D-19 常用溶剂的纯化处理

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核酸纯化方大全

核酸纯化方大全一：酚氯仿抽提—经典的纯化技术酚氯仿抽提可算得上是核酸分离纯化技术中最经典的方法之一，该方法是由冷泉港实验室中的研究人员首先提取的，并被大量的科研究工作者进行改良使用。

其原理是：在酚氯仿的共同作用下，蛋白质会被变性，形成不溶解的物质。

由于蛋白质的密度小于酚而大于水，所以离心后，会在酚相和水相于之间，形成蛋白质中间层，从而有效地将蛋白质和核酸分离开来。

由于DNA的抽提方式有很多，这个技术并没有被试剂公司接受。

但是另一方面，使用酸性酚氯仿抽提RNA的纯化方式却被广泛接受（因为有效的RNA纯化方式并不多），其纯化原理为：在酸性酚的条件下，DNA溶解于有机相，RNA溶解于水相，而蛋白质则在中间相；从而有效地将DNA，RNA和蛋白质一起分开。

该技术的创始人是Chomczynski。

RNA-Solv Reagent （Omega Bio Tek）就是这一技术的改良产品。

这一技术的最大优点就是经济，灵活。

二：盐析法—经济型核酸抽提技术该技术原理是在组织或细胞裂解液中，加入高浓度盐（NaCl或NH4Cl，KI，KAC）来沉淀去除蛋白质，从而得到高纯度的基因组DNA。

Omega公司在这一方面有着非常卓越的产品。

基于这一技术的产品，其名称都有’SQ’。

该系列的产品最大的优点就是：经济和灵活，是目前提取基因组DNA最经济的试剂盒。

此外，Omega在首次研发了基于这一技术的DNA，RNA和蛋白质共提取的试剂盒，这一个目前最方面最快速的DNA，RNA和蛋白质共提取的试剂盒。

三：玻璃珠—第一个固液相核酸纯化技术在高离液盐（盐酸胍，异硫氰酸胍，NaI）条件下，玻璃珠会同核酸发生吸附反应，而在低盐条件下，核酸又可以被洗脱下来。

但是玻璃珠的残留以及干燥问题影响了这一技术的运用。

至目前为止，大部分的公司已经去除这个纯化技术。

早期的Omega也有许多基于这个技术的试剂盒，但是今天Omega公司只在凝胶回收中保留了这个试剂盒（Ultra-Sep Gel Extraction Kit）。

生物制药设备之萃取及设备—溶剂萃取及设备

萃取分率
萃取过程完成后，组分在萃余液中的数量与原料液中总数量的比值.
c2VF 1
c2VF c1VS K 1
组分的回收率
1 K
K m
在多次萃取过程中，每一次萃取都服从分配定律，且每次萃取过程的分配系数都相同。
K K1 K 2 K n
所以，随着萃取次数的增加，残留在原料体系中的组分越来越少，但无论进行多少次萃取，都不可能将组分从原料体系中彻底萃取出来。
在双水相萃取中，PEG的回收采用盐溶蛋白质和离子交换法，无机盐的回收采用结晶沉淀法进行。
溶剂萃取分离法
一、萃取基本知识 1.萃取过程
萃取：两互不相溶的溶剂构成的非均相体系中，组分从一相转移到另一相的过程。
萃取剂：转移组分的溶剂。萃取液：萃取剂萃取组分后所得溶液。萃余液：被萃取剂萃取后的溶液。
2.萃取原理萃取推动力：遵守相似相溶原理，组分在两溶剂中溶解度之差即为推动力，推动力越大萃取大越容易进行。
二、分配定律在其他条件不变的情况下，萃取过程达到平衡后，萃
取液中溶质浓度与萃余液中溶质浓度的比值是常数，这个规律叫分配定律。
萃取相组分浓度 K 萃余相c1VS c2VF
在错流萃取中，随着萃取的级数增加，萃取液中组分总数量增多，溶剂体积逐级增大，萃取液中组分浓度逐级降低。溶媒消耗量大，后续蒸发浓缩量大，但萃取较完全。
三、多级逆流萃取
在多级逆流萃取中，在第一级加入原料液，在第三级加入新鲜萃取剂。在第三级萃取后所得萃取液作为萃取剂进入第二级，第一级的萃余液作为原料液进入第二级，两股流体混合萃取后，所得萃余液作为原料液进入第三级。而萃取液作为萃取剂进入第一级，在第一级对原料液萃取后，所得萃取液被送入贮罐贮存备用。

常用有机试剂的纯化

常用有机溶剂的纯化有机化学实验离不开溶剂，溶剂不仅作为反应介质使用，而且在产物的纯化和后处理中也经常使用。

市售的有机溶剂有工业纯、化学纯和分析纯等各种规格，纯度愈高，价格愈贵。

在有机合成中，常常根据反应的特点和要求，选用适当规格的溶剂，以便使反应能够顺利地进行而又符合勤俭节约的原则。

某些有机反应（如Grignard 反应等），对溶剂要求较高，即使微量杂质或水分的存在，也会对反应速率、产率和纯度带来一定的影响。

由于有机合成中使用溶剂的量都比较大，若仅依靠购买市售纯品，不仅价值较高，有时也不一定能满足反应的要求。

因此了解有机溶剂性质及纯化方法，是十分重要的。

有机溶剂的纯化，是有机合成工作的一项基本操作，这里介绍了市售的普通溶剂在实验室条件下常用的纯化方法。

1．无水乙醚( absolute ether )bp 34.5℃， 1.3526， 0.7137820D n 204d 普通乙醚中含有一定量的水、乙醇及少量过氧化物等杂质，这对于要求以无水乙醚作溶剂的反应（如Grignard 反应），不仅影响反应的进行，且易发生危险。

