大肠杆菌分离鉴定及药敏实验方案

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猪大肠杆菌的分离鉴定与药物敏感试验3

1.3.2细菌的生化鉴定挑取可疑菌落纯培养物，分别接种于蔗糖、葡萄糖、阿拉伯糖、卫矛醇、乳糖、山梨醇、甘露醇、麦芽糖、鼠李糖、精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸柠檬酸钠、乳糖胆盐、M.R 试验、靛基质、侧金盏花醇、肌醇、水杨苷、尿素、明胶、半固体及H2S培养基中37 ℃培养24～48 h。

1.3.3致病力试验将分离到的细菌接种普通肉汤培养基，37℃培养24h。

选择日龄、体重、性别、精神状态相似的小白鼠12只，分为三组。

第一组与接种所分离到的大肠杆菌，每只腹部皮下接种0.3ml。

第二组接种等同量的肉汤作为对照。

能致小白鼠发病死亡，并从试验小白鼠体内分离细菌，再经生化试验鉴定为性大肠杆菌的菌株用于药敏试验。

1.4药敏试验采用纸片琼脂扩散法（K-B法）。

大肠埃希氏菌菌液浓度标化后15min之内接种于药敏培养基，以无菌棉拭子蘸取已制备好的菌液，并在管壁上拧压除去多余的菌液后，向一个方向均匀涂布接种于M-H琼脂平板表面，然后将平板每转动60度涂布一次，共涂三次，最后沿平板边缘涂布一圈。

盖上平皿盖，置室温干燥3~5min待平皿面稍干后用无菌镊子或纸片分配器将含药纸片平放于含菌琼脂平板表面，并轻压使其紧贴在上面。

纸片应贴得均匀，各纸片中心距离不小于24mm，纸片距平板内缘应不少于15mm。

直径为90mm 的平皿可贴6~7张纸片。

纸片贴牢后避免再次移动，因为有些药物立刻就可扩散于琼脂内。

平板经室温放置15min再倒置于35℃培养箱中，培养16~18h后阅读结果。

1.5防治措施对猪舍进行全面的消毒；病猪硫酸卡那霉素等敏感药物进行治疗对与病弱的仔猪进行补液、强心等支持疗法；对与临床水肿症状明显的猪进行消肿利尿、镇静等治疗。

对病猪使用以下处方：卡那霉素(25万单位／毫升)2毫升、5％碳酸氢钠30毫升、25％葡萄糖液40毫升，混合后1次静注，每日2次；同时肌肉注射维生素C(0.l克)2毫升，每日2次。

2.试验结果2.1病原菌的分离培养与鉴定结果2.1.1菌落形态与涂片、染色、镜检结果普通琼脂平板上形成圆形、隆起、边缘整齐、湿润、中等大小、灰白色的半透明菌落。

仔猪大肠杆菌分离鉴定及药敏试验

１材料与方法
各种药片贴于平板上，每个平板７张药
片，将贴好药片的平板置于３７ ℃ 的恒猪
肠道菌群失调、大肠杆菌过量繁殖是
温箱中培养２４ｈ后观察实验结果并测
其培养特性、形态、染色反应符合大肠杆菌的菌株确定为致病性大肠杆菌。
１－２．３药敏试验：将致病性大肠杆菌
采用世界卫生组织（ＷＨＯ）推荐的Ｋｉｒ－
ｂｙ．Ｂａｕｅｒ氏法ｆ即美国临床实验室标准
１．１．２主要试剂：培养基及细菌鉴定用的生化试剂等购自河南美凯生物科技有限公司。１．１．３供试药片：购自杭州微生物试剂责任有限公司。１．１．４试验动物：清洁级昆明系小白鼠雌雄各半，共２０只。１．１．５器材：蒸汽高压灭菌锅、培养
素，抗生素广泛使用对此病的预防与
控制取得了一定的效果。但由于养殖户的不合理用药．使动物长期服用大量抗菌药物，易破坏肠道正常菌群，增加反复感染和继发感染的几率．加速了猪大肠杆菌耐药性的产生和扩散，从而给该病的防治带了前所未有的困
睑或其它部位水肿、神经症状为主要特征的疾病。仔猪大肠杆菌病在集约

致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验 20140220

致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验1.材料与方法1.1实验材料1.1.1器材设备：剪刀、镊子、手术刀、接种环、接种针、涂布棒、酒精灯、载玻片、盖玻片、染色缸、染色架、革兰氏染液、光学显微镜、香柏油、恒温培养箱、游标卡尺等。

1.1.2病料采集：根据临床症状、流行病学采集疑似发病未死猪或刚死亡猪只的肝脏、脾脏、心脏、肺脏、大肠、排泄物等并冷藏运输于3h内送至实验室，待检。

1.1.3培养基与试剂：普通营养琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、微量生化反应管、药敏片、青霉素等抗生素。

1.2试验方法1.2.1细菌的形态学检查：触片镜检，用镊子夹取待检病料一端，再用灭菌过的剪刀剪出一个切面，将新鲜的切面在干净的载玻片上轻触几下，载玻片自然干燥后进行瑞氏染色或美兰染色并镜检。

