分子生物学实验：安全与仪器使用
分子生物学实验室仪器使用说明书
分子生物学实验室仪器使用说明书一、引言分子生物学实验室仪器的使用是进行基因研究和分析的重要环节，正确的仪器操作和维护对于保证实验结果的准确性具有至关重要的作用。
本说明书旨在提供对分子生物学实验室仪器的正确使用方法和维护技巧的指导，以确保实验室工作的顺利进行。
二、常用仪器1. 基因扩增仪基因扩增仪是分子生物学实验室常用的仪器之一，其中最常见的是PCR仪。
以下是PCR仪的使用步骤：- 将待扩增的DNA模板、引物和试剂添加至PCR管或96孔板中；- 根据所需的扩增程序，在PCR仪面板上设置合适的温度和时间参数；- 启动PCR仪，开始扩增；- 扩增结束后，及时取出试管或孔板，并进行下一步实验操作。
2. 凝胶电泳仪凝胶电泳仪主要用于观察DNA、RNA或蛋白质的迁移情况以及分子大小的测定。
以下是凝胶电泳仪的使用步骤：- 准备所需的琼脂糖凝胶，并注入到电泳槽中；- 将待检测的样品混合液加入到电泳槽中的样品孔中；- 在电泳槽两侧连接正负极电源，并设置合适的电压和时间参数；- 启动电源，进行电泳；- 电泳结束后，取出凝胶，进行染色或进一步分析。
3. 离心机离心机用于分离混合物中的固体颗粒和液体，是分子生物学实验室必备的仪器之一。
以下是离心机的使用步骤：- 将待离心的样品均匀加入离心管中，并保持离心管的平衡；- 将离心管放入离心机转盘的相应位置，并注意转盘的平衡；- 根据离心速度和时间要求，设置合适的参数；- 启动离心机，开始离心过程；- 离心结束后，小心取出离心管，注意避免离心管的倾斜或颠倒。
三、常见问题及处理方法1. 仪器出现异常- 若仪器出现异常操作或显示异常，应首先检查是否按照正确的使用步骤进行操作；- 仔细阅读仪器说明书，查看是否存在使用特殊注意事项；- 若仍无法解决问题，及时联系仪器维修人员进行检修。
2. 仪器维护- 每次使用仪器后，应进行基本的清洁和消毒，保持仪器干净整洁；- 定期检查仪器是否正常，如电源是否接触良好，仪器表面是否有明显损坏等；- 根据仪器的要求，及时更换耗材和维护配件。
现代分子生物学常用实验仪器
实验一分子生物学实验室常用仪器及使用事实证明，在科学飞速发展的今天，无论从事哪个领域的研究，要想突破，除了有良好的理论基础外，更重要的是依赖于先进的技术和优良的仪器设备以及良好的研究环境。
一个标准的分子生物学实验室除了具有一般生物学实验室的常规仪器设备外，还具有一些特殊用途的仪器，这些仪器一般较精密，价格昂贵。
下面介绍这些仪器的使用方法和注意事项。
一、冷冻离心机低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。
基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术，因此低温冷冻离心机成为分子生物学研究中必备的重要仪器。
在国内，有多个厂家生产冷冻离心机，本实验室的高速冷冻离心机为GL-20G-Ⅱ型（上海安亭），落地式。
配有角式转头：6×50ml、12×10ml和12×1.5ml。
极限转速20000rpm。
1. 安装与调试离心机应放置在水平坚固的地面上，应至少距离10cm以上且具有良好的通风环境中，周围空气应呈中性，且无导电性灰尘、易燃气体和腐蚀性气体，环境温度应在0～30℃之间，相对湿度小于80%。
试转前应先打开盖门，用手盘动转轴，轻巧灵活，无异常现象方可上所用的转头。
转子准确到位后打开电源开关，然后用手按住门开关，再按运转键，转动后立即停止，并观察转轴的转向，若逆时针旋转即为正确，机器可投入使用。
2. 操作程序（1）插上电源，待机指示灯亮；打开电源开关，调速与定时系统的数码管显示的闪烁数字为机器工作转速的出厂设定，温控系统的数码管显示此时离心腔的温度。
（2）设定机器的工作参数，如工作温度，运转时间，工作转速等。
（3）将预先平衡好的样品放置于转头样品架上，关闭机盖。
按控制面板的运转键，离心机开始运转。
在预先设定的加速时间内，其运速升至预先设定的值。
（5）在预先设定的运转时间内（不包括减速时间），离心机开始减速，其转速在预先设定的减速时间内降至零。
分子生物学实验室内部质量控制制度
分子生物学实验室内部质量控制制度分子生物学实验室是一个进行生物分子研究与实验的场所，准确和可靠的实验结果对于研究的进展至关重要。
为了保证实验室内部的质量控制，制定和实施一套科学的质量管理制度是必要的。