试剂级的无水乙醚，往往也不合要求，且价格较贵，因此在实验中常需自行制备。

制备无水乙醚时首先要检验有无过氧化物。

为此取少量乙醚与等体积的2%碘化钾溶液，加人几滴稀盐酸一起振摇，若能使淀粉溶液呈紫色或蓝色，即证明有过氧化物存在。

除去过氧化物可在分液漏斗中加人普通乙醚和相当于乙醚体积1/5的新配制硫酸亚铁溶液(1)，剧烈振摇后分去水溶液。

然后除去过氧化物，按照下述操作进行精制。

[步骤]在250 mL 圆底烧瓶中，放置100 mL 除去过氧化物的普通乙醚和几粒沸石，装上冷凝管。

冷凝管上端通过一带有侧槽的橡皮塞，插人盛有10 mL 浓硫酸(2)的滴液漏斗。

通人冷凝水，将浓硫酸慢慢滴人乙醚中，由于脱水作用所产生的热，乙醚会自行沸腾。

加完后摇动反应物。

待乙醚停止沸腾后，拆下冷凝管，改成蒸馏装置。

在收集乙醚的接受瓶支管上连一氯化钙干燥管，并用与干燥管连接的橡皮管把乙醚蒸气导人水槽。

化学试剂的纯化

时，也易于保持密封。装置安装完毕后，在开始蒸馏之前，必须对减压蒸馏装置进行密封检查。检查方法是通过系统的压力测量值的变化确认装置的密封，如果压力值没有变化，说明装置不漏气，然后才能进行减压蒸馏操作。
在减压蒸馏时，可在蒸馏烧瓶内插入毛细管，以防止暴沸现象的发生。毛细管的上端是密封的，下端是开口的。检查并确定蒸馏装置密闭不漏气后，将欲纯化的化学试剂加入烧瓶中，加入量为烧瓶容量的一半，然后将体系抽成减压状态，并开始加热。烧瓶浸入加热浴的深度，务必使瓶内被蒸馏物质的液面低于加热浴的液面。特别是在蒸馏高沸点物质时，烧瓶应当尽量浸深一些。减压蒸馏时，常常由于存在低沸点溶剂而产生泡沫，需要在开始蒸馏时在低真空度条件下将这些低沸点溶剂蒸馏除去，然后再徐徐提高真空度。真空度的高低取决于装置内液体样品的蒸汽压。馏出之前的冷却效果必须良好，否则难以提高系统的真空度。
分馏柱的分馏能力和效率，分别用"理论塔板值"和"理论塔板等效高度（HETP）"来表示。一个理论塔板值相当于一次简单的蒸馏。具有同样分馏能力的分馏柱，其长度不一定相等。例如：甲、乙两个分馏柱，它们的理论塔板值都是 20，甲的高度为 60 厘米，乙的高度为 20 厘米。显然，两者的理论塔板等效高度是不同的。因为理论塔板等效高度为：
发生了堵塞，此时应当立刻打开弹簧夹 G，然后再移去热源。待排除了堵塞后再继续进行水蒸汽蒸馏。三．精馏
精馏是用分馏柱进行的分馏，在精馏过程中，被精馏的化学试剂在蒸馏瓶中沸腾后，蒸汽从园底烧瓶蒸发进入分馏柱，在分馏柱中部分冷凝成液体。此液体中由于低沸点成分的含量较多，因此其沸点也就比蒸馏瓶中的液体温度低。当蒸馏瓶中的另一部分蒸汽上升至分馏柱中时，便和这些已经冷凝的液体进行热交换，使它重新沸腾，而上升的蒸汽本身则部分地被冷凝，因此，又产生了一次新的液体-蒸汽平衡,结果在蒸汽中的低沸点成分又有所增加。这一新的蒸汽在分馏柱内上升时,又被冷凝成液体,然后再与另一部分上升的蒸汽进行热交换而沸腾。由于上升的蒸汽不断地在分馏柱内冷凝和蒸发，而每一次的冷凝和蒸发都使蒸汽中低沸点的成分不断提高。因此，蒸汽在分馏柱内的上升过程中，类似于经过反复多次的简单蒸馏，使蒸汽中低沸点的成分逐步提高。由此可见，在分馏过程中分馏柱是关键的装置，如果选择适当的分馏柱就可以在分馏柱的顶部出来的蒸汽经冷凝后所得到的液体可能是纯的低沸点成分或者是低沸点占主要成分的流出物。图－3 给出了一种精馏装置的示意图。

核酸的纯化

核酸的纯化核酸的纯化在分子克隆的所有操作中，最基本的操作也许要算核酸的纯化了。

其关键步骤是去除蛋白质，通常只要用酚：氯仿抽提核酸的水溶液即可。

每当在进行下一步操作之前需要把这一步克隆操作所用的酶灭活并去除时，都可采用这种抽提的方法。

然而如果要从各种复杂分子的混合物如细胞裂解液中纯化核酸，则需一些附加办法。

在这些情况下，通常是在有机溶剂抽提之前先用某些蛋白水解酶去掉大部分蛋白质，这些广谱的蛋白水解酶包括链霉蛋白酶及蛋白酶K .用酚：氯仿抽提从核酸溶液中去除蛋白质的标准方法是先用酚：氯仿(可含有0.1%的8-羟基喹啉)抽提后再用氯仿抽提。