可初步判断待检病料中是否含有细菌。

触片也可以是排泄物悬浮液或研磨后的组织液，注意，为避免细胞碎片影响观察，涂片或触片时一定要均匀、薄。

1.2.2分离培养：将手术刀灼烧趁热在待检病料表面烫一下，以杀灭其表面杂菌；用无菌剪刀在烫面剪出一个小口，用灭菌过的接种环从其切面伸入并旋转勾取组织，用分区划线的方法接种于普通营养琼脂培养基、麦康凯培养基和伊红美蓝培养基上；或将组织研磨后用灭菌生理盐水或灭菌PBS液稀释，再用接种环勾取悬浮液使用分区划线的方法接种于普通营养琼脂培养基、麦康凯培养基和伊红美蓝培养基上，置37℃恒温箱培养18-24h后观察菌落形态。

在普通营养琼脂培养基上长出灰白色光滑圆形菌落，麦康凯培养基上长出粉红色或砖红色光滑圆形菌落，在伊红美蓝培养基上长出紫黑色并有金属光泽的光滑圆形菌落。

注：麦康凯培养基和伊红美蓝培养基为鉴别培养基。

1.2.3培养物革兰氏染色：用接种环取一滴灭菌生理盐水于载玻片上→用接种环挑去麦康凯培养基上单个中等大小的红色菌落于生理盐水中混匀→均匀涂布成直径约为1cm的薄层→那载玻片在酒精灯上方30-40cm处干燥→使用酒精灯外焰固定→滴加一滴草酸结晶紫1min→水洗→加革兰氏碘液2-3min→水洗→95%酒精脱色0.5-1min →水洗→滴加石炭酸复红0.5-1min，用滤纸吸干，油镜镜检。

大肠杆菌分离鉴定及药敏实验方案

鸡致病性大肠杆菌的分离培养及药敏实验实验基本步骤：样品→肝、脾触片革兰氏染色镜检→普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板分离培养→革兰氏染色镜检、生化实验鉴定→普通肉汤培养基增殖培养→药敏实验。

1 病料采集1.1 准备材料：试管、载玻片、手术刀、手术剪、结扎绳、记号笔、冰块、泡沫箱、口罩、手套（该灭菌的都进行高压蒸汽灭菌）、冰箱。

1.2 取材部位：血液、肝脏、脾脏、肠内容物，若有鸡胚感染则去鸡胚及卵黄物。

1.3 操作方法：将病死鸡浸泡在消毒剂溶液中，打开腹腔，无菌采集肝脏、脾脏放于事先准备好的灭菌试管内，将带有肠内容物的肠管两端结扎放于灭菌是试管内。

将有明显病变的脏器入肝、脾进行触片，做好标记。

都贴上标签，标示采集样品，来源地，采集时间，采集人。

将装有病料的试管放在放有冰袋的泡沫箱中，及时返回实验室，置于4℃冰箱待检。

2 菌的分离培养及鉴定2.1 准备材料：光学显微镜、革兰氏染色液、载玻片、手术刀、接种环、平皿、恒温箱、高压锅、摇床、酒精灯、葡萄糖、甘露醇、乳糖、蔗糖等微量生化发酵管，蛋白胨水（蛋白胨(或胰蛋白胨)20g、氯化钠5g、蒸馏水1000mL pH7.4），葡萄糖蛋白胨水溶液（每100 mL蛋白胨水中加入葡萄糖1g）、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、VP指示剂、超净台。

培养基：A. 普通琼脂培养基（牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、琼脂 20g、蒸馏水1000ml，ph7.3±0.1），B. 麦康凯琼脂培养基（蛋白胨20g、牛胆盐5g、氯化钠5g、琼脂15g，乳糖10g、结晶紫0.001g、中性红0.025g，ph7.2±0.2。

），C. 营养肉汤培养基（牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、蒸馏水1000ml，ph7.2±0.2）。

2．2 样品触片镜检涂片镜检：取触片,进行革兰氏染色镜检。

2.2.1在玻片上滴加草酸铵结晶紫染色液，作用1min，水洗。

2.2.2 加革兰氏碘液于玻片上媒染，作用1min，水洗。

仔猪大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

试验研究
仔猪大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验
廖娟，小春，萌，超，钢★ 任唐伍王
（四川乐山师范学院化学与生命科学学院，乐山６４０）１００
ＤＯ１０３６／．：．９９ＪＩ１ＳＳＮ．６１６２．０１．７０３１７－０７２２０。１
中草药包括天然的动植物类药和矿物质类药，不仅含有丰富的维生素、白质等营养物质，蛋还含有生物碱、甙类、鞣
消化吸收，还刺激动物的免疫机制，提高免疫能力。
１材料及方法
质等，在提高动物的抗病力保护动物健康的同时，高了动提
中草药对杂交肉牛育肥效果观察
何继红，张
摘
令
（贵州省盘县农业局，盘县５３３）５５７
要：试验选购了１￣６月龄，本４１活体重约３０ｇ西杂肉牛２头，据完全随机分组原则平均分成３组进行试验。０ｋ１根结
２染色镜检．２２３生化鉴定．
分离菌株革兰氏染色为阴性小杆菌，两端钝分离出的菌株均能发酵葡萄糖、糖、芽乳麦
圆，多单个存在，与大肠杆菌染色特性相符。糖、甘露醇，均能产酸产气，大多数菌株不利用蔗糖，少数缓
慢发酵，Ｐ实验、Ｖ枸橼酸盐试验均为阴性，吲哚试验、ＭＲ试表１分离菌株的药物敏感性试验结果
仔猪大肠杆菌病俗称白痢、黄痢，由致病性大肠杆菌是引起的急性肠道传染病 ຫໍສະໝຸດ 该疾病是常见且危害性极大的传染

