Sevag+酶法除玉米须多糖中蛋白质工艺的研究

Sevag+酶法除玉米须多糖中蛋白质工艺的研究

【摘要】目的：本论文是关于玉米须多糖的脱蛋白工艺研究。方法：实验以脱蛋白率和

多糖剩余率及由此计算所得的综合评分为指标，采用Sevag+酶法脱蛋白。结果：确定最佳脱蛋

白条件酶底比0.25%，温度50℃，振荡时间8min，脱蛋白次数2次。最终多糖纯度提高为37.77%,

损失率为5.16%。结论：本法可作为玉米须多糖的脱蛋白的工艺方法。

【关键词】玉米须多糖；sevag；木瓜蛋白酶；脱蛋白

玉米须(Stigma maydis)是禾本科植物玉蜀黍的花柱和柱头，味淡、性平，有利尿、平肝、利胆等功效，用于治疗糖尿病、黄疸、麻疹等症,具有良好的市场开发前景及科研价值。由于单

纯的Sevag方法脱蛋白要想达到理想的效果需要进行脱蛋白的次数较多，造成多糖的浪费，[1]单

纯的木瓜蛋白酶处理后期酶解将产生游离蛋白质，[2]故本课题探讨玉米须多糖sevag+酶法除蛋

白工艺方法，[3]未见文献报道，以便为玉米须资源高效开发利用提供基础理论资料。

1. 实验条件

1.1 实验原料：松原玉米须

1.2 实验仪器与设备

循环水多用真空泵 SHB－ⅢA型：郑州长城科工贸有限公司；台式离心机 LDZ5-2型：北京医用离心机有限公司；紫外可见分光光度计 752型：山东高密彩虹分析仪器有限公司；恒温水浴锅W2－100S型：余姚新波仪表公司；真空干燥箱 DZF-6020：上海一恒科技有限公司。

1.3 实验药品与试剂

氯仿（AR）：天津市大茂化学试剂厂；苯酚（AR）：天津市瑞金特化学品有限公司；浓硫酸（AR）：哈尔滨化工化学试剂厂;正丁醇(AR): 天津市大茂化学试剂厂.

2. 实验步骤及方法

2.1 方法学研究实验

2.1.1 葡萄糖标准曲线

依上述测定法测得吸光度值，得到回归方程为:A=5.945x-0.0377,r=0.9995。线性范围为0.06-0.14 mg/mL。

2.1.2 标准牛血清白蛋白曲线

标准蛋白质量（mg）做横坐标，吸光度（A）作为纵坐标，得到回归方程：=x

y；线性范围为0.12-0.25 mg/mL。

.5-

.0

2806

4954

2.2 Sevag+酶法脱蛋白

2.2.1 单因素实验

分别就样液与木瓜蛋白酶的酶底比（0%、0.1%、0.15%、0.2%、0.25%），水浴温度（40℃、50℃、60℃、70℃），振荡时间（0,2，5，8，11min），振荡次数（0，1，2，3，4次）四个因素实验。【4,5,6,7】具体实验如下：

粗多糖溶液的配制：精确称取干燥粗多糖0.1g，配制成50mL多糖溶液，离心、过滤，备用。

（1）以不同酶底比为单因素，进行脱蛋白

以不同酶底比0%、0.1%、0.15%、0.2%、0.25%精确称量适量木瓜蛋白酶分别加入5mL多糖溶液中振荡溶解均匀。【8】在反应温度为60℃，PH值为5.0条件下水解1h，离心得上清液后用sevag试剂脱蛋白，脱蛋白次数1次，振荡时间为5min，离心取上清液测其吸光度，计算脱蛋白率和剩余多糖率，并以综合评分=(脱蛋白率%62.92)*0.5*100+(多糖剩余率%78.03)*0.5*100计算。数据如下表

表4 以样液与木瓜蛋白酶酶底比因素的含量测定

综合评分酶底比蛋白吸光度A 多糖吸光度A 脱蛋白率（%）多糖剩余率

（%）

0% 0.770 0.503 17.43 62.80 54.04

0.1% 0.452 0.707 42.13 78.03 83.48

0.15% 0.306 0.583 53.88 72.93 89.55

0.2% 0.202 0.700 62.13 77.59 99.09

0.25% 0.191 0.504 62.92 62.55 90.08

由以上数据可知，当样液与木瓜蛋白酶酶底比为0.2%时，脱蛋白率和多糖剩余率都较高，且综合评分最高，故可知0.2%为最佳酶底比。

（2）以酶脱蛋白时的不同水浴温度为单因素，进行脱蛋白

选择酶底比为0.2%依次称取适量木瓜蛋白酶加入5mL多糖溶液中，振荡溶解均匀在PH值为5.0条件下分别放入温度为40℃、50℃、60℃、70℃【9】的水浴锅中水解1h，离心得上清液后用sevag试剂脱蛋白，脱蛋白次数1次，振荡时间为5min，离心取上清液测其吸光度，数据如下表

表5 以温度为因素的含量测定

温度蛋白吸光度

A 多糖吸光度

A

脱蛋白率

（%）

剩余多糖率

（%）

综合评分

40℃0.113 0.825 63.95 83.55 94.20

50℃0.092 0.903 65.88 91.48 100

60℃0.101 0.814 65.05 82.43 94.42

70℃0.115 0.756 55.42 56.56 72.98 由以上数据可知，在温度为50℃时脱蛋白率和多糖剩余率都较高，且综合评分最高故可知50℃为最佳脱蛋白温度。

（3）以不同振荡时间为单因素，进行脱蛋白

选择酶底比为0.2%依次称取适量木瓜蛋白酶加入5mL多糖溶液中，振荡溶解均匀在PH值为5.0条件下放入温度为50℃水浴锅中水解1h，离心得上清液后用sevag试剂脱蛋白，选择不同振荡时间0，2，5，8，11min分别振荡一次。离心取上清液测其吸光度，数据如下表

表6 以振荡时间为因素的含量测定

时间（min）蛋白吸光度

A 多糖吸光度

A

脱蛋白率(%) 剩余多糖率

(%)

综合评分

0 0.273 0.935 54.03 83.48 91.01

2 0.209 0.835 63.84 75.24 93.66

5 0.195 0.807 64.92 72.71 92.99

8 0.193 0.855 65.07 70.02 91.51

11 0.180 0.946 63.36 84.34 98.69

由以上数据可知，在振荡时间为11min脱蛋白率和多糖剩余率都较高，且综合评分最高故可知11 min为最佳振荡时间。

（4）以不同振荡次数为单因素，进行脱蛋白

选择酶底比为0.2%依次称取适量木瓜蛋白酶加入5mL多糖溶液中，振荡溶解均匀在PH值为5.0条件下放入温度为50℃水浴锅中水解1h，离心得上清液后用sevag试剂脱蛋白，选择不同振荡次数0，1，2，3，4次【9】分别振荡5min。离心取上清液测其吸光度，数据如下表

表7 以脱蛋白次数为因素的含量测定

次数蛋白吸光度

A 多糖吸光度

A

脱蛋白率（%）多糖剩余率

（%）

综合评分

0 0.161 0.972 57.60 93.42 83.81

1 0.183 0.965 60.58 78.6

2 77.64