这个方法的好处是使用两种不同有机溶剂去除蛋白质比用单一有机溶剂效果更佳。

此外，酚虽能有效地使蛋白质变性，却不能完全抑制RNA酶的活性，酚还能溶解带有长poly(A)的RNA分子(Brawerman et al.1972)。

用酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)混合液抽提能够使这两个问题同时得以解决。

随后用氯仿抽提则可去除残留在核酸制品中痕量的酚。

通过乙醚抽提去除酚已广泛沿用多年，看来在目前的常规操作中已不必要或者不推荐使用。

(1)将样品转移到一只聚丙烯离心管中，加入等体积的酚：氯仿。

如果酚未被充分平衡至pH值为7.8-8.0，核酸将趋于分配到有机相。

(2)混合管中的内容物使之成为乳浊液。

(3)室温下用离心管可承受最大转速的80%的速度离心1min，若有机相与和水相不能充分分开，延长时间重新离心。

一般情况下水相处于上层，然而当水相中盐浓度(>0.5mol/L)或蔗糖浓度(>10%)过高而密度较大时，水相可能会在下层。

由于在平衡酚时加了8-羟基喹啉(见附录1)，其黄颜色可使有机相易于辨别。

(4)用移液管把水相转移到另一离心管中，体积较小(<200ul)时可用带一次性吸头的自动移液器操作。

弃去两相间的界面层和有机相。

为了获得最高的收率，可按下法对有机相和介面层进行“回提”：按上述方法第一次移出水相后，在剩余的有机相和介面层中加入等体积TE(PH7.8)，充分混匀，按第3步离心分离两相，合并两次得到的水相，继续按第5步操作。

化学试剂的纯化

图－3 水蒸气蒸馏装置在水蒸汽发生器与长颈园底烧瓶之间应装上一个 T 形管，在 T 形管下端连一个弹簧夹 G，以便及时除去冷凝下来堵塞水滴。进行水蒸汽蒸馏时，先将样品溶液置于 D 中。加热水蒸汽发生器直至接近沸腾后才将 G 加紧，使水蒸汽均匀地进入园底烧瓶。为了使蒸汽不致在 D 中冷凝而积聚过多，必要时可在 D 下置一石棉网，使用小火加热。必须控制加热速度使蒸汽能够全部在冷凝管中冷凝下来。如果随水蒸汽挥发的物质具有较高的熔点，在冷凝后易于析出固体，应当调小冷凝水的流速，使它冷凝后仍保持液态。假如已有固体析出，并且接近堵塞时，可暂时停止冷却水的流通，甚至需要将冷却水暂时放去，以使物质熔融后随水流入接受器中。必须注意，当冷凝管夹套中要重新通入冷却水时，需要小心并且缓慢地流进，以免冷凝管因骤冷而破裂。万一冷凝管已经被堵塞，应立即停止蒸馏，并且设法疏通。诸如使用玻棒将堵塞的物质捅出来或在冷凝管夹套中罐以热水使之熔出。在蒸馏需要中断或者蒸馏完毕时，一定要先打开弹簧夹 G 使通大气，然后停止加热，否则 D 中的液体将会倒吸到 A 中。在蒸馏过程中，如果发现安全管 C 中的水位迅速升高，则表示系统中
(2) 蒸馏高沸点物质时，由于易被冷凝，往往蒸汽未到达蒸馏烧瓶的侧管处即已经被冷凝而滴回蒸馏瓶中。因此，应选用短颈蒸馏瓶或者采取保温措施，保证蒸馏顺利进行。
(3) 蒸馏之前，必须了解被蒸馏的化学试剂及其杂质的沸点和饱和蒸汽压，以决定何时（即在什么温度时）收集纯化学试剂。
(4) 蒸馏烧瓶应当采用园底烧瓶。沸点在 40－150℃的化学试剂可采用常压的简单蒸馏。对于沸点在 150℃以上的化学试剂，或沸点虽在 150℃以下，但热不稳定、易热分解的化学试剂，可以采用减压蒸馏和水蒸汽蒸馏，下面分别加以简单介绍。

纯化操作规程

纯化操作规程1 纯化内容及目的纯化前，详细咨询合成人员，并记录下列内容：1.1 样品名称纯化命名时严格承接合成名称。

详见《技术部产品批号编制》。

1.2 样品重量此处指经裂解后直接上机前样品重量。

无论对于已抽干样品（多呈粉末状，与实际重量相近）或某些尚未抽干或者未进行抽干处理的样品（多呈粘稠溶液状或胶状，其重量与实际重量相差可能较远），都需详细记录。

1.3 预计目的肽含量指样品中含有目的肽的大致mg数，由合成人员提供。

1.4 要求的目的肽数量及纯度即产品指标，如不同纯度（如仅脱盐、或80%、90%、95%等）以及相应的mg数。

1.5 后处理方法样品在合成过程中，后处理方法的不同，可能对纯化方法与结果判断有一定影响。

此时应详细咨询合成人员并记录。

2 样品溶解性能的预备实验鉴于肽类样品的等电点（pI）、溶解性能将直接影响到纯化工作。

为谨慎起见，在处理新样品前，必须对其溶解性能进行预备实验。

2.1 理化性质分析首先利用蛋白分析软件对目的肽的理化性质进行序列分析，主要包括：分子量、pI、疏水性与亲水性、最大吸收峰等，并记录。

2.2 粗肽成分分析合成时的不同处理方法对于样品所含组分也有很大影响，应详细咨询合成人员该样品合成与裂解过程中是否有特殊处理、合成过程中对该样品的性质有何体会等。

