槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离及含量测定 (3)

综合化学实验论文

槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离及含量测定

学院化学化工学院

姓名

专业化学

年级2011级

指导老师

2014年4月20日

槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离及含量测定（山西大学化学化工学院，山西太原 030006）

摘要：采用碱溶液沉淀法，从槐米中提取芦丁，用稀酸催化水解，得到水解产物槲皮素，并用紫外分光光度法进行定性、定量测定。

关键词：槐米；芦丁；槲皮素；碱溶液沉淀法；紫外光谱

槐米中含有多种黄酮类物质，如芦丁、槲皮素等。其中槲皮素具有广泛的生理和药理活性，它具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌等作用，槲皮素对恶性肿瘤生长和转移的抑制作用是近年来一个十分活跃的研究课题。

芦丁（Rutin）亦称芸香苷（Rutionside），广泛存在于多种植物中。槐米中含量最高达12~16%。芦丁为维生素P类药物，有助于保持毛细血管的正常弹性和调节毛细管壁的渗透作用，临床上用于治疗高血压的辅助药物和毛细管性止血药。此外，对放射性伤害所引起的出血症也有一定的治疗作用。

芦丁为淡黄色针状结晶，含3分子结晶水，其熔点为174-178℃，不含水的芦丁熔点188℃。芦丁在沸水的溶解度相当大（1:200），而在冷水中的溶解度很小（1:10000），溶于热甲醇（1:7），冷甲醇（1:100），热乙醇（1:30），冷乙醇（1:300），难溶于乙酸乙酯，不溶于苯、氯仿、乙醇及石油醚等溶剂，芦丁分子结构中含有酚羟基，呈弱碱性，易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出，所以可用水煮沸的方法提取。

Rutin Quercetin 芦丁中的苷键属于缩醛结构，易为稀酸催化水解，水解产物主要有苷元槲皮素（quercetin）、鼠李糖和葡萄糖。槲皮素，即芸香苷元，为黄色针晶体，含

2分子结晶水的槲皮素熔点313-314℃，不含结晶水的槲皮素熔点316℃，溶于热乙醇（1:23）、冷乙醇（1:300）、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚和水中。

利用紫外分光光度法先分别扫描出芦丁、槲皮素标准品的紫外谱图，再分别扫描出样品芦丁、槲皮素的紫外谱图，进行对照后，根据吸收峰峰形、最大吸收峰位置是否一致，即可定性；根据朗伯—比尔定律，配置槲皮素标品的系列溶液做成标准曲线，即可定量测出槲皮素的含量。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

(1) 试剂：槐米、石灰乳、盐酸、1﹪硫酸水溶液、乙醇、槲皮素标准样品、

芦丁标准样品

(2) 仪器：回流冷凝管、1000 ml三口烧瓶、250 ml圆底烧瓶、500 ml

烧杯、50 ml容量瓶、25 ml容量瓶、研钵、电热套、机械搅拌、离心机、布氏

漏斗、紫外分光光度仪

1.2 实验方法

1.2.1芦丁的提取

(1)将粉碎好的槐米20g倒入装有回流冷凝管的1000 ml三口烧瓶中，加入

200 ml沸水，搅拌下加入石灰乳，调节pH 8-9，加热微沸。

(2)30 min后，趁热用四层纱布过滤，得滤液。

(3)残渣同样提取一次，将两次滤液合并，用盐酸调节pH 3-4。

(4)稍冷后，放置冰箱中冷却，待全部固体析出后，离心，用两层滤纸抽滤，

70℃以下干燥，得3.5g青黄色固体。

1.2.2.芦丁的水解

(1) 称取1g制得的芦丁，放入250mL圆底烧瓶中，加入1﹪硫酸水溶液

100 ml，回流。

(2) 微沸回流约40 min，瓶中黄棕色浑浊液逐渐变为的黄色液体，颜色不再改变冷却，抽滤，70℃下干燥，制得0.58g黄色固体。

1.2.3紫外光谱测定

(1) 芦丁和槲皮素的标准标准液（实验室已配好）。

(2) 分别称取0.6mg芦丁提取物和0.5mg槲皮素的提取物，用乙醇溶解在50mL容量瓶中。

(3) 以无水乙醇做空白溶液，紫外分光光度法先分别扫描出芦丁标准品、芦丁提取物的紫外谱图，得图1-1。由图可知，芦丁提取物的吸收峰峰形与芦丁标准物相同、最大吸收峰位置与芦丁提取物一致，可定性确定提取物为芦丁，且芦丁的吸收峰位置为258nm和363nm。

(4) 同上一步，测槲皮素标准品、槲皮素提取物的紫外谱图，得图1-2。由图可知，槲皮素提取物的吸收峰峰形与槲皮素标准物相同、最大吸收峰位置与槲皮素提取物一致，可定性确定提取物为槲皮素，且得槲皮素的最大吸收峰位置为256nm和373nm。

(5) 称得2.6mg槲皮素标准品于50 ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，得浓度为52 mg/l的溶液分别移取上述贮液1ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml、6 ml于25 ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，，制得浓度分别为2.08、4.16、6.24 、8.32、10.4、12.48 ml/l的槲皮素标准溶液。以上步所测槲皮素吸收波长373nm为测定波长，分别测出上述溶液的A值，以槲皮素浓度（单位为2.08 mg/l）为横坐标，A值为纵坐标，绘制标准曲线，得图1-3。可知所测溶液中槲皮素的含量在横轴对应的数值为5.2109。

2 结果与讨论

2.1 数据处理

(1)槐米中芦丁的含量：

17.24%%100g

30.20g 5.3=⨯ (2) 芦丁中槲皮素的含量:

%72.54%100g

06.1g 58.0=⨯ (3) 提取物中槲皮素的纯度测定

由实验测得槲皮素提取物中槲皮素的浓度：

l l /mg 84.10/mg 08.22109.5=⨯

根据浓度计算可得槲皮素的含量:

%33.90%1006.005.0/m g 84.10=⨯⨯mg

l l 3 注意事项及讨论

3.1注意事项

(1) 槐米必须粉碎，以提高提取效率。

(2) 要用沸水提取，破坏槐米中酶的活性，防止黄酮苷类化合物发生水解，而不能加凉水慢慢加热提取。

(3) 提取过程中，不断加入石灰乳清夜，使加入石灰乳可以达到碱性溶解的目的，又可除去槐花米中所含的大量粘液质，应控制其碱性pH8～9，过高过低都会降低收率。

(4) 芦丁析出后，可以用离心的方法代替过滤，离心后上清液倒掉。

3.2讨论

本实验利用酶在高温失去活性，与芦丁在热水中的溶解度大，而在冷水中溶解度小的原理，提取芦丁，同时由于芦丁在水中分离，因而采用离心分离的手段。并采用酸催化水解芦丁制备槲皮素。并在已知标准物的情况下对产物进行定性、定量测定。

参考文献

[1] 宗淑梅，王海英，沈丽霞.槐米中槲皮素的提取与含量测定.时珍国医国药,2013,24

（2）；308-309.

[2] 马溶，庞光昌.芦丁对现代文明病的作用.食品科学，2013,34（07）；307-311.