高尔基体驻膜糖蛋白GP73启动子克隆
高尔基体蛋白73(GP73)对慢性肝病的诊断价值
, DOI:10.3969/j.issn.1001-5256.2023.08.035高尔基体蛋白73(GP73)对慢性肝病的诊断价值马杨青1,范海纳1,孙 鑫1,2,刘成海1,2,31上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所,上海201203;2上海市中医临床重点实验室,上海201203;3肝肾疾病病证教育部重点实验室,上海201203通信作者:刘成海,chenghailiu@hotmail.com(ORCID:0000-0002-1696-6008)摘要:早期诊断并准确评估肝脏炎症和纤维化程度对慢性肝病的治疗干预及预后尤为重要。
本文通过回顾高尔基体蛋白73(GP73)与肝癌、肝纤维化及肝脏炎症的诊断、预后方面的研究,归纳总结了目前GP73对于慢性肝病的诊断效能。
分析表明除了与肝癌有关外,GP73与肝纤维化程度及预后密切相关,也可较好地反映肝脏炎症损伤。
GP73与其他血清标志物联合,可提高慢性肝病的无创诊断效能。
关键词:肝疾病;高尔基体基质蛋白质类;诊断基金项目:国家自然科学基金(81730109,82274305);上海市临床重点专科建设项目(shslczdzk01201);上海市科学技术委员会启明星计划扬帆专项(22YF1449300);上海中医药大学预算内项目(2021LK081)RoleofGolgiprotein73(GP73)indiagnosisofchronicliverdiseasesMAYangqing1,FANHaina1,SUNXin1,2,LIUChenghai1,2,3.(1.InstituteofLiverDiseases,ShuguangHospitalAffiliatedtoShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanghai201203,China;2.ShanghaiKeyLaboratoryofTraditionalChineseClinicalMedicine,Shanghai201203,China;3.KeyLaboratoryofLiverandKidneyDiseases,MinistryofEducation,Shanghai201203,China)Correspondingauthor:LIUChenghai,chenghailiu@hotmail.com(0000-0002-1696-6008)Abstract:Earlydiagnosisandaccurateassessmentofliverinflammationandfibrosisisparticularlyimportantforthetherapeuticinterventionandprognosisofchronicliverdiseases.ThisarticlesummarizesthediagnosticefficacyofGolgiprotein73(GP73)forchronicliverdiseasesbyreviewingrelatedclinicalstudiesonGP73andthediagnosisandprognosisoflivercancer,liverfibrosis,andliverinflammation.Theanalysisshowsthatbesideslivercancer,GP73iscloselyassociatedwiththede greeofliverfibrosisandprognosisandcanbetterreflectliverinflammatorydamage.GP73combinedwithotherserummarkerscanimprovethenoninvasivediagnosisofchronicliverdiseases.Keywords:LiverDiseases;GolgiMatrixProteins;DiagnosisResearchfunding:NationalNaturalScienceFoundationofChina(81730109,82274305);ShanghaiKeySpecialtyofTradi tionalChineseClinicalMedicine(shslczdzk01201);ShanghaiScienceandTechnologyCommission(22YF1449300);ShanghaiUniversityofTCMBudgetProject(2021LK081) 各种原因引起的慢性肝病严重危害人类健康,因此早期、有效诊断评价肝脏炎症、肝纤维化,进行有效干预及监测可减少肝硬化并发症和肝细胞癌(HCC)等终末期肝病的发生[1]。
新型肝癌标志物高尔基体蛋白73(GP73)
向您致以衷心的感谢和 诚挚的祝福!
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二、GP73是肝硬化患者发生肝癌强预测因子
GP73和AFP在肝硬化患者中诊断肝癌 的预测价值
不同GP73的水平,发生肝癌的风险比
944例肝硬化患者中,GP73>150ng/ml的患者338例(35.8%),GP73<150ng/ml 的患者606例(64.2%)。 以GP73>150ng/ml,AFP>400ng/ml作为诊断肝癌的临界值时,GP73的敏感性 要远好于AFP,但特异性要差于AFP。 1-11个月的随访发现,GP73>150ng/ml的患者发生肝癌的比例是GP73<150ng/ml 患者的3.21倍(相对危险度的精确估计值,odds ratio)。
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GP73已在全国范围内快速推广应用
GP73部分临床应用单位(三甲):解放军
302医院、地坛医院、山东省立医院、盛京医院、 陆军总医院、福建省肿瘤医院、福州传染病医院、 杭州第六人民医院。。。。。
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肝癌早期诊断套餐
血清指标:AFP/AFP-L3/GP73
