组织分离法制备母种
母种制种技术
母种转管
将母种移入新的母种培养基的过程 概念 过程 注意 接种环取绿豆粒大母种 移入新斜面中部 种块勿太大 原老种块勿再接入
传代次数勿太多
转管
假设同学们现在是一 名食用菌技术人员，你 在生产中发现一性状良 好的平菇品种，你怎样 制得这一品种的母种？ 要求同学们以组为单 位，进行讨论，拿出制 种方案。
2.采收孢子 整菇 插种法 种菇插在孢子收集器中 使孢子散落于培养皿内的方法
用 前 灭 菌
25℃、24h现孢子粉 取出分离材料 培养皿盖严
钩悬法
25℃、24h现孢子粉 取出分离材料
孢子印法
3.接种孢子
用接种环 蘸孢子液或孢子粉 涂布于平板上
组织分离法 组织 培养
PDA
次生菌丝
特点
简便，易成功 保持原菌种性状 重复多易退化 不适于耳类
步骤 外观典型、大小适中、无病虫害、 选种菇 八九成熟、第1~2茬的子实体
种菇 消毒 取接 组织
用酒精棉球擦拭
纵剖（撕）菇体 尖头镊取盖柄交界处绿豆—黄豆粒大 的组织 放入新斜面中部
母种培养
1.培养条件 场所清洁 空气清新 空气湿度 60%~70%
光线暗
温度约25℃
2.技术环节
母种 培养 及时挑拣污染管 分离的母种要纯化→出菇试验 →使用 控制菌龄（即将长满斜面） 培养时间5~10天
食用菌母种制作实验一
实验一食用菌母种制作
一、目的要求：
1、了解母种培养基制作过程,理解灭菌原理；
2、掌握母种培养基的制备方法；
3、了解无菌操作基本原理,掌握母种的无菌接种培养方法.
4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤；
5、熟练分离出栽培用菌种.
二、主要仪器设备及药品材料：
灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管18x180mm、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体.
三、实验步骤与方法:
①培养基的制作
1 PDA培养基配方
马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升.
2. 母种培养基的配制
1熬制.马铃薯洗净,挖芽去皮.称取200克,切成玉米大小颗粒或薄片.量筒量取1000毫升水,铝锅中煮沸后记时30分钟.四层纱布过滤于量杯中.滤液倒入锅中文火加热,加
入葡萄糖和琼脂,不断搅拌,直到琼脂溶化.补足水量至1000毫升.
2分装试管.将熬制的培养基用小漏斗趁热分装.培养基高度为试管长度的1/5左右,注意避免培养基沾于试管口外.分装完成后,盖紧硅胶塞.
3捆把.7支试管为一捆,用牛皮纸包裹试管口,用捆扎绳扎紧.贴上标签,准备灭菌.
4灭菌.注意加足水量和排气,灭菌完成后降压不能太快.
5摆斜面,培养基长度约为试管长度的1/2.斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布,防止试管内产生过多的冷凝水.
①菌种分离与培养
1种菇选择.选取无杂菌感染,无病虫害,出菇均匀,适应性强的子实体,要求个体健壮,朵大肉厚,外形规整,出菇早,约七八成熟的新鲜子实体.子实体采收后切去大部分菌柄,放入干净器皿内备用.
