡的细胞未得到及时清除时便会导致继发性坏死，出现胞膜破裂溶解、胞浆外泄并引发炎症反应的现象．研究发现其机制为ｃａｓｐａｓｅ酶能切割与自噬有关的蛋白Ｂｅｃｌｉｎ１、Ａｔｇ５、Ａｔｇ４Ｄ，导致Ｂｅｃｌｉｎ１及Ａｔｇ５失去自噬诱导活性，而发挥促凋亡作用［４］．切割后的Ａｔｇ４Ｄ自噬活性及促凋亡活性均增加［５］．由此细胞从自噬走向凋亡．凋亡可以抑制坏死．坏死与聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（ＰＡＲＰ）导致的ＡＴＰ过度消耗及其产物介导的线粒体凋亡诱导因子释放有关．凋亡时激活的ｃａｓｐａｓｅ面每切割ＰＡＲＰ使其失活，从而抑制ＡＴＰ的过度消耗，防止坏死发生［６］．王晓东等人发现了诱导细胞坏死的关键蛋白ＲＩＰ３［７］，并发现ＲＩＰ３蛋白表达量的高低是控制细胞凋亡或细胞坏死的关键，如果ＲＩＰ３表达量高，细胞则走向坏死；ＲＩＰ３表达量低，细胞则走向凋亡．由此可见，三者之间的关系是比较复杂的，三者之间相互协调，共同维持机体结构及功能的稳定．２ 检测方法细胞凋亡、坏死及自噬无论在生化代谢途径，还是形态学方面都有显著的区别，可以根据其各自的特点，运用一定的检测手段将其区分开来．２．１ 细胞凋亡检测２．１．１ 细胞凋亡的形态学检测方法凋亡细胞会发生形态学上的改变，一般认为凋亡细胞的形态学改变是判断其凋亡的基础．在光学显微镜下可以观察到凋亡细胞大体形态的改变，如贴壁生长的凋亡细胞外形皱缩、圆化，细胞的体积变小，凋亡晚期可以观察到凋亡小体．经吖啶橙或Ｈ３３２５８染色后，在荧光显微镜下可以观察到活细胞核染色质呈现均匀分布的黄绿色或蓝色荧光，而凋亡细胞核染色质的荧光浓聚在核膜内侧，因此凋亡细胞核的特征性形态可以被清晰地辨认．在电子显微镜下可以清晰地观察到凋亡细胞超微结构的改变，如细胞表面微绒毛消失，核染色质凝聚、边缘化，细胞器集中，胞膜起泡．凋亡晚期的细胞可观察到凋亡小体或可见凋亡小体被邻近巨噬细胞吞噬的现象．激光共聚焦显微镜除用于普通形态学观察外，还可以对凋亡细胞内的大分子进行初步定位［８］．实验证实１０μｍｏｌ／Ｌ的ＭＭＰＴ作用于Ｈ１７９２细胞４８ｈ后，倒置相差显微镜下可以观察到凋亡小体及胞膜起泡，荧光显微镜下部分细胞呈现明显的染色质凝集现象［９］．此外利用荧光显微镜还可以定性地观察转染效率的高低［１０］．形态学观察法与其他方法相比更形象、更直观、更容易被接受．一般实验研究的首选是进行形态学检测．电镜形态学观察曾一度被认为是判断凋亡最经典、最可靠的方法，是鉴定细胞凋亡的金标准［１１］．然而形态学检测法也有一定的局限性，如只能定性不能定量，且在判定时存在一定的主观性．另外，扫描电镜及透射电镜的样品处理过程比较繁琐，且价格昂贵．２．１．２ 凋亡细胞的ＤＮＡ检测分析细胞凋亡的一个最主要特征是ＤＮＡ发生核小体间的断裂，产生含有不同数量核小体单位的片段，大小为１８０～２００ｂｐ的整数倍，在进行琼脂糖凝胶电泳时就形成了特征性的梯状条带（ＤＮＡｌａｄｄｅｒ）．但是当凋亡细胞数量少无法直接应用琼脂糖电泳观察凋亡细胞核ＤＮＡ的变化时，可以通过连接介导的ＰＣＲ专一性地扩增核小体的梯形片段再进行琼脂糖电泳，从而提高检测的灵敏度．此外，对凋亡细胞ＤＮＡ的检测分析还包括ＤＮＡ末端标记检测：原位切口平移（ＩＳＮＴ）和ＤＮＡ断裂的原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）．其原理都是将标记的核苷酸连接到断裂ＤＮＡ的３’羟基末端，再通过酶联显色或荧光检测定量分析结果．酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）也是常用的检测细胞凋亡的方法，其原理是在吸附有组蛋白抗体的微孔板上加入核小体５１１滨州学院学报第２８卷上清液，核小体组蛋白与抗体结合，当加入过氧化物酶标记的ＤＮＡ抗体后，它们与核小体上的ＤＮＡ结合，并对过氧化物酶底物产生显色反应，再用酶标仪对凋亡细胞进行定量分析．罗迪贤等人证实ＴＯＦＡ和ＤＮＲ处理的细胞经琼脂糖凝胶电泳后，其ＤＮＡ出现特征性的梯状条带［１２］．ＴＵＮＥＬ染色后，经电针刺处理的小鼠大脑皮层变薄并伴有局部神经元丢失［１３］．经ＥＬＩＳＡ法证实，随着ＭＭＰＴ作用时间的延长和药物浓度的增加，肺癌Ｈ１７９２细胞内核小体水平逐渐升高，表明凋亡细胞数逐渐增加［９］．ＤＮＡ检测分析与电镜检测法一样也被认为是判断细胞凋亡的金标准，但是它只能对晚期凋亡细胞进行检测．琼脂糖凝胶电泳法简单易行，但灵敏度不高，且需要的细胞数量较多．ＴＵＮＥＬ荧光素标记法灵敏度高，且可以测定在细胞周期中ＤＮＡ发生断裂的具体时相，但是不能检测只发生ＤＮＡ大片段断裂的凋亡细胞，不能定量，且容易出现坏死细胞的假阳性．ＥＬＩＳＡ法不需要特殊仪器，但不能精确测定凋亡发生的绝对量．２．１．３ 细胞凋亡相关基因的表达检测细胞凋亡时有些基因表达异常，这些基因的产物促进或抑制凋亡发生．因此检测这些基因的表达也成了确定细胞是否发生凋亡的手段之一．基因的表达包括转录和翻译两个过程，因此可以分别从转录水平和翻译水平进行检测．（１）相关基因转录水平的检测①ＲＴ－ＰＣＲ检测凋亡相关基因的表达变化细胞发生凋亡时，细胞内如Ｂｃｌ－２家族、Ｃａｓｐａｓｅ家族成员表达异常，可以用ＲＴ－ＰＣＲ对这些基因的表达进行半定量测定．首先提取细胞总ＲＮＡ，并添加要检测基因及内参基因的引物，进行ＲＴ－ＰＣＲ反应，随后通过琼脂糖凝胶电泳进行半定量检测［１４－１５］．②荧光定量ＰＣＲ检测细胞凋亡近年来，实时荧光定量ＰＣＲ作为一种新的技术在检测基因表达水平方面得到了广泛的应用，与ＲＴ－ＰＣＲ相比，其具有操作简单，反应快速，灵敏度高等优点．原理是ＰＣＲ扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团．探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；ＰＣＲ扩增时，Ｔａｑ酶的５’端～３’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，实现荧光信号的累积与ＰＣＲ产物形成完全同步．步骤是提取细胞总ＲＮＡ，设置反转录反应体系反转录成ｃＤＮＡ，取１μＬ ｃＤＮＡ，加入Ｔａｑ酶等进行实时荧光定量ＰＣＲ扩增，根据得到的ＣＴ值分别与其相对应的内参（一般为β－ａｃｔｉｎ）的ＣＴ值相减进行校正得到校正ＣＴ值，从而相对定量计算ｍＲＮＡ含量［１６］．（２）相关基因翻译水平的检测①酶活检测凋亡有３条信号通路，每条通路都有其特征性酶，如ｃａｓｐａｓｅ４或ｃａｓｐａｓｅ１２是内质网通路特有的酶，而ｃａｓｐａｓｅ９为线粒体途径所特有，因此检测这些特征性的酶对于确定具体的凋亡途径具有重要的意义．对于酶活检测，可以选用特定的试剂盒，如碧云天的ｃａｓｐａｓｅ４试剂盒，原理是ｃａｓｐａｓｅ４能催化底物Ａｃ－ＬＥＶＤ－ｐＮＡ产生黄色的ｐＮＡ，用分光光度计或酶标仪测ｐＮＡ在４０５ｎｍ处的吸光度，根据标准曲线换算成酶活力单位．②Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测蛋白表达Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ又称蛋白质印迹，是一种蛋白质的固定和分析技术，现在被广泛用于检测蛋白水平的表达．将已用聚丙烯酰胺凝胶或其他凝胶电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维素滤膜上，固定在滤膜上的蛋白质成分保留抗原活性，第一抗体与特异性抗原决定簇结合，再用荧光标记（用同位素或非同位素）的第二抗体来检测．③免疫组化免疫组化与Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ一样，也是利用了抗原与抗体特异性结合的免疫学原理，它通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，以此对组织细胞内抗原其进行定位、定性及定量研究．一般要用到石蜡切片技术．经ＲＴ－ＰＣＲ和ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳检测显示，二甲胂酸通过调节鼠表皮细胞内Ｂｃｌ－２、Ｂａｄ和ｃａｓｐａｓｅ１２的ｍＲＮＡ水平和蛋白表达水平来诱导凋亡［１７］．