以下是一个分子生物学实验室内部质量控制制度的框架，以确保实验结果的准确性和可重复性。
一、实验室设备和仪器的维护保养：1.实验室设备和仪器的选择应基于性能和质量，并由负责人和技术团队共同决策。
2.实验室设备和仪器的定期维护和校准应提前安排，确保其始终处于运行良好的状态。
3.实验室设备和仪器的使用前，需要进行验证和验证的记录，确保其准确性和可靠性。
二、试剂和材料的管理：1.负责人和技术团队在选择试剂和材料时应遵循严格的供应商选择标准，并确保试剂和材料的原始质量。
2.试剂和材料的储存应根据其特点和要求进行，并定期检查过期日期和质量。
三、实验室操作规程：1.实验室应制定并执行实验室操作规程，包括实验前的准备、实验的步骤和操作、实验后的数据整理和记录等。
2.严格遵守实验室操作规程，确保实验的可控性和规范性。
3.实验操作应遵循操作规程，并且实验记录应详细、准确地记录实验过程和结果。
四、实验数据管理：1.实验数据应详细记录，并由技术人员进行校对和复核。
2.实验数据的存储和管理应遵循数据保密和可追溯性的原则，确保实验数据的完整性和准确性。
五、实验结果的分析和解释：1.实验结果的统计分析和解释应由专业技术人员进行，确保结果的准确性和可靠性。
2.实验结果的正常范围和偏差应根据实验室内部验证和外部比对确定。
3.实验结果的报告应根据内部标准和要求完成，并由负责人进行审查和核实。
六、实验室的持续改进和质量审计：1.实验室应建立质量管理小组，并定期召开会议进行质量管理的评估和改进。
2.实验室应进行定期的内部质量审计，并根据审计结果制定相应的纠正措施和改进计划。
以上是一个分子生物学实验室内部质量控制制度的框架，旨在保证实验结果的准确性和可重复性。
分子生物学检测实验室技术要求与质量控制
案例分析：乙型 肝炎病毒核酸检
测
遗传性疾病：由基因突变或染色体异常引起的疾病
诊断方法：分子生物学检测技术，如基因测序、基因芯片等
应用案例：遗传性疾病的诊断，如唐氏综合征、地中海贫血等
质量控制：确保检测结果的准确性和可靠性，如样本采集、处理、检测等环节的质量控 制
个体化医疗：根据患者的基因、环境和生活方式等因素制定个性化的治疗方案 精准医学：通过分子生物学检测技术，精确诊断疾病，制定个性化的治疗方案 案例分析：分子生物学检测技术在癌症、遗传病等疾病诊断中的应用 技术要求：分子生物学检测实验室的技术要求，包括设备、试剂、人员等
PART SIX
实验室生物安全是实 验室工作的重要组成 部分，需要严格遵守 相关法律法规和标准。
实验室生物安全包括 生物安全柜、生物安 全实验室、生物安全 防护设备等设施设备 的使用和管理。
实验室生物安全还包 括实验室人员的培训 和考核，确保实验室 人员具备必要的生物 安全知识和技能。
实验室生物安全还需 要建立完善的生物安 全管理制度和应急预 案，确保实验室生物 安全的有效实施。
应用：研究基 因表达调控、 疾病诊断、药 物研发等领域
质量控制：包括 样本采集、RNA 提取、构建、 测序和数据分析 等环节的质量控
制
蛋白质组学：研究蛋白质在细 胞、组织或生物体中的表达、 修饰、相互作用和功能
蛋白质组学检测技术：包括质 谱分析、蛋白质芯片、蛋白质 相互作用分析等
质谱分析：通过测量蛋白质的 质量和电荷，确定蛋白质的种 类和数量
实验动物福利：确保实验动物的健 康和福利，遵循3R原则（替代、减 少、优化）
实验动物使用：实验动物必须经过 适当的训练和适应，确保实验结果 的准确性
分子生物学实验室常用仪器设备简介
实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介一、实验目的熟悉分子生物学实验室常用仪器并熟练使用二、实验原理1、恒温气浴摇床：用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌培养，发酵，杂交，生化反应及酶和组织研究等。
2、超净工作台：用于分子生物学无菌操作。
3、低温台式高速离心机：用于分离纯化DNA和蛋白质等，如基因片段的分离，蛋白酶的沉淀和回收等。
4、微量移液管：是连续可调的，计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。
有多种规格：①0.5-10μL②10-100μL③20-200μL④100-1000μL。