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影像学诊断
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北京热景生物技术有限公司
GP73能预警肝癌的发生
试验结果:14例GP73阳性肝病(非肝癌患者)在8 个月内第二次诊断有6位确诊为肝癌(见下表), 另有47例GP73阴性(有3例门诊失访)非肝癌患者, 在8个月内有3例第二次诊断发现肝癌。
人_型高尔基体膜蛋白73多克隆抗体的制备及免疫学鉴定_吴玉
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人Ⅱ型高尔基体膜蛋白 73 多克隆抗体的 制备及免疫学鉴定
吴玉1 ,蔡媛媛1 ,徐霞1△ ,林云恩2
1 广州医学院检验系( 广州 510182) ; 2 广州医学院第一附属医院病理科( 广州 510120)
△通信作者。E - mail: xuxia503@ 126. com
转化成功的单克隆菌落,接种于含有氨苄青霉素的 LB 培养液中扩增,加 IPTG 诱导蛋白表达,并摸索最佳表 达条件。以菌液 OD600 为 0. 6 ~ 0. 7 时、IPTG 终浓度 1 mmol / L、诱导温度 25℃ 、诱导时间 7 ~ 8 h 心 收 集 菌 体 ,超 声 破 碎,收 集 上清和沉淀,分别进行 SDS - PAGE 电泳检测。
电泳 后,将 胶 放 入 硫 酸 锌 负 染 溶 液 ( ZnSO4 75 mmol / L,咪唑 75 mmol / L,NaCl 25 mmol / L) 中浸 泡 10 min,然后取出放入 20 g / L Na2 CO3 中显色,切出透明的 目的条带[9],放入 透 析 袋 中,置 于 水 平 电 泳 槽 中 电 泳, 电泳完之后将此透析袋放入装有 PBS 的烧杯中透析, 每 8 h 换液 1 次共换液 3 ~ 4 次。纯化的蛋白经 BCA 蛋白定量试剂盒定量,- 70℃ 保存备用。 1. 2. 2 多克隆抗体的制备 用纯化的 GP73 蛋白免疫 新西兰兔。初次免疫取 200 μg 与弗氏完全佐剂按体 积 1∶ 1 混合,乳化后背部及臀部皮下多点注射免疫新 西兰兔,免疫之 前 从 兔 耳 缘 静 脉 取 血 ,作 为 阴 性 对 照。 10 d 后行第 2 次免疫,取纯化的 GP73 蛋白 100 μg 与 弗氏不完全佐剂 1∶ 1 混合,皮下多点注射免疫,以后每 隔 1 周按第 2 次免疫方案加强免疫,且在每次免疫后 第 7 天,从兔耳缘静脉取血,间接 ELISA 法测抗体效 价,末次免疫后第 7 天,心脏采血,分离血清,- 20℃ 保 存备用。 1. 2. 3 多克隆抗体的纯化 取分离的血清加等量的 生理盐水,于搅拌下加入与稀释血清等量的饱和硫酸 铵[终浓度为 50% ( NH4 ) 2 SO4 ],待充分沉淀后离心弃 上清液,以生理盐水溶解沉淀至原体积。再加入 1 /2 体积的饱和硫酸铵[此时( NH4 ) 2 SO4 饱和度为 33% ], 重复这一步,将末次离心后所得沉淀物以 PBS 溶解至 原体积装入透析袋,并将此透析袋放入 50 ~ 100 倍的 PBS 中,4℃ 透析过夜。
高尔基蛋白73检测结果69
高尔基蛋白73检测结果69简介高尔基蛋白73(Golgi protein 73,简称GP73)是一种与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,简称HCC)相关的标志物。
通过检测血清中的GP73水平,可以帮助医生诊断和监测肝细胞癌的发展情况。
本文将详细介绍GP73的功能、检测方法以及结果解读,旨在加深对该标志物的理解,并为临床医生和患者提供参考。
一、GP73的功能GP73是一种位于高尔基体膜上的糖蛋白,在正常情况下主要表达于肝脏和胆道上皮细胞。
它参与了肝脏内多个重要生物学过程,包括胆汁分泌、糖代谢和脂代谢等。
在肝细胞癌中,GP73的表达水平显著增加。
研究表明,这种增加可能与肿瘤发展、侵袭和转移等过程密切相关。
因此,检测血清中的GP73水平可以作为肝细胞癌的标志物。
二、GP73的检测方法GP73的检测方法主要包括酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,简称ELISA)和免疫组化染色(immunohistochemistry,简称IHC)。
1. ELISA法ELISA法是一种常用的定量检测方法。
它利用特异性抗体与待测物相互作用,通过酶标记二抗的反应来定量测定待测物的含量。
具体操作步骤如下:1.将血清样本加入预包被有GP73抗体的微孔板中,与GP73结合。
2.洗涤掉未结合的物质。
3.加入与GP73结合的辣根过氧化物酶标记二抗。
4.洗涤掉未结合的二抗。
5.加入底物溶液,使其与辣根过氧化物发生反应并产生颜色。
6.加入停止溶液停止反应。
7.利用酶标仪读取吸光度值,并根据标准曲线计算出GP73的浓度。
2. IHC法IHC法是一种常用的组织学检测方法。
它利用特异性抗体与待测物在组织切片上的结合情况来确定待测物在组织中的表达情况。
具体操作步骤如下:1.取得肝细胞癌组织切片。
2.对切片进行脱脂、脱水和透明处理。
3.用GP73抗体孵育切片,使其与GP73结合。
血清高尔基体膜蛋白73在原发性肝癌早期诊断中的应用价值
血清高尔基体膜蛋白73在原发性肝癌早期诊断中的应用价值李庆芝【摘要】目的:探讨原发性肝癌血清中高尔基体膜蛋白-73的表达水平及其早期诊断价值。
方法选择住院患者和健康体检人群,分别用酶联免疫吸附法和化学发光免疫分析法检测63例原发性肝癌、56例肝硬化、87例慢性乙型肝炎、48例其他恶性肿瘤、58例健康对照组血清高尔基体膜蛋白-73与AFP水平,分析两指标各组间差别,绘制其诊断原发性肝癌的ROC曲线。
结果高尔基体膜蛋白-73在不同年龄、性别、肿瘤大小间及不同AFP浓度的表达差异无统计学意义,高尔基体膜蛋白-73、AFP在PHC鉴别诊断的ROC曲线下面积分别为0.808、0.758。
高尔基体膜蛋白-73诊断PHC组敏感性及特异性分别为88.6%,92.1%,均显著高于AFP。
结论血清高尔基体膜蛋白-73对原发性肝癌的诊断价值优于AFP,有望成为原发性肝癌早期诊断的血清标记物。