而ＰＣＳＫ９ｓｉＲＮＡ通过Ｂｃｌ／Ｂａｘ—ｃａｓｐａｓｅ９—ｃａｓｐａｓｅ３途径抑制ｏｘ－ＬＤＬ诱导的脐静６１１第６期卢建美，赵云峰 细胞凋亡、坏死、自噬的检测方法与技术脉内皮细胞凋亡［１８］．通过检测细胞内特定基因的表达变化可以明确细胞的凋亡途径．荧光定量ＰＣＲ与Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交相比更快更准确，能显著提高检测的特异性和灵敏度，同时，它要求操作也必须非常精确．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测法灵敏度高，但是只能做半定量分析，且部分药品毒性较大．２．１．４ 凋亡细胞的流式细胞仪检测流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置，是现代高科技多学科高度发展、综合的结晶，是目前定量测定细胞凋亡的重要方法之一．细胞凋亡时的许多特征性变化都可以用流式细胞仪检测出来．（１）磷脂酰丝氨酸外翻检测用荧光素ＦＩＴＣ标记的Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ进行磷脂酰丝氨酸外翻检测．Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ是一种Ｃａ２＋依赖性磷脂结合蛋白，能与磷脂酰丝氨酸特异性结合．正常细胞的磷脂酰丝氨酸位于细胞膜内侧，荧光素ＦＩＴＣ标记的Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ不能与ＰＳ结合．而凋亡早期，细胞的磷脂酰丝氨酸外翻到细胞膜表面，从而能与Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ特异性结合．坏死细胞由于胞膜不完整，Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ也可以与ＰＳ结合．为了将凋亡与坏死区分开来，一般采用Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ与ＰＩ双染．ＰＩ是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，因此可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来．即正常活细胞为Ａｎｎｅｘｉｎ－／ＰＩ－均低染；凋亡细胞Ａｎｎｅｘｉｎ＋高染、ＰＩ－低染；继发性坏死细胞Ａｎｎｅｘｉｎ＋／ＰＩ＋均高染．（２）凋亡细胞的ＤＮＡ检测ＰＩ虽不能透过完整的细胞膜，但经打孔后可以进入细胞插入到ＤＮＡ碱基对之间，用流式细胞仪检测掺入的ＰＩ荧光强度，即为ＤＮＡ含量．细胞凋亡时，ＤＮＡ发生断裂，膜通透性升高，一部分小分子ＤＮＡ可透出细胞外，使细胞内ＤＮＡ含量低于正常细胞，故在正常的Ｇ０／Ｇ１峰前常有一亚二倍体峰出现［１９］，即为凋亡峰（ＡＰ峰）．根据亚二倍体峰的高低可计算出凋亡细胞百分率．（３）凋亡细胞的周期检测利用流式细胞仪还可以检测出某种药物使细胞周期阻滞于哪个时期，来确认处于什么周期的细胞更易发生凋亡．如盐霉素可以使经辐射处理的癌细胞阻滞于Ｇ２期［２０］，而经表没食子儿茶素没食子酸酯（ＥＧＣＧ）处理的ＨＴ－１０８０细胞停滞于Ｇ０／Ｇ１期［２１］．此外，利用流式细胞仪还可以对细胞进行线粒体膜电位及细胞内氧化还原态的检测等．流式细胞仪检测显示，盐霉素能使经辐射处理的癌细胞阻滞在Ｇ２期，且能引起ＤＮＡ片段化［２０］．通过Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ双染显示Ｈ２Ｏ２能有效诱导树突状细胞走向凋亡，为治疗植物抗宿主病及自身免疫病等提供了新的方向［２２］．流式细胞仪常用作细胞凋亡的定量分析，具有简便、快速、特异性好、灵敏度高等特点，可以分别从ＤＮＡ及膜分子水平进行多方位的检测．但是也存在一定的局限性，如检测中漏检率和错检率很高，周期检测时固定过程难控制等．２．２ 细胞坏死检测２．２．１ 形态学检测方法同凋亡一样，坏死的细胞也有其独特的形态学变化．借助显微镜可以观察到坏死细胞体积及细胞器肿胀，细胞核稀疏成网状，细胞膜破裂引起内容物外溢等现象．２．２．２ ＤＮＡ检测分析细胞坏死的另一特点是染色质随机降解．因此ＤＮＡ电泳条带呈弥散状，而非规则的梯状条带．２．２．３ ＰＩ染色法通常采用Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ和ＰＩ双标法对凋亡细胞与坏死细胞加以鉴别．凋亡早期，磷脂酰丝氨酸外翻，但膜具有完整性，因此凋亡细胞呈Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ单标阳性．坏死细胞膜不具完整性，呈Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ和ＰＩ双染阳性．同凋亡不同，细胞坏死会引发周围组织发生炎症反应，不利于机体健康，因此单独研究坏死的文献较少．根据细胞坏死特征所采用的检测方法可以将细胞坏死与凋亡区分开来．２．３ 细胞自噬检测２．３．１ 自噬泡的观察透射电子显微镜的超微结构观察一直被认为是检测自噬的金标准［２３］．在透射电子显微镜下，可以观察到自噬的特征性变化即自噬泡及自噬溶酶体形成的全过程．首先在肿胀变形的细胞器周围出现双层膜空泡状结构，继而包裹待降解物质形成自噬体，随后与溶酶体融合形成自噬溶酶体．７１１滨州学院学报第２８卷透射电镜观察显示，暴露在香烟中的部分卵泡上皮细胞发生自体吞噬，细胞内形成许多清晰可见的自噬泡［２４］．而Ｐ５３靶基因ＩＳＧ２０Ｌ１敲除能降低细胞自噬泡水平［２５］．透射电镜观察结果形象、直观，甚至可以观察到自噬的全过程，但是存在一定的主观性，且样品处理过程比较繁琐，价格昂贵．２．３．２ 单丹（磺）酰戊二胺染色法单丹（磺）酰戊二胺（ＭＤＣ）染色法是自噬发生过程中分析分子水平机制的一种非特异的检测自噬体方法．ＭＤＣ是自噬囊泡示踪剂，能与自噬囊泡膜上的Ａｔｇ８特异性结合，因此其阳性结构可代表自噬囊泡［２６］，在荧光显微镜下可观察自噬囊泡的数量．顺铂作用于食管鳞状上皮细胞后，用ＭＤＣ对自噬囊泡染色，结果显示实验组自噬泡数量明显高于对照组，而经自噬抑制剂３－ＭＡ诱导后，自噬泡数量照组的５０％左右［２７］．由于ＭＤＣ染色法不具有自噬特异性，且假阳性较高，因此只有当自噬效应得到了肯定后，用此方法分析效应强度才有意义．２．３．３ 自噬体膜上标志性蛋白质检测微管相关蛋白１的轻链３（ＬＣ３）是目前检测自噬的唯一标志蛋白［２８］，定位在自噬体分隔膜上，在自噬体形成各阶段的内外膜及自噬溶酶体膜上也可见到．通过与绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）结合来示踪自噬形成．在正常细胞中，自噬特异性蛋白ＬＣ３呈低水平表达，且均匀地弥散在胞浆中，在荧光显微镜下呈现均匀的绿色荧光．而细胞发生自噬后，ＬＣ３表达增加并转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，斑点的个数用来评价自噬活性的高低［２９］．用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法可以检测细胞内ＬＣ３的相对含量，评价自噬水平．激光共聚焦显微镜检测显示，低氧条件下内皮细胞内含ＬＣ３－ＧＦＰ颗粒的自噬小体明显增多［３０］．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测显示顺铂作用于食管鳞状上皮细胞后，实验组Ｂｅｃｌｉｎ １与ＰＩＫⅢ含量明显升高，而加入自噬抑制剂３－ＭＡ诱导后能恰好抵消Ｂｅｃ－ｌｉｎ １与ＰＩＫⅢ表达的上调，且能降低ＬＣ３－Ⅰ的含量及减少ＬＣ３－Ⅰ向ＬＣ３－Ⅱ的转变［２７］．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测法特异性强，灵敏度高，但是只能做半定量分析，且部分药品毒性较大．