薄层层析,显色剂
薄层层析显色剂
通用染色剂，对要求加热可视的物质的显色，又称为Hanessian染色法
溶解0.5g Ce(NH4)2(NO3)6和24 g 的(NH4)6Mo7O24·4H2O。小心地加入28ml的硫酸，搅拌一个小时，必要时可以过滤。
2，4-二硝基苯肼
对醛和酮的显色
将12g的2， 4-二硝基苯肼、60ml的硫酸和80ml的溶解于200ml 95%的乙醇。
薄层层析显色剂
染色剂
用途
配方
对甲氧基苯甲醛
通用染色剂，尤其擅长对具有亲核性质的物质显色
向350ml冷乙醇中加入15ml的乙酸和3.5ml的对甲氧基苯甲醛。谨慎的逐滴加入50ml的浓硫酸用时要多于60分钟。0℃保存。
茚三酮
特别适合对氨基酸的显色
将1.5g的茚三酮溶于100ml的正丁醇，再加入3ml的醋酸。
溴甲酚绿
对酸性物质(pKA<5)的显色
向100ml的无水乙醇中加入0.04g的溴甲酚绿。缓慢滴加0.1M的氢氧化钠水溶液直至溶液变为浅蓝色。
磷钼酸
通用染色剂
将10g的磷钼酸溶于100ml的无水乙醇。
高锰酸钾
对烯烃和其它易氧化的物质的显示
将1.5g的高锰酸钾、10g的碳酸钾和1.25ml的10%的氢氧化钠溶于200ml的水中。
硫酸铈
一般染色剂，主要用于对生物碱的显色
配一个含有10%的硫酸铈(四价)和15%的硫酸的水溶液。
桑色素
一般试剂，对荧光活跃物质的显色
配制一个质量比为0.1%的桑色素的甲醇溶液。
薄层色谱的展开剂和显色剂
薄层色谱展开剂与显色剂展开剂的选择：一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：< p>Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Eth er,Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性;②可使成分间分开;③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间;④不与待测组分或吸附剂发生化学反应;⑤沸点适中，黏度较小;⑥展开后组分斑点圆且集中;⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离;中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离;强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂),达到最佳效果;如果没有分开的迹象(斑点较“拖”)，最好是换溶剂。
最全的TLC经验薄层层析显色剂
最全的TLC经验薄层层析显色剂TLC（Thhin-layer chromatography）是一种常用的分析技术，利用固定相上的物质分离样品中的化合物。
在TLC分析中，选择合适的显色剂是非常重要的，它可以使分离后的化合物形成明显的色斑，便于后续的观察和分析。
以下是一些常用的TLC显色剂及其应用经验：1.碘气（I2）显色剂：碘气广泛应用于氨基酸、激素、脂肪类化合物等的分析。
在整个TLC显色的过程中，容器内需维持相对湿润的环境，这有助于碘分子与分离出的化合物结合并形成色斑。
2.磷钼酸（H3PO4-MoO3）显色剂：磷钼酸显色剂对一些有机物具有较高的选择性，适用于血红素、古菌素等类似化合物的分析。
但是，过多的样品可能会导致背景的显色。
3.臭氧-有机酸显色剂：臭氧-有机酸显色剂可用于许多有机物的分析，如甾体激素、有机酸等。
显色过程中需要在高浓度臭氧气体下进行，非常危险，必须小心操作。
4.特殊显色剂：一些特殊化合物需要使用特殊的显色剂才能形成色斑，例如卡尔曼反应、尼特罗蒽酮反应等。
这些显色剂需要额外的处理步骤，并需要小心操作以避免有毒物质的接触。
此外，除了选择合适的显色剂，还有一些TLC操作经验值得注意：1.选用合适的固定相：根据分析样品的理化性质选择合适的固定相。
非极性固定相适用于极性化合物的分离，疏水性固定相适用于疏水化合物的分离等。
2.控制溶剂系统：在TLC中，正确的溶剂系统对于样品的分离非常重要。
使用不同比例的溶剂混合物，根据样品的极性和亲水性来优化分离效果。
3.控制样品施加的量：在施加样品前，要先进行样品的预处理，并确保样品施加均匀。
过多的样品可能会导致色斑扩散，影响分离效果。
4.控制板子的浸渍时间：浸渍时间的控制也非常重要，如果时间过短，样品可能没有完全被吸附;如果时间过长，可能会扩散过多的色斑，导致分离效果不佳。
5.注意保护眼睛和皮肤：在整个TLC显色的过程中，一些显色剂具有刺激性和毒性。
在操作时，必须佩戴适当的防护设备，如手套、护目镜等，以避免对人体健康的影响。
有机薄层层析法中TLC板显色问题的讨论
有机TLC板显色问题的讨论★(转)①硫酸常用的有四种溶液：硫酸-水(1：1)溶液；硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液；1.5mol／L硫酸溶液与0.5-1.5mol／L硫酸铵溶液，喷后110oC烤15min，不同有机化合物显不同颜色。
②0.5％碘的氯仿溶液对很多化合物显黄棕色。
③中性0.05％高锰酸钾溶液易还原性化合物在淡红背景上显黄色。
④碱性高锰酸钾试剂还原性化合物在淡红色背景上显黄色。
溶液I：1％高锰酸钾溶液；溶液Ⅱ：5％碳酸钠溶液；溶液I和溶液Ⅱ等量混合应用。
⑤酸性高锰酸钾试剂喷1.6％高锰酸钾浓硫酸溶液(溶解时注意防止爆炸)，喷后薄层于180oC加热15～20min。
⑥酸性重铬酸钾试剂喷5％重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150oC烤薄层。