%Objective To investigate the expression level of serum Golgi protein 73(GP73)in patients with prima⁃ry hepatocellular carcinoma(HCC)and to discuss its clinical value in making early diagnosis. Methods Among wards, out-patients and healthy check people in our hospital from October 2012 to October 2014, 63 HCC, 56 hepatic cirrhosis, 87 HBV carriers,48 other Malignant Tumor,and 58 healthy control people were involved in the study. GP73 in serum was measured by ELISA and AFP was measured by ADVIA Centaur XP Immunoassay System.The sensitivity,specifica⁃tion were calculated. Results The serum levels of GP73 in different ages, gender, tumor sizes and concentriations of AFP was not significantly different. The area of AFP, GP73 under the ROC curve in the differential diagnosis of PHC were 0.758, 0.808. The sensitivityand specificity value of GP73 were 88.6%and 92.1%, higher than those of AFP. Conclu⁃sion In diagnosing HCC,the expression level of serum GP73 is superior to AFP. It is hopeful that serum GP73 may be proved to be an early serum tumor marker for HCC.【期刊名称】《菏泽医学专科学校学报》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】3页(P32-33,92)【关键词】肝;肿瘤;肝癌/诊断;GP73/诊断应用【作者】李庆芝【作者单位】附属菏泽市立医院,山东菏泽 274000【正文语种】中文【中图分类】R735.7原发性肝癌(PHC)是一种恶性程度高、进展快、治疗难度大、病死率高的恶性肿瘤,随着影像技术的发展,使得部分小肝癌患者得以及时发现,但影像学检查对肝内小的恶性病变发现仍很困难,而肿瘤越小,手术效果越好。
高尔基体驻膜糖蛋白GP73启动子克隆
安徽农业科学 。ora o A hi g .Si 08 3 {4 :0 5 0 6 。00 Junl f n u A n c. 0 ,6 2 ) 139—13 1 14 1 2
责任编辑
段 永波
责任校对
杨J l
高尔 基体Leabharlann 驻膜 糖 蛋 白 G 7 启 动子 克 隆 P3
摘要 [ 目的 ] 寻找 并克 隆有 活性 的高 尔基体膜 蛋 白 G 7 P3的启动子 。[ 方法 ] G 7 基 因转录起 始位点上 游 l 0b 对 P3 3 p至下游 40b 序 列 0 0 p 进行软 件分析预 测 , 以肝癌 细胞 系 H h 基 因组 D A为模板 , 增 目 片段 , 建增 强型绿 色荧光蛋 白( G P 为报 告 基 因的重 组质 粒 , u7 N 扩 标 构 EF) 转 染细胞后在 荧光显微镜 下观察 E F G P的表 达 , 并采 用流式 细胞仪 定量检 测转 染细胞 的荧光强度 。[ 结果 ] 发现 G 7 转 录起始位 点上 游 P3 90 下游 30b 长 l 1 8到 3 0 0b 3 0的序 列具 有启动 子功能 。该 区域可 能具有 两个核 心启 动子序 列和 多个保 守序 列, 包括 TT 0 A bx和 N - 、 A Fr , B A 1G .P 等 D A结合序 列。 [ P 、cS I N 结论 ] 该研 究为探 讨 G 7 P 3的转录机制提 供 了参考 。 关键 词 G 7 蛋 白; P3 启动 子 ; 序列分 析 中图分类号 S 8 文献标识码 A 1 8 文章编 号 0 1 — 6 1 0 82 —139 0 5 6 l( 0 ) 7 2 4 05 — 3
e m ef hes d f h rnc pi o rt t vo tet sr t nm c a i o u a i o e hn s f m .
Ⅱ型高尔基体膜蛋白GP73的研究进展
( i t e e ai s GC ga — l h p t i, H) n cl t 的病 原 学 研 究 中 发 现 , GC 是 肝炎 中一种 罕见 的形式 , 能与病 毒性致 病 H 可 原感 染 有关 。在 近几年 的研 究 中发 现此 GP 3不仅 7
与病毒 感染 、 肝脏 疾 病 相关 , 和其 它 疾 病 , 其是 肿 尤 瘤 疾病 都有 一定 的 关联 , 该 蛋 白的研 究 目前 仍处 但 于初 步 阶段 , 是否 能够代 替 甲胎 蛋 白( p a{t— 它 Alh 一eo
记 ) 其功 能 尚不 清楚 。紧邻 跨膜 区发 现 了一 些卷 曲 ,
螺旋 结构 , 该结 构参 与蛋 白之 间 的相互 作 用 。G 7 P3 可 能代表 着另 一种 高 尔基 Ⅱ型膜 蛋 白 , 高 尔 基磷 如
酸 蛋 白 G P 3 , 种 蛋 白与 GP 3结 构 相似 , P 10 这 7 都含 有 大量 的酸 性氨基 酸 , 有卷 曲结构 。 都
示 约 为 7 a 这 比理 论 的 4 a 大 的 多 。 3KD , 5KD 要
GP 3有 很 强 的 亲 水性 , 是 却 有 着 疏 水 的 氨 7 但 基端 , 在氨 基端编 码 的跨 膜 区 中 , 2 第 8与 2 个 氨 基 9