食用菌原种的筛选与扩繁实验报告
食用菌原种的筛选与扩繁实验报告
一、实验目的
1、了解食用菌的基础知识。
2、掌握食用菌培养基的配置原理。
3、通过平菇、香菇、金针菇的栽培实验，掌握食用菌代料栽培的一般方法和栽培管理技术。
4、学习和掌握食用菌的组织分离法
二、实验内容
1、代料栽培培养基的制备
2、培养基的灭菌3.接种
三、实验原理（食用菌的组织分离法
食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。四、实验材料
1、原种制作实验材料
（1）食用菌：香菇、平菇。
（2）培养基：PDA培养基斜面。
（3）仪器或其他用具：75%酒精棉球、接种针记号笔等。
2、食用菌的组织分离（1）试剂：棉籽壳、麸皮、蔗糖、CaCO3
四、注意事项
1、在整个操作过程中都要注意无菌操作，一切用具都要消毒。
2、要等刀片冷却后再切取组织块。
3、栽培种在培养过程中，应经常检查，污染袋要及时检查出处理掉。经过30至40天的培养，菌丝长满袋后即可使用。若菌袋内长出原基，说明菌种已经老化。若有黄、绿、黑等杂色斑点或连成片时，说明菌种已经污染，不可使用。
怎样制备黑木耳菌种
怎样制备黑木耳菌种
黑木耳菌种制作包括母种、原种、栽培种的制作三个程序。
一、母种的分离和培养
1.母种培养基。配方为马铃薯葡萄糖琼脂。配制成试管斜面，经常规灭菌，即可使用。
2.母种分离和培养。分离方法有孢子分离法、耳木分离法和组织分离法，无论哪种方法，都可获得菌种。①孢子分离法：这种方法获
得的菌种变异较大，适合于育种采用。②耳木分离法：成功率高，种性较稳定，生产中多用此法。③组织分离法：选片大、肉厚、成
丛生长的鲜耳或当年生长经晒干的干耳再经清水泡胀，洗净，进行无菌操作分离。以上方法均在28℃下培养。
分离得到的母种必须经过转管纯化，质量评定，出耳试验，才能作进一步扩大生产。
二、原种制作
培养基配方：木屑78%，米糠20%，蔗糖1%，石膏粉1%，水65%，pH为6。把各种培养料拌匀，调至适当水分，装瓶，灭菌。灭菌后
待瓶温降至30℃送入接种室，无菌操作，接入母种块。在28℃下培养。
三、栽培种制备
栽培种是直接在生产中使用的菌种，由原种进一步扩大生产而得到。黑木耳的栽培种有几种类型。
组织分离母种的对比试验
旬覆 土 ， ３月 上 旬 出 菇 ， 种 至 出 菇 ９ 接 Ｏ天 左 右 ， 收 ３潮 菇 ． 采 ５ 月 上 旬 结 束 。秋 栽 ８月 上 旬 接 种 ， ９月 中 旬 覆 土 ， ０月 上 旬 出 １ 菇 ． 种 至 出菇 ６ 接 Ｏ天左 右 ， 收 ３潮 菇 ． ２ 上 旬 结 束 。 采 １月 ６ 长根菇 适 宜初 夏和早秋栽培 ． 夏栽培 １ 月 中旬 接种 ． 初 ２
月 下 旬 结 束 。秋 季 栽 培 ８月 上 旬 接 种 ，０月 上 旬 始 出菇 ， 种 １ 接 至出菇 ６～７ Ｏ ０天 ， 收 ２ 菇 。 ２月 上 旬 结 束 采 潮 １ ２ 真 姬菇 适 宜 冬 季栽 培 ．Ｏ月 下 旬 接 种 ， １ １月 下 旬 始 出 菇 ．
切取种 菇内一小块 菇肉组织接 人试管 培养基 中。
作了如下对 比试验 ：
１ 试 验 方 法
１ １ 供 试 材 料 自 己选 育 的 平 菇 、 菇 、 头 菇 子 实 体 。 ． 香 猴 １２ 常 规 方 法 ．
１ 茶 薪菇 适宜 春秋两 季栽培 ， 季栽 培 在 １ 春 ２月 上 旬 开 始 接种 ， ３月 中旬 始 出 菇 ， 种 至 出 菇 １ ０天 左 右 ， 收 ３潮 菇 。 接 ０ 采 ５
文重点 介绍适宜 粤北地区气候特点栽 培 的几种珍稀 食用菌 。
母种分离技术