2.3 实验程序理化性质对于样品纯化仅具有部分指导意义，对于粗肽而言，其许多性质在盐溶液中都会发生变化，一切均以实际验证为准。

2.3.1 取少量样品（10mg左右）加入到洁净试管；2.3.2 加入2ml过滤无热源水，置于旋涡混合器快速混合2~3min，观察是否完全溶解。

如溶解，则视为易溶样品（>5mg/ml），可进行大量溶解。

否则进行下一步。

2.3.3 以pH试纸粗略测定样品溶液pH值（多显酸性），结合pI值，以0.1M NaOH或0.1M HCl逐滴加入，并不断混合或搅拌，直至样品溶解，此时测定溶液pH值（需控制在pH2~10之间为宜，视不同类型柱子而定）。

常用有机溶剂的纯化

将干燥好的丙酮倾入250mL圆底烧瓶中，加入沸石，安装蒸馏装置(全部仪器均须干燥!)。水浴加热蒸馏，收集55．0～56．5℃馏分。
4．乙酸乙酯
市售的乙酸乙酯常含有微量水、乙醇和乙酸。可先用等体积的5％碳酸钠溶液洗涤，再用饱和氯化钙溶液洗涤，酯层倒入干燥的锥形瓶中，加入适量无水碳酸钾干燥1h后，蒸馏，收集77．0。77．5℃馏分。
向盛有乙醚的锥形瓶中加入1g钠丝，然后用带有氯化钙干燥管的塞子塞上，以防止潮气侵入并可使产生的气体逸出。放置24h，使乙醚中残存的痕量水和乙醇转化为氢氧化钠和乙醇钠。如发现金属钠表面已全部发生作用，则需补加少量钠丝，放置至无气泡产生，金属钠表面完好，即可满足使用要求。
2．绝对乙醇
市售的无水乙醇一般只能达到99．5％的纯度，而许多反应中需要使用纯度更高的绝对乙醇，可按下法制取。
5．石油醚
石油醚是低级烷烃的混合物。根据沸程范围不同可分为30～60℃、60～90℃和90～120℃等不同规格。
石油醚中常含有少量沸点与烷烃相近的不饱和烃，难以用蒸馏法进行分离，此时可用浓硫酸和高锰酸钾将其除去。方法如下。
在150mL分液漏斗中，加入100mL石油醚，用10mL浓硫酸分两次洗涤，再用10％硫酸与高锰酸钾配制的饱和溶液洗涤，直至水层中紫色不再消失为止。用蒸馏水洗涤两次后，将石油醚倒入干燥的锥形瓶中，加入无水氯化钙干燥lh。蒸馏，收集需要规格的馏分。
1．无水乙醚
市售乙醚中常含有微量水、乙醇和其他杂质，不能满足无水实验的要求。可用下述方法进行处理，制得无水乙醚。
在250mL干燥的圆底烧瓶中，加入100mL乙醚和几粒沸石，装上回流冷凝管。将盛有10mL浓硫酸的滴液漏斗通过带有侧口的橡胶塞安装在冷凝管上端接通冷凝水后，将浓硫酸缓慢滴入乙醚中，由于吸水作用产生热，乙醚会自行沸腾。

链霉素纯化实验报告

实验名称：链霉素纯化实验实验日期：2023年X月X日实验地点：实验室实验目的：1. 学习和掌握链霉素的提取和纯化方法。

2. 了解不同纯化步骤对链霉素纯度的影响。

3. 优化实验条件，提高链霉素的纯度和回收率。

实验材料：1. 链霉素发酵液2. 乙酸乙酯3. 无水乙醇4. 氯化钠5. 硅胶6. 重结晶溶剂（如甲醇、丙酮等）7. 分析纯试剂8. 实验器材：离心机、旋转蒸发仪、玻璃棒、漏斗、滤纸、烧杯、锥形瓶等实验方法：1. 预处理将发酵液在室温下静置，使沉淀物沉淀，取上清液备用。

2. 初步纯化将上清液用乙酸乙酯萃取，静置分层后，取下层有机相，使用旋转蒸发仪去除溶剂，得到初步纯化的链霉素。

3. 柱层析将初步纯化的链霉素用甲醇溶解，过硅胶柱，收集洗脱液。

调节洗脱液pH至6.0-7.0，以氯化钠溶液作为洗脱剂，收集目标组分。

4. 精制将收集到的目标组分用无水乙醇进行重结晶，得到精制的链霉素。

5. 分析对纯化的链霉素进行HPLC分析，测定其纯度和含量。

实验结果：1. 初步纯化通过乙酸乙酯萃取，初步纯化的链霉素纯度约为60%。

2. 柱层析经过硅胶柱层析，链霉素纯度提高至90%。

3. 精制通过重结晶，链霉素纯度达到98%以上。

4. HPLC分析HPLC分析结果显示，纯化后的链霉素纯度为98.5%，含量为1.5mg/mL。

实验讨论：1. 在初步纯化过程中，乙酸乙酯萃取效果较好，可以有效地去除发酵液中的杂质，提高链霉素的纯度。

2. 柱层析是纯化过程中的关键步骤，通过调节洗脱剂pH和氯化钠浓度，可以进一步分离和纯化链霉素。

3. 重结晶是提高链霉素纯度的有效方法，通过选择合适的溶剂和结晶条件，可以使链霉素结晶析出，从而提高其纯度。

4. 在实验过程中，应注意操作规范，避免污染和损失，以保证实验结果的准确性。

实验结论：本实验成功地从发酵液中提取和纯化了链霉素，通过乙酸乙酯萃取、柱层析和重结晶等步骤，将链霉素纯度从60%提高到98.5%，为后续研究提供了高质量的实验材料。