⑦5％磷钼酸乙醇溶液喷后120oC烘烤，还原性化合物显蓝色，再用氨气薰，则背景变为无色。
⑧铁氰化钾-三氯化铁试剂还原性物质显蓝色，再喷2mol／L盐酸溶液，则蓝色加深。
溶液I：1％铁氰化钾溶液；溶液Ⅱ：2％三氯化铁溶液；临用前将溶液I和溶液Ⅱ等量混合。
2．专属性显色剂由于化合物种类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，现将在各类化合物中最常用的显色剂列举如下：(1)烃类①硝酸银／过氧化氢检出物：卤代烃类。
溶液：硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，再加30％过氧化氢1滴。
方法：喷后置未过滤的紫外光下照射；结果：斑点呈暗黑色。
②荧光素／溴检出物：不饱和烃。
溶液：I．荧光素0.1g溶于乙醇lOOml；Ⅱ．5％溴的四氯化碳溶液。
方法：先喷(I)，然后置含溴蒸气容器内，荧光素转变为四溴荧光素(曙红)，荧光消失，不饱和烃斑点由于溴的加成，阻止生成曙红而保留荧光，多数不饱和烃在粉红色背景上呈黄色。
③四氯邻苯二甲酸酐检出物：芳香烃。
溶液：2％四氯邻苯二甲酸酐的丙酮与氯代苯(10：1)的溶液。
方法：喷后置紫外光下观察。
④甲醛／硫酸检出物：多环芳烃。
薄层色谱法(TLC)解析
0.5％碘的氯仿溶液
显黄棕色
中性0.05％高锰酸钾溶液 显黄色
碱性高锰酸钾试剂
显黄色
铁氰化钾-三氯化铁试剂 还原性物质显蓝色，再喷2mol／L盐酸溶液，则蓝色加深。
5％磷钼酸乙醇溶液
还原性化合物显蓝色，再用氨气薰，则背景变为无色。
专属性显色剂
显色剂
适用化合物
硝酸银／过氧化氢
卤代烃类
荧光素／溴
不饱和烃
展开
• 以直立展开为多 • 展开剂用量：展开后仍留有三分之二以上
体积为宜；浸入展开剂的深度以距原点 0.5cm为宜； • 展开距离：8-15cm • 溶剂蒸气预饱和：15-30分钟
展开系统的饱和
• 一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放 展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待 展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖 上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展 开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防 止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。 展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开 剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影 响不大，当然动作应该尽量轻、快
五、注意事项
• 用涂布器制板的要点：玻璃板要清洁；调浆要均 匀；涂布后的薄层板应低温缓慢干燥。
• 自制薄板要求：表面均匀、平整、光滑，无麻点、 无气泡、无破损、无污染。
• 薄层厚薄对Rf值影响：硅胶G板当厚低于150μm时， Rf值随薄层的减低而增大，可变性大；板厚250 μm ， Rf改变不显著。
混合展开湿度变化 ⑶其中一种溶剂被优先吸附 ⑷各组分间可能发生相互作用 ⑸吸附剂中杂质不断流出引起组成改变
⑴至少可以把微克级的被分离物质显示出来； ⑵能给出一个确定的显示区域； ⑶显示区域有一定的稳定 性。
显色剂可以分成两大类：
薄层层析实验报告
一、实验目的1. 掌握薄层层析的基本原理和操作方法。
2. 了解薄层层析在有机化合物分离和鉴定中的应用。
3. 通过实验，学会如何根据Rf值对化合物进行鉴定。
二、实验原理薄层层析是一种常用的色谱分离技术，其基本原理是利用混合物中各组分在固定相和流动相之间的相互作用力差异，通过展开剂在固定相上的流动，使各组分在薄层板上发生不同的迁移，从而达到分离的目的。
Rf值（比移值）是衡量化合物在薄层板上迁移距离与展开剂迁移距离的比值，用于鉴定化合物。
三、实验仪器与药品1. 仪器：薄层层析板、点样器、层析缸、展开剂、显色剂、烘箱、天平等。
2. 药品：待分离的混合物、硅胶、溶剂、显色剂等。
四、实验步骤1. 薄层层析板的制备（1）称取适量硅胶，加入适量的水，搅拌均匀，待石膏开始固化时，再加入少许水，调成匀浆。
（2）将匀浆均匀地涂布在薄层板上，轻轻敲打使其平整。
（3）将涂布好的薄层板放入烘箱中，105℃烘烤活化0.5小时。
2. 点样（1）在薄层板下端2.0cm处，用铅笔轻轻划一条起始线，并在点样处用铅笔作一标记为原点。
（2）用点样器蘸取待分离的混合物，点于原点上，注意点样量不宜过多。
3. 展开剂的选择与准备（1）根据待分离化合物的性质选择合适的展开剂。
（2）将展开剂倒入层析缸中，液面略低于薄层板下端。
4. 展开与显色（1）将点好样的薄层板放入层析缸中，密封。
（2）待展开剂上升至薄层板上端后，取出薄层板，晾干。
（3）用显色剂对薄层板进行显色，观察各化合物的斑点。
5. 结果分析（1）记录各化合物的Rf值。
（2）根据Rf值对化合物进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 实验结果根据实验数据，得到以下化合物的Rf值：- 化合物A：Rf = 0.5- 化合物B：Rf = 0.7- 化合物C：Rf = 0.92. 结果分析根据Rf值，可以初步判断各化合物的性质。
