植物基因组DNA提取试剂盒(北京天根)
植物基因组DNA提取试剂盒（离心柱法）
植物基因组DNA提取试剂盒（离心柱法）(Plant Genomic DNA Mini Preparation Kit） PBZ0205‐1 20次 150.00 PBZ0205‐2 50次 370.00 简介本试剂盒用于提取多种单子叶和双子叶植物或真菌类细胞基因组DNA。
该试剂盒提供的方法简单易行，通过去垢剂处理和特殊的液体系统将裂解细胞后产生的DNA结合在柱材上，避免酚仿抽提。
所获的基因组DNA具有完整性好、产量大、纯度高和稳定性好等特点。
可以满足PCR、酶切、分子杂交和文库构建等各种分子生物学实验需要。
试剂盒组成<20次>离心柱及收集管各 20个裂解液 PDL 15ml 沉淀液 PPS 5ml 缓冲液PDB 5ml蛋白清洗液PWB 12ml 洗涤液WB 20ml 洗脱液EB 15 ml需自备的试剂无水乙醇，RNase A(25mg/ml)保存条件及有效期试剂盒保存在室温（15‐30℃）。
试剂如出现混浊或结晶，可以将试剂瓶置于55℃水浴加热，溶液变清亮后再使用。
本试剂盒有效期为12个月。
操作步骤所有离心步骤皆使用台式离心机，为室温下操作。
第一次使用前请先参考试剂瓶上的标签，在缓冲液PDB和洗涤液WB中加入无水乙醇。
1.取新鲜植物组织100mg或干重组织20mg，加入液氮充分研磨，在化冻前将粉末转移到1.5ml离心管中。
2.加入450µl经65℃预热的裂解液PDL，涡旋混匀使样品完全悬浮，加入5µl RNase A（25mg/ml），65℃水浴15分钟。
温育期间可间或振荡离心管2~3次，保证裂解充分。
3.12,000rpm离心5分钟。
用宽口吸头转移上清到一个干净的1.5ml离心管中。
4.加入150µl溶液沉淀液PPS，充分振荡混匀，冰水浴5 ‐10分钟， 此时可见大量白色沉淀，12,000rpm离心10分钟。
（该步骤去掉去垢剂，大部分蛋白质和多糖类物质）5.用宽口吸头轻轻吸取大约400µl上清于一个干净的1.5ml离心管，尽量不要吸取沉淀，避免离心柱堵塞。
TAKARA植物DNA提取试剂盒说明书
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 2 M
1.0 kbp 0.5 kbp
2.0 kbp
PCR 反应液 4 μl，1％ Agarose 电泳，M：Wide-Range DNA Ladder（50～10,000 bp） 图 3 以提取的基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增的电泳图
图 1 从植物组织中提取的基因组 DNA 电泳图 -2-
表 1 从植物组织中提取的基因组 DNA 纯度*
样品名称
样品量
Sample No.
A260/A280
A260/A230
20 mg
1
拟南芥幼芽
2
3
50 mg
4
2.2
1.4
2.2
1.4
2.1
1.7
2.1
1.7
20 mg
5
6
西红柿幼芽
7
50 mg
8
图 5 以提取的基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增的电泳图
注：长时间存放可能会有夹杂物沉淀，尽量迅速进入 下一步操作。
12. 12,000 rpm 4℃离心 10 分钟。 13. 弃上清，注意不要吸取沉淀。
注：沉淀有时肉眼看不见。
14. 加入 1 ml 70％乙醇，清洗沉淀。 15. 12,000 rpm 4℃离心 3 分钟。 16. 弃上清，注意不要吸取沉淀。 17. 沉淀干燥，加入适量 TE Buffer（约 20 μl）溶解沉
2. 取出冻结的植物组织于室温放置 5 分钟左右，使其融解。 3. 轻微离心，将植物组织收集在 Microtube 底部。 4. 使用 Pipet Tip 尖端将植物组织按压 Microtube 底部 10 次左右，进行物理破碎。 5. 加入 400 μl 的 Extraction Solution 1，剧烈振荡 5 秒钟。如果植物组织仍滞留于 Microtube 底部，
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒使用说明书
◆新型植物基因组DNA快速提取试剂盒◆目录号DN15◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外新型植物基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN15目录编号包装单位DN1501 50次DN1502 100次DN1503 200次适用范围：适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次RNaseA(10mg/ml)-20℃250 μl500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温10 ml 20 ml 40 ml缓冲液AP3/E 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
天根 快速定点突变试剂盒说明书
KM101 （20 rxn）
30 μl 200 μl 20 μl 40 μl 80 μl 20×50 μl
储存条件
收到本产品后， 请立即将FDM competent cells置于-70℃条件下保存，试剂盒其他组分 置于-20℃条件下保存。感受态细胞可在-70℃条件下保存3个月，试剂盒其他组分可在-20℃ 条件下保存1年。
50 μl 体系 2 μl 4 μl 10 μl 1.5 μl
至50 μl
终浓度 0.2 ng/μl 400 nM
1× 0.075 U/μl
－
4、将实验组及对照组按照如下PCR反应程序进行PCR反应。
