XX大学本科课程教学大纲【模板】(2)

东北农业大学本科课程教学大纲

课程名称：基础植物分子生物技术实验

英文名称：Basic Plant Molecular Biotechnology

一、理论课程（或实验课程）课号：********x

适用专业：农学，农学（农产品），农学（种子）

理论课程总学时：0

实验总学时（周学时）：16

学分：0.5

开出实验个数：（验证实验个；综合实验 2 个；设计实验个；创新性实验个）

应开实验学期：第七学期

二、实验课程简介

《基础植物分子生物技术实验》内容附属于《基础植物分子生物技术》课程。旨在让学生通过实验，一方面进一步印证、巩固和丰富课堂的理论教学内容，另一方面加强学生动手操作能力，促进理论联系实际，对生物技术的应用有较深刻的体会。

本实验课程共安排2次实验，均为综合性实验。

三、实验教学目标及基本要求

通过本实验的学习，要求学生了解分子生物学实验的基本原理，能掌握生物技术的关键技术，并完成质粒DNA提取，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法等基本实践环节的工作任务；能利用相关知识解决分子生物学中出现问题，对植物生理生化的特性有进一步的了解。

四、教材及主要参考书（2000年后出版的书籍）

1教材:肖尊安.植物生物技术.化工出版社，2005.

2主要参考书:

王关林，方宏筠.植物基因工程.科学出版社，2002.

胡松年，薛庆中.基因组数据分析手册.浙江大学出版社，2003.

F.M.奥斯伯等.精编分子生物学（第四版）.科学出版社，2005.

Joe Sambrook, David Russell.分子克隆实验指南(黄培堂等译).科学出

版社，2002.

郭尧君.蛋白质电泳技术（第二版）.科学出版社，2005.

五、考核办法

完成实验报告程度。

大纲主撰人：韩英鹏

（一）实验项目1

感受态细胞的制备与质粒DNA的转化

1．实验特点

实验类型：专业基础

实验类别：综合

计划学时：8学时

每组人数：5人

首开日期：

2. 实验目的与要求

2.1目的：学习感受态细胞的制备与质粒DNA的转化的方法。

2.2要求：通过本课程的学习，加深对《农业生物技术》基础理论、基本知识的理解，培养学生理论与实践相结合的能力，使学生获得运用农业生物技术原理进行对植物的基本实验技能和综合运用所学知识分析问题和解决问题的能力。3．主要仪器设备

4．实验内容提要

重组质粒DNA转化不同细菌有不同的转变效率。目前PUC19对E．Coli, DH5α或JMl09菌株的转化，已达到105～107转化子／mg DNA (最高可达108转化子)。转化效率的高低与实验的成败直接相关。DNA分子转化的过程如下：4.1吸附：完整的双链DNA分子吸附在受体菌的表面。

4.2转入：双链DNA分子解链，单链DNA进入受体菌，另一链降解。

4.3自稳：外源质粒DNA分子在细胞内又复制成双镶环状DNA。

4.4表达：供体基因随同复制子同时复制，并被转录转译。对DNA分子来说，成

功转化的比率极小，仅占DNA分子的0.01％。

5．实验操作要点

5.1 全过程必须无菌操作

5.2为达到高效转化，活细胞数务必少于108 个/ml，这相当于OD=0.4。

6．注意事项

6.1连接后的DNA溶液与细胞混合后，一定要在冰浴条件下操作，如果温度时

高时低，转化效率将极差。

6.2 DNA连接液的盐浓度较高，与细胞混合时要加以稀释，因为高盐浓度会影响

转化率。

6.3所有的菌液涂皿操作，只需一根玻璃涂布棒，用95%酒精在火焰下灭菌冷却后即可用。注意避免反复来回涂布，因为感受态细胞的细胞壁有了变化，过多的机械挤压涂布会使细胞破裂，影响转化率。

（二）实验项目2

蛋白质含量测定-考马斯亮蓝G-250法

1．实验特点

实验类型：专业基础

实验类别：综合

计划学时：8学时

每组人数：5人

首开日期：

2．实验目的与要求

2.1 目的：学习和掌握考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量的原理和方法。

2.2 要求：通过本课程的学习，加深基础理论、基本知识的理解，培养学生理论

与实践相结合的能力，使学生获得运用农业生物技术原理进行对植物的基本实验技能和综合运用所学知识分析问题和解决问题的能力。

3．主要仪器设备

4．实验内容提要

考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为青色，前者最大光吸收在465 nm，后者在595 nm。在一定蛋白质浓度范围内(0～1000 g／ml)，蛋白质一色素结合物在595 nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质

的含量测定。蛋白质和考马斯亮蓝G-250结合在2 min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1 h内保持稳定；该反应非常灵敏，可测微克级蛋白质含量，所以是一种比较好的蛋白质定量法。

5．实验操作要点

5.1蛋白质标准液的配制：称取100 ml牛血清白蛋白，溶于100 ml蒸馏水中，即为1000 g/ml的原液。

5.2考马斯亮兰G-250蛋白试剂的配制，称取100 mg考马斯亮兰G-250，溶于50 ml 95％乙醇中，加入85％(W／V)的正磷酸100 ml。最后加蒸馏水到1 L，此溶液在常温下可放置一个月。

6．注意事项

6.1 注意电泳正负极，更换电极缓冲液；

6.2 跑电泳时要时刻观察，以防样品跑出胶面；

6.3 点样要注意不要戳破胶面。