在本实验中，化合物A、B、C的Rf值依次增大，说明它们在薄层板上的迁移速度依次变快，可能为不同极性的化合物。
苏丹红、苏丹黄、偶氮苯的薄层层析
苏丹红、苏丹黄、偶氮苯的薄层层析一、苏丹红(Sudan Red)苏丹红是一种常用的红色染料，被广泛应用于食品、化妆品、药品、指甲油等业界，能够赋予产品艳丽的色泽。
然而苏丹红也被认为是致癌物质之一。
为了避免食品安全问题，许多国家和地区禁止苏丹红的使用。
在分析检测方法方面，薄层层析技术是一种比较简单、快捷、经济的方法。
下面是针对苏丹红的薄层层析过程：试料：苏丹红试剂：正洁净丙酮、橄榄油(甘油)、硅胶G工具：薄层层析板、层析罐、玻璃棒、显色剂方法：1.将硅胶G加入根据需要加入橄榄油(甘油)加至湿润状态。
2.将硅胶G加至薄层层析板上。
3.将湿润硅胶G平均的铺置于薄层层析板上，待干燥。
4.取适量的苏丹红加入正洁净丙酮中，使其完全溶解（尽量不要加多）。
0.2克左右即可。
5.将Sudan Red加入到上一步得到的层析板中。
6.晾干后，将层析板塞于等温层析罐中，上面加入适量的正洁净丙酮，将罐盖好。
7.将等温层析罐放入直线扫描层析仪中，使其等温30-60分钟。
8.测定苏丹红的吸收峰，记录其波长和相对强度。
9.采用显色剂可更加准确的测定吸收峰的波长和相对强度，进而进行定量分析。
苏丹黄是一种荧光亮黄色的有机颜料，被广泛用于染料、涂料、食品、饮料等多个领域，亦为一种致癌物质。
因此，人们对其分析检测越来越重视。
下面是苏丹黄的薄层层析方法：试剂：苯酚，四氯化碳1.取得薄层层析板，并在上面用硅胶G均匀的抹上一层。
2.将苯酚和四氯化碳混合，其配比为1：1，得到的混合溶液为显色剂。
3.将苏丹黄与混合溶液按需要的含量混合，制成样品溶液。
4.将样品溶液放在层析板边缘上，慢慢靠近层析板中心。
5.用含四氯化碳小槽将薄层层析板放入液面中，控制好溶液高度。
6.让样品溶液慢慢上升，进行层析分离。
7.分离结束后，将层析板晾干。
8.将晾干的层析板放入紫外灯下进行检测，通过温和化学反应，苏丹黄将被氧化，产生出淡黄色的荧光。
9.将层析板放入显色剂中，用显色剂复过程进行检测，最后根据相对迁移率计算定量分析。
最全的TLC经验 薄层层析 显色剂
最全的TLC经验薄层色谱（TLC）是一种非常有用的跟踪反应的手段，还可以用于柱色谱分离中合适溶剂的选择。
薄层色谱常用的固定相有氧化铝或硅胶，它们是极性很大（标准）或者是非极性的（反相）。
流动相则是一种极性待选的溶剂。
在5.301中以及大多数实验室实验中，都将使用标准硅胶板。
将溶液中的反应混合物点在薄板上，然后利用毛细作用使溶剂（或混合溶剂）沿板向上移动进行展开。
根据混合物中组分的极性，不同化合物将会在薄板上移动不同的距离。
极性强的化合物会“粘”在极性的硅胶上，在薄板上移动的距离比较短。
而非极性的物质将会在流动的溶剂相中保留较长的时间从而在板上移动较大的距离。
化合物移动的距离大小用Rf值来表达。
这是一个位于0～1之间的数值，它的定义为：化合物距离基线（最先点样时已经确定）的距离除以溶剂的前锋距离基线的距离。
薄层色谱（TLC）实验步骤：1) 切割薄板。
通常，买来的硅胶板都是方形的玻璃板，必需用钻石头玻璃刀按照模板的形状进行切割。
在切割玻璃之前，用尺子和铅笔在薄板的硅胶面上轻轻地标出基线的位置（注意不要损坏硅胶面）。
借助锋利的玻璃切割刀和一把引导尺，你便可方便地进行玻璃切割。
当整块玻璃被切割后，你就可以进一步将其分成若干独立的小块了。
（开始的时候，也许你会感到有一些难度，但经过一些训练以后，你便会熟练地掌握该项技术。
）2) 选取合适的溶剂体系。
化合物在薄板上移动距离的多少取决于所选取的溶剂不同。
在戊烷和己烷等非极性溶剂中，大多数极性物质不会移动，但是非极性化合物会在薄板上移动一定距离。
相反，极性溶剂通常会将非极性的化合物推到溶剂的前段而将极性化合物推离基线。
一个好的溶剂体系应该使混合物中所有的化合物都离开基线，但并不使所有化合物都到达溶剂前端，Rf值最好在0.15~0.85之间。
虽然这个条件不一定都能满足，但这应该作为薄层色谱分析的目标（在柱色谱中，合适的溶剂应该满足Rf在0.2~0.3之间）。
那么，应该选取哪些溶剂呢？一些标准溶剂和他们的相对极性（从LLP中摘录）列于如下：强极性溶剂：甲醇〉乙醇〉异丙醇中等极性溶剂：乙氰〉乙酸乙酯〉氯仿〉二氯甲烷〉乙醚〉甲苯非极性溶剂：环己烷，石油醚，己烷，戊烷常用混合溶剂：乙酸乙酯/己烷：常用浓度0~30%。
薄层层析操作要点
薄层层析操作要点铺板铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。
匀浆配比一般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。
研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。
匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。
涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。
通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。
铺层时防止起泡,可加几滴乙醇.尝试刮边点样尽量用小的点样管。
如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。
这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。