酸之 间有一 潜 在 的信 号 肽 裂解 位 点 。GP 3的 羧 基 7 端位 于细胞 外 , 五个 糖 基 化 位 点 ( 1 2边 框 标 有 图 、
poenAF ) 为 肝癌 诊 断 的 新标 记 物 , 是 成 为 rti P 作 或
其它 肿瘤 诊断 或治 疗 的辅 助 指 标 , 有 待更 深 层 次 都 的研 究 。本 文查 阅 了近 几 年 GP 3现 有 的研 究 状 7 况, 综述 如下 , 以期 为广 大 的科 研工 作者 提供参 考 。
肝癌相关标致物高尔基体蛋白GP73的基因序列的克隆、表达、抗体制备及初步应用
肝癌相关标致物高尔基体蛋白GP73的基因序列的克隆、表达、抗体制备及初步应用时间:2009-09-29 作者:解放军三○二医院临检中心李伯安李波刘爱霞李永利马洪滨郭静霞毛远丽来源:本站点击量:606肝细胞癌(HCC)是世界上第五种最常见的癌症。
2001年,全世界HCC的标化发病率为21/100,000,标化死亡率为20.2/100,000。
我们可以看出,HCC的发病率和死亡率几乎是一样的,表明了这一肿瘤的预后是极差的。
在2001年美国癌症状况国家年度报告中,HCC是过去十年中发病率增长最快的癌症[2]。
肝硬化是发展成为HCC的最重要的因素;因此肝硬化患者就成为了高危人群。
预测,在美国接下来20年中,丙型肝炎(HCV)相关的HCC的发病率将会持续上升[3]。
考虑到美国肝硬化患者总体生存率的提高[4],和HCC患病率的持续增加,医学界就迫切需要一种早期HCC诊断的有效方法。
开发出一种敏感度和特异度更高的血清标志物,用于危险人群的HCC早期诊断,就可能会提高这一致命癌症患者的生存率。
目前,甲胎蛋白(AFP)是唯一的推荐用于肝硬化患者HCC监测的血清标志物。
回顾性分析认为,AFP作为早期HCC监测工具,敏感度为39-64%,特异度为76-91%,阳性预测值为9-32%。
另外,据报道,肝脏超声用于临床研究中早期HCC诊断时,具有78%的敏感度,91%的特异度,和73%的阳性预测值。
然而,肝脏超声的准确性是操作者依赖性的,这就限制了它的价值,从而不能作为一种监测性检验方法。
这说明,我们需要一种更好的用于HCC监测的标志物。
高尔基蛋白-73(GP73),最初被认为是一种滞留性的高尔基体II型跨膜蛋白,主要在许多人体组织的上皮细胞中表达。
在正常的人体肝脏中,GP73只在胆上皮细胞中表达,而肝细胞中则几乎检测不到表达。
然而,临床发现,在患有病毒性或非病毒性肝病的患者的肝细胞中,GP73的表达出现显著的上调。
一项最近的研究发现,可在人体血清中检测到GP73,而且,与非肿瘤肝脏相比,在HCC旱獭模型中,血清和组织中的GP73浓度都上升了。
人高尔基蛋白-73GP73酶联免疫分析试剂盒使用方式
人高尔基蛋白-73(GP73)酶联免疫分析试剂盒使用方式检测范围:96T2.5 ng/mL -80 ng/mL使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中高尔基蛋白-73(GP73)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人高尔基蛋白-73(GP73)水平。
用纯化的人高尔基蛋白-73(GP73)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入高尔基蛋白-73(GP73),再与HRP标记的高尔基蛋白-73(GP73)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的高尔基蛋白-73(GP73)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人高尔基蛋白-73(GP73)浓度。
试剂盒组成1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
高尔基体蛋白73(GP73)在原发性肝癌诊断中的临床价值
高尔基体蛋白73(GP73)在原发性肝癌诊断中的临床价值摘要: 目的探讨定量测定血清中的高尔基体蛋白( GP73) 对肝癌诊断的临床意义。
方法应用双抗体夹心酶联免疫定量测定方法检测肝癌、治疗后、肝癌复发组、良性肝病、其他恶性肿瘤对照组血清中GP73 的含量,应用临床化学发光法测定甲胎蛋白(AFP) 为参比。
结果肝细胞癌组、肝良性病变组、其他恶性肿瘤组和对照组血清GP73 浓度有统计学意义,且肝细胞癌组浓度高于肝脏良性疾病组、其他恶性肿瘤组和对照组(P<0.01);单项检测时,GP73的敏感度和特异度分别是71.3%和85.5%,AFP的敏感度和特异度分别是46.2%和80.3% ,GP73和AFP联合检测时敏感度和特异度分别为83.2%和78.4%;原发性肝癌治疗前GP73 浓度显著高于治疗后(P=0.001)。
结论GP73 对于原发性肝癌有较好的诊断性能,可以作为恶性肝病的独立指标与AFP 互补应用于临床。
关键词: 肝癌; 高尔基体蛋白; 诊断Research on the diagnosis of Golgi protei73 (GP73) in the primary hepatocellular carcinoma【Abstract】Objective:To study the determination of Golgi protein in serum (GP73) on the clinical significance of quantitative diagnosis of liver cancer. Methods: The content of GP73 using the method of double antibody sandwich ELISA method for quantitative determination of liver cancer detection, treatment, recurrence of hepatocellular carcinoma group, benign liver diseases, other malignant tumors, clinical chemistry luminescence determination of alpha fetoprotein (AFP) as reference. Results : liver cell carcinoma group, benign liver disease group, other gastrointestinal malignant tumor group and control group had statistical significance in serum GP73 concentration, and concentration of hepatocellular carcinoma group was higher than that in benign liver diseases, other malignant tumor group and the control group (P < 0.01); single detection GP73 sensitivity and specificity 71.3% and 85.5%, AFP sensitivity and specificity were 46.2% and 80.3%, the combined detection of GP73 and AFP sensitivity and specificity were 83.2% and 78.4%; primary liver cancer before treatment was significantly higher than that of GP73 concentration after treatment (P=0.001). Conclusion: GP73 has better diagnostic performance for primary liver cancer, can be used as an independent index for malignant liver disease and AFP complementary to clinical application. Keywords: Golgi protein; hepatocellular carcinoma; diagnosis肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)是一种恶性程度高、进展快、预后差、侵袭性强的恶性肿瘤。
高尔基体蛋白73(GP73)在肿瘤诊断中的临床应用
高尔基体蛋白73(GP73)在肿瘤诊断中的临床应用摘要】原发性肝癌是目前世界上致死率最高的恶性肿瘤之一,在全世界范围内的发病率有逐年上升的趋势。
早期诊断对肝癌患者的预后至关重要。
对于肝癌的高危人群,现在最常用的监测手段是定期检测血浆中甲胎蛋白(AFP)水平和影像学检查如超声等。
然而,甲胎蛋白的敏感性和特异性都不令人满意。
近年来,蛋白组学技术的发展使得筛选新的肿瘤标志物成为可能,各种有希望的新的肿瘤标志物被相继发现,其中高尔基体蛋白73 (GP73)最有可能成为更好的诊断肝癌,尤其是早期肝癌的血清标志物。
在仅有的少数报道中,其敏感性可达69% ,特异性可达90% ,而其异构体敏感性和特异性可达90%和100%。
除此之外,新发现的肝癌患者血清中高表达的标志物有甲胎蛋白异质体(AFP2L3)、异常凝血酶原(DCP) 、α2L2岩藻糖苷酶(AFU)、磷脂酰基醇蛋白聚糖23 (GPC23)、肝细胞生长因子(HGF) 、转化生长因子β1 (TGFβ1)、血管内皮生长因子(VEGF)、粘液素1 (MUC21,KL21)等。
这些新的血清标志物,正在被各种临床研究进行检测,有希望改变肝癌早期诊断和治疗的现状。
我们正在进行GP73的大样本临床研究,取得初步结果。
肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的增长速度之快已成为一个世界性难题,其发病率在全球位居第4位,总发患者数约56.4万[1]。
在我国,由于乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)携带者数量之庞大,与此相关的HCC患者已占世界的55%左右,其死亡率在恶性肿瘤中排第2位。
乙型肝炎、肝硬化及肝癌在医疗费用及社会负担中占有相当大的比重。
在过去相当长的时间里,早期诊断HCC主要是依靠影像学手段及血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP),但影像学检查对肿瘤体积较小者不易被发现;临床上最常用的AFP也因其敏感性(39%-64%)不高并不令人满意[2]。
高尔基体蛋白73(GP73)的研究进展
高尔基体蛋白73(GP73)的研究进展
赵娣;马茂;高向阳;覃于洪;何妮;韩雪
【期刊名称】《现代医学与健康研究电子杂志》
【年(卷),期】2022(6)6
【摘要】高尔基体蛋白73(GP73)是一类常驻高尔基体Ⅱ型跨膜蛋白,其对于维持人体机能至关重要。
在病毒感染和营养状况波动时上调,GP73能够调节肝内脂肪运输、促进肝内的糖异生及介导肝癌细胞的转移。
临床研究发现GP73水平不仅与病毒性肝炎、非酒精性脂肪肝病、肝纤维化、肝硬化等慢性肝病密切相关,也与肝癌、胆囊癌、肺癌等肿瘤疾病的发生、发展相关。
本研究就近几年来GP73在基础临床诊断的价值和治疗作用作出如下综述。
【总页数】6页(P25-30)
【作者】赵娣;马茂;高向阳;覃于洪;何妮;韩雪
【作者单位】吉林大学第一医院健康管理中心;西安交通大学医学院第一附属医院健康管理中心;中国健康促进基金会;重庆大学附属涪陵医院肝病与转化医学科;贵港市人民医院健康管理中心;城固县中医医院健康管理中心
【正文语种】中文
【中图分类】R256.4
【相关文献】
1.探讨联合检测高尔基体糖蛋白 GP73、甲胎蛋白异质体和甲胎蛋白在诊断原发性肝癌的临床价值
2.Ⅱ型高尔基体膜蛋白GP73的研究进展
3.高尔基体蛋白73
(GP73)在原发性肝癌诊断中的临床价值4.高尔基体蛋白GP73和Ki-67在胆囊癌中的表达及临床意义5.高尔基体蛋白73(GP73)在原发性肝癌中的早期诊断价值研究
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高尔基体蛋白73标准值