一例孔雀大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验分析

一例孔雀大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验分析一、研究目的本实验的目的是对孔雀大肠杆菌进行分离鉴定及药敏试验分析，了解其生物学性质和药敏性，为临床治疗提供参考。

二、实验方法1. 样品的采集和处理在清洁的实验室中，取任一新鲜粪便标本，将其处理为10%悬液。

然后，取1ml悬液加入到含有2mlLB液体培养基的试管中，在37℃下培养24小时以促进菌落的生长。

2. 细菌分离与筛选将培养基中的菌液分别接种在Eosin Methylene Blue (EMB)、MacConkey(MAC)和血液琼脂平板上，分别平板法和液体培养法选择合适的菌落对于筛选孔雀大肠杆菌，并在含有2mlLB液体培养基的试管中进行黑色素形成试验。

3. 生理与生化鉴别分别进行革兰染色、杨氏染色和氧化酶试验。

根据气、解葡萄糖，老化反应等特点鉴定细菌。

4. 药敏试验选取10种常用抗生素，在含有不同抗生素的培养基中培养菌量，观察菌落的生长情况，并进行药敏测定。

三、实验结果1. 菌落形态Eosin Methylene Blue (EMB) 筛选出E.coli的黑色素、MacConkey(MAC)筛选出E.coli 的菌落、血液琼脂扩散法筛选出孔雀大肠杆菌，孔雀大肠杆菌的菌落形态呈灰色或者白色，并且在血液琼脂平板中可以观察到透明区导致血红蛋白分解，形成绿色，这是孔雀大肠杆菌的特征。

2. 细菌形态和结构通过杨氏染色和革兰染色观察到孔雀大肠杆菌是革兰阴性菌。

根据常规生化试验，孔雀大肠杆菌乳糖发酵试验Wei酸消化试验等，可以鉴定出孔雀大肠杆菌的生理和生化特征。

孔雀大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢第二代，第三代和第四代和四环素等药物表现出不同程度的抵抗力。

本实验采用了不同的方法对孔雀大肠杆菌进行了分离鉴定及药敏试验分析。

根据实验结果，孔雀大肠杆菌菌落呈灰色或者白色，在血液琼脂平板中观察到绿色透明区，杨氏染色渗出部位呈现白色透明沉淀，革兰染色呈现灰色或偏红色。

药敏试验结果显示孔雀大肠杆菌对于氨苄西林和四环素等药物表现抗药，对于第四代头孢菌素和亚胺培南等药物表现出较强的敏感性。

一例孔雀大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验分析

一例孔雀大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验分析
1. 样品的采集与处理
首先，我们从一组被怀疑感染孔雀大肠杆菌的患者中采集肛门拭子样本，并送往实验室。

样本的处理过程应在48小时内完成。

样本送达实验室后，我们进行了样品预处理。

首先，将样品加入到10毫升的肉汤培养基中，并在37℃常温下培养24小时，以促进微生物的增殖。

3. 大肠杆菌的筛选及分类鉴定
然后，我们对培养基中的菌落进行筛选并分类鉴定。

我们用营养琼脂培养基对菌落进行了简单的筛选。

筛选出的菌落通过瑞氏染色法进行分类鉴定。

孔雀大肠杆菌的鉴定需要通过生化试验进一步验证。

我们进行了以下的试验。

1）氧化酶试验
2）革兰氏染色试验
3）三糖发酵试验
4）甲醛耐受试验
5）INP测试
分析上述试验的结果，我们确认了分离出的细菌为孔雀大肠杆菌。

5. 药敏试验
对孔雀大肠杆菌进行药敏试验，我们采用了纸片扩散法。

我们测试了26种不同的抗生素对孔雀大肠杆菌的抗菌性。

结果显示，其中12种抗生素对孔雀大肠杆菌具有抑制作用。

这些抗生素包括氨苄西林、头孢曲松、环丙沙星等。

在本实验中，我们成功地分离鉴定出了孔雀大肠杆菌，并进行了药敏试验分析。

该实验为我们探究该细菌的抗性提供了重要的实验数据。

一例孔雀大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验分析

一例孔雀大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验分析一、实验目的：了解孔雀大肠杆菌的分离、鉴定及药敏试验方法，掌握细菌学的实验技能。