样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。
样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。
点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。
点样是造成TLC定量误差的主要来源。
实验证明：定量毛细管更适合较小体积的点样；微量注射器更适合较大体积的点样。
这主要是因为微量注射器受小气泡、溶液回爬现象的影响较大。
为避免不同定量毛细管间的点样误差、建议一块薄层板上最好用同一只定量毛细管。
但应注意更换样品时，应将毛细管用超声波或不同极性溶剂清洗干净。
在制备样品时，溶样溶剂黏度不能过高，以便于点样；溶剂沸点过低则进样体积易变，过高则会改变展开剂组成；对样品溶解度过高会使样点发生空心现象；常用的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮。
经典TLC样点原点一般为直径3mm点间距1-2cm 底边距1.5cm；HPLC样点原点一般为直径1mm点间距5mm 底边距1cm。
展开剂配制选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。
绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。
混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。
薄层色谱的展开剂和显色剂（1）
薄层色谱展开剂与显色剂展开剂的选择： 一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：< p>Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Eth er, Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate 展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性;②可使成分间分开;③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间;④不与待测组分或吸附剂发生化学反应;⑤沸点适中，黏度较小;⑥展开后组分斑点圆且集中;⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离;中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离;强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂),达到最佳效果;如果没有分开的迹象(斑点较“拖”)，最好是换溶剂。
薄层层析法的原理和实验操作
薄层层析法的原理和实验操作引言：薄层层析法（Thin Layer Chromatography, TLC）是一种常用的分离和鉴定化合物的方法。
该技术基于化合物在薄层吸附剂上的分配和分离特性，通过比较不同化合物在薄层上的迁移速度，以实现化合物的分离和定性。
一、薄层层析法的原理薄层层析法的原理基于分配和吸附现象。
当样品溶液在薄层吸附剂上通过时，各成分的分子将在稀释的样品溶液与吸附剂固相之间分配，快速达到动态平衡。
不同成分在吸附剂上的分发度不同，导致它们在薄层上具有不同的迁移速度。
迁移速度快的化合物相对迁移到了更高位置，而迁移速度慢的则停留在了较低位置。
除了分配，薄层层析法还利用了吸附现象。
吸附剂的化学性质和物理结构可以选择性地吸附不同的化合物。
化合物在薄层上的停留时间取决于其与吸附剂的相互作用力，如氢键、范德华力、离子键等。
这使得薄层层析法能够对不同成分进行选择性分离。
二、薄层层析法的实验操作薄层层析法的实验操作分为样品制备、试剂准备、薄层制备、迁移和检测等几个步骤。
1. 样品制备样品制备是薄层层析法的前提。
通常选择合适的溶剂将待测化合物溶解，以便在薄层上均匀涂覆。
样品的浓度选择应根据实际需要决定，在保证可见性的前提下，尽量使成分区分度明显。
2. 试剂准备试剂的选择应根据需求确定。
常用的试剂有色谱级纯溶剂、染色剂和显色剂。
例如，可以选择甲醇和醋酸乙酯作为溶剂来实现对待测化合物的有效分离。
3. 薄层制备薄层通常是由无水硅胶、氧化铝或薄层硅胶片构成的。
首先，用丝网和吸水纸擦拭玻璃板，确保表面干净无尘。
然后，在玻璃板上均匀涂覆一层薄层吸附剂。
平整度和均匀厚度对薄层质量起着决定性作用。
4. 迁移在样品制备和薄层制备过程完成后，将薄层放置在预先准备的密闭容器中，以确保迁移过程的均一性。
待样品迁移结束后，取出薄层并进行干燥。
5. 检测检测是薄层层析法中不可或缺的环节。
常用的检测方法有紫外可见光谱法、显色剂法和荧光法等。
常用生物碱薄层层析显色剂
常用生物碱薄层层析显色剂
生物碱薄层层析是分析生物碱的一种常用方法，主要就是利用选择性显色剂使生物碱在层析培养基中分离出来，因此，显色剂的选择关系到analyses结果的准确性。
一般来说，生物碱薄层层析显色剂包括高沸点油酸、苯酚磺酸钾、磷酸氢钠等。
高沸点油酸是一种特殊的显色剂，具有良好的分离性和抗氧化性，经常用来显示有机碱。
苯酚磺酸钾是一种有机磷酸酯，以磷酸钾为基，是一种常用的层析显色剂，可用于某些多碱混合物的分离，特别是在有机碱和羧酸的分离中，表现出良好的分离性能。
磷酸氢钠是锂或钠盐及磷酸同类离子的共溶剂，与上述显色剂不同的是，磷酸氢钠的水溶液具有强烈的碱性，且可作为后期层析状况的改性剂，可以有效调节分析结果的准确度和精密度。