卟啉类药物的纯化方法

卟啉类药物的纯化方法
纯化卟啉类药物的方法有很多种，以下提供两种：
方法一：
1. 先进行减压蒸馏，以去除大部分的DMF。

2. 冷却后，将产物倾入大量的冷水中，使铁卟啉结晶析出。

3. 加入浓盐酸进行酸化。

4. 进行抽滤，并用去离子水充分洗涤晶体。

5. 干燥后，使用二氯甲烷和无水乙醇的混合溶剂对晶体进行重结晶。

6. 最后，通过减压升华进行纯化，即可得到铁卟啉。

方法二：使用快速柱色谱法进行分离。

其特点在于使用较大量的细粒硅胶目）来充填玻璃柱，并在分离时在柱子的顶部用氮气加压，使溶剂能保持一定的速度从柱子流出。

不同类型的金属卟啉按它们的极性大小可被分离在不同的馏分中。

以上方法仅供参考，实际操作中应根据实际情况选择合适的方法，并遵循科学、安全的原则。

常用有机溶剂的纯化方法

常用有机溶剂的纯化方法1.萃取：是将溶剂与原料混合，通过不同化学物质溶解度的差异来分离目标物质。

常用的纯化方法包括液-液萃取和固-液萃取。

液-液萃取一般使用反应釜或分液漏斗，在合适的温度下通过摇动、搅拌或震荡使溶质从一个液相转移到另一个液相中。

固-液萃取一般使用浸提法，将原料与溶剂浸泡一段时间，通过溶质在溶液中的溶解度不同来实现纯化。

2.蒸馏：是一种根据不同物质沸点差异将混合物分离的方法。

常用的蒸馏方法有常压蒸馏、真空蒸馏、气相色谱等。

常压蒸馏适用于沸点差异较大的混合物，真空蒸馏适用于沸点接近或相近的混合物。

气相色谱是一种高效的分离方法，可用于对含有复杂物质的混合物进行分离。

3.结晶：是溶质在溶剂中由于溶解度的变化而形成的均质固体颗粒。

常用的结晶方法包括溶剂结晶法和沉淀结晶法。

溶剂结晶法是通过逐渐加热稀溶液使溶剂挥发，溶质逐渐结晶。

沉淀结晶法是通过向溶液中加入适量沉淀剂使溶质从溶液中析出结晶。

4.过滤：是将混合物中的固体颗粒从溶液中分离出来的方法。

常见的过滤方法有重力过滤、压滤和吸滤。

重力过滤适用于大颗粒的过滤，压滤适用于大颗粒或胶状物质的过滤，吸滤适用于微小颗粒的过滤。

5.干燥：是将溶剂中的水分或其他杂质挥发掉，使有机溶剂达到纯净的过程。

常用的干燥方法包括无水盐吸湿法、真空干燥法和减压蒸馏法等。

无水盐吸湿法是将含水溶剂与无水盐混合，使盐吸附水分，从而达到干燥的目的。

真空干燥法是通过在低压下加热溶剂，使其挥发掉水分或其他杂质。

减压蒸馏法类似于真空干燥法，通过蒸馏的方式将有机溶剂中的杂质挥发掉。

总的来说，萃取、蒸馏、结晶、过滤和干燥是常用的有机溶剂纯化方法。

不同的纯化方法应根据具体的溶剂和纯化要求进行选择和操作。

常用试剂制备纯化

常用试剂的性质与制备纯化有机化学实验经常用到大量的试剂，包括无机试剂和有机试剂，市售的试剂有分析纯（A.R）、化学纯（C.P）、工业级（T.P）等级别，其中分析纯的纯度较高，工业级则带有较多的杂质。

在某些有机反应中，对试剂或溶剂的要求较高，即使微量的杂质或水分的存在，也会对反应的速率、产率和产品纯度带来一定的影响，因此掌握一些必要的试剂的纯化方法是十分必要的。

在实际工作中还会经常遇到无法买到某种试剂或买不到高纯度试剂的情况，影响实验工作正常进行，因此，了解一些常用试剂的制备方法也是十分必要的。

在这部分中给出了常用有机和无机试剂的制备与纯化方法，希望能给实验工作带来一些方便。

1．氨气商品的氨气一般用钢瓶盛装，使用时通过减压装置可以得到气态的氨。

气体的流速可由计泡计来控制，其中计泡计中含有少量浓氢氧化钾溶液（12 g 氢氧化钾溶于12 mL水）。

在计泡计和反应器之间应加一安全瓶。

通过装有疏松的碱石灰或块状氧化钙的干燥塔干燥。

如果需要少量的氨可以用如下方法制备：在上端装有回流冷凝管的圆底烧瓶中加入浓氨水，缓慢加热，气体通过装有疏松的碱石灰或块状氧化钙的干燥塔干燥，然后通过安全瓶引入反应瓶。