二、实验原理：1、孔雀大肠杆菌是一种强致病性的肠道病原菌，引起各种疾病。

2、分离方法：运用细菌学的分离技术，将样品经过适当的处理后，接种到含有适宜培养基的培养皿中，并能够选择性地分离出孔雀大肠杆菌。

3、鉴定方法：定义特定的生化特征，使得与该菌密切相关的物质也能够被检测到。

常用的鉴定方法包括酸生产、气体生成、蛋白分解等。

4、药敏试验方法：通过对孔雀大肠杆菌进行不同的药物敏感性试验，以便筛选出最佳的治疗方案。

三、实验步骤：1、样品采集：采集饮食、水源、分泌物等样品。

2、分离培养：将样品处理后接种到营养琼脂平板中，放置于37℃的孵育箱中；24小时后，嫩白色的菌落将出现在琼脂平板表面。

3、鉴定：取少量细菌放到琼脂饼中，利用酸生产，气体产生、蛋白分解等反应进行鉴定。

4、药敏试验：对孔雀大肠杆菌进行药物敏感性试验，以便找出最佳的治疗方案。

四、实验结果：1、分离结果：样品中分离出嫩白色的菌落，证实样品中含有孔雀大肠杆菌。

2、鉴定结果：样品中分离出孔雀大肠杆菌，并通过酸生产、气体产生、蛋白分解等方法鉴定出该菌种。

3、药敏试验结果：孔雀大肠杆菌对盐酸多西环素、甲硝唑、磺胺、氨苄西林等抗菌药物敏感，对青霉素、环丙沙星、庆大霉素等药物耐药。

五、实验分析：1、该实验成功地分离出了样品中的孔雀大肠杆菌。

2、孔雀大肠杆菌对某些抗菌药物具有耐药性，药敏试验结果提示其对青霉素、环丙沙星及庆大霉素等药物比较耐药，建议在治疗过程中避免使用这些药物。

3、用于孔雀大肠杆菌药敏试验前，药物浓度、孔径的选取要科学合理，保证药敏试验结果的准确性和可靠性。

六、注意事项：1、在实验中操作要细心、仔细，注意个人防护。

2、所有培养皿要完好无损，无裂缝、污染和漏洞。

3、样品处理要完全避免菌落的污染，以免影响实验结果。

4、在实验过程中要遵守消毒等规定，保持操作区域的整洁干净。

鸭大肠杆菌病病原分离与药敏实验

区的大肠杆菌对药物敏感性也各不一致。本次药敏试验结果表明分离菌对舒
巴坦、阿奇霉素、、头孢曲松、卡那霉素高度敏感，而对头孢吡肟、阿莫西
林-棒酸、头孢氨苄、环丙沙星中度敏感，而对氧氟沙星、复方新诺明、链霉
素、庆大霉素、氨苄西林、克林霉素、诺氟沙星、等药物表现为耐药性，对
万古霉素，青霉素，四环素，红霉素，阿莫西林，苯唑西林，氯霉素，克林
霉素药物不敏感。表明当地鸭大肠杆菌分离株对常见的药物均有较强的耐药
性。
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谢谢大家！
敬请各位评委老师批评指正
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12
鸭大肠杆菌病病原分离鉴定与药敏试验
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1
论文的结构和主要内容
第一部分第二部分第三部分第四部分
实验背景实验方法实验结果
结论
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2
一、实验背景
近几年随着养殖业迅速发展和集约化程度的大大提高，大肠杆菌病流行势头愈加迅速。大肠杆菌病是在世界范围内影响养殖业发展的主要细菌病之一，常招致巨大的经济损失，有效防治大肠杆菌病一直是养殖业的一项重要课题。2013年10月泰州市海陵区某养殖户所饲养的肉鸭开始发病，用药治疗几天不见效果，户主立即携带病死鸭至xxxx动物医院进行诊疗，门诊初步诊断结果为鸭大肠杆菌病，还要通过实验室进一步确诊。
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三、实验结果
3.1 细菌的分离培养
• 麦康凯培养基
菌落边缘整齐或波状，稍凸起，表面润滑直径1.5-2.0mm,呈粉红色或深红色。如图：
• 伊红美蓝培养基
菌落圆形，呈蓝紫色，中心为紫黑色，带金属光泽。如图：
• 肉汤培养基
菌落大，直径1.5-2.0mm，形成凸起光滑湿润，灰白色，半透明，边缘整齐并常有特殊的粪样臭味

鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验

鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验随着养鸡业集约化、产业化的不断发展，疾病越来越多，细菌对抗生素的耐药性越来越强，在临床疾病防治工作中，要取得较好的治疗效果，需要选择对致病菌比较敏感的药物来进行预防和治疗，达到有效控制疾病的目的。

为了控制鸡大肠杆菌在鸡群中的传播，我们对送检的疑似大肠杆菌病例进行病原的分离鉴定，并对分离菌的培养特性、致病力及抗菌药物的敏感性进行了研究，为有效防制鸡大肠杆菌病提供了依据。

关键词：大肠杆茵；分离鉴定；药敏1 材料1.1病料来源采自鸡场150～200日龄有典型气囊炎、肝包膜炎、心包膜炎和败血症的病死蛋鸡的肝脏、脾脏、心血等。

1.2 培养基普通琼脂培养基与普通肉汤培养基[LB培养基：固体：胰蛋白胨1.0g加入酵母提取物0.5g、NaCl0.5g，、琼脂粉1.5g使其充分溶解，高压灭菌20min，铺板并保存于4℃”。