5、电泳仪：用于确定大分子物质的分子量以及鉴定物种亲缘关系的仪器。
6、PCR仪：用于目的基因的扩增，是一对寡糖核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段。
主要用于基础研究和应用研究等领域。
7、灭菌锅：用于细菌和细胞培养及核酸等有关实验使用的试剂，器皿及实验用具的严格灭菌。
三、实验仪器恒温气浴摇床、超净工作台、低温台式高速离心机、微量移液管、灭菌锅、PCR仪、电泳仪。
四、实验步骤（一）、恒温气浴要穿的使用：1、样品瓶牢固放入弹簧夹中2、接通电源开关，仪器进入准备状态3、参数设定，（设定温度、时间、转速等参数）4、按启动键仪器开始工作，按暂停键可暂停托盘的旋转；5、按电源键，显示屏显示消失，关闭电源总开关（二）、超净工作台的使用1、使用工作台时，先经过清洁液浸泡的纱布擦拭台面，然后用消毒剂擦拭消毒。
2、接通电源，提前30分钟打开紫外灯照射消毒，处理净化工作区内工作台表面积累的微生物，15分钟后，关闭紫外灯，开启送风机。
3、工作台面上，不要存放不必要的物品，以保持工作区内的洁净气流不受干扰。
4、操作结束后，清理工作台面，收集各废弃物，关闭风机及照明开关，用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。
5、最后开启工作台紫外灯，照射消毒30分钟后，关闭紫外灯，切断电源。
（三）、低温台式高速离心机的使用1、把离心机放置于平面桌或平面台上，目测使之平衡，用手轻摇一下离心机，检查离心机是否放置平衡。
核酸提取仪通量安全操作及保养规程
核酸提取仪通量安全操作及保养规程前言核酸提取仪是分子生物学实验室中常用的仪器之一，它能够从生物样本中提取出高质量的核酸。
核酸提取仪的通量越大，提取效率也越高，但同时也增加了仪器使用的风险。
因此，在使用核酸提取仪时，必须遵循严格的安全操作和保养规程，为实验室的工作和环境安全保驾护航。
安全操作规程1. 穿戴个人防护装备在使用核酸提取仪前，检查并穿戴好相应的个人防护装备，包括实验室外套、口罩、手套、护目镜等。
这些装备可以有效地减少操作时因误操作导致的伤害。
2. 防止样品污染样品污染可能会导致实验结果不准确，因此在样品的处理过程中，需要遵循相应的规范。
在加样操作过程中，避免将样品接触到台面、墙壁等不干净的表面上，同时避免用其他物品接触样品；在核酸提取过程中，注意避免不必要的接触，如手工操作等。
3. 正确使用化学试剂在使用化学试剂前，需了解其性质及危险性，按照标签上的说明正确使用试剂，避免因误操作导致危险发生。
在操作过程中，要注意防止化学物质的飞溅，避免吸入有害气体。
4. 操作结束后的清洁操作结束后要及时清洁工作站，并按照规定处理好样品及废弃物等，避免污染其他样品或实验室环境。
5. 正常操作流程正常操作流程如下：1.打开仪器，进行系统预热；2.充分准备样品及试剂，避免在操作过程中造成不必要的中断；3.将样品加入提取板中，注意不要超出曼陀罗图形的板槽；4.加入试剂，按照步骤操作；5.与提取仪工作站连接，打开盖子；6.开始提取过程，按照实验操作手册操作；7.提取完毕后，注意关闭所有操作手制，断电及清洁工作站；8.清点试剂，避免浪费及引起环境污染。
保养规程1. 定期校验、维护核酸提取仪核酸提取仪需要定期维护，以确保其正常工作、提取效率，避免发生危险。
建议实验室安排专人定期对核酸提取仪进行检测和保养，包括精确校验仪器提取效率、检查气泵状态、清洁滤纸等，减少因设备故障导致的误差。
2. 仔细保养工作站和相关部件工作站是核酸提取仪的重要组成部分，定期对工作站进行清理和维护，以防其他污染影响实验结果。
分子生物学实验教案
机 5m 后关灯，关灯后 10 分钟打开照明灯，即可使用。 11. 电泳系统：
期保存在超低温环境下，就需要一个液氮罐（-196℃）具有经济、省力和较好地保 持细胞生物学特性的优点。 3．培养箱：37℃恒温箱用于细菌的固体培养和细胞培养。
CO2培养箱适用于培养各种细胞，可恒定地提供一定量的CO2（通常 5%），用来维 持培养液的酸度（pH值）。 37℃恒温空气摇床可进行液体细菌的培养。 4. 水浴锅：用于保温。 25-100℃水浴摇床可用于分子杂交试验，各种生物化学酶反应等试验的保温。 25-100℃水浴箱用于常规试验。 5. 烘箱：主用于烘干实验器皿，有些需要温度高些，有些需要温度低些。用于 RNA 方面 的实验用具，需要在 250℃烤箱中烘干，有些塑料用具只能在 42-45℃的烤箱中进行 烘干。 （二）水的净化装置：随着分子生物学的飞速发展，许多实验对水纯度的要求越来越高。 1. 蒸馏水皿：单蒸水常难以满足实验要求。双蒸水、三蒸水配液，许多实验要去离子水。
