微生物限度检查办法验证方法

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微生物限度检查方法验证方案

1.目的：

为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。

2.3. 4.0.22um 121营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL ）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG ）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在2小时内，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌15 min ，在3周内使用。

4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml ）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min ，在3周内使用。

4.4.2 试验菌的制备和稀释：

4.4.2.1细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液：

4.4

4.4

4.4

4.4.2.2控制菌检查方法验证用菌液：

1ml 含菌10

3g单

45℃pH7.0

液。

3

4.4.4.2试验组：

4.4.4.2.1 平皿法：分1：20的供试液1ml和试验菌液（含菌50～100CFU）1ml，注入同一直径90mm的灭菌平皿中，每株试验菌平行制备2个平皿。

4.4

4.4

4.4.4.4.1 平皿法：取1：20供试液1ml，注入直径90mm的灭菌平皿中，每种培养基平行制备2个平皿。

4.4

4.4.4.5稀释剂对照组：若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心等特殊处理时，需增加稀释剂对照组，以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。

4.4

养48

培养72

稀释剂对照组回收率＝

结果判定：在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的回收率应均不低于％。试

菌回收率低于70％，则应采用薄膜过滤法、培养基稀释法、离心沉淀集菌法、中和法等方法或联合使用上述方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法学验证。

4.4.4.11细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证结果：

若试验组未检出试验菌，应采用薄膜过滤法、培养基稀释法、离心沉淀集菌法、中和法等方法或联合使用上述方法消除供试品的抑菌活性，建立新的方法，并重新验证。

4.4.

5.6控制菌检查方法验证结果：

第一次：

第三次：

4.4.6

5.验证结果评价与建议你

5.1验证结果评估与结论：

按照验证方案的要求实施验证，并将验证过程记录在验证报告中。对微生物限度检查方法验证的数据进行分析，对验证的结果进行分析和评价，并建议日常监控的项目和周期。

5.2验证会审

验证领导小组对验证实施的过程及结果进行分析和评价，做出确认结论。主要关注如下问题是否得到证明和解决：

5.2.1验证过程是否有遗漏？

5.2.2验证过程中对验证方案是否进行过修改？修改原因、依据是否充分？是否经批准？

5.2.3验证记录是否完整？数据是否真实？

5.2.4验证结果是否符合标准要求？偏差及对偏差的说明是否合理？是否需要做进一步实验？5.4

使用。