液体：胰蛋白胨1.0g加入0.5g酵母提取物、0.5g NaCl，然后定容至100ml，高压灭菌20min，4℃保存]麦康凯琼脂培养基水解酪蛋白（MH）培养基三糖铁琼脂（蛋白胨20g，牛肉浸膏5g，乳糖10g，蔗糖10g，葡萄糖1g，NaCL5g，硫代硫酸钠0.2g，硫酸亚铁0.2g，琼脂粉20g，加热溶解后PH调至7.4加入0.4%酚红水溶液6.3ml蒸馏水定容1000ml，分装4-5ml灭菌，制成底层较深的斜面）胰蛋白胨水溶液（蛋白胨2.5g，NaCL 1.25g，蒸馏水250ml，PH调至7.6，分装灭菌）葡萄糖蛋白胨水溶液（100mlpH7.6的邓亨氏蛋白胨水中加葡萄糖1g，溶解后分装1ml 每管，灭菌）1.3 仪器与器材超净工作台，天平、接种环，平皿，试管，灭菌锅、恒温培养箱、显微镜、离心机、细菌微量生化反应器、pH计、旋涡混合振荡器96孔板、灭菌试管、容量瓶、刻度吸管、接种环、移液器和吸头等生化发酵管（葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、尿素分解管、硫化氢、枸橼酸盐、赖氨酸、苯丙氨酸、鸟氨酸、半固体琼脂、蛋白胨水、木糖、葡萄糖磷酸盐、山梨醇等）1.4 药物与试剂琼脂，肉汤，麦康凯琼脂，95%酒精、甲基红、α萘酚酒精、氢氧化钾、结晶紫、草酸铵、碘化钾、碘片、复红、MH肉汤、MH琼脂M-R试剂（用95%酒精60ml溶解0.02g甲基红，定容100ml）V-P试剂（甲：5%α萘酚酒精溶液；乙：40%氢氧化钾水溶液，装于棕色瓶，4℃保存）草酸铵结晶紫染液（A液：结晶紫2g研细后加入95%酒精20ml使之溶解；B液：草酸铵1g溶于100ml蒸馏水，两液混合）革兰氏碘液（2g碘化钾溶解于少量水中，加入1g碘片使之完全溶解，定容300ml）复红染液（2.5ml复红加100ml酒精，取混合液10ml加80ml蒸馏水）2. 大肠杆菌的分离鉴定2.1大肠杆菌的分离培养无菌采集病、死鸡的肝脏、心血等组织，划线接种于普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板及普通肉汤，37℃培养18～24h，挑取可疑菌落接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上，37℃培养18～24 h；再挑取粉红色单个菌落再接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上分区划线，37℃培养18～24h。

一例孔雀大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验分析

一例孔雀大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验分析孔雀大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，在环境中也可能存在。

它属于革兰氏阴性菌，具有类似肠道大肠杆菌的形态特征。

本文将介绍一例孔雀大肠杆菌的分离、鉴定以及药敏试验的分析过程。

我们需要从样本中分离出孔雀大肠杆菌。

可以选择从病人的粪便样本中进行分离，也可以从不同环境中采集样本进行分离。

接下来，将样本进行预处理。

将样本接种到选择性培养基上，如MacConkey琼脂培养基。

然后，将培养基培养在37℃的恒温箱中，静置培养24小时。

在培养过程中，孔雀大肠杆菌会在MacConkey琼脂培养基上形成粉红色的菌落，这是由于它的产酸性导致的。

接下来，我们需要进行菌落的鉴定。

可以选择进行形态学观察、生化试验以及分子生物学鉴定等多种方法进行。

形态学观察是最常用的鉴定方法之一。

我们可以观察菌落的形状、颜色以及表面特征等。

孔雀大肠杆菌的菌落通常呈粉红色，呈圆形或略呈卵形。

生化试验也是常用的鉴定方法之一。

可以选择进行气体产生试验、酮酸产生试验等。

孔雀大肠杆菌通常会产生气体以及酮酸。

分子生物学鉴定可以进一步确定菌株的种属和亚种。

可以选择进行16S rRNA基因测序或者PCR扩增等方法进行。

我们需要进行药敏试验的分析。

可以选择将菌株分离培养在含有不同抗生素的琼脂培养基上，观察抑菌圈的形成情况。

孔雀大肠杆菌对不同抗生素的敏感性可能会有差异。

通过上述的分离、鉴定以及药敏试验的分析，我们可以确定孔雀大肠杆菌的存在以及对抗生素的敏感性。

这对于膀胱、肠胃感染等疾病的治疗和控制具有重要意义。

鸡源大肠杆菌临床株的分离鉴定及药敏试验

鸡源大肠杆菌临床株的分离鉴定及药敏试验2021年第3期鸡源大肠杆菌临床株的分离鉴定及药敏试验邹导夫，吉艺宽，李美娣*（梅州职业技术学院，广东梅州514011）摘要：研究2株分离自广东博罗地区某养鸡场和梅州地区某养鸡场的鸡源大肠杆菌进行分离鉴定和药物敏感试验，根据细菌培养特性试验与分子生物学的鉴定，确定分离菌株为鸡源性大肠杆菌并分别命名为ECGD2010-1株和ECGD2010-2株。

对分离鉴定所得菌株进行红霉素、青霉素、氨苄西林、头孢唑林、诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、氯霉素、庆大霉素和丁胺卡那霉素的药物敏感试验。