此外还有间接自噬体检测法、吖啶橙染色法等．３ 结语由于不同药物触发的细胞死亡途径有多种，而每种检测方法也都有一定的局限性，因此在研究某一药物的作用机制时可以同时采用多种检测方法．例如在测定细胞活力时可采用四唑盐比色实验，也可以采用染料排斥实验进行细胞计数绘制生长曲线．在检测细胞内凋亡蛋白ｃａｓｐａｓｅ酶的表达时，可以用ＲＴ－ＰＣＲ及荧光定量ＰＣＲ半定量测定其ｍＲＮＡ含量，也可以采用试剂盒直接测定该酶的活性或用免疫印迹实验在翻译水平测定其蛋白表达量．在检测细胞核的凋亡变化时，可以通过吖啶橙或Ｈ３３２５８染色对凋亡细胞核进行形态学观察，也可以通过琼脂糖凝胶电泳对ＤＮＡ进行定性分析．总之药物作用机制的检测方法有很多，在实验过程中应该根据具体情况及实验目的进行筛选．细胞是一个复杂的有机体，凋亡、坏死及自噬是细胞自我调控维持机体稳定的３种形式，研究其各自的检测方法有助于为癌症及肿瘤治疗提供可靠的依据．目前对细胞的这３种调控方式已日渐明朗，检测手段也日益成熟，但是对三者之间的相互关联的分子机制还知之甚少．受刺激诱导以后，细胞又是如何特异性地选择了其中之一走向了死亡，还有待进一步研究．参 考 文 献：［１］ Ａｓｈｆｏｒｄ Ｔ Ｐ，Ｐｏｒｔｅｒ Ｋ Ｒ．Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｃｅｌｌ ｌｙｓｏｓｏｍｅｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６２，１２：１９８－２０２．［２］ Ｃｈｅｎ Ｎｉｎｇ，Ｖａｓｓｉｌｉｋｉ Ｋａｒａｎｔｚａ．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ ａｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｙ，２０１１，１１（２）：１５７－１６８．［３］ Ｖｉｃｅｎｃｉｏ Ｊ Ｍ，Ｇａｌｌｕｚｚｉ Ｌ，Ｔａｊｅｄｄｉｎｅ Ｎ，ｅｔ ａｌ．Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｒ ａｕｔｏｐｈａｇｙ？Ｗｈｅｎ ａ ｄａｍａｇｅｄ８１１第６期卢建美，赵云峰 细胞凋亡、坏死、自噬的检测方法与技术ｃｅｌｌ ｍｕｓｔ ｄｅｃｉｄｅ ｉｔｓ ｐａｔｈ－ａ ｍｉｎｉ－ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ，２００８，５４（２）：９２－９９．［４］ Ｋａｂｅｙａ Ｙ，Ｋａｍａｄａ Ｙ，Ｂａｄａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ａｔｇ１７ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｔｇ１ａｎｄ ａｔｇ１３ｉｎ ｙｅａｓｔａｕｔｏｐｈａｇｙ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｃｅｌｌ，２００５，１６（５）：２５４４－２５５３．［５］ Ｄｊａｖａｈｅｒｉ－Ｍｅｒｇｎｙ Ｍ，Ｍａｉｕｒｉ Ｍ Ｃ，Ｋｒｏｅｍｅｒ Ｇ．Ｃｒｏｓｓ ｔａｌｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｂｙｃａｓｐａｓｅ－ｍｅｄｉｕａｔｅｄ ｃｌｅａｖａｇｅ ｏｆ Ｂｅｃｌｉｎ－１［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０１０，２９（１２）：１７１７－１７１９．［６］ Ｚｏｎｇ Ｗ Ｘ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＣＢ．Ｎｅｃｒｏｔｉｃ ｄｅａｔｈ ａｓ ａ ｃｅｌｌ ｆａｔｅ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ，２００６，２０（１）：１－１５．［７］ Ｈｅ Ｓｕｄａｎ，Ｗａｎｇ Ｌａｉ，Ｍｉａｏ Ｌｉｎ，ｅｔ ａｌ．Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ－３ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｎｅｃ－ｒｏｔｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ＴＮＦ－α［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２００９，１３７（６）：１１００－１１１１．［８］ Ｓｕｎ Ｈｏｎｇｘｉａ，Ｘｉａ Ｑｉａｎｇ，Ｔａｎｇ ｗｅｎｃｈｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｎｉｃｋｅｌ ｏｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｈｅｍｏｃｙｔｅｓｏｆ Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）ｌａｒｖａｅ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，２０１０，５５：３９０－３９７．［９］ Ｚｈａｏ Ｙｕｎｆｅｎｇ，Ｌｉ Ｘｉｕｌａｎ，Ｈｕ Ｚｕｎｌｉ，ｅｔ ａｌ．ＭＭＰＴ：ａ ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ Ｈ１７９２ｃｅｌｌｓ ｖｉａ Ｆａｓ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｎｄ ｃａｓｐａｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＩｎｖｅｓｔＮｅｗ Ｄｒｕｇｓ，２０１０，２８：３１８－３２５．［１０］ 孙威，刘宝林．靶向Ｐｌｋ１的ｓｉＲＮＡ对肝癌细胞凋亡的影响［Ｊ］．世界华人消化杂志，２０１１，１９（２７）：２８２２－２８２８．［１１］ Ｃｏｍｐｔｏｎ Ｍ Ｍ，Ｃｉｄｌｏｗｓｋｙ Ｊ Ａ．Ｒａｐｉｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ｏｆ ｒａｔ ｌｙｍ－ｐｈｏｃｙｔｅ Ｇｅｎｏｍｉｃ ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ［Ｊ］．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１９８６，１１８：３８－４５．［１２］ 罗迪贤，李波平，高治平．ＴＯＦＡ协同柔红霉素诱导肠癌细胞株ＨＣＴ－８细胞凋亡［Ｊ］．中南医学科学杂志，２０１１，３９（５）：５１４－５２１．［１３］ Ｚｈａｏ Ｊｉａｎｘｉｎ，Ｔｉａｎ Ｙｕａｎｘｉａｎｇ，Ｘｉａｏ Ｈｏｎｇｌｉｎｇ，ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｌｅｃｔｒｏａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｏｎ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌａｎｄ ｃｏｒｔｉｃａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ Ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒａ－ｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１１，３１（４）：３４９－３５５．［１４］ 胡志坚，江永青．ｓｉＲＮＡ抑制ＮＦＢＤ１基因表达对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞凋亡的影响［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２０１１，２１（１０）：２３７３－２３７６．