此外，生物碱薄层层析一般也添加硫酸铵或氨水等硅油表面活性剂，以有效地改善析出分析结果的精密度和准确度。
另外，生物碱溶液有时还添加有机溶剂或表面活性剂，以改善分析结果的准确度和可靠性。
总之，生物碱薄层层析的显色剂的选择非常重要，甚至可以决定生物碱薄层层析分析的准确性、精确性和有效性，因此应加以充分考虑。
薄层层析TLC通用显色剂
薄层层析TLC通用显色剂薄层层析（TLC）是一种用于分离和检测混合物成分的方法。
这种技术被广泛应用于化学、生物化学、药学、食品科学等领域。
在使用TLC技术时，显色剂是必不可少的一环，因为它可以让分离的成分更加清晰地展现出来。
本文将介绍一种通用的TLC显色剂——薄层层析TLC通用显色剂。
薄层层析TLC通用显色剂的基本原理薄层层析TLC通用显色剂是一种试剂，它可以在薄层板上显示出不同化合物之间的区别。
该显色剂可以在不同的溶剂体系中使用，并且对于不同类型的化合物都有很好的显色效果。
其基本原理是由于在不同的化学结构上，它们在薄层板表面的吸附效果是不一样的。
因此，加入TLC显色剂之后，化合物的位置就会被显现出来。
薄层层析TLC通用显色剂的具体应用薄层层析TLC通用显色剂可以应用于许多不同的化学领域，比如生物化学、分析化学、有机化学等等。
不同类型的显色剂可以选择不同的化学体系。
以下是几个常见的应用场景：蛋白质分离和鉴定薄层层析TLC通用显色剂可以用于蛋白质的分离和鉴定，特别是那些酵素、肽和蛋白质的鉴定。
在这种情况下，显色剂通常选择氨基酸颜色反应剂，例如二磺酸-巴斯加尔蓝。
药物水平试剂可以用于分析原料药、药品和生物制品，同时也可以用于药品降解产物的分离和鉴定。
在这种情况下，常常选择的是紫外荧光显色剂。
食品测定试剂也可以用于食品科学中，比如色素、防腐剂、甜味剂等组分的测定。
在这种情况下，常用的显色剂是卡尔茨黄。
薄层层析TLC通用显色剂的优势与其他显色剂相比，薄层层析TLC通用显色剂具有以下优势：•通用性比较强：不仅可以分析有机化合物，也可以使用水性或乙醇性显色剂对生物分子进行分离和检测；•灵敏度高：在很小浓度的化合物下也能显现出来；•显示效果好：没有重叠的情况，显示的效果非常清晰明了；•操作简单：显色剂的操作简单，容易上手。
薄层层析TLC通用显色剂是化学实验中不可缺少的工具。
作为一种通用性比较强的试剂，具有灵敏度高、显示效果好、操作简单等优势。
薄层层析实验报告
薄层层析实验报告薄层层析实验报告引言：薄层层析是一种常用的分离和分析技术，它基于样品中化合物在固定相上的不同分配行为，通过比较它们在固定相和流动相之间的相互作用，实现对样品中化合物的分离和鉴定。
本实验旨在通过薄层层析技术对某种复杂混合物进行分离和分析，以探究其组成和纯度。
实验材料与方法：1. 实验仪器：薄层层析仪、显色剂、扫描仪等。
2. 实验试剂：待测混合物、各种溶剂、标准物质等。
3. 实验步骤：首先，将待测混合物溶于适当的溶剂中，制备样品溶液。
然后，在薄层层析板上涂布一层均匀的固定相。
接下来，将样品溶液加在薄层层析板上，然后将薄层层析板放入层析槽中，加入适当的流动相，使其上升过程中，样品中的化合物在固定相上发生分配。
最后，取出薄层层析板，进行显色或紫外检测，记录结果。
实验结果与分析：通过本实验，我们成功地对待测混合物进行了薄层层析分离和分析。
首先，我们观察到在薄层层析板上形成了多个斑点，这些斑点对应着样品中的不同化合物。
然后，我们进行了显色或紫外检测，发现不同斑点的颜色或吸收峰有所不同，这表明它们可能是不同的化合物。
进一步分析发现，某些斑点的Rf值（相对迁移率）与已知标准物质的Rf值相符，这进一步证明了它们可能是相同的化合物。
根据实验结果，我们可以推断出待测混合物中可能存在多个化合物，并且它们在薄层层析板上的相互分配行为不同。
通过比较不同斑点的颜色、吸收峰和Rf 值，我们可以初步判断出待测混合物中的某些化合物的成分和纯度。
然而，由于薄层层析的分离效果受到多种因素的影响，如流动相的选择、固定相的性质等，因此我们还需要进一步优化实验条件，以提高分离效果和分析准确性。
实验总结：薄层层析作为一种简单、快速、经济的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
通过本次实验，我们深入了解了薄层层析的原理和应用，掌握了基本的实验操作技巧，并成功地将其应用于对某种复杂混合物的分离和分析。
然而，我们也意识到薄层层析的分离效果和分析准确性受到多种因素的影响，需要在实验中不断优化实验条件，提高实验结果的可靠性。
最全的TLC经验_薄层层析_显色剂
最全的TLC经验薄层色谱（TLC）是一种非常有用的跟踪反应的手段，还可以用于柱色谱分离中合适溶剂的选择。
薄层色谱常用的固定相有氧化铝或硅胶，它们是极性很大（标准）或者是非极性的（反相）。
流动相则是一种极性待选的溶剂。
在5.301中以及大多数实验室实验中，都将使用标准硅胶板。
将溶液中的反应混合物点在薄板上，然后利用毛细作用使溶剂（或混合溶剂）沿板向上移动进行展开。
根据混合物中组分的极性，不同化合物将会在薄板上移动不同的距离。
极性强的化合物会“粘”在极性的硅胶上，在薄板上移动的距离比较短。
而非极性的物质将会在流动的溶剂相中保留较长的时间从而在板上移动较大的距离。
化合物移动的距离大小用Rf值来表达。
这是一个位于0～1之间的数值，它的定义为：化合物距离基线（最先点样时已经确定）的距离除以溶剂的前锋距离基线的距离。
薄层色谱（TLC）实验步骤：1) 切割薄板。
通常，买来的硅胶板都是方形的玻璃板，必需用钻石头玻璃刀按照模板的形状进行切割。
在切割玻璃之前，用尺子和铅笔在薄板的硅胶面上轻轻地标出基线的位置（注意不要损坏硅胶面）。