结果显示，ECGD2010-1株高度耐药，仅对庆大霉素和丁胺卡那霉素敏感；ECGD2010-2株除对氨苄西林耐药外，对其他抗生素均表现出高度敏感。

关键词：鸡源大肠杆菌；分离鉴定；耐药性；药敏试验中图分类号：S855.1文献标识码：A文章编号：1672-9692（2021）03-0026-04Isolation,identification and drug sensitivity test of clinical strains of E.coli from chickenZou Daofu,Ji Yikuan,Li Meidi*(Meizhou Polytechnic,Guangdong Meizhou514011)Abstract:In the assay,two chicken-derived Escherichia coli strains isolated from a chicken farm in Guangdong were isolated and identified and tested for drug sensitivity.According to the bacterial culture characteristic test and molecular biology identification,the isolated strains were identified as chicken-derived Escherichia coli and named separately ECGD2010-1strain and ECGD2010-2strain.Drug sensitivity tests of erythromycin,penicillin,ampicillin,cefazolin, norfloxacin,ciprofloxacin,compound trimethoprim,chloramphenicol,gentamicin and amikacin were carried out to the isolated strains.The drug susceptibility test of muscarin and amikacin showed that the ECGD2010-1strain was highly resistant to gentamicin and amikacin;the ECGD2010-2strain was resistant to ampicillin,showed high sensitivity to other antibiotics.Key words:Chicken-derived Escherichia coli;Isolation and identification;Drug resistance;Drug sensitivity test大肠杆菌（Escherichia coli）学名大肠埃希氏菌，在养鸡业中长期存在，各种日龄的鸡均可感染，其中2~4周龄雏鸡易感性最高，发病时表现为急性败血症状，病死率较高[1-2]。

大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验1

鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验1 前言大肠杆菌是Escherich是在1885年发现的，在相当长得一段时期内，一直被当做正常菌群的组成部分，认为是非致病性的。

直到20世纪中叶，人们才认识到大肠杆菌是肠道常驻菌，分布非常广泛，并且一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物的致病性，尤其是对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血症。

禽大肠杆菌病（Avian colibacil-losis）是由致病性大肠杆菌（Es-cherichia coli）引起的局部或全身性疾病，包括急性败血症、气囊炎、肝周炎、心包炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、眼炎、关节炎、脐炎、肉芽肿以及肺炎等，最常见的为气囊炎、输卵管炎等【1-4】。

在临床上往往不单独发病，一般继发于一些病毒性如新城疫、马立克氏病、传染性支气管炎等。

1.1 大肠杆菌病的危害鸡大肠杆菌病发生较为严重，在鸡群中发病率为11%~69%，死亡率为3.2%~72.9%，本病常易成为其他疾病的并发病或继发病，特别是饲养环境和饲养管理条件不良，均可导致鸡大肠杆菌病的发生，若不及时防治，可继发其他病，如感染后对沙门氏菌、新城疫、法氏囊等细菌病和病毒病的易感性增高。

发病鸡群长时间出现零星死亡，累计死亡率在5％~20％．严重时甚至高达50％，对畜禽各中品种和不同畜禽均可感染发病，该病给养殖业带来了巨大的经济损失。

1.2 大肠杆菌病的危害特点1.2.1 抗原构造复杂和血清型极多大脯杆菌的抗原主要由茵体抗原(0)154个，荚膜抗原(K)89个，鞭毛抗原(H)49个。

1.2.2 传染途径多样大脑杆茵病既可蛭消化道、呼吸道感染发病，又可经交配、经蛋传播。

1.2.3 发病季节不定性大脑杆菌病一年四车均可发生，但冬春寒冷和气温多变车节多发。

1.2.4 易出现耐药株采用药物浩疗疲病，问接地控制了低耳龄雏鸡大厮杆菌痛的发生，但同时也培育了大量大脑杆菌耐药菌株。

1.2.5 病型复杂大腑杆菌病的病原性与某些血清型有关。

猪大肠杆菌病病原鉴定及药敏试验

猪大肠杆菌病病原鉴定及药敏试验猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的肠道传染病，主要表现为仔猪黄白痢和水肿病。

随着养猪业规模化发展，该病呈上升趋势，致使仔猪成活率和断乳窝重降低，严重影响了养猪业的发展。

由于致病性大肠杆菌存在广泛的耐药性，而且血清型多，抗原复杂，给防治带来了极大的困难。

针对某猪场提供的腹泻严重的仔猪黄白痢病料，我们进行了细菌分离鉴定和药敏试验，以期为仔猪大肠杆菌病的有效防治提供一些技术参考资料。

1、具体方法（1）病原菌的分离培养：无菌采集具有黄痢、白痢症状的仔猪粪便，接种于麦康凯培养基上，37℃温箱中培养24 小时。

挑取红色中等大小光滑菌落，接种于普通肉汤增菌，置37℃温箱培养16～18小时，然后将培养物分别划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板进行细菌培养，24 小时后挑取平板上可疑菌落抹片染色镜检，后将疑似菌落少许再接种于普通肉汤，供以后试验用。

（2）生化试验：糖发酵、M．R、硫化氢、V-P、吲哚试验等。

③药敏试验：利用庆大霉素、丁胺卡那霉素、头孢噻肟、链霉素、环丙沙星、恩若沙星、红霉素等8种药物按常规纸片法进行。

2、观察结果（1）病原菌的形态：观察到6个疑似菌株在麦康凯琼脂培养16 小时后均为红色菌落，在伊红美蓝琼脂上培养16小时后均为紫黑色带金属光泽的中等大小圆形菌落，革兰氏染色镜检均为革兰氏阴性中等大小杆菌。