PCR反应程序： 注：下表中PCR程序按照对照组实验条件设置，客户可根据自身实验进行相应调整。
阶段 预变性
■ PCR、RT-PCR系列 ■ 核酸DNA、RNA分离纯化系列 ■ DNA分子量标准 ■ 克隆载体、感受态细胞 ■ 细胞生物学产品 ■ 蛋白分子量标准 ■ 蛋白质染色、检测及定量相关产品
版本号: KM131204
Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD
PCR反应
补充延伸
循环 1×
18×
1×
温度 95℃ 94℃ 55℃ 68℃ 68℃
时间 2 min 20 sec 10 sec 2.5 min 5 min
二、质粒模板的消化
1、按照下表所述配制酶切体系： 组成成分
PCR产物 Dpn I restriction enzyme （20 U/μl） Total Volume 2、充分混匀后，将上述酶切体系于37℃条件下消化1 h。
植物基因组DNA提取试剂盒(北京天根)
植物基因组DNA提取试剂盒1 取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约30 mg，加入液氮充分研磨。
2 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μL 65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴20 min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
3 加入700 μL氯仿，充分混匀，12,000 rpm（~13,400×g）离心5 min。
注：若提取富含多酚或淀粉的植物组织，可在第3步前，用酚：氯仿/1:1进行等体积抽提。
4 小心的将上一步所得水层上相转入一个新的离心管中，加入700 μL缓冲液GP2，充分混匀。
5 将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，弃掉废液。
（吸附柱容积为700μL左右，可分次加入离心。
）6 向吸附柱CB3中加入500 μL缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7 向吸附柱CB3中加入600 μL漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8 重复操作步骤7。
9 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，倒掉废液。
将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中的乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，将溶液收集到离心管中。
转基因作物中常见Bt基因PCR检测方法的建立
转基因作物中常见Bt基因PCR检测方法的建立邵改革;闫伟;夏蔚;李葱葱;龙丽坤;李飞武【摘要】建立基于常见外源基因的转基因成分检测方法是开展转基因生物监测与检测活动的技术支撑,Bt基因作为目前商业化应用最广泛的一类外源基因,已成为转基因产品筛选检测的重要靶标.依据转基因作物中常见的6种Bt基因(cry1F、cry1C、cry1Ie、cry34Ab、cry35Ab、vip3A)的核苷酸序列设计特异性PCR引物,并经过特异性、灵敏度等一系列测试,建立上述6种Bt基因的定性PCR检测方法.结果显示,应用这些方法均可从含有相应Bt基因的样品中正确检测出预期转基因成分,方法的灵敏度可达0.10%.上述方法具有特异性强、灵敏度高等特点,适用于转基因作物中常见Bt基因的筛选检测.【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2017(045)012【总页数】4页(P31-34)【关键词】转基因作物;Bt基因;定性PCR方法【作者】邵改革;闫伟;夏蔚;李葱葱;龙丽坤;李飞武【作者单位】吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,吉林长春130033;吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,吉林长春 130033;吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,吉林长春 130033;吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,吉林长春 130033;吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,吉林长春 130033;吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,吉林长春 130033【正文语种】中文【中图分类】Q785与全球转基因作物商业化蓬勃发展相对应的是人们对于转基因技术产品的安全性越来越重视。
加强转基因产品监管，已成为世界各国管理转基因技术的一贯做法，开发行之有效的检测技术则成了转基因监管技术支撑机构的一项重要工作[1]。
PCR 技术兼具特异性强、灵敏度高、结果稳定可靠等优点，在转基因产品检测方法研究中被广泛应用，根据检测靶标功能的不同，又分为筛选PCR检测、基因特异性PCR检测、构建特异性PCR检测、转化体特异性PCR检测4类，其中基因特异性PCR检测方法以转基因作物中的外源目的基因为检测靶标，是一类常见的转基因产品成分检测方法[2]。
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒
4.