在自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。所谓菌种分离，就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯的优良菌种。菌种分母种、原种、栽培种。制种程序可参考 图13。(一）母种的分离培养 食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等。 1.孢子分离法 孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。 （l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子， 让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分离法。 （2）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。具体操作方法，有以下几种：①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。形成一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇 为褐色，香菇、金针菇孢子印白色）。用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。 还可用孢子采集器收集孢子。方法是选好种菇后，按上述程序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上，放在培养皿正中央。随即盖好玻璃罩，用纱布将钟掌周围塞好。并在纱布上倒少许升汞或无菌水。移入 20℃左右恒温箱培养。 ②褶上涂抹法：按无菌操作分离时；应选择成熟的种菇，用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表面子实体尚未弹射的孢子，再在培养基上划线接种。 ③钩悬法：取成熟菌盖的几片菌褶或一小块耳片（黑木耳、毛木耳、白木耳〕，用无菌不锈钢丝（或铁丝、棉线等其他悬挂材料）悬挂于三角瓶内的培养基的上方，勿使接触到培养基或四周瓶壁。置适宜温度下培养、转接即可。 ④贴附法：按无菌操作将成熟的菌褶或
母种分离技术
母种分离技术
在自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。所谓菌种分离，就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯的优良菌种。菌种分母种、原种、栽培种。
制种程序可参考图13。
(一）母种的分离培养
食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等。1.孢子分离法
孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。
（l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子，让它萌发成菌丝体来获
得纯菌种的方法。蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分离法。
（2）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交
配来获得食用菌纯菌种的一种方法。具体操作方法，有以下几种：
①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。
培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12～20小时，菌褶上的孢子就会散
落在培养皿内。形成一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇为褐色，香菇、金针菇孢子印白色）。用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。
食用菌组织分离制母种PPT52页
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
Thank you
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
菌种分离与培养
菌种分离与培养（1）
人们采取无菌操作的方法，把某种食用菌从混杂的微生物中，单独地分离开来，这个过程叫做菌种分离。从分离过程中得到的菌丝体纯化后，就是纯菌种。在实验室条件下，以人工使纯菌种大量生长和繁殖的方法，叫做培养。
一、母种培养
(一)菌种分离