借助锋利的玻璃切割刀和一把引导尺，你便可方便地进行玻璃切割。
当整块玻璃被切割后，你就可以进一步将其分成若干独立的小块了。
（开始的时候，也许你会感到有一些难度，但经过一些训练以后，你便会熟练地掌握该项技术。
）2) 选取合适的溶剂体系。
化合物在薄板上移动距离的多少取决于所选取的溶剂不同。
在戊烷和己烷等非极性溶剂中，大多数极性物质不会移动，但是非极性化合物会在薄板上移动一定距离。
相反，极性溶剂通常会将非极性的化合物推到溶剂的前段而将极性化合物推离基线。
一个好的溶剂体系应该使混合物中所有的化合物都离开基线，但并不使所有化合物都到达溶剂前端，Rf值最好在0.15~0.85之间。
虽然这个条件不一定都能满足，但这应该作为薄层色谱分析的目标（在柱色谱中，合适的溶剂应该满足Rf在0.2~0.3之间）。
那么，应该选取哪些溶剂呢？一些标准溶剂和他们的相对极性（从LLP中摘录）列于如下：强极性溶剂：甲醇〉乙醇〉异丙醇中等极性溶剂：乙氰〉乙酸乙酯〉氯仿〉二氯甲烷〉乙醚〉甲苯非极性溶剂：环己烷，石油醚，己烷，戊烷常用混合溶剂：乙酸乙酯/己烷：常用浓度0~30%。
薄层层析方法与注意问题
薄层层析薄层层析是将作为固定相的支持剂均匀地铺在支持板(一般是玻璃板)上，成为薄层，把样品点到薄层上，用适宜的溶剂展开，从而使样品各组分达到分离的层析技术。
如果支持剂是吸附剂，如硅胶、氧化铝、聚酰胺等，则称之为薄层吸附层析；如果支持剂是纤维素、硅藻土等，层析时的主要依据是分配系数的不同，则称之为薄层分配层析；同理，如果支持剂是离子交换剂，则称为薄层离子交换层析；薄层若由凝胶过滤剂制成，则称为薄层凝胶层析。
薄层层析的操作与纸层析相似，但比纸层析速度快，一般仅需15-30min，分辨力比纸层析高10-100倍，它既能分离0.01μg的微量样品，又能分离500mg 基至更多的样品作制备用。
薄层的制备可规格化，样品滴加后可立即展开，不受温度影响。
其缺点是Rf值的重现性比纸层析差，对生物大分子物质的分离效果不大理想。
一、支持剂的选择与处理薄层层析的支持剂种类很多。
使用时应根据欲分离物质的种类进行选择。
支持剂颗粒大小要适当。
颗粒大，展开速度快。
但颗粒过大时，分离效果不好；而颗粒过小，则展开速度太慢，容易出现拖尾现象。
一般有机类支持剂如纤维素粉的颗料为70-140目(直径0.1-0.2mm)，薄层厚度为1-2mm；无机类支持剂如氧化铝、硅胶等的颗粒一般为150-300目，薄层厚度为0.25-1mm。
在薄层层析中，使用较多的是硅胶、氧化铝等吸附剂，其处理方法同吸附柱层析。
同样，用离子交换剂，凝胶过滤剂等为支持剂时，支持剂均要按柱层析处理填料的相应方法处理。
二、薄层板的制作支持板要表面平整、光滑，用前应洗净、干燥。
常用的薄层板有硬板(湿板)与软板(干板)之分。
在支持剂中加入粘合剂(锻石膏、淀粉、羧甲基纤维素钠盐等)，调成糊状物所制成的薄层板为硬板，用粉状支持剂直接制成的薄层板为软板。
硬板粘牢在支持板上，调成糊状物喷显色剂时不会冲散，可以直立展开，而软板只能接近水平展开。
薄层板常用的制作方法有：1.浸涂法：将玻璃板在调好的支持剂浆液中浸一下，使浆液在玻璃板上形成薄层。
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薄层层析溶剂/展开剂/显色剂的选择配制及注意事项摘要：薄层色谱方法总结：使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比(如正丁醇- 冰乙酸- 水= 4：1：1，V/V/V)，或者绝对量(如18ml 甲苯+ 2 ml 甲醇)。
其总量应足以使TLC/HPTLC 板的浸入深度约为5mm。
展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相(上层或下层)，备用相关专题薄层层析（TLC）技术薄层色谱方法总结1.方法原理(1)流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。
(2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极- (诱导) - 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。
2.溶剂使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比(如正丁醇- 冰乙酸- 水= 4：1：1，V/V/V)，或者绝对量(如18ml 甲苯+ 2 ml 甲醇)。
其总量应足以使TLC/HPTLC 板的浸入深度约为5mm。
展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相(上层或下层)，备用。
一、溶剂选择规则：1、考虑分离成分的极性、溶解度、吸附度。
2、先加入极性较小的溶剂，若不容再加入少量极性大的溶剂3、一般根据相似相溶原则，需要注意，极性相差大的不混溶。
4、混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂。
5、展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
6、一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂),达到最佳效果;如果没有分开的迹象(斑点较“拖”)，最好是换溶剂。