不同来源的植物组织材料中提取DNA 的量会有差异， 一般100mg新鲜组织典型产 量可达3-25μg。
5.
洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水 洗脱， 但应该确保 pH 大于 7.5， pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA 应该 DNA 如果需要长期保存， 保存在－20℃。 可以用 TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA， pH 8.0） ， 但是 EDTA 可能影响下游酶切反应， 使用时可以适当稀释。
� 1.
产品特点： 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小， 可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 3. 4.
不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 1 小时内完成。 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度， OD260/OD280 典型的比值达 1.7～1.9，可直接用于 PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。
8. 9.
◆ ◆ ◆ ◆
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒 目录号 DN15 使用手册 实验室使用，仅用于体外
新型植物基因组 DNA 快速提取试剂盒
目录号：DN15 目录编号 01 DN15 DN1501 02 DN15 DN1502 03 DN15 DN1503 包装单位 50次 100次 200次
�
适用范围： 适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA
3. 4.
65℃水浴 10 分钟，在水浴过程中颠倒离心管 2-3 次，混合样品。 加入 130 μl 缓冲液 AP2，充分混匀，冰上放置 5 分钟， 14,000 rpm 离心 5-10 分 钟，小心吸取上清到一个新的 1.5ml 离心管，注意不要吸到界面物质。
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN15目录编号包装单位DN1501 50次DN1502 100次DN1503 200次适用范围：适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次RNase A(10mg/ml) -20℃250 μl500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温10 ml 20 ml 40 ml缓冲液AP3/E 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml 吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
（TSP101）植物DNA提取试剂盒
（TSP101）植物DNA提取试剂盒Trelief T M Plant Genomic DNA Kit 植物基因组DNA提取试剂盒（通用型）TSP101本试剂盒采用独特的缓冲液系统配合特异性吸附 DNA的离心柱，可以从植物的根、茎、叶、花、果实、种子等样本中简单、快速、高效地提取基因组 DNA。
获得的基因组DNA完整性好、纯度高、质量稳定，是AFLP、RAPD、SSR 等分子标记，Southern 杂交，常规PCR，文库构建以及基因组测序等分子生物学实验的最佳选择。
试剂盒组成：TSP101-50 (50次) TSP101-200 (200次)RNase A Buffer BL Buffer gP1 Buffer gP2 Buffer PW20 ~ 25℃ 20 ~ 25℃ 20 ~ 25℃ 20 ~ 25℃ 20 ~ 25℃250μ l 13 ml 21 ml 8 ml 12 ml1 ml 55 ml 85 ml 31 ml 46 ml6个月 1年 1年 1年 1年 3个月 1年 3个月 1年 1年 1年第一次使用前加指定量乙醇13 ml 25 ml × 2Wash Buffer TE Buffer Spin Columns20 ~ 25℃ 20 ~ 25℃ 20 ~ 25℃第一次使用前加指定量乙醇 5 ml 50 个 50 个 1份 20 ml 200 个200 个 1份Collection Tubes(2.0ml) 20 ~ 25℃实验操作手册产品特点:简单快速：1 h内即可获得超纯的基因组DNA。
应用广泛：适用于各种植物组织，包括富含多糖、多酚等提取困难样本。
超纯：获得的DNA纯度高、完整性好，可直接用于各种分子生物学实验。
注意事项：1. 检查Buffer gP1 及Buffer Pw是否有固体析出，如有析出，请置于37℃水浴中溶解并摇匀。
2. Buffer PW及Wash Buffer首次使用前加入指定量的无水乙醇，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
StarSpinPlantDNA...