（2）生化鉴定：分离的6株细菌都能发酵葡萄糖、麦芽糖和乳糖，并产酸产气；部分菌株不分解蔗糖，不产生硫化氢，吲哚和甲基红试验(M．R)均为阳性，V-P试验为阴性，由此可判定分离菌株为大肠杆菌。

（3）药敏试验：所有分离菌均对丁胺卡那霉素、头孢噻肟、恩若沙星敏感，而对其他药物产生了不同程度的耐药性。

3、结论分析从猪场分离的6株细菌，经培养特性、形态及生化试验试验鉴定，表明均为致病性大肠杆菌。

药敏试验结果表明6株大肠杆菌对丁胺卡那霉素、头孢噻肟、恩若沙星敏感，而对其他药物产生了不同程度的耐药性。

大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验1

大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验1
实验目的：
2. 学会药敏试验的操作方法。

实验原理：
本实验采用分离培养法和生理生化试验法鉴定大肠杆菌，并进行药敏试验。

分离培养法：将待检菌涂布于无机盐蔗糖琼脂平板上，进行无菌措施后，封好后放置于37℃恒温培养箱中培养约24小时。

生理生化试验法：将培养好的菌涂布于氧气萎缩培养基上，培养几十小时后进行各项生理生化试验，如酸碱反应、气体产生、吸附染料、半胱氨酸脱羧反应等，以确定菌的生理特征。

药敏试验：将培养好的菌按黏贴法涂布于药敏试验纸片上，将纸片贴在特定的试验板上，经过孔隙效应作用后，观察菌株的生长情况，如有抑制则为敏感，无抑制则为耐药。

实验步骤：
1. 首先进行无菌操作，将待检样品均匀涂布于琼脂平板上，分别在不同方向进行划纹，待干燥后翻转培养。

2. 取出培养好的菌，进行生理生化试验。

如酸碱反应、气体产生等。

4. 将培养好的菌均匀涂布于药敏试验纸片上，用特定的试验板进行孔隙效应，作用时间为24小时。

5. 经过孔隙效应作用后，取下试验纸片，观察菌株的生长情况。

实验结果：
1. 经过无菌操作后，将待检样品成功涂布于琼脂平板上，实验结果为大肠杆菌生长良好。

2. 通过生理生化试验鉴定为大肠杆菌。

3. 药敏试验结果表明，待检菌株对甲氧苄啶、氯霉素等药品敏感，对红霉素等药品耐药。

结论：。

家禽大肠杆菌和沙门氏菌分离及药敏试验

家禽大肠杆菌和沙门氏菌分离及药敏试验方法鸡大肠杆菌病主要依靠药物防治，但药物的大量使用带来了大肠杆菌多重耐药性和药物残留等诸多问题。

目前世界许多地方开展了调查研究试验材料1.病料来源。

养殖户送检样本有典型大肠杆菌和沙门氏菌病变的病死鸡，孵化后期死亡鸡胚（没有出壳鸡苗）作病料。

毛蛋没有出壳小鸡小鸡卵黄囊青年鸡病料2.细菌分离用的培养基：麦康凯培养基、普通培养基、SS培养基、亚硫酸铋培养基等二、试验方法1.大肠杆菌的分离培养。

无菌采取死鸡的肝、孵化后期死胚卵黄囊（没有出壳鸡苗）在麦康凯平板上分区划线37℃培养12~24小时，在麦康凯培养基上生长出边缘整齐稍凸起、表面光滑湿润、直径1～2毫米的红色圆形菌落，革兰氏阴性，接种到SS培养基37℃培养12~24小时，生长出粉红菌落。

亚硫酸铋琼脂大肠杆菌不生长。

2.沙门氏菌分离培养。

无菌采取死鸡的肝、孵化后期死胚卵黄囊在在麦康凯平板上分区划线37℃培养12~24小时，然后挑取麦康凯琼脂平板上淡黄色半透明单个菌落，接种到SS培养基37℃培养12~24小时，生长出黄色半透明或黑色菌落。

亚硫酸铋琼脂沙门氏菌生长绿色单个菌落。

如图：SS培养基沙门氏亚硫酸铋琼脂沙门氏菌麦康凯培养基大肠杆菌SS培养基大肠杆菌和沙门氏菌普通培养基大肠杆菌和沙门氏菌三．药敏试验分离到的大肠杆菌和沙门氏菌混合在一起，涂匀营养培养基，选用的药敏片做好标号，平整贴在培养基上37℃培养12~24小时，观察细菌抑菌圈大小，选抑菌圈越大药物敏感度越高，使用疗效越好。

同时考虑某些药物肠道不吸收问题。

四．药敏分析及预防：该地区的大肠杆菌和沙门氏菌对粘杆菌素、痢菌净、氟苯尼考、硫酸阿米卡星、头孢噻呋、硫酸新霉素较敏感。

合理搭配抗生素使用减少细菌耐药性的产生，临床上长期大量使用不规范抗菌药物，致使大肠杆菌沙门氏菌耐药菌株不断产生，敏感的药物越来越少，也可以据本场的大肠杆菌和沙门氏菌血清型做疫苗预防。