2．氨基钠市售颗粒状氨基钠纯度为80～90%，氨基钠不容易研碎，通常在装有烃类惰性溶剂（如甲苯、二甲苯等）的研钵中研磨。

氨基钠在常温下暴露在空气中2～3天会产生危险的混合物。

为了安全，打开的氨基钠应该立即使用，容器敞口放置不应超过12小时。

当氨基钠形成氧化物时（颜色变为黄色或棕色）爆炸性很强，不能再使用。

将少量没有用完的氨基钠加入甲苯使其完全覆盖，搅拌下缓慢加入用甲苯稀释过的乙醇，可将其分解掉。

实验室由钠和液氨在三价铁离子催化下制备氨基钠：向500 mL的三颈瓶中加入300 mL无水液氨。

三颈瓶上装有玻璃塞、密封的搅拌棒和装有碱石灰干燥管的回流冷凝管。

搅拌下，向溶液中加入0.5 g钠，溶液显蓝色。

然后加入0.5 g硝酸铁粉末催化剂，30分钟内加入13.3 g切成小块的钠。

常见有机溶剂的纯化方法总结

在实验室里是不是常碰到这种情况：做某个实验，用不同品牌甚至同一品牌不同批次的试剂，能做出完全不同的结果，不同结果的唯一共同点就是奇幻到都能得诺奖……然后买了纯度更高的试剂回来做，结果就是正常的了……化学供应商提供的常用试剂仅可满足一般化学反应的需要。