高尔基体蛋白73标准值全文共四篇示例,供您参考第一篇示例:高尔基体蛋白73(Golgi Protein 73,GP73)是一种位于高尔基体和内质网之间的膜蛋白,它在多种生理和病理条件下发挥重要作用。
GP73的标准值对于肝脏疾病的诊断和治疗具有重要的临床意义。
本文将围绕GP73的标准值展开详尽的介绍,以期为读者提供详实的知识和资讯。
我们来介绍一下GP73的一般特征及其生理功能。
GP73是一种高度保守的蛋白质,广泛存在于多个组织和器官中,但其在肝脏中表达量最高。
GP73属于非酶性高尔基体膜蛋白,它参与了泛素化、泛扯化和囊泡转运等细胞生物学功能。
关于GP73的标准值,一般是通过血清或血浆中的浓度来进行检测。
目前临床上对于成年人而言,正常人群GP73的标准值一般在10-20 ng/ml之间。
而对于儿童而言,GP73的标准值可能会有所不同,需要根据年龄和性别的不同而有所调整。
那么,为什么要对GP73的标准值进行检测呢?一方面,GP73作为肝脏疾病的新的生物标志物,对于肝脏疾病的早期诊断和鉴别诊断有着非常重要的价值。
通过检测肝脏疾病患者血清中GP73的含量,可以及时发现肝炎、肝硬化、肝脏肿瘤等肝脏疾病的变化,为临床治疗提供了重要的依据。
对于肝脏移植术后的监测也需要通过检测GP73的标准值来判断肝脏功能的复原情况。
通过不同时间点的检测,可以了解肝脏移植患者的康复情况,是否出现了排斥反应或者肝脏功能障碍等问题。
近年来研究还发现GP73对于代谢性疾病、肿瘤等其他疾病也有一定的参考价值。
部分研究表明GP73与肥胖、糖尿病等代谢性疾病有一定的相关性,因此在未来可能对这些疾病的辅助诊断和治疗提供帮助。
需要注意的是,血清中的GP73标准值受到许多因素的影响,比如性别、年龄、季节、个体差异等都会对其标准值造成影响。
在进行检测时,需要综合考虑患者的整体情况,不能仅仅依赖于GP73的标准值来进行诊断。
GP73的标准值作为一种新的生物标志物,在肝脏疾病的早期诊断、肝脏移植后的康复监测以及其他疾病的辅助诊断中具有重要的临床应用价值。
高尔基体糖蛋白73(GP-73)与甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)在早期原发性肝
高尔基体糖蛋白73(GP-73)与甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)在早期原发性肝癌的研究进展发表时间:2018-07-05T14:06:21.010Z 来源:《医药前沿》2018年6月第18期作者:冯将王明全[导读] 原发性肝细胞癌(primary hepatic carcinoma PHC)分别占全球癌症发病率和死亡率的6%和9%,是全球癌症死亡的第二大常见原因。
(延安大学附属医院介入科陕西延安 716000)【摘要】原发性肝细胞癌属于恶性肿瘤类型,发病率非常高,位居我国肿瘤发病率第四位,主要原因在于大多数患者在早期很难发现,高尔基体糖蛋白73(GP-73)和甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)作为两种辅助诊断血清标志物,近年来在原发性肝细胞癌诊断、病情判断及预后的预测中应用的研究越来越多,指出其在患者的中有一定的研究及应用价值,可以为原发性肝细胞癌患者的疾病诊断及预后预测提供新的思路。
【关键词】原发性肝细胞癌;GP-73;AFP-L3;诊断【中图分类号】R73-3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2018)18-0012-01原发性肝细胞癌(primary hepatic carcinoma PHC)分别占全球癌症发病率和死亡率的6%和9%,是全球癌症死亡的第二大常见原因。
在美国,1973—2015年PHC发病率同比增加。
PHC的5年复发率为48.8%,平均生存期为54.4~70.0个月。
在我国进行的一项为期10年的调查表明,世界卫生组织列出的慢性病中PHC的社会成本和负担是最高的[1]。
如何进行早期诊断及建立更加全面的诊断方法一直以来是肝癌研究领域的难点和热点话题。
目前对于高危肝癌人群早期的筛查,最常用的方法是定期检测血清中甲胎蛋白(alpha-fetoprotein AFP)含量以及腹部超声检查。
甲胎蛋白(AFP)监测目前是用于原发性肝癌(PHC) 诊断的最为广泛的一种手段,但是其敏感性、特异性均差强人意。
高尔基蛋白73检测结果69
高尔基蛋白73检测结果691. 什么是高尔基蛋白73(Golgi protein 73)高尔基蛋白73(Golgi protein 73,简称GP73)是一种细胞器高尔基体上的膜蛋白,也被称为肝细胞癌相关抗原(hepatocellular carcinoma-associated antigen,简称HCAg)。
在正常情况下,GP73主要表达在肝细胞的高尔基体中。
然而,在某些疾病状态下,如肝炎、肝硬化和肝癌等,GP73的表达水平会显著增加。
2. GP73检测及其意义GP73检测是通过血清样本或组织样本中的免疫学方法来确定GP73的表达水平。
这种检测方法可以用于诊断和评估肝疾病的严重程度,特别是在肝癌早期筛查和鉴别诊断方面具有重要价值。
2.1 肝癌早期筛查由于肝癌早期症状不明显,很难及时发现和治疗。
而GP73作为一种特异性标志物,在早期肝癌的筛查中具有较高的敏感性和特异性。
通过检测血清中的GP73水平,可以帮助医生及早发现患者是否存在肝癌的风险,从而及时采取进一步的检查和治疗。
2.2 肝病严重程度评估在肝炎、肝硬化等肝病患者中,GP73的表达水平与病情的严重程度密切相关。
通过检测血清中的GP73水平,可以帮助医生评估患者肝脏功能损害的程度,指导治疗方案的选择和调整。
2.3 肿瘤复发监测对于已经接受肝癌手术治疗或其他治疗措施的患者来说,监测肿瘤复发是非常重要的。
由于GP73在肝癌组织中高表达,在术后复发监测中,通过检测血清中GP73水平的变化,可以及早发现肿瘤复发,并采取相应措施。
3. GP73检测结果69分析根据任务名称提供的信息,高尔基蛋白73检测结果为69。
下面将对该结果进行分析和解读。
3.1 结果解读根据已有的研究,正常人群中GP73的表达水平通常较低,一般在检测范围内的数值较小。
而在一些肝病患者和肝癌患者中,GP73的表达水平会显著升高。
根据不同实验室的标准范围,GP73的正常参考值可能有所差异。