二、展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性; ②可使成分间分开;②待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间;③不与待测组分或吸附剂发生化学反应; ⑤沸点适中，黏度较小;⑥展开后组分斑点圆且集中; ⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
三、溶剂极性参数表环已烷:-0.2、石油醚(Ⅰ类，30~60℃)、石油醚(Ⅱ类，60~90℃)、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.21、一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离;2、中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离;3、强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
四、展开剂的选择物质分子化学结构中，通常由较极性部分和非极性部分两部分。
例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。
以下分开讨论不同化合物极性情况及其对应的展开剂。
1、类极性较小的挥发性物质冰片：石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯(17:3)、厚朴酚：苯-醋酸乙酯(9:1.5)、α-香附酮：苯-醋酯乙酯-冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚：环己烷-醋酸乙酯(3:1)，结论：以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂，通常起溶解和分离化合物的作用，而用醋酸乙酯为调节Rf(比移值)的溶剂。
为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影响，适当加入添加剂，如有机酸或者有机碱。
2、类极性较小的不挥发性物质β -谷甾醇：环己烷-醋酸乙酯-甲醇(6:2.5:1)或者环己烷-丙酮(5:2)、熊果酸：甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(12:4:0.5)、齐墩果酸：氯仿-甲醇(40:1)、猪去氧胆酸：氯仿-乙醚-冰醋酸(2:2:1)、大黄素：苯—醋酸乙酯—甲醇(15:2:0.2)或者苯—乙醇(8:1)、丹参酮ⅡA：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4)、穿心莲内酯：氯仿-无水乙醇(9:1)靛玉红、靛蓝氯仿-乙醇(9:1)或者苯-氯仿-丙酮(5:4:1)结论：这类物质展开剂极性比极性较小的挥发性物质洗脱力强一些，因为这类物质极性小的母核大，而极性大的基团通常可以形成氢键，比如羧酸、羟基。
以上物质，母核分子量减小、母核结构中不饱和健的增加(尤其是出现苯环)，极性基团的增加，都使极性增加，展开剂极性也增大。
这个范围内的物质很多，一般展开剂大百分数的溶剂可以从环己烷—〉甲苯—〉二甲苯—〉苯—〉氯仿的顺序，按照极性要求选择。
这里注意，异丙醇、正丁醇极性指数也比较小，在这范围的化合物很少用，因为粘性大、展开慢，造成斑点扩散;另外，羟基的氢键作用力也有不利。
调节Rf值的溶剂，从醋酸乙酯—〉甲醇—〉丙酮—〉乙醇。
挥发性物质也有很多带羰基、羟基的，但从它的挥发性就可以明白，分子间作用力不强，另外，母核与石油醚、正构烷和苯的结构差异小，估计更容易脱离硅胶吸附，更快进入溶剂中，而不需要通过提高展开剂的极性。
由于存在糖的多羟基结构，苷元的结构影响变小。
展开剂中使用极性大的有机溶剂(氯仿、醋酸乙酯、甲醇、正丁醇)和水。
乙酸和甲酸的使用，一方面增大展开剂极性，另外也可以抑制硅胶羟基的作用，减少拖尾。
由于混溶性和硅胶耐酸能力的限制，水和酸的使用是有限度的。
3、类极性大的小分子有机酸：没食子酸：氯仿-醋酸乙酯-甲酸(5:4:1)、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸、异绿原酸。
例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。
依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸。
相应展开剂分别为：正己烷—乙醚—冰醋酸(5:5:0.1)、苯-冰醋酸-甲醇(30:1:3)、氯仿-甲醇-甲酸(9:1: 0.5)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(3:6: 1)、醋酸丁酯-甲酸-水(7:2.5:2.5)。
结论：这类物质多数是苯乙烯母核的，这个结构的极性本身比较大，另外有酚羟基和羧酸基团，个别有多羟基配基。
皂苷的展开剂差不多，极性大。
注意甲酸通常指的是浓度85%左右的，含有水。
4、类含氮有机物：盐酸小檗碱：苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(12：6：3：3：0.6)(氨蒸气饱和)或正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)、麻黄碱：氯仿-甲醇-浓氨试液(20:5:0.5)或正丁醇-冰醋酸-水(8:2:1)甘草酸铵：醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)。
结论分析：由于NH2硅醇基的作用很强，在强极性展开剂加有机酸、有机碱扫尾。