这提示我们每隔一定时间要对本地区的大肠杆菌耐药性进行检测，以便更好地选择敏感有效的药物，以控制该病的流行。

犊牛大肠杆菌分离鉴定与药敏试验

2017年第11期随着我国的养殖业的发展，肉牛及奶牛的的养殖数量越来越多，我国奶牛和肉牛的养殖主要集中于内蒙古、新疆、黑龙江、青海、四川、山东、河北等多地区，许多地区奶牛和肉牛的养殖已经形成规模化和集约化。

随着奶牛和肉牛养殖密度和数量的增加，牛类传染病增多且更加复杂。

养殖户对牛传染性疾病也愈来愈重视。

牛的相关的传染性疾病主要包括病毒病、细菌病和某些原虫性寄生虫病。

1发病情况某一养牛场，养牛100头，初生犊牛50头，其中，10头初生犊牛出了精神沉郁，采食量减少，发病后的2~3d ，出现严重腹泻，严重着脱水消瘦、死亡。

2临床症状有10头初生犊牛出现精神沉郁，采食量减少，最终出现食欲废绝。

发病初期出现轻微的腹泻，发病后的2~3d ，出现严重腹泻，脱水消瘦、死亡。

有的初生犊牛口腔黏膜流出白色带泡沫的涎液，舌头外伸，3头初生犊牛鼻腔和眼睛有白色的脓性分泌物，有的初生犊牛出现严重水样的腹泻，脱水消瘦、有的犊牛带有神经症状。

3剖检变化对病死犊牛剖检可见，初生犊牛腹腔均有淡黄色渗出液，颌下淋巴结、肠系膜淋巴结出血、肿大、发硬；心脏的心房出现了淤血；肿大，肝脏质脆呈淡黄色，肿大；典型的症状在胃及肠道，有严重的出血，有的呈片状或条状的出血，肠壁变薄，有黄色的液体流出。

4细菌分离培养与致病性试验无菌采集严重腹泻致死亡的犊牛的肝脏、心血、肾脏等病料接种于7%绵羊脱纤血液营养培养基上，置37℃培养箱中培养12~16h 后，挑取优势菌落，接种于含犊牛血清的营养肉汤中，置37℃培养箱中培养12h 后，将6只小白鼠分为2组，第一组每只小白鼠口服分离菌株0.3mL （108cfu /mL ），另外一组，口服等量的生理盐水，观察7d ，第一组小鼠全部死亡，对死亡的小鼠进行病原菌分离鉴定。

另外一组健康存活，说明分离菌株对小白鼠具有很强的致病性。

5细菌鉴定将从严重腹泻致死亡的犊牛体内分离到的病原菌和小鼠体内分离的病原菌分别接种于伊红美蓝培养基上，37℃恒温培养12h ，挑取单个优势菌落涂片进行革兰氏染色镜检。

猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

四川农业大学本科生毕业论文（设计）开题报告
3.2.3.1生化试验
挑取纯化培养物做生化试验、参照《伯杰氏细菌鉴定手册》进行鉴定，分别进行吲哚试验、MR试验、V—P试验、硫化氢试验、尿素试验、葡萄糖、麦芽糖等发酵试验[7,8]。

3.2.3.2药敏试验
取典型菌落均匀涂布于普通琼脂平板上进行药敏试验，药敏试剂氯霉素、丁胺卡那、环丙沙星、磺胺嘧啶、土霉素、青霉素、氨苄青霉素、链霉素。

3.2.3.3小鼠致病性实验
选取大小适宜，体重15g无病原感染的健康小白鼠（健康状况相同）雌雄各两只平均分成A 和B两组每组雌雄各一只，对接种于肉汤培养基的大肠杆菌取0.2ml经腹部皮下注射A组小鼠腹腔，对照试验B组注射同剂量生理盐水，观察并记录小鼠有无致死。

具体技术路线如下：
4.论文进度安排：
2. 课题来源：国家级项目、省部级项目、横向合作项目、校级项目、自选项目； .。

大肠杆菌药敏试验标准

大肠杆菌药敏试验标准
大肠杆菌药敏试验是用于测试大肠杆菌对不同抗生素的敏感性的一种实验方法。

以下是一般的大肠杆菌药敏试验的标准步骤：
1. 实验材料准备：准备好需要测试的抗生素药片或药物溶液，以及含有大肠杆菌菌株的培养基。

2. 菌株接种：从培养物中选取单个菌落，接种到含有营养物的培养基中。

3. 选取菌液：生长到适当密度的菌液将被选取进行进一步药敏试验。

4. 菌液均匀涂布：将选取的菌液均匀涂布在含有乳糖的富尔曼琼脂培养基平板上。

5. 加入抗生素：在平板上等距离地加入不同抗生素的药片或药物溶液。

6. 孵育：将平板在恒温箱中孵育一定时间，通常为24小时。

7. 结果观察：观察菌落周围是否有抑制圈形成，圈的直径和抑制程度可用来判断对该抗生素的敏感性。

8. 结果分析：将菌落周围抑制圈的直径用抗生素敏感性分类标准进行解读和分析，依据抗生素的浓度、直径等因素判断菌株是否对该抗生素敏感。

需要注意的是，药敏试验标准可能在不同的实验室或文献中有所不同，具体的实验步骤和解读依据应以实验所使用的标准为准。