［１５］ 贾广乐，王众．镉诱导大鼠肾细胞凋亡及其机理的研究［Ｊ］．生态毒理学报，２００８（３）：２６８－２７３．［１６］ 郭晓慧，于小玲．实时荧光定量ＰＣＲ法检测卵巢良、恶性肿瘤中Ｉｄ１ｍＲＮＡ的表达［Ｊ］．现代肿瘤医学，２０１１，１９（１１）：２２９９－２３０１．［１７］ Ｋｉｍ Ｅｕｎｊｕ，Ｋｉｍ Ｍｉｎｊｅｏｎｇ，Ｓｕｎｇ Ｋｙｕｎｇｈｗａ，ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｏｐｉｃａｌ ｄｉｍｅｔｈｙｌａｒｓｉｎｉｃ ａｃｉｄ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘ－ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｓｋｉｎ［Ｊ］．Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１２，８８（５）：６７２－６７７．［１８］ Ｗｕ Ｃｈｕｎｙａｎ，Ｔａｎｇ Ｚｈｉｈａｎ，Ｊｉａｎｇ Ｌｕ，ｅｔ ａｌ．ＰＣＳＫ９ｓｉＲＮＡ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＨＵＶＥＣ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙｏｘ－ＬＤＬ ｖｉａ Ｂｃｌ／Ｂａｘ—ｃａｓｐａｓｅ９—ｃａｓｐａｓｅ３ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２，３５９（１－２）：３４７－３５８．［１９］ Ｎａｄｉａ Ｚｅｐｅｄａ，Ｓａｎｄｒａ Ｓｏｌａｎｏ，Ｎａｔａｌｉａ Ｃｏｐｉｔｉｎ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｃｒｅａｓｅ ｏｆ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ＣＤ４（＋），ＣＤ８（＋），ＣＤ１９（＋）ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ ｉｎ ａ ｍｕｒｉｎｅ Ｔａｅｎｉａ ｃｒａｓｓｉｃｅｐｓ ｉｎｆｅｃ－ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ Ｒｅｓ，２０１０，１０７：１１２９－１１３５．［２０］ Ｋｉｍ Ｗｏｎ Ｋｉ，Ｋｉｍ Ｊｕｈｗａ，Ｙｏｏｎ Ｋｙｕｎｇｓｉｌ，ｅｔ ａｌ．Ｓａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ，ａｐ－ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓｒａｄｉａｔｉｏｎ－ｔｒｅａｔｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｉｎｇ Ｇ２ａｒｒｅｓｔ［Ｊ］．Ｉｎｖｅｓｔ ＮｅｗＤｒｕｇｓ，２０１１，４：４１１－４１９．［２１］ Ｌｅｅ Ｍｉｈｅｅ，Ｈａｎ Ｄｏｎｇｗｏｏｋ，Ｈｙｏｎ Ｓｕｏｎｇｈｙｕ，ｅｔ ａｌ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ ＨＴ－１０８０ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ－３－Ｏ－ｇａｌｌａｔｅ ｖｉａ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ａｎｄ ｃａｓｐａｓｅｓ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ９１１滨州学院学报第２８卷Ｂｃｌ－２ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒκＢ［Ｊ］．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，２０１１，１６：７５－８５．［２２］ 刘鑫，庞铁光，姚闯，等．ＤＣ凋亡的流式细胞术分析［Ｊ］．内蒙古民族大学学报，２０１０，１６（５）：１０９－１１０．［２３］ Ｍａｒｔｉｎｅｔ Ｗ，ＤｅＭｅｙｅｒ Ｇ Ｒ，Ａｎｄｒｉｅｓ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎ ｓｉｔｕ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ［Ｊ］．Ｊ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ Ｃｙｔｏｃｈｅｍ，２００６，５４（１）：８５－９６．［２４］ Ｓｔｅｐｈａｎｉｅ Ｖｅｒｓｃｈｕｅｒｅ，Ｌｉｅｓｂｅｔｈ Ａｌｌａｉｓ，Ｓａｓｋｉａ Ｌｉｐｐｅｎｓ，ｅｔ ａｌ．Ｃｉｇａｒｅｔｔｅ ｓｍｏｋｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｉｌｅ－ｕｍ：ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｆｏｌｌｉｃｌｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ａｎｄ Ｐｅｙｅｒ’ｓ ｐａｔｃｈｅｓ［Ｊ］．Ｈｉｓｔｏ－ｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２０１２，１３７：２９３－３０１．［２５］ Ｋａｔｈｒｙｎ Ｇ Ｅｂｙ，Ｊｅｎｎｉｆｅｒ Ｍ Ｒｏｓｅｎｂｌｕｔｈ，Ｄｅｂｏｒａｈ Ｊ Ｍａｙｓ，ｅｔ ａｌ．ＩＳＧ２０Ｌ１ｉｓ ａ Ｐ５３ｆａｍｉｌｙ ｔａｒｇｅｔｇｅｎｅ ｔｈａｔ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｇｅｎｏｔｏｘｉｃ ｓｔｒｅｓｓ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ，２０１０，９：２５－２６．［２６］ 张石云，段振玲，徐琳，等．顺铂诱导卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞自噬和凋亡的研究［Ｊ］．现代妇产科进展，２０１１，２０：４５－４７．［２７］ Ｌｉｕ Ｄｏｎｇｌｅｉ，Ｙａｎｇ Ｙａｎｇ，Ｌｉｕ Ｑｕａｎ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｂｙ ３－ＭＡ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｍｅｄ Ｏｎｃｏｌ，２０１１，２８：１０５－１１１．［２８］ 齐亚莉，王俊，李岩，等．自噬体的检测及其对肿瘤的作用［Ｊ］．中国实验诊断学，２０１０，１４：７８０－７８２．［２９］ 方永奇，刘林．神经细胞自噬的研究进展［Ｊ］．中华中医药学刊，２０１１，２９：４５３－４５５．［３０］ 张瑞光．低氧微环境下内皮细胞自噬与凋亡之间作用的研究［Ｄ］．