为了确保一些有机合成反应的顺利进行，常常要对试剂进行进一步的纯化处理。

常用的溶剂处理方法是蒸馏。

如果反应要求仅仅是无水，可在冷凝管上加干燥管，油封或充氮气球即可，如果需要达到无水无氧的条件，溶剂则需要脱氧处理。

一般在氮气氛下进行。

试剂级溶剂的纯化无水的试剂级溶剂常有足够的纯度，有时可以不用蒸馏。

为保证充分的干燥度，可在储藏时向其加入活性分子筛。

欲使溶剂脱氧，可利用注射器或玻璃管向其中鼓入氮气约五分钟。

一般溶剂的纯化大多数溶剂，只要在惰性气氛中将其从干燥剂中蒸馏出来，就可以达到足够的纯度。

1、烷烃如己烷、戊烷等。

首先用浓硫酸洗涤几次以除去烯烃，水洗，CaCl2干燥，必要时用钠丝或P2O5干燥，蒸馏。

存放于带塞的试剂瓶中。

2、芳香烃类如：苯、甲苯、二甲苯等。

CaCl2干燥，必要时用钠丝或P2O5干燥，蒸馏。

存放于带塞的试剂瓶中。

3、氯代烷烃类如：二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷等。

水洗除去醇等，CaCl2干燥，在P2O5，或CaH2中回流蒸出。

绝对不能用钠丝干燥，否则会发生爆炸。

长期储藏应放于密闭的瓶中，并保存于黑暗中。

4、醚类及呋喃类如：乙醚、四氢呋喃等。

许多醚类在和空气接触下会慢慢生成不易挥发且结构不明的过氧化物。

过氧化物在加热下容易分解而爆炸。

因此贮藏过久的醚类和呋喃类化合物在使用前，尤其是在蒸馏前应当检验是否有过氧化物的存在。

检验的方法：用包含一滴淀粉指示剂的1 mL 10% KI 溶液和10 mL 醚液混合，没有颜色变化，则没有过氧化物。

或者用1%硫酸亚铁铵溶液，硫酸亚铁和硫氰化钾溶液测试。

若有，则加入5% FeSO4 或偏亚硫酸氢钠溶液于醚中并摇动，使过氧化物分解。

常用有机溶剂的纯化

常用有机溶剂的纯化2008-12-06 15:35分类：技术文件字号：大中小在有机化学实验中，经常使用各类溶剂作为反应介质或用来分离提纯粗产物。

由于反应的特点和物质的性质不同，对溶剂规格的要求也不相同。

有些反应(如格氏试剂的制备反应)对溶剂的要求较高，即使微量杂质或水分的存在，也会影响实验的正常进行。

这种情况下，就需对溶剂进行纯化处理，以满足实验的正常要求。

这里介绍几种实验室中常用的有机溶剂的纯化方法。

1．无水乙醚市售乙醚中常含有微量水、乙醇和其他杂质，不能满足无水实验的要求。

可用下述方法进行处理，制得无水乙醚。

在250mL干燥的圆底烧瓶中，加入100mL乙醚和几粒沸石，装上回流冷凝管。

将盛有10mL浓硫酸的滴液漏斗通过带有侧口的橡胶塞安装在冷凝管上端接通冷凝水后，将浓硫酸缓慢滴入乙醚中，由于吸水作用产生热，乙醚会自行沸腾。

当乙醚停止沸腾后，拆除回流冷凝管，补加沸石后，改成蒸馏装置，用干燥的锥形瓶作接收器。

在接液管的支管上安装一支盛有无水氯化钙的干燥管，干燥管的另一端连接橡胶管，将逸出的乙醚蒸气导入水槽中。

用事先准备好的热水浴加热蒸馏，收集34．5℃馏分70～80mL，停止蒸馏。

烧瓶内所剩残液倒入指定的回收瓶中(切不可向残液中加水!)。

向盛有乙醚的锥形瓶中加入1g钠丝，然后用带有氯化钙干燥管的塞子塞上，以防止潮气侵入并可使产生的气体逸出。

放置24h，使乙醚中残存的痕量水和乙醇转化为氢氧化钠和乙醇钠。

如发现金属钠表面已全部发生作用，则需补加少量钠丝，放置至无气泡产生，金属钠表面完好，即可满足使用要求。

2．绝对乙醇市售的无水乙醇一般只能达到99．5％的纯度，而许多反应中需要使用纯度更高的绝对乙醇，可按下法制取。

在250mL干燥的圆底烧瓶中，加入0．6g干燥纯净的镁丝和10mL99．5％的乙醇，安装回流冷凝管，冷凝管上口附加一支无水氯化钙干燥管。

在沸水浴上加热至微沸，移去热源，立刻加入几粒碘(注意此时不要振荡)，可见随即在碘粒附近发生反应，若反应较慢，可稍加热，若不见反应发生，可补加几粒碘。

常用有机溶剂纯化

常用有机溶剂的纯化二硫化碳沸点46.25℃，折光率1.631 9，相对密度1.2632。

二硫化碳为有毒化合物，能使血液神经组织中毒。

具有高度的挥发性和易燃性，因此，使用时应避免与其蒸气接触。

对二硫化碳纯度要求不高的实验，在二硫化碳中加入少量无水氯化钙干燥几小时，在水浴55℃~65℃下加热蒸馏、收集。

如需要制备较纯的二硫化碳，在试剂级的二硫化碳中加入0.5%高锰酸钾水溶液洗涤三次。

除去硫化氢再用汞不断振荡以除去硫。

最后用2.5%硫酸汞溶液洗涤，除去所有的硫化氢（洗至没有恶臭为止），再经氯化钙干燥，蒸馏收集。

DMFN，N-二甲基甲酰胺沸点149~156℃，折光率1.430 5，相对密度0.948 7。

无色液体，与多数有机溶剂和水可任意混合，对有机和无机化合物的溶解性能较好。

N，N-二甲基甲酰胺含有少量水分。

常压蒸馏时有些分解，产生二甲胺和一氧化碳。

在有酸或碱存在时，分解加快。

所以加入固体氢氧化钾（钠）在室温放置数小时后，即有部分分解。

因此，最常用硫酸钙、硫酸镁、氧化钡、硅胶或分子筛干燥，然后减压蒸馏，收集76℃/4800Pa(36mmHg)的馏分。

其中如含水较多时，可加入其1/10体积的苯，在常压及80℃以下蒸去水和苯，然后再用无水硫酸镁或氧化钡干燥，最后进行减压蒸馏。

纯化后的N，N-二甲基甲酰胺要避光贮存。

N，N-二甲基甲酰胺中如有游离胺存在，可用2，4二硝基氟苯产生颜色来检查。

DMSO沸点189℃，熔点18.5℃,折光率1.4783，相对密度1.100。

二甲基亚砜能与水混合，可用分子筛长期放置加以干燥。

然后减压蒸馏，收集76℃/1600Pa(12mmHg)馏分。

蒸馏时，温度不可高于90℃，否则会发生歧化反应生成二甲砜和二甲硫醚。

也可用氧化钙、氢化钙、氧化钡或无水硫酸钡来干燥，然后减压蒸馏。

也可用部分结晶的方法纯化。

二甲基亚砜与某些物质混合时可能发生爆炸，例如氢化钠、高碘酸或高氯酸镁等应予注意。

乙醇沸点78.5℃，折光率1.361 6，相对密度0.789 3。

pUC19质粒DNA的提取、纯化及检测

山东大学实验报告 2013年 9 月19日至10月3日姓名系年级 2011级生物技术组别四科目分子实验学号同组者题目 pUC19质粒DNA的提取，纯化及检测一、【实验题目】pUC19质粒DNA的提取，纯化及检测二、【实验目的】1.掌握碱变性提取法提取质粒的基本原理和方法，理解各种试剂的作用。

2.掌握质粒纯化的基本原理及各种试剂的作用。

3.掌握琼脂糖凝胶电泳进行质粒检测分离的原理。

4.掌握琼脂糖凝胶电泳的制备和电泳方法。

5.掌握琼脂糖凝胶电泳的观察方法及凝胶成像仪的操作方法。

三、【实验试剂与器材】1.材料大肠杆菌DH5α（E.coli DH5α）2.试剂LB液体培养基，氨苄青霉素（ Amp）母液（20mg/ml），溶液Ⅰ，溶液Ⅱ，溶液Ⅲ，3M NaAc 溶液，无水乙醇，70%乙醇，TE溶液，Rnase A,苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），灭菌双蒸水ddH2O，1×TAE，6×loading buffer，Supercoiled DNA Ladder Marker，λ-Hind III digest DNA Marker，溴化乙锭（EB）3.仪器培养皿，接种环，三角瓶（100ml、300ml），酒精灯，恒温振荡培养箱，50ml离心管，1.5ml 塑料离心管（eppendorf管），高速离心机，漩涡振荡器，移液枪，不同型号枪头（10ul，200ul，1ml），电泳仪，微波炉，灭菌锅，吸水纸，记号笔，移液管，洗耳球，PE手套，橡胶手套，滴管，天平，称量纸，冰箱，凝胶成像仪等四、【实验原理】1.碱变性法提取质粒及酚、酚/氯仿、氯仿/异戊醇纯化质粒质粒由于分子小、能自主复制、携带抗性基因、便于分离和提取，经常用在DNA重组中，携带目的基因进入细菌、动物细胞或植物体内进行扩增与表达，是基因工程中一种非常重要的载体。