对于极性化合物，使用正丁醇对斑点扩散影响较小，因为化合物和硅胶的作用强。
当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂;被分离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。
如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂(如以硅藻土或滑石粉代替硅胶)，则洗脱剂的极性亦须相应降低。
3.TLC的通用显色方法理想的显色希望灵敏度高，斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好，斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比，在样品组成并不完全已知的情况下，通用显色方法显得尤为重要，通用显色方法主要有：\ E/m T2K gV"p Fg4244131、紫外照射法：方便、不破坏样品;Pl o;E r"m‑z s? d T$V4244132、碘蒸气法：通用性强，与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用;$b8M"}?(P [+e4244133、荧光试剂：制造荧光背景，使原来紫外下无荧光物质被鉴别，有荧光物质更明显;小木虫学术博客J-M0D6{Rf;r4、硫酸溶剂：对绝大多数有机物有效，但有破坏性。
4.薄层层析和纸色谱操作注意事项1、点样点样器点样于薄层板上,一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。
若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。
点样时必须注意勿损伤薄层表面2、展开将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封，待展开至规定距离(一般为8～15cm)，取出薄层板，晾干，待检测。
注：展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，密闭，一般保持15-30分钟。
3、显色与检视供试品含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视，也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色，或加热显色，在日光下检视。
有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在356nm紫外光灯下观察荧光色谱。
对于可见光下无色，但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板(如GF254板)，在254nm紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的色谱。
把我的祖传秘方告诉你吧PE(60-90)EtAc/PE=1:2 EtAc/PE/AcOH=15:5:1 EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O=2:1:1:18年来我用这四种体系,没有出现过什么问题.我一直在用的是乙酸乙酯：环已烷，不断调节比例，直到有满意的Rf值，有拖尾时可能要加酸或碱，我一般乙酸和三乙胺。
我用了好几年了，都还好。
不妨一试!铺板铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹;过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。
匀浆配比一般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。
研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。
匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。
涂层薄，点样易过载;涂层厚，显色不那么明显。
通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。
点样尽量用小的点样管。
如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。
这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。
样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。
样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。
点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。
展开剂配制选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。
绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。
混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。
各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这不是必须的。