菌种分离通常采用的方法有孢子分离法、组织分离法和寄主分离三种方法，三种方法各有特点，可根据不同的菌类和生产条件选择使用。
1.孢子分离法孢子分离法，是利用成熟子实体的有性孢子能自动从子实体层中弹射出来的特性，在无菌条件下和适宜的培养基上，使孢子萌发成菌丝，而获得纯种的一种方法。
(1)孢子的采集
①种菇的选择用作分离菌种的种菇，应选择出菇早、朵型好、个体肥大、生长健壮、无病虫害、八成熟的菇体。一进入出菇期，就要注意观察选择，并作好标记。不同的食用菌选择的具体要求是：
香菇菇型圆整，菇体肥大，柄细而短，菌盖呈深褐色，出菇早，无病虫害，一般为八成熟的子实体。
双孢蘑菇菇型圆整，光滑直立，颜色洁白，柄粗盖厚，无病虫害，生长快而健壮的单生菇。
草菇菇型端正，肥大健壮，包被未破，无病虫害的单生菇。
平菇出菇早，菌盖厚实，重叠丛生，菌柄粗短，色泽鲜亮，尚未散发孢子，八成熟而无病虫害的子实体。
木耳选朵大、耳片厚、色黑、生长健壮、褶皱多、无病虫害的春耳。
银耳朵大肉肥、色泽洁白、展片良好、朵型美观、八成熟、无病虫害的子实体。
猴头形状正常、颜色洁白、出菇早、生长健壮、菌刺丰满、无病虫害的子实体。
金针菇出菇早而均匀、生长健壮、朵型正常、菌柄长短适中、无病虫害的子实体。
②种菇的消毒子实体采回后要及时切除基部，并进行表面消毒。对子实体层未外露的种菇(如蘑菇等)，可浸入0.1%升汞溶液中消毒约1分钟，用镊子捏出后经无菌水冲洗数次，再用无菌纱布将表面水吸干；对于子实层裸露的种菇(如香菇等)，只能用75%酒精揩擦菌盖及菌柄表面；而对于银耳、木耳类子实体，却千万不能接触消毒剂，只能置于烧杯中用无菌水洗涤，然后捏起再经无菌水冲洗数次，同样用无菌纱布吸干表面水。
食用菌菌种的分离
3、组织分离接种
用无菌解剖刀从菌柄中部纵向 切开，或把种菇撕开，在菌盖与菌 柄交界处或菌盖带菌褶部分挑取一 小块组织，移接到试管PDA培养基
上。
4、菌种培养及保存
置28℃左右温度下培养3～5天就
可看到组织上产生白色绒毛状菌丝， 并向培养基上生长。菌丝长满斜面后， 管口用塑料薄膜或防潮纸包扎，即可 放入5℃电冰箱中保藏。
六、作
业
根据观察结果同一菌种不同部位 组织分离后菌丝生长情况，评价何种 部位更适宜该菌种的组织分离繁殖， 并对操作的各个环节提出改进建议。
• 答：从菌盖和菌柄交界处接种的组织生 活力最好，可以用来生产。
四 、分 组
每班同学分为8个小组，(每4个人一 个小组)组织分离接种以小组为单位进行， 每个同学接种2支试管母种
每小组没人采用菌盖与菌柄交界处组
织进行分离和菌盖带菌褶部分进行组织分
离。(各做一支试管)
五、方法与步骤
1、选菇
平菇选朵大肉厚的作种菇。香菇 选择菇形圆整、肉厚较成熟未开伞 的作种菇。
2、种菇消毒
食用菌菌种的分离与纯化
一、目的和要求
掌握了解食用菌组织分离的
方法和实际操作技术，明确食用
菌组织分离在食用菌生产中的重
食用菌的制种(母种的分离和培养)
食用菌的制种（母种的分离和培养）()---
食用菌菌种质量的优劣，直接影响到栽培的成败和产量的高低，只有优良的菌种，才能获得优质高产的食用菌。因此食用菌的制种，是生产中一项极其重要
的工艺。
食用菌的菌种按培养阶段和来源的不同，可分母种、原种和栽培种三种。从食用
菌的孢子分离培养或从组织分离培养、基内菌丝分离培养所得到的第一代菌丝体，称为母种。从母种扩大培养的菌丝体，称为原种。从原种扩大培养直接用于
生产上播种的菌丝体；称为栽培种。
一、母种的分离和培养
（一）母种培养基的配制
1.母种培养基的种类母种是菌种生产的关键，要求纯度高，不能混生杂菌，同
时母种的菌丝体较为纤细，分解培养料的能力较弱。因此，母种菌丝体需要培养
在营养丰富，易被吸收，表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。适合
母种菌丝生长的琼脂培养基种类很多，常用的有下列几种：（1）马铃薯——葡萄糖——琼脂培养基
马铃薯（去皮） 200克琼脂 20克
葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升
（2）麦芽汁——葡萄糖——琼脂培养基
干麦芽 250克琼脂 15～20克
葡萄糖（或蔗糖） 10克水 1000毫升
（3）胡萝卜——葡萄糖——琼脂培养基
胡萝卜 100克琼脂 20克
葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升
（4）蘑菇汁——葡萄糖一一琼脂培养基（适用于蘑菇）鲜蘑菇 250克琼脂20克
葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升
（5）蛋白胨——葡萄糖——琼脂培养基
蛋白胨 2克葡萄糖 20克
磷酸氢二钾 2克维生素B1（硫胺素） 0.5毫克磷酸二氢钾 0.5克琼脂 18克
香菇菌种研发流程
香菇菌种研发流程
香菇菌种研发流程包括以下几个步骤：
1. 纯种分离及出菇试验：选择出菇早、出菇均匀、朵形好、粗壮肥大、柄短、色泽好、八成熟的香菇菇体作为种菇，用孢子分离法或组织分离法或菇木分离法获得菌种，然后用常见的培育方法，用马铃薯葡萄糖琼脂或玉米粉琼脂培养基进行纯种分离，然后放入摄氏22-26度环境中培养，一般经过10-
20天的培育，就会发现长成菌落，然后挑选出那些色白、健壮、无病虫害
菌丝转入斜面培养。然后需要这样的操作2-3次纯培养后，并经出菇试验，选取优良菌株用作制母种。
2. 母种制备：经过培育后，可以开始制备母种。方法是取经出菇试验的纯种，用马铃薯葡萄糖琼脂在摄氏24-26度培养，需要有培养箱恒温。母种可转
3-4代扩大培养获得更多的母源菌种。
3. 原种制备：通过前一段时间的培育，获得了母种后，就要制作原种。方法是把母种用与栽培料接近的培养基进行扩大培养，这样就获得原种。如果原种比较多，也可以直接用于栽培接种。制作原种，需要配置原种培养基，不能用母种的培育基了，原种的培养基比较多，需要大量、廉价的材质来培育，降低价格。配方是锯木屑78%、米糠或麸皮20%、蔗糖1%、硫酸钙1%、水适量。将以上混合的配方基质装入750毫升菌种瓶，包扎好在公斤压力
下1小时灭菌。接入母种后在摄氏24-26度培养30-40天至菌丝长满瓶。
4. 栽培种制备：原种培育好以后，就是培育栽培种了。这是在原种的基础上，进一步扩大种源，栽培种是原种的进一步扩大生产，然后直接用于栽培接种的。栽培种的培养基和原种的培养基有一定的区别，可以用木块作香菇菌种培养基。具体配方可以用厘米厚、直径1厘米的圆木粒或楔形木块1000个，木屑100克，米糠50克，水毫升。先把木粒在水中浸透，再用浸过木粒的水拌料，然后装入菌种瓶在公斤压力1小时灭菌后接种培养。
组织培养法制取鸡腿菇母种的实验研究
把水 份 吸 干 ， 无 菌 解 剖 刀 将 菇 体 顶 端 表 皮 割 去 一 薄 层 ， 出 顶 端 内 部 分 生 组 织 （ 处 组 织 具 有 较 强 用 露 此 分 生能 力 ， 理 想 的 实 验 材 料 ） 之 后 用 解 剖 刀 在 菇 体 顶 端 竖 切 成 井 字 型 ， 后 横 切 ， 每 块 组 织 长 、 是 ． 然 使 宽 约 ０ ５ｅ 左 右 ， ０． ～０ ２ ｃ 片 状 ， 特 制 接 种 针 接 种 在 事 先 准 备 好 的 斜 面 培 养 基 中 部 ， 管 一 ． ｍ 厚 １ ． ｍ 用 每 片 ， 上棉塞 于 ２ 塞 ５℃ 恒 温 恒 湿培 养 箱 中 培 养 ．
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２ ０ 年 ８月 ０２
第 ３期
松 辽 学 刊 （自然 科 学 版 ）
Ｓ ｎ ｌａ ｏ ｒ ａ Ｎａ ｕ ａ ｃｅ ｃ ｉｉｎ） ｏ ｇ ｉｏＪ ｕ ｎ ｌ（ ｔ ｒ ｌ ｉｎ ｅＥｄ ｔ Ｓ ｏ
Ｎ ３ ｏ，
Ａｕ ｇ，
组 织 培 养 法 制 取 鸡 腿 菇 母 种 的 实 验 研 究
牧 藕 日期 ： ０ ２—０ ２０ ５—１ ５
作 者简介 ： 孙
颖 （９ １一）女 ． 林 省 通 化 市 人 ，９ ０年 毕 业 于 东 北 师 范 大 学 生 物 系 ， 为 吉 林 师 范 大 学 生 物 系 实 验 师 ． １６ ， 吉 １９ 现
如何用组织分离法制备灵芝母种
母种
2023-11-05
contents •组织分离法介绍•准备工具和材料•具体操作步骤•注意事项
•总结
目录
01
组织分离法介绍
•组织分离法是一种常用的微生物分离方法，它通过从灵芝子
实体或菌褶中切取一小块组织，然后将其接种到选择性培养基上，以获得纯培养的灵芝母种。