武汉：华中科技大学，２０１１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｏｆ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，Ｎｅｃｒｏｓｉｓ ａｎｄ ＡｕｔｏｐｈａｇｙＬＵ Ｊｉａｎ－ｍｅｉ，ＺＨＡＯ Ｙｕｎ－ｆｅｎｇ（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｑｕｆｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｕｆｕ２７３１６５，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｎｏｗａｄａｙｓ，ｉｔ ｉｓ ｗｉｄｅｌｙ ｂｅｌｉｅｖｅｄ ｔｈａｔ ｃｅｌｌ ｄｉｅｓ ｉｎ ｔｈｒｅｅ ｗａｙｓ：ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｎｅｃｒｏｓｉｓ ａｎｄ ａｕｔｏｐｈ－ａｇｙ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｄｉｃａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ ｍａｋｅ ｕｎｒｅｍｉｔｔｉｎｇ ｅｆｆｏｒｔｓ ｔｏｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｃａｎｃｅｒ，ｗｈｉｌｅ ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｉｓ ａｎｏｔｈｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｈｏｔｓｐｏｔ ｓｔａｒｔｅｄ ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ．Ｔｈｉｓ ａｒｔｉｃｌｅ ｇｅｎｅｒ－ａｌｌｙ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｓ ｔｈｅｓｅ ｔｈｒｅｅ ｆｏｒｍｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ｎｅｃｒｏｓｉｓ；ａｕｔｏｐｈａｇｙ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ（责任编辑：贾晶晶）０２１。
Trimble GNSS RTK操作手册-final
频率：选择一个不受干扰的频率 例 如4 1 6 .0 6 M h z
电 台 操 作 模 式 ： 选 择 基 准 站/流 动 站 基 准 站 电 台 模 式 ： 选 择T T 4 5 0 S在9 6 0 0 b p s 数字静噪：选择高灵敏度 配置好了，点击“接受”按钮。
第二页，天线类型根据手簿连接上的 接收机及接收机使用的GPS天 线 。 常用的有一体机， R8 GNSS R8/5800 R6 Internal 分体机 Zephyr Zephyr Geodetic Zephyr model 2 Zephyr Geo Mel 2
“测量到”也得根据使用的天线不 用选择不同的方法，常用的方法有， 斜 高: Zephyr ：槽口顶部 Zephry Geodetic：槽口底部 R8 GNSS、R8/5800、R6 Internal： 护圈中心 垂高 :所有的GPS天线天线座底部 都是垂高
第 一 页 ， 测 量 类 型 选 择 ：R T K 播 发 格 式 ：C M R + 输 出 附 加 的 代 码R T C M :不 选
测 站 索 引 ：2 9 截 止 高 度 角 ：1 0
做RTK 测量类型自然的选“RTK”， C M R +是T r i m b l e的 差 分 播 发 格 式 ， 测站索引用以区别同频率的不同基准站。
S u r v e y C o n t r o l l e r标 题 栏 显示当前任务的名字，如果没有打开的任务，显示无当前任务 在开始测量时，软件会先让你打开一个任务。
Survey Controller 任务行 状态行出现在屏幕底部，当手簿连接到接收机时，状态行显示当前测量模式， 下表解释了这些模式的意义。如果处于实时动态测量的精确方式， 则 平 方 根 （R M S）指 示 器 显 示 出来，它给出当前位置的 RMS，用毫周波表示。
VLBI空间大地测量技术原理简介与技术应用
VLBI空间⼤地测量技术原理简介与技术应⽤VLBI空间⼤地测量技术原理简介与技术应⽤摘要：深长基线⼲涉测量(VLBI)是重要的空间⼤地测量技术，本⽂主要简要介绍了VLBI的⼤地测量原理，以及VLBI在⼤地测量⽅⾯的⼀些应⽤。
关键词：VLBI1.前⾔空间⼤地测量在近20多年中获得了长⾜的发展，以VLBI、SLR、GPS、LLRDORIS 等为主要标志的空间测量技术⼤⼤推动了⼤地测量学的发展，也⼤⼤富了⼤地测量学，特别是空间⼤地测量学的研究内容。
这些⼿段的应⽤将⼤加强⼤地测量控制⽹的强度和可靠性，尤其是在⼤尺度范围内，可⼤⼤改善度系统误差和其它系统误差的积累。
VLBI极⾼的相对精度和分辨率，⼤⼤提⾼了如⼤地测量定位、参考框架的连接、地球⾃转和极移监测、估计地壳运动和绘制河外射电源图像等许多任务的精度⽔平。
2. VLBI⼤地测量原理甚长基线⼲涉测量(Very Long Baseline Interferometry，VLBI )是本世纪六⼗年代末发展起来的⼀种全新的空间⼤地测量技术，它通过测定来⾃河外射电源的信号在两个接收天线之间的传播延时来精确求定地⾯点间的相对位置。
VLBI 测量的⼏何原理如下图所⽰：图2-1 VLBI⼏何原理图射电源辐射出的电磁波通过地球⼤⽓到达地⾯，由基线两端的天线接收。
由于地球⾃转，电磁波的波前到达两个天线的⼏何程差(除以光速就是时间延迟差)是不断改变的。
两路信号相关的结果就得到⼲涉条纹。
天线输出的信号进⾏低噪声⾼频放⼤后，经变频相继转换为中频信号和视频信号。
由于两天线到某⼀射电源的距离不同，有⼀路程差L ，则射电信号的同⼀波前到达两天线的时间也不相同，有⼀时间延迟g τ根据图2-1的⼏何关系：gC L τ?=（1）其中C 为真空中的光速。
若设_B 为天线1到天线2的基线⽮量，K 为被观测的射电源⽅向的单位⽮量，则有：-=-K B C g 1τ（2）其对时间的倒数即为延迟率：??-=-K B t C g 1.τ（3）式(2)就是VLBI 从纯⼏何关系出发推出的时间延迟(⼏何延迟)。
公差对照表-d11公差对照表
φ
RY2.5 RY2.5
0.8 6.3
.
§9—2 公差与配合简介
一、公差与配合的基本概念 1、零件的互换性
● 互换性： 同一批零件，不经挑选和辅助加工，任取一个就可
顺利地装到机器上去，并满足机器的性能要求。 ● 保证零件具有互换性的措施：
.
标准公差 基本偏差
0
+ -
0 基本偏差
标准公差
基本尺寸
轴与孔的基本偏差代号用拉丁字母表示，大写为孔，小写 为轴，各有28个。其中H（h）的基本偏差为零，常作为基准 孔或基准轴的偏差代号。
.
A
B
+
EI
CCD D E EF F FG
零线
0-
G
H
J JS
K
M
N
P
R
S
T
UV
X
Y Z ZA ZB
ES
0
ZC
间隙
-0.020 +0.041
+0.053 +0.020
φ30
φ30
最大间隙
孔公差带 轴公差带
最小间隙
最大间隙
孔的公差 带在轴的公 差带之上。
孔公差带
最小间隙为零
轴公差带
.
➢ 过盈配合：孔和轴配合时，孔的尺寸减去相配合轴的 尺寸，其代数差为负值为过盈。具有过盈 的配合称为过盈配合。
过盈 轴径
轴公差带
标准公差是标准所列的，用以确定公差带的大小的任一 公差。标准公差分为20个等级，即：IT01、IT0、IT1至于 IT18 。IT表示公差，数字表示公差等级，从IT01至IT18依次 降低。 ❖ 基本偏差
实时荧光定量PCR技术
动物医学进展,2005,26(12):972101Progress in Veterinary Medicine专论与讲座实时荧光定量PCR技术3蒋春燕,王泰健,王 琴3,范学政(中国兽医药品监察所,北京100081)中图分类号:Q503文献标识码:B文章编号:100725038(2005)1220097205摘 要:荧光定量PCR技术是一种目前国内外应用较为广泛的定量PCR技术,是通过始点定量和荧光检测系统实时监测累积荧光强度而实现的,具有灵敏度高、特异性强、线性关系好、操作简单等优点,不但能够用于基因定量检测,还能准确定量疾病相关基因的表达,现已广泛应用于人类和动物疾病的快速检测、定量分析、早期诊断、基因分型等方面。
它可以采用绝对定量和相对定量2种方式实现定量检测,但都有各自的优缺点,需根据具体的试验选择合适的定量方式,从而得到更准确的试验结果。
提高荧光定量PCR技术的特异性和灵敏度需从多方面着手,主要指特异性探针及引物的设计,选择合适的Mg2+浓度、引物和探针浓度、循环数等。