StarSpin Plant DNA KitStarSpin植物基因组DNA提取试剂盒【货号及规格】D106-01，50rxn【产品概述】本产品是利用硅基质材料在一定的高盐缓冲体系下能够高效、专一地吸附DNA的原理，从新鲜或冷冻植物组织中提取基因组DNA。
该产品适用范围广，可用于多种植物基因组DNA（包括叶绿体和线粒体DNA）的快速提取，每100 mg植物组织通常可提取10~30µg DNA；提取的DNA纯度高，OD260/280=1.8~2.0，长度一般为40~50kb，可直接用于酶切、PCR、real-time PCR、multiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern blot,microsatellite analysis 等各种后续分子生物学实验。
植物裂解液1（PLB1）40ml如有沉淀，65℃加热溶解沉淀后使用植物裂解液2（PLB2）20ml膜结合液（MB）50ml通用漂洗液（WB）20ml使用前请加入35ml无水乙醇通用洗脱液（EB）10ml离心吸附柱及收集管50套室温密闭干燥1.5ml无菌离心管50个室温密闭干燥产品说明书一份【保存条件】常温保存一年【使用方法】用户需自备的材料：10mg/ml RNaseA，氯仿，1.5ml离心管，塑料研钵或组织匀浆器，台式离心机，冰浴，65℃水浴1.注：此步为可选步骤，视样品的情况而定。
将150µl RNaseA溶液全部加入到植物裂解液1（PLB1）中，充分混匀。
未用完的植物裂解液（PLB1）应于4℃保存。
2.65℃预热植物裂解液（PLB1），待沉淀溶解后，充分混匀，取0.75ml加入到1.5ml离心管中并置于65℃水浴待用。
3.称取植物组织0.1~0.5g，剪成微小的碎片，加入到植物裂解液1（PLB1）中并短暂匀浆（匀浆过程中会产生大量泡沫），也可以液氮研磨后，将粉末加入到PLB1中混匀。
注意：研磨应在塑料研钵中进行，而不要使用陶瓷或玻璃研钵，以免二氧化硅吸附DNA，降低回收率。
不同DNA提取试剂盒提取作物种子基因组DNA效果的比较
DNA 提取率//μg/g 58.8 41.3 53.7
提 取 时 间 //h 1.5 1.5 1.5
价 格 // 元 / 个 12.00 12.00 12.00
玉米种子
47.2
1.84
47.2
1.0
6.40
天 根 （DP305 ）
水稻种子
35.3
1.89
35.3
1.0
6.40
大豆种子
21.6
1.99
图 3 3 种 DNA 试剂盒提取基因组 DNA 的 PCR 扩增电泳结果
出 ， 在 均 取 1 μL DNA 进 行 PCR 反 应 的 情 况 下 ， PCR 反 应 扩 增 CaMV35S 启 动 子 来 检 测 提 取 的 DNA， 宝生物和天根试剂盒的图谱较清晰，LGC 试 剂盒效果较差。
3 小结与讨论
天根试剂盒采用的是离心柱法，DNA 损耗量较 大， 但是对于日常检测提取的样品是足够使用的。 由于其对样品需求量小、耗时短、操作简单、成本 低、纯度好，在日常检测中应用较广。 宝生物试剂盒 在样品使用量上较大，水浴时间也较长，操作步骤 较天根试剂盒更为繁琐一些。 英国 LGC 类型属于磁 珠型，试剂盒内包含一个小的磁力架（可放置 2 个 1．5 mL 离心管），过程中不使用酚和氯仿，操作中不 需要高速离心，提取的 DNA 浓度较高，但成本也较 高。 综上所述，天根 DNA 提取试剂盒 DP305 较适合 从作物种子中提取基因组 DNA 进行转基因成分检 测。
参考文献： ［1］ JAMES C． 2009 年 全 球 生 物 技 术 ／ 转 基 因 作 物 商 业 化 发 展 态
势— ——第 一 个 十 四 年 （1996－2009） ［J］． 中 国 生 物 工 程 杂 志 ，
植物基因组 DNA 提取试剂盒使用说明
植物基因组DNA提取试剂盒使用说明货号：D1500规格：50T/100T保存：室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。
试剂盒内容：50T100TRNase A1ml1ml×2β-巯基乙醇250ul500ul溶液A20ml40ml溶液B7ml14ml溶液C30ml60ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液10ml20ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品简介：本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统提取植物的基因组DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。
使用本试剂盒提取的植物基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤：使用前先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、植物组织预处理：取新鲜植物组织（不超过100mg）或干重组织（不超过20mg），于液氮中充分研磨至细粉状，让液氮自然挥发。
2、将研磨好的植物组织粉末迅速转移到预先装有400ul溶液A、20ul RNase A（10mg/ml）和5ulβ-巯基乙醇的离心管中，充分颠倒混匀，室温放置10min。
3、加入140ul溶液B，充分颠倒混匀，12000rpm离心10min，将上清转移至新离心管(约400-500ul)，注意不要吸入沉淀。
4、加入和上清相同体积的溶液C，充分颠倒混匀，再加入和溶液C相同体积的无水乙醇，此时若出现絮状物，将絮状物吹散后一起加入吸附柱中，12000rpm离心5min，弃废液，一次加不完可分两次加入。
注意：如果吸附柱膜呈绿色或离心时有堵塞现象，可向吸附柱中加入600ul无水乙醇，并适当延长离心时间。
天根RNA提取说明书