组织分离法的定义
•组织分离法适用于从自然界中分离和纯化各种微生物，包括细菌、真菌、病毒等。它是一种非常实用的方法，尤其适用于从子实体或菌褶中获得纯培养的真菌，如灵芝等。
组织分离法的应用范围
组织分离法的优缺点
优点
1. 操作简单易行，不需要复杂的设备和仪器。
2. 可以获得纯培养的微生物，避免了其他杂菌的污染。
•对于一些难以通过其他方法分离的微生物，组织分离法是一种有效的手段。
组织分离法的优缺点
组织分离法的优缺点
缺点
1. 有些微生物在组织分离过程中可能会受到
损伤，影响其生长和繁殖。
2. 有些微生物在组织分离过程中可能需要特
定的培养条件才能生长，否则会影响其分离
效果。
3. 组织分离法获得的母种可能存在一定的遗
传差异，需要经过进一步的筛选和鉴定才能
获得理想的菌株。
02
准备工具和材料
酒精灯
电子天平
用于消毒器械，需准备镊子、解剖
刀、接种针等。用于称量药品和材料。培养皿恒温箱用于接种和培养灵芝组织块。用于控制培养温度和湿度。三角瓶超净工作台用于培养灵芝菌丝体。
提供无菌环境，用于接种和培养操作。工具准备
选择健康、无病虫害的灵芝作为分离材料。
材料准备
新鲜灵芝
用于诱导灵芝组织块萌发菌丝体。
PDA培养基
提供营养，促进菌丝体生长。
葡萄糖
提供营养，促进灵芝生长。
平菇的组织分离及培养
平菇的组织分离和培养
一、实验目的
1、了解食用菌的基础知识。
2、了解、掌握食用菌培养基的配置原理。
3、通过平菇栽培实验，掌握食用菌代料栽培的一般方法。
二、实验原理
（食用菌的组织分离法）
食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。
三、实验材料
1、原种制作实验材料
（1）食用菌：平菇。
（2）培养基：PDA培养基斜面。
（3）仪器或其他用具： 75%酒精棉球、接种针记号笔等。 2、食用菌的组织离
2、食用菌的组织分离
（1）试剂：棉籽壳、麸皮、蔗糖、CaCO3
（2）仪器或其他用具：平菇菌种、香菇菌种、金针菇菌种、姬菇菌种、茶树菌种、台秤、盆子、聚丙烯塑料袋、颈圈、封口膜、橡皮筋、高压蒸气灭菌锅、pH试纸（pH 5.5—9.0）、记号笔、麻绳等
四、实验步骤
平菇组织分离的方法和步骤
一、种菇选择：一般选择在适宜出菇期出菇早、出菇整齐、特征典型、无病虫害、产量高的栽培袋，从中选择菌肉肥厚、大小适中、颜色正常、尚未散孢、长至七八分成熟的优质菇作种菇
二、种菇消毒：用0.1%升汞溶液或75%酒精浸泡或擦拭，无菌水冲洗，吸干表面的水分。
三、切块接种：将分离种菇沿菌柄中心纵向掰成两半，用解剖刀在菌盖和菌柄交界处划成田字形，取黄豆粒大一小块菌肉组织，接在PDA培养基上。
四、培养纯化：温度控制在22℃~25℃之间，培养1~2天，长出白色绒毛状菌丝体，4~5天通过筛选，挑出菌丝洁白、清晰、生长整齐、健壮的试管母种继续培养，将有杂菌、长势纤弱的淘汰。7~10天菌丝长满斜面。
食用菌一级菌种的制作
二、母种的制作流程
培养基配制 培养基灭菌 菌种分离
菌种培养
转管纯化培养
一级种
三、母种培养基制作与灭菌
1、母种培养基配方：
应根据不同食用菌的不同营养需要配制不同的培养基。 常用的配方有： 配方1：土豆葡萄糖琼脂培养基：土豆(即马铃薯)200g、葡 萄糖20g、琼脂(凝固剂)20g。 配方2：土豆蔗糖琼脂培养基：土豆200g、琼脂20g、水 1000ml、蔗糖20g； 配方3：土豆胡萝卜琼脂培养基：土豆20g、胡萝卜25g、琼 脂20g、水1000ml。
6、菌种质量检查：
通过培养，在试管斜面上长出洁白、粗壮的菌丝体，说明接 种成功。若在试管斜面上出现有光泽、粘液状培养物或呈黄、 绿、灰、黑等毛状物时，即是污染，不能使用。优良菌种的 感观应具备“纯、正、壮、润、香”的特点。而菌种生产性 能(产量高低、品质优劣、抗逆性强弱)的考核，通常只有根 据栽培试验的结果才能得出结论。
目的
方法
注意
六、母种的保存：
方法有三种：
融化琼脂
Fra Baidu bibliotek
调节PH值
根据不同的菌种需要，用1mol／L NaOH 溶液 或盐酸调节好PH值
培养基配好后应趁热用分装漏斗进行分装试管， 装入试管高度的1/5～1/4，分装时应注意不
分装试管
得使培养基粘在试管的口壁上，以防污染杂菌。