关键词:荧光定量PCR;基因定量;检测技术随着基因诊断技术的不断发展和成熟,基因诊断在临床中的地位显得更为重要。
自从1983年Mullis发明聚合酶链式反应(polymerase chain re2 action,PCR)以来,PCR技术作为一种重要的基因诊断方法,以其迅速、简便、灵敏等优点很快成为科研、临床诊断的热点技术。
但是传统PCR技术在应用中遇到了一些难题,一是不能准确定量,二是容易交叉污染,产生假阳性。
为克服上述不足,人们采取了许多方法,如杂交法、竞争法、酶联法及尿苷酶降解法等,但均不能得到满意的结果,直到近年来荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy t rans2 fer,FRET)技术用于PCR定量后,上述问题才得到较好的解决。
1992年Higuchi等首次提出了采用动态PCR方法和封闭式检测方式对目的核酸数量进行定量分析,为解决传统PCR的难题提出了新的思路。
Occam反演及其在瞬变电磁测深中的应用
步可 以将它用第 ｋ 次模型参数表示， 即
Ｊｎ ＝ｄ一厂ｎ ）＋Ｊ ｎ （ （） ８
ｌ １ Ｅ．２
ｌ １ ３ Ｅ． ｌ Ｅ
在上式基础上 ， 直接对模型参数本身 ， 而不是其修正 量进行的约束 ， 从而有如下的优化问题 ： ｍｉ ＝ ｌ “ ｌ ｎ： ｌ Ｗｎ ｌ
满 足
ｐ ｑｍ Ａ ｌ ｌ Ｏ ｌＯ Ｏ ｌｏ ｏＯ
Ｊｎ ＝ｄ一厂ｎ ）＋Ｊ ｎ ｋ （ ｋ
（） ９
；＿
上式的改进使得在实际工作 中反演不再依赖于初始 模型参数。（ ） ９ 式是 Ｏ ｃｍ反演的基础 。 ｃａ 在 我 们 的反 演 中 ， 述 优 化 问题 被 等 价成 如 下 上 的线性 方程 组 的求解 ¨ ．
一
Ｊ＝ １
其 ｆ 称 灵 度 阵 素 为 论 中 ＝ 为敏矩 元 。讨方 。 被
便 ， 设 数据方 差 为 １ 假 。将上 式 代入 （ ） 并 对模 型 １式 参数 修 正量 极小 化 ， 有
Ｊ ｎ＝ｂ Ａ （） ４
由于问题 的非适 定 性 ， 常 要 对模 型修 正 量 加 通
社 。９ ８ １９ ．
ａ ｅ ｍｏ ｔ ｔ — ｄ ｍｅ ｓｏ ａ ｄ ｌ ｒ ｍ ｇ ｅ ｏｅ ｌ ｒｃ ｄ ｔ ｔ ｓ ｏ ｈ ｗｏ ｉ ｎ ｉｎ ｍｏ ｅ ｓ ｆｏ ｍａ ｎ ｔｔ ｌ ｉ ａａ ｌ ｕ
：
●
ｍ
∞
１０ ００
ｄ ｎ ＋ １ （ ） 一 ｋ １ ） ０
０
图 １ 四层理 论模 型的反演结果
ＡＷ
该方程可 以利用奇 异值分解技术 进行求解 。通过 （０ 式 可 以建 立起 反 演迭 代 过 程 ， １） 即可 以从 均 匀 半
Rood技术临床应用概述
脑卒中是因脑部发生血运障碍而导致脑组织 损 伤 、脑内细胞死亡的一组疾病。肢体功能障碍是 脑 卒 中 后 最 主 要 的 临 床 症 状 ，严 重 影 响 患 者 日 常 生 活 活 动 能 力 和 生 存介:谭小玲（1990-),女，学士，康复治疗师，研究方向：脑卒中康复。 a通讯作者:姜迎萍（1976-),女，博士，主任医师,研宄方向：神经系统与运动系统疾病的中西医结合康复研宄。
Rood技 术 又 称 多 种 感 觉 刺 激 疗 法 ，系 属 生 物 反 馈 技 术 。由美国物理治疗师和作业治疗师Margaret Rood于 2 0 世 纪 9 0 年 代 创 立 ，是神经发育学治疗方 法 中最早的方法m。它 是 在 特 定 器 官 如 皮 肤 、关节 等 区 域 使 用 多 种 感 觉 刺 激 ，通 过 感 觉 反 馈 环 路 调 节 脊 髓 传 出 纤 维 的 兴 奋 性 ，改 变 特 异 性 靶 肌 肉 的 皮 肤 感应 器 ，从而取得局部通促作用。近年来越来越多 临床康复中应用Rood技 术 ，本研究对现有文献进行 总 结 分 析 ，阐 述 其 可 能 的 发 挥 的 作 用 机 制 ，以更好 应 用 及 发 展 Rood技 术 。 1 Rood技术原理概述
予大量反复有目的感觉及运动反应的刺激和运动。 Rood技 术 主 要 通 过 包 括 温 度 刺 激 、机械性刺
基于掌握速度的知识追踪模型
2021576随着互联网教育的不断发展，通过运用人工智能技术来促进教育己成为必然趋势。
近年来，智能教育和在线教育平台越来越普及，学生可以在不同时刻进行学习，并且可以观看不同学校、老师开设的课程。
然而，教育平台上的学生人数远远超过教师数量，老师不可能追踪每一个学生的知识状态并提供个性化的学习路径[1]。
如何个性化每个学生的学习情况，如何让在线教育系统做到因材施教，这是当前智能教育领域中的重要研究课题[2]，也是未来教育发展的基本趋势。
知识追踪的特点是个性化和自动化[3]，其任务是根据学生与智能辅导系统的互动来自动追踪学生的知识状态随时间的变化过程，以便能够准确地预测学生对知识点的掌握情况以及学生下一次的表现。
KT任务可以形式化为一个有监督的序列学习问题：即给定学生的历史交互序列，预测学生回答下一个练习题正确的概率。
典型的知识追踪方法有：贝叶斯知识追踪（Bayesian Knowledge Tracing，BKT）[4]和深度知识追踪（Deep Knowledge Tracing，DKT）[5]。
最初的知识追踪是基于概率的贝叶斯知识追踪模型（BKT），本质上是隐马尔可夫模型（Hidden Markov Model，HMM）的一个特例，它把知识体系划分为多个知识点，学生对每个知识点的掌握情况看作隐含状态，之后根据学生的历史答题情况来更新隐含变量的概率分布。
但BKT模型存在以下几个不足：首先需要对数据进行标注，其次每个知识点的概念是单独表示的，BKT无法捕捉不同概念之间的相关性且无法有效表示复杂的概念状态转换。
随着深度学习基于掌握速度的知识追踪模型宗晓萍，陶泽泽河北大学电子信息工程学院，河北保定071002摘要：知识追踪（Knowledge Tracing，KT）是教育数据挖掘领域的研究热点。
KT能够自动发现学生的薄弱知识点，向学生推荐最佳的学习路径和练习题。
针对现有的KT模型只适用于对单个知识点建模并没有考虑学生掌握知识点快慢的问题。
GPU在遥感图像处理中的应用综述_袁涛
第２７卷第６期２０１２年１２月遥感信息Ｒｅｍｏｔｅ Ｓｅｎｓｉｎｇ ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＶｏｌ．２７，Ｎｏ．６Ｄｅｃ．，２０１２ ＧＰＵ在遥感图像处理中的应用综述袁涛①，②，马艳①，②，刘定生①（①中科院对地观测与数字地球科学中心，北京１０００９４；②中国科学院大学，北京１０００４９）收稿日期：２０１２－０２－０２ 修订日期：２０１２－０４－１３作者简介：袁涛（１９８７～），男，硕士研究生，主要研究方向是并行图像处理。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｙｕａｎ＠ｃｅｏｄｅ．ａｃ．ｃｎ摘要：遥感图像处理具有数据量大、运算密集、算法复杂等特点，如何快速、高效地处理遥感图像成为遥感图像处理技术研究的目标之一。
随着通用ＧＰＵ计算技术的飞速发展，ＧＰＵ的运算性能不断提高，具有浮点运算能力强、运算密集度高、体积小、性能功耗比和性价比高等特点，为加速遥感图像处理提供了新的途径。
本文在简要介绍与分析ＧＰＵ体系结构和编程模型的基础上，对国内外遥感图像ＧＰＵ处理研究的现状进行了概括性综述，并对这些研究工作的特点进行了简要分析，最后总结了研究中存在的问题并给出了一些未来的展望。