高尔基体驻膜糖蛋白73的研究进展及其与肝癌等疾病的联系_江均昌
收稿日期:2011-08-15修回日期:2011-10-20基金项目:国家科技部十一五“重大新药创制”科技重大专项资助项目(2009ZX09103-680).作者简介:江均昌(1985-),女,生物化学与分子生物学硕士.通讯作者:周林福(1973-),男,副教授,硕士生导师,从事传染病学研究;Email :239zlf@zju.edu.cn.http :∥www.journals.zju.edu.cn /med DOI :10.3785/j.issn.1008-9292.2012.02.017高尔基体驻膜糖蛋白73的研究进展及其与肝癌等疾病的联系江均昌,周林福综述(浙江大学医学院生物化学与遗传学系,浙江杭州310058)[摘要]高尔基体驻膜糖蛋白73(GP73)是定位于高尔基体的Ⅱ型跨膜蛋白,在肝癌组织中高表达,并分泌入血。
研究表明,GP73作为血清标志物检测肝癌的特异性和灵敏度均优于AFP 。
另外,GP73在前列腺肿瘤、肾脏肿瘤、肺癌、食道肿瘤、精原细胞瘤等疾病中的表达也有增高,因此,GP73也可能成为这些疾病辅助诊断的新型指标。
但是,目前GP73的生理功能和表达调控机制尚不清楚。
文中将从理化性质、细胞内分布、表达调节、与疾病相关性和临床应用等方面对GP73的迄今研究状况作一较为全面的综述。
[关键词]肝肿瘤/诊断;高尔基体;糖蛋白类/血液;肿瘤标记,生物学;高尔基体驻膜糖蛋白73;肝癌;血清肿瘤标志物[中图分类号]R 735.7[文献标志码]A[文章编号]1008-9292(2012)02-0215-07Advances on Golgi glycoprotein 73and its association with diseasesJIANG Jun-chang ZHOU Lin-fu (Department of Biochemistry and Genetics ,Zhejiang University School of Medicine ,Hangzhou 310058,China )[Abstract ]Golgi glycoprotein 73(GP73)is a transmembrane glycoprotein residing in the cis-Golgi complex ,which is strongly expressed in hepatocellular carcinoma (HCC )and secreted into the blood.It has been regarded as a promising serum tumor marker for the detection of HCC with higher sensitivity and specificity than AFP.GP73is also significantly elevated in kidney cancer ,prostate cancer ,lungadenocarcinoma ,esophageal cancer and seminomas ;therefore ,it would be helpful for the diagnosis of these diseases.However ,the function of GP73and the regulatory mechanism for its expression are unclear.In this article ,the physical-chemical properties ,the regulation of its expression ,the relation with various cancers and the clinical applications of GP73are reviewed.[Key words ]Liver neoplasms /diag ;Golgi apparatus ;Glycoproteins /blood ;Tumor markers ,biological ;Golgi glycoprotein 73;Hepatocellular carcinoma ;Serum tumor marker[J Zhejiang Univ (Medical Sci ),2012,41(2):215-221.]第41卷第2期2012年浙江大学学报(医学版)JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES )Vol 41No 22012GP73是近年新发现的Ⅱ型高尔基体驻膜糖蛋白,与肝癌等肿瘤密切相关,可能发展成为一个新的血清肿瘤标志物,具有重要的临床价值。
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图 2 PCR产物电泳图谱 Fig. 2 Agarose gel analysis of PCR products
2 结果与讨论 2. 1 序列分析 经过对 GP73 mRNA ( ID 号为 NM2177937) 5’ 端进行分析 ,预测其启动子位于转录起始位点上游 1 000 bp 到下游 400 bp 范围内(图 1 A) 。运用 Neural Network Promoter Prediction 以及 Fruitfly 在线软件分析 ,发现该区域具有 2 个可
该研究是在已知的 GP73 mRNA 序列的基础上 ,对转录 启始位点上下游序列进行分析 ,预测并克隆到 GP73 的启动 子 ,以期用于研究 GP73 的表达调控机制。 1 材料与方法 1. 1 材料 Huh7、Hela 及自制感受态大肠肝菌 DH5α细胞。 1. 2 试剂 基因组 DNA 提取试剂盒购自天根公司 ;DNA 胶
1. 3. 5 启动子活性检测。转染 48 h 后 ,在倒置荧光显微镜 下观察 EGFP 表达情况。用胰酶消化细胞后收集于 1. 5 ml 离 心管 ,冰 PBS 洗 2 次 ,300μl PBS 重悬细胞沉淀 ,用流式细胞 术定量检测 EGFP 表达情况。
注 :M ,DNA marker DL2000 ;1 ,PCR 产物。 Note :M:DNA marker DL2000 ;1 :PCR products.