2) 胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用PBS 洗涤细胞，吸除PBS ，向细胞中加入含有0.1-0.25%胰蛋白酶的PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-Free 的离心管中，300×g 离心5 min ，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清。
注意：收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，造成RNA 的产量降低。
d. 细胞悬液：离心取细胞。
每5×106-107动物细胞和植物细胞加入1 ml TRNzol-A +。
加入TRNzol-A +前不要洗涤细胞，以免降解mRNA 。
e. 血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积TRNzol-A +(推荐0.25ml 全血加入0.75 mlTRNzol-A +)，充分振荡混匀。
2. 将匀浆样品在15-30℃放置5 min ，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3. 可选步骤：4℃ 12,000 rpm(~13,400×g) 离心10 min ，取上清。
注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。
离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA ，上清中含有RNA 。
处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。
取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。
4. 每使用1 ml TRNzol-A +加0.2 ml 氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15 sec ，室温放置3 min 。
注意：如不能旋涡混匀，可手动快速颠倒混匀2 min 。
5. 4℃ 12,000 rpm(~13,400×g)离心10-15 min 。
样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和上层无色的水相，RNA 主要在水相中，把水相（约500 μl ）转移到新管中。
(如果要分离DNA 和蛋白质，可向天根公司索取提取方法)。
6. 在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，混匀，室温放置20-30 min 。
产品简介DNaseI储存液的配制-天根生化科技（北京
产品简介本试剂盒可从植物组织，特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织（如棉花叶片，成熟水稻叶片，拟南芥种子，白松松针，香蕉，枇杷叶片，马铃薯块茎，苹果，梨，西瓜果肉，猕猴桃，月季，烟草，沙棘，百合等）中快速提取总RNA，可同时处理大量不同样品。
提取的总RNA纯度高，没有基因组、蛋白和其它杂质的污染，可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、PolyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆等多种下游实验。
预防RNase污染，应注意以下几方面：1. 经常更换新手套。
因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2. 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3. RNA在裂解液SL中时不会被RNase降解。
但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。
4. 配制溶液应使用RNase-Free ddH2O。
（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%( v/v)，混匀后放置过夜，高压灭菌。
）RNA得率：使用前注意事项：1 操作前在SL中加入β-巯基乙醇至终浓度5%，如475 μl SL中加入25 μl β-巯基乙醇。
此裂解液最好现用现配。
配好的SL 4 ℃可放置一个月，裂解液SL在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。
2 植物组织裂解是否充分直接影响到RNA提取的质量和产量，本试剂盒中提供的裂解液SL，适用于大多数植物组织的裂解，但有些植物组织（例如玉米的乳白色胚乳，红豆种子或小麦种子）或丝状真菌，由于次级代谢产物较特殊，异硫氰酸胍使样品产生沉淀，导致RNA提取效果不佳的现象，此时可以向TIANGEN 公司免费索取另一种裂解液HL，将解决该问题。
3 第一次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。
DNase I储存液的配制将DNase I干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月）。
天根DP117-无内毒素质粒大提试剂盒说明书
For personal use only in study and research; not for commercial use产品简介本试剂盒采用独特的硅胶模吸附技术，高效专一地结合质粒DNA。
同时采用特殊的溶液P4和过滤器CS1，可有效的出去内毒素、蛋白质杂志；整个提取过程仅需1h，方便快捷。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和细胞转染多种细胞等试验。
推荐每次菌液使用量：高拷贝质粒推荐使用量为100ml，得率一般在500-1500μg左右；低拷贝质粒推荐使用量为200ml，得率一般在200-600μg左右。