关键词：ＧＰＵ；并行计算；遥感图像处理ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－３１７７．２０１２．０６．０１９中图分类号：ＴＰ７９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００－３１７７（２０１２）１２４－０１１０－０８Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ＧＰＵ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｒｅｍｏｔｅ Ｓｅｎｓｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇＹＵＡＮ Ｔａｏ①，②，ＭＡ Ｙａｎ①，②，ＬＩＵ Ｄｉｎｇ－ｓｈｅｎｇ①（①Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｅａｒｔｈ Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｉｇｉｔａｌ Ｅａｒｔｈ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９４；②Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００４９）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｒｅｍｏｔｅ ｓｅｎｓｉｎｇ ｉｍａｇｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｈａｓ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｌａｒｇｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｄａｔａ，ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎ，ｃｏｍｐｌｅｘａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ，ｅｔｃ．，ｔｈｕｓ ｈｏｗ ｔｏ ｑｕｉｃｋｌｙ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｄｅａｌ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ ｒｅｍｏｔｅ ｓｅｎｓｉｎｇ ｉｍａｇｅｒｙ ｂｅｃｏｍｅｓ ａ ｈｏｔ ｒｅｓｅａｒｃｈｔｏｐｉｃ．Ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｒａｌ－Ｐｕｒｐｏｓｅ ＧＰＵ ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＧＰＵ ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｃｏｎｔｉｎｕｅｓｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ．Ｉｔｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｓｔｒｏｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｆｌｏａｔｉｎｇ ｐｏｉｎｔ ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ，ｈｉｇｈ ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎ，ｓｍａｌｌ ｖｏｌｕｍｅ，ｐｒｅｔｔｙ ｐｅｒ－ｆｏｒｍａｎｃｅ ｐｏｗｅｒ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ－ｃｏｓｔ ｒａｔｉｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｎｅｗ ｗａｙ ｔｏ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅ ｔｈｅ ｒｅｍｏｔｅ ｓｅｎｓｉｎｇ ｉｍａｇｅ ｐｒｏ－ｃｅｓｓｉｎｇ．Ｂａｓｅｄ ｏｎ ａ ｂｒｉｅｆ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ＧＰＵ ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ ｍｏｄｅｌ，ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｍａｋｅｓａｇｅｎｅｒａｌ ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｃｕｒｒｅｎｔ ＧＰＵ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｓｔａｔｕｓ ｉｎ ｒｅｍｏｔｅ ｓｅｎｓｉｎｇ ｉｍａｇｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，ａｎｄ ｂｒｉｅｆｌｙ ａｎａｌｙｚｅｓ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆｔｈｅｓｅ ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｉｔ ｓｕｍｍａｒｉｚｅｓ ｔｈｅ ｐｒｏｂｌｅｍｓ ｅｘｉｓｔｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｇｉｖｅｓ ｓｏｍｅ ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＧＰＵ；ｐａｒａｌｌｅｌ ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ；ｒｅｍｏｔｅ ｓｅｎｓｉｎｇ ｉｍａｇｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ１ 引 言现代遥感技术已经进入了一个能够动态、快速提供多种对地观测数据的新时期，通过遥感手段获得的数据量也随之急剧增长，如何快速、高效地处理海量数据是遥感图像处理技术与系统面临的重要挑战。
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由于该施工区域面积较大， 且地面以农田与湖塘洼地为主， 地形较为平坦， 为了加快原始地形测量进度， 拟投入 １台南方公 Ｐ ＳＲ Ｔ Ｋ测量技术的灵锐 Ｓ ８ ２仪器用于原始地 司研制的基于 Ｇ 形测量、 加密控制网复测及测量放样等工作， 灵锐 Ｓ ８ ２仪器具有 测量精度高、 克服雨雾天气、 采集数据快等优点。
３ 库使用的 Ｇ Ｐ ＳＲ Ｔ Ｋ仪器 为广州南方测绘公司生产的灵锐 Ｓ ８ ２ 。其静态高程精度为： ５ ； Ｒ Ｔ Ｋ高程精度： ２ｃ ｍ＋ １ｐ ｐ ｍ 。静态平面精度为： ３ ｍ ｍ＋ ２ｐ ｐ ｍ ｍ ｍ＋ １ｐ ｐ ｍ ；Ｒ Ｔ Ｋ平面精度： １ｃ ｍ＋ １ｐ ｐ ｍ 。Ｒ Ｔ Ｋ初始化时间： １ ５ｓ 。
２ Ｒ Ｔ Ｋ测高
Ｇ Ｐ ＳＲ Ｔ Ｋ技术在普通测量中使用广泛。但 Ｇ Ｐ Ｓ测高数据 的应用却没有像 Ｇ Ｐ Ｓ平面成果那样被广泛应用。由于 Ｇ Ｐ Ｓ高 程只有经过高精度的高程异常改正才能应用于工程测量和水库 河道测量中。现阶段国内测量通常采用水准测量与 Ｇ Ｐ Ｓ测量 Ｐ Ｓ ， 高程 相结合的方法进行平面和高程测量， 即平面测量采用 Ｇ 采用水准测量的方法。 Ｐ Ｓ 测量系统的测高数据为 ８ ４坐标系下的 这主要是因为 Ｇ 大地高 Ｈ ８ ４ ， 即点到 ８ ４坐标系椭球表面的距离。而在普通测量 和水利工程测量系统中， 地面点的高程采用正常高程系统， 地面 点的正常高 Ｈ ｒ即地面点沿铅垂线至似大地水准面的距离。地 面点正常高为 Ｈ 大地高为 Ｈ， 它们的关系为： Ｈ ， Ф ｒ， ｒ ＝Ｈ－Ф 为高程异常。 用传统的水准测量手段进行水准测量耗时耗力， 容易出现 人为失误。因此考虑使用 Ｇ Ｐ ＳＲ Ｔ Ｋ测高技术， 通过高程拟合最 终求出测站的高程。下面介绍在实际工程测量中， 如何求得利 用Ｇ Ｐ ＳＲ Ｔ Ｋ高程测量技术所产生的高程异常 Ф。
作者简介： 刘智杰， 男， 武警水电第二总队第五支队， 助理工程师。
６ ２ ２ ． １ 利用 Ｒ Ｔ Ｋ测量求高程异常
人 民 长 江 已知点之间的平均距离的两倍为宜。
２ ０ ０ ９年