EGFP in recombinants were observed under fluorescence microscope after transfection ,with the assistant of flow cytometry. [ Result ] The 1 310 bp ranged between upstream 980 bp and downstream 330 bp of transcription initiation site assumed promoter function. The region contains two core promoters and sev2 eral conserved sequences including DNA binding sites such as TATA box and NF2kB ,AP1 ,GC2SP1. [ Conclusion] The cloning of the promoter provides ref2
安徽农业科学 ,Journal of Anhui Agri. Sci. 2008 ,36 (24) :10359 - 10361 ,10401 责任编辑 段永波 责任校对 杨川
高尔基体驻膜糖蛋白 GP73 启动子克隆
谢红彬 , 宫 钰 , 彭 涛 1 ,2 ,3
4
erence for the study of the P73. Key words GP73 ;Promoter ;Sequence analysis
GP73( Golgi Protein 73 ,又称 GOLPH2) 是近年发现的一种 高尔基体膜蛋白 ,迄今为止功能不明确。Fimmel 等研究人员 对 GP73 的表达进行了一系列的研究[1 - 9] ,在 1 例成年巨细 胞性肝炎患者的肝细胞中发现了该蛋白的表达 ,进而发现其 在多种 急 慢 性 肝 病 患 者 肝 脏 中 异 常 表 达 。乙 型 肝 炎 病 素 (HBV) 和丙型肝炎病毒 ( HCV) 的侵染可导致患者肝脏中 GP73 异常表达 ,而腺病毒体外感染高分化型 HepG2 肝癌细 胞后 , GP73 的 mRNA 和蛋白也大量表达。免疫组化和 West2 ern Blot 已证实该蛋白的上皮组织特异性和分布特性 ,细胞免 疫荧光发现该蛋白亚细胞定位于高尔基体中。GP73 蛋白与 肝病尤其是肝癌有密切相关性 ,且在前列腺癌症患者体内也 异常表达[10] ,因此认为它是一种具有重要功能的蛋白 。近 年来 ,对 GP73 在各种肝脏疾病病人肝脏中的表达模式以及 亚细胞定位逐渐明晰 ,但其功能和表达调控仍有待于进一步 研究 。
作者简介 谢红彬 (1980 - ) ,女 ,湖北恩施人 ,硕士研究生 ,研究方向 : 生物化学与分子生物学 。 3 通讯作者 。
收稿日期 2008205204
回收试剂盒购自 AXYGEN ; EGFP2Promoter 、EGFP2basic 载体由 广州生物医药与健康研究院新发疾病研究中心改造并保存 ; 限制 性 内 切 酶、Ex Taq 、dNTPs、DNA 快 速 连 接 试 剂 盒 购 自 TAKARA 公司 ;质粒提取试剂盒购自 Qiagen 公司 ;转染试剂 LipofectamineTM2000 购自 Invitrogen 公司 。 1. 3 方法 1. 3. 1 序列分析。对 GP73 的 mRNA 序 列 ( ID 号 为 NM2 177937) 5’端序列进行分析 ,将启动子定位于转录起始位点附 近。用 Eukaryotic Promoter Database 对目标序列进行分析 ,查 找核酸序列中的功能元件 。 1.3. 2 Huh7 细胞基因组 DNA 的提取。收集生长良好的 Huh7 细胞 ,用细胞基因组 DNA 提取试剂盒抽提基因组 DNA , - 20 ℃保存备用。 1. 3. 3 启动子片段克隆及重组报告质粒构建。在使用软件 对序列进行分析后 ,设计 1 对基因特异的引物 ,pgpF :AAG2
core promoter sequence.
图 1 预测的 GP73 启动子序列
Fig. 1 Predicted GP73 promoter sequence
OPTI2MEM 中加入 2μg 的质粒 DNA ,室温孵育 5 min。在 250 μl OPTI2MEM 中 加 入 5 μl LipofectamineTM 2000 , 室 温 孵 育 5 min。将上述 2 种稀释液轻轻混匀 ,室温孵育 20 min 后加入 细胞板孔中 ,将细胞置于培养箱常规培养 4 h 后 ,换 DMEM 完 全培养基培养 。
Cloning of the Promoter Regions of Golgi Membrane Glycoprotein GP73 XIE Hong2bin et al (South China Botanical Garden ,Chinese Academy of Sciences ,Guangzhou ,Guangdong 510650) Abstract [Objective ] The study aimed to clone active promoter of golgi membrane glycoprotein GP73. [Method] The sequence in the range of upstream 1 000 bp and downstream 400 bp of transcription initiation site was analyzed ,the genomic DNA of hepatoma cell line Huh27 was regarded as template for amplification. The amplified fragment was cloned into recombined plasmid with enhanced green fluorescent protein ( EGFP) report gene. The expression of
GAGCTCTGGACCTGTTCCATAAAGT ; pgpR : ACTAAGCTTCT2 GTGGGGAAAGGGTA ,在正反向引物的 5’端分别加上 Sac I 和 Hind III 酶切位点。引物由上海英骏公司合成。扩增片段经 限制性内切酶消化后 ,用 DNA 快速连接试剂盒连接。转化 按照分子克隆的操作进行 ,所获克隆经菌落 PCR 鉴定后送上 海英骏公司测序。PCR 反应体系为 :基因组 DNA 0. 1μl ;10 × PCR Buffer ( Mg2 + ) 5 μl ; dNTPs ( 2. 5 mmol/ L ) 8 μl ; ExTaq (5 U/μl) 0. 5μl ;pgpF (10 nmol/μl) 5μl ;pgpR (10 nmol/μl) 5μl ; ddH2O 至 50μl 。PCR 扩增反应程序为 :94 ℃预变性 5 min ,94 ℃30 s ; (58 ℃45 s ,72 ℃90 s) 30 循环 ,72 ℃延伸 10 min ;4 ℃ 保存 。 1. 3. 4 细胞培养与转染。取对数生长期的 Hela 细胞(约 5 × 106 cells) ,转染前 1 d 将细胞接种于 6 孔培养板 , 接种密度为 3 ×105 cells/ 孔 , 使得次日转染时细胞融合度达 90 %左右。 根据 LipofectamineTM 2000 试剂操作手册进行转染 : 在 250μl
36 卷 24 期 谢红彬等 高尔基体驻膜糖蛋白 GP73 启动子克隆
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能的核心启动序列和多个启动子元件 ,包括 1 个 TATA box 及 NF2κB 、AP1、AP24、GC2SP1、HSF21 等 DNA 结合序列(图 1 B) 。 2. 2 PCR 扩增及重组质粒构建 以 Huh7 细胞基因组 DNA 为模板扩增到约 1 310 bp 的特异条带 (图 2) ,与预期片段大 小一致。将片段连接到 EGFP2promoter vector 上 (图 3B) ,获得 重组质粒 GP73 promoter2EGFP(图 3C) 。测序结果表明扩增片 段为目的片段 。