注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1.溶液P1在使用前先加入RNase A （将试剂盒中提供的RNase A全部加入)，混匀，置于2-8℃保存。
2.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液PW中加入无水乙醇。
3.使用前先检查平衡液BL，溶液P2和P4是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
4.注意不要直接接触溶液P2和P4，使用后应立即盖紧盖子。
5.使用过滤器时请将推柄小心缓慢地从过滤管中抽出，避免滤膜因压力而松动。
6.提取的质粒量与细菌培养浓度，质粒拷贝数等因素有关。
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、P4的用量；洗脱缓冲液推荐在65-70℃水浴中预热，可以适当延长吸附和洗脱时间，以提高提取效率。
7.实验前使用平衡液BL处理吸附柱，可以最大限度激活硅基质膜，提高得率。
8.用平衡液处理过的柱子最好立即使用，放置时间过长会影响使用效果。
质粒DNA 浓度及纯度检测得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。
纯化的质粒DNA OD260/OD280通常在1.8-2.0左右，可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的实验中。
基因组纯化之试剂盒选择
这次就带大家巡一巡众多品牌的基因组DNA纯化产品，并教大家如何挑选适合自己的纯化产品。
第三站是Tiangen。
作为QIAGEN的全资子公司，Tiangen（天根）在核酸纯化上的表现还是相当不错的，质量过硬，价格合理。
在基因组DNA纯化方面，Tiangen也有不少好东西。
作为QIAGEN的全资子公司，Tiangen（天根）在核酸纯化上的表现还是相当不错的，质量过硬，价格合理。
在基因组DNA纯化方面，Tiangen也有不少好东西。
生物通这次就带你看一看畅销产品。
血液样品这一系列可是Tiangen的王牌产品，销量一直很好，并且广泛用于中华骨髓库建库。
针对不同体积的样品，Tiangen推出了不同的试剂盒。
对于少量的样品，主要是走硅胶膜纯化的路线，如果特别微量，试剂盒中还附带了Carrier RNA，提高DNA与吸附柱的结合。
对于大量的样品，它采用的是异丙醇沉淀法。
血液基因组提取试剂盒(0.1-1ml)此试剂盒是TIANGEN精心研发的特别针对血液样本的基因组DNA提取试剂盒，适合于各种抗凝剂（柠檬酸钠、EDTA 等）处理过的全血的基因组DNA 提取，也适用于血凝块的基因组DNA 提取。
试剂盒采用了独特的细胞裂解体系，使蛋白变性，结合硅胶膜特异吸附核酸的原理快速纯化得到基因组DNA。
纯化所得的DNA 无蛋白、核酸酶等污染，可直接进行PCR、酶切和Southern杂交等实验操作。
血液基因组DNA提取系统(0.1-20ml)此试剂盒采用独特的缓冲液系统，可从0.1-20 ml加入各种抗凝剂（柠檬酸钠、EDTA等）的全血、血凝块、白膜层等样本中提取DNA。
样品在裂解缓冲液FG和蛋白酶K中能够被充分裂解，经异丙醇沉淀便可以得到基因组DNA。
无需使用酚氯仿等有机溶剂，回收的DNA适用于各种常规操作。
微量样品基因组DNA提取试剂盒此试剂盒可从少量的血液、干血点、血清/血浆、微量组织、漱口水、毛发、显微切割组织等微量样品中提取基因组DNA。
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植物基因组DNA提取试剂盒
1 取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约30 mg，加入液氮充分研磨。
2 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μL 65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴20 min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
3 加入700 μL氯仿，充分混匀，12,000 rpm（~13,400×g）离心5 min。
注：若提取富含多酚或淀粉的植物组织，可在第3步前，用酚：氯仿/1:1进行等体积抽提。
4 小心的将上一步所得水层上相转入一个新的离心管中，加入700 μL缓冲液GP2，充分混匀。
5 将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，弃掉废液。
（吸附柱容积为700μL左右，可分次加入离心。
）
6 向吸附柱CB3中加入500 μL缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7 向吸附柱CB3中加入600 μL漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8 重复操作步骤7。
9 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，倒掉废液。
将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中的乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，将溶液收集到离心管中。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μL，体积过小影响回收率。
洗脱液的PH值对于洗脱效率有很大影响。
若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置 2 min，12,000 rpm （~13,400×g）离心2 min。