在测区内选取部分点进行 Ｒ Ｔ Ｋ测量的同时， 进行水准测 量， 或者选取部分 Ｇ Ｐ Ｓ 点设在水准点上， 这样重合点 ｉ 的正常高 通过 Ｒ Ｔ Ｋ测量可求各点的大地高 Ｈ 高程异常为： Ｈ Ф ｒ ｉ已知， ｉ， ｉ ＝Ｈ ｉ －Ｈ ｒ ｉ。而这样只能求出测区部分点的高程异常。
３ ． ５ 数据对比
表 １是一组用常规水准测量的测得数据和利用二次曲面拟 Ｔ Ｋ高程拟合后的数据。 合模型 Ｒ
表１ 数据对比 序号 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １ ０ １ １ １ ２ １ ３ １ ４ １ ５ １ ６ １ ７ １ ８ １ ９ ２ ０ ２ １ ２ ２ ２ ３ ２ ４ 水准高 ２ ７ ． ５ ３ ４ １ ２ ６ ． ９ １ ４ ９ ２ ７ ． ０ ５ ４ ９ ２ ７ ． １ ９ ７ ２ ６ ． ４ ２ ５ ２ ２ ６ ． ６ ８ １ ４ １ ６ ． ６ ９ ９ ３ ２ １ ． ３ ２ ６ ６ ２ ０ ． ２ ０ ６ ６ ２ ６ ． ５ ７ ９ １ ２ ５ ． ６ ８ ２ ７ ２ ５ ． ３ ８ ６ ６ ２ ５ ． ８ １ １ ３ ２ ６ ． ８ ８ ０ ２ ２ ６ ． ６ ８ １ ４ ２ ６ ． ４ ２ ２ ７ ２ ６ ． ３ ９ １ ３ ２ ４ ． ７ ５ ５ ２ ２ ５ ． １ ５ ０ ４ １ ８ ． ８ ６ ９ １ ２ ３ ． ３ ３ ８ １ ２ １ ． ６ ４ ５ ７ ２ ６ ． ４ ３ ８ ７ ２ ７ ． ８ ５ ７ ４ Ｇ Ｐ Ｓ 高 ４ １ ． ８ ８ ３ ２ ４ １ ． ２ ８ ８ １ ４ １ ． ３ ６ ４ ７ ４ １ ． ４ ７ ３ ６ ４ ０ ． ５ ０ ８ ４ ４ ０ ． ６ ２ ３ ８ ３ ０ ． ７ １ ２ ９ ３ ５ ． ４ ４ ３ ８ ３ ４ ． ４ １ ４ ３ ４ ０ ． ９ ２ ９ ５ ４ ０ ． ０ ７ １ ２ ３ ９ ． ７ ５ １ ４ ０ ． １ ５ ７ ８ ４ １ ． ２ ４ ７ ７ ４ ０ ． ９ ３ １ ４ ４ ０ ． ７ ９ １ ２ ４ ０ ． ４ ５ ８ １ ３ ８ ． ８ ７ ２ ４ ３ ９ ． ２ ８ ８ ２ ３ ３ ． ０ ２ ７ ２ ３ ７ ． ５ ６ １ ６ ３ ５ ． ８ ６ ２ １ ４ ０ ． ６ ８ ０ ９ ４ ２ ． ０ ３ ４ ５ 高程异常 １ ４ ． ３ ６ １ ７ １ ４ ． ３ ６ ２ ２ １ ４ ． ３ ２ ９ ８ １ ４ ． ２ ９ ５ ４ １ ４ ． ０ ７ ３ ２ １ ３ ． ９ ２ ３ ９ １ ４ ． ０ ０ ６ ６ １ ４ ． １ ３ １ ２ １ ４ ． １ ９ ３ １ １ ４ ． ３ ６ １ ４ １ ４ ． ３ ６ １ ５ １ ４ ． ３ ６ ２ ４ １ ４ ． ３ ６ １ ５ １ ４ ． ３ ６ １ ５ １ ４ ． ２ ３ ６ １ ４ ． ３ ５ ２ ５ １ ４ ． ０ ４ ４ ５ １ ４ ． １ ３ ２ ２ １ ４ ． １ ４ ５ ３ １ ４ ． １ ２ ３ １ １ ４ ． ２ ３ ５ ５ １ ４ ． ２ ４ ３ ３ １ ４ ． ２ ３ ２ １ １ ４ ． １ ６ ３ ２ 拟合后高程 ２ ７ ． ５ ２ １ ５ ２ ６ ． ９ ２ ５ ９ ２ ７ ． ０ ３ ４ ９ ２ ７ ． １ ７ ８ ２ ２ ６ ． ４ ３ ５ ２ ２ ６ ． ６ ９ ９ ９ １ ６ ． ７ ０ ６ ３ ２ １ ． ３ １ ２ ６ ２ ０ ． ２ ２ １ ２ ２ ６ ． ５ ６ ８ １ ２ ５ ． ７ ０ ９ ７ ２ ５ ． ３ ８ ８ ６ ２ ５ ． ７ ９ ６ ３ ２ ６ ． ８ ８ ６ ２ ２ ６ ． ６ ９ ５ ４ ２ ６ ． ４ ３ ８ ７ ２ ６ ． ４ １ ３ ６ ２ ４ ． ７ ４ ０ ２ ２ ５ ． １ ４ ２ ９ １ ８ ． ９ ０ ４ １ ２ ３ ． ３ ２ ６ １ ２ １ ． ６ １ ８ ８ ２ ６ ． ４ ４ ８ ８ ２ ７ ． ８ ７ １ ３ 高程较差 ０ ． ０ １ ２ ６ － ０ ． ０ １ １ ０ ０ ． ０ ２ ０ ０ ０ ． ０ １ ８ ８ － ０ ． ０ １ ０ ０ － ０ ． ０ １ ８ ５ － ０ ． ０ ０ ７ ０ ０ ． ０ １ ４ ０ － ０ ． ０ １ ４ ６ ０ ． ０ １ １ ０ － ０ ． ０ ２ ７ ０ － ０ ． ０ ０ ２ ０ ０ ． ０ １ ５ ０ － ０ ． ０ ０ ６ ０ － ０ ． ０ １ ４ ０ － ０ ． ０ ０ ６ ０ － ０ ． ０ ２ ２ ３ ０ ． ０ １ ５ ０ ０ ． ０ ０ ７ ５ － ０ ． ０ ３ ５ ０ ０ ． ０ １ ２ ０ ０ ． ０ ２ ６ ９ － ０ ． ０ １ ０ １ － ０ ． ０ １ ３ ９ ｍ
Ｒ Ｔ Ｋ测高技术应用简介
刘 智 杰 季 建 兵 赵 亚 军
（ 武警水电第二总队 第五支队， 江苏 常州 ２ １ ３ ０ ３ １ ） 摘要： 某水电工程主要包括围堤、 充水闸、 下进出水口、 库盆开挖、 填筑及混凝土浇筑、 河道疏浚等工程施工。施
２ 工区域长度约 ２０ ０ ０ｍ ， 宽度约 １４ ０ ０ｍ ， 施工面积近 １ ２ ０万 ｍ ， 地形以农田与湖塘洼地为主， 还有少量的山地。
第４ ０卷 第 １ ２期 ２００９年 ６月 文章编号： １ ０ ０ １－ ４ １ ７ ９ （ ２ ０ ０ ９ ） １ ２－ ０ ０ ６ １－ ０ ２
人 民 长 江 Ｙ ａ ｎ ｇ ｔ ｚ ｅ Ｒ ｉ ｖ ｅ ｒ
Ｖ ｏ ｌ ． ４ ０ ， Ｎ ｏ ． １ ２ ， ２ ０ ０ ９ Ｊ ｕ ｎ ｅ
１ ． ２ Ｒ Ｔ Ｋ技术概述
Ｒ Ｔ Ｋ－ Ｒ ｅ ａ ｌ Ｔ ｉ ｍ ｅＫ ｉ ｎ ｅ ｍ ａ ｔ ｉ ｃ 是一种实时动态测量技术， 采用 了载波相位观测值实时动态差分的定位方法， 能够实时地提供 测站点在指定坐标系中的三维定位结果。在 Ｒ Ｔ Ｋ作业模式下， Ｐ Ｓ 接收机将采集到的载波相位观测量和测站坐标 基准站上 Ｇ 信息一起调制到基准站电台的载波上， 再通过基准站电台 （ 数 Ｐ Ｓ卫星进行观测并采集载波相 据链） 发射出去， 流动站在对 Ｇ 位观测量的同时， 也通过流动站电台（ 数据链） 接收由基准站电 台发射的信号， 经调解得到基准站的载波相位观测量， 流动站的 Ｇ Ｐ Ｓ 接收机再利用 Ｏ Ｔ Ｆ （运动中求解整周模糊度） 等技术由基 准站的载波相位观测量和流动站的载波相位观测量来求解整周 模糊度， 在系统内进行实时处理， 同时求出流动站的点位成果， 。流动站既可在固定点上先进行初始化后再进入 历时不到 １ｓ 动态作业， 也可在动态条件下直接开机， 并在动态环境下完成周 收稿日期： ２ ０ ０ ９－ ０ ５－ １ ０
２ ． ２ 利用曲面拟合求高程异常
近年来， 国内外学者采用数学拟合方法求解高程异常。常 用的方法有曲线拟合法， 曲面拟合法， 移动曲面法等。曲线拟合 法适用于 Ｇ Ｐ Ｓ 网线状布设的情况， 如河道， 公路， 铁路， 管线， 电 线等。当测区面积较大， 已知点数量多时， 选用移动曲面法。在 一个小范围的测区内， 二次曲面拟合是优选的方法。
３ ． ３ 二次曲面拟合模型
拟合过程如下： 设（ 其高程异常 Ф ＝ｆ ｘ ， ｙ ）为任一点的平面坐标， （ ｘ ， ｙ ）。 二次曲面拟合的 ６参数形式如下：
２ ２ ｆ （ ｘ ， ｙ ） ＝ａ ｘ＋ａ ｙ＋ａ ｘ ＋ａ ｘ ｙ＋ａ ｙ ０ ＋ａ １ ２ ３ ４ ５
１～ １ ６号点为已知控制点， １ ７～ ２ ４号点为加密点。最大较 差为 ０ ． ０ ３ ５ｍ ， 较差中误差为 ０ ． ０ １ ６６ ７ｍ ， 符合四等水准高程的 精度要求。 鉴于常规水准测量的测量高程与 Ｇ Ｐ ＳＲ Ｔ Ｋ测量拟合后高 程的较差及较差中误差都能满足施工测量规范中一定的精度要 求， 利用二次曲面拟合模型拟合 Ｇ Ｐ ＳＲ Ｔ Ｋ测高技术在该项抽水 蓄能电站下水库的工程测量中得到较好应用。
１ 概 况
１ ． １ 工程概况
某水电站工程位于安徽省芜湖市三山区峨桥镇境内， 电站 装机容量 １０ ０ ０Ｍ Ｗ（ ４× ２ ５ ０Ｍ Ｗ） ， 为日调节纯抽水蓄能电站， 电站由上水库、 输水系统、 地下厂房系统、 开关站和下水库等建 筑物组成。 该本工程主要包括围堤、 充水闸、 进出水口、 库盆开挖及河 ０ ０ｍ ， 宽度约 １４ ０ ０ｍ ， 道疏浚等工程施工。施工区域长度约 ２０