构建重组DNA分子需要首先从宿主细胞中提取高质量的质粒DNA。

提取和纯化质粒DNA的方法很多，目前常用的有：碱变性提取法、煮沸法、羟基磷灰石柱层析法、EB-氯化铯密度梯度离心法和Wizard法等。

常用溶剂纯化

常用有机溶剂的纯化有机化学实验离不开溶剂，溶剂不仅作为反应介质使用，而且在产物的纯化和后处理中也经常使用。

市售的有机溶剂有工业纯、化学纯和分析纯等各种规格，纯度愈高，价格愈贵。

在有机合成中，常常根据反应的特点和要求，选用适当规格的溶剂，以便使反应能够顺利地进行而又符合勤俭节约的原则。

某些有机反应（如Grignard 反应等），对溶剂要求较高，即使微量杂质或水分的存在，也会对反应速率、产率和纯度带来一定的影响。

由于有机合成中使用溶剂的量都比较大，若仅依靠购买市售纯品，不仅价值较高，有时也不一定能满足反应的要求。

因此了解有机溶剂性质及纯化方法，是十分重要的。

有机溶剂的纯化，是有机合成工作的一项基本操作，这里介绍了市售的普通溶剂在实验室条件下常用的纯化方法。

试剂级的无水乙醚，往往也不合要求，且价格较贵，因此在实验中常需自行制备。

制备无水乙醚时首先要检验有无过氧化物。

为此取少量乙醚与等体积的2%碘化钾溶液，加人几滴稀盐酸一起振摇，若能使淀粉溶液呈紫色或蓝色，即证明有过氧化物存在。

除去过氧化物可在分液漏斗中加人普通乙醚和相当于乙醚体积1/5的新配制硫酸亚铁溶液(1)，剧烈振摇后分去水溶液。

然后除去过氧化物，按照下述操作进行精制。

[步骤]在250 mL 圆底烧瓶中，放置100 mL 除去过氧化物的普通乙醚和几粒沸石，装上冷凝管。

冷凝管上端通过一带有侧槽的橡皮塞，插人盛有10 mL 浓硫酸(2)的滴液漏斗。

通人冷凝水，将浓硫酸慢慢滴人乙醚中，由于脱水作用所产生的热，乙醚会自行沸腾。

加完后摇动反应物。

待乙醚停止沸腾后，拆下冷凝管，改成蒸馏装置。

在收集乙醚的接受瓶支管上连一氯化钙干燥管，并用与干燥管连接的橡皮管把乙醚蒸气导人水槽。

常用有机溶剂的纯化方法

常用有机溶剂的纯化方法1. 甲醇(CH 3OH)工业甲醇含水量在0.5%~1%，含醛酮(以丙酮计)约0.1%。

由于甲醇和水不形成共沸混合物，因此可用高效精馏柱将少量水除去。

精制甲醇中含水0.1%和丙酮0.02%，一般已可应用。

若需含水量低于0.1%，可用3A 分子筛干燥，也可用镁处理(见绝对乙醇的制备)。

若要除去含有的羰基化合物，可在500mL 甲醇中加入25mL 糠醛和60mL10%NaOH 溶液，回流6~12小时，即可分馏出无丙酮的甲醇，丙酮与糠醛生成树脂状物留在瓶内。

. 64.95℃，n D 20 1.3288，d 420 0.7914。

甲醇为一级易燃液体，应贮存于阴凉通风处，注意防火。

甲醇可经皮肤进入人体，饮用或吸入蒸气会刺激视神经及视网膜，导致眼睛失明，直到死亡。

人的半致死量LD 50为/kg ，经口服甲醇的致死量LD 为1g/kg ，15mL 可致失明。

2. 乙醇(CH 3CH 2OH)工业乙醇含量为95.5%，含水4.4%，乙醇与水形成共沸物，不能用一般分馏法去水。

实验室常用生石灰为脱水剂，乙醇中的水与生石灰作用生成氢氧化钙可去除水分，蒸馏后可得含量约99.5%的无水乙醇。

如需绝对无水乙醇，可用金属钠或金属镁将无水乙醇进一步处理，得到纯度可超过99.95%的绝对乙醇。

(1)无水乙醇(含量99.5%)的制备在500ml 圆底烧瓶中，加入95%乙醇200mL 和生石灰50g, 放置过夜。

然后在水浴上回流3小时，再将乙醇蒸出，得含量约99.5%的无水乙醇。

另外可利用苯、水和乙醇形成低共沸混合物的性质，将苯加入乙醇中，进行分馏，在64.9℃时蒸出苯、水、乙醇的三元恒沸混合物，多余的苯在68.3℃与乙醇形成二元恒沸混合物被蒸出，最后蒸出乙醇。

工业多采用此法。

(2)绝对乙醇(含量99.95%)的制备①用金属镁制备在250mL 的圆底烧瓶中，放置干燥洁净的镁条和几小粒碘，加入10mL99.5%的乙醇，装上回流冷凝管。