3
1. 真空加热干燥箱：核酸在硝酸纤维素膜和尼龙膜上固定，用于杂交实验。 2. 电泳凝胶干燥箱：电泳后的凝胶进行脱水干燥的仪器，一般可将凝胶干燥到一些玻
璃纸上，干燥后的凝胶易于保存。 3. 液氮冷冻干燥：适用于活性蛋白质样品的干燥与结晶。 4. 真空泵：许多实验都需要抽真空。如：乙醇沉淀后核酸样品的干燥，电泳凝胶的干
主用于核酸样品琼脂糖凝胶和 PCR 电泳结果的紫外观察和照像。 8. PCR 仪：PTC-200 基因扩增仪
分子生物学实验仪器设备分析
• １． 空气垫移液器 • 该类移液器适用于固定或可调体积液体的加样。 空气垫的作用是将
吸于一次性吸头内的液体样本与加样器内的活塞分隔开来， 空气垫 通过加样器活塞的弹簧样运动而移动， 进而带动吸头中的液体， 死 体积和一次性吸头中高度的增加决定了加样中空气垫的膨胀程度。
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第一节 微量移液器
• 四、 微量移液器的使用方法
• １． 容量设定 • 容量设定可通过容量调节轮的旋转来完成。 正确的容量设定有两个
步骤： 一是粗调， 即通过排放按钮将容量值迅速调整至接近需要的 预想值； 二是细调， 当容量值接近需要的预想值以后， 应将移液器 横置， 水平放至在观察者的眼前， 通过调节轮慢慢地将容量值调至 预想值， 从而避免视觉误差所造成的影响。 • 在容量设定时， 还有一个需要特别注意之处， 即从大值调整到小值 时， 调整到预想值即可； 但从小值调整到大值时， 需要超 １ ／ ３ 圈后再返回。 这是因为计数器里面有一定的空隙， 需要弥补。
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第七章 房地产权属登记法律制度
• 第一节 房地产权属登记概述 • 第二节 土地登记 • 第三节 房屋登记 • 第四节 房屋权属登记信息查询与档案管理
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第一节 房地产权属登记概述
• 一、房地产权属登记的含义
• 房地产权属登记又称为房地产登记，是指经申请人申请，由房地产登 记机构将申请人的房地产权利和其他应当记载的事项在房地产登记簿 上予以记载的行为，是将房地产权利现状、权利变动情况以及其他相 关事项记载在房地产登记簿上予以公示的行为，是一种不动产物权的 公示方式。其主要分为土地登记和房屋登记两种。
分子生物学实验室需要的仪器配置
分子生物学实验室需要的仪器配置(1)培养箱在分子生物学试验中，有很多反应都是在特定温度下进行的，这时就需要一个控温的装置。
例如:用于细菌的平板培养，我们通常设定为3７℃于培养箱倒置培养;其他分子生物学实验如酶切等需要25℃，３0℃，37℃等条件。
(2）冰箱冰箱是实验室保存试剂和样品必不可少的仪器。
分子生物学实验中用到的试剂有些要求是４度保存,有些要求是负２０度保存，实验人员一定要看清试剂的保存条件，放置在恰当的温度下保存。
具体来说，不同温度下保存的物品如下:ａ。
4℃适合储存某些溶液、试剂、药品等.ｂ。
—20℃适用于某些试剂、药品、酶、血清、配好的抗生素和DNＡ、蛋白质样品等.c。
—8０℃适合某些长期低温保存的样品、大肠杆菌菌种、纯化的样品、特殊的低温处理消化液,感受态等的保存.ｄ。
０-１０℃的层析冷柜适合低温条件下的电泳、层析、透析等实验．（3）摇床摇床是实验室常用仪器，一般有常温型和低温型两种.对于分子生物学实验室，如果能配置低温型摇床，就可以适应不同的实验需求.例如：用于大肠杆菌，酵母菌等生物工程菌种的振荡培养及蛋白的诱导表达，培养通常为2８度和３7度，诱导表达需要20—37度;在感受态的制备过程中，需要有18度的温度控制；用于蛋白凝胶的染色脱色时振荡，常温使用；用于大肠杆菌常规转化时振荡复苏,常为３7度.对于控制温度低于室温时,我们需要低温型摇床来控温.（４）水浴锅水浴锅也是一种控温装置，水浴控温对于样品来说比较快速且接触充分。
例如,用于4２度的大肠杆菌转化时的热激反应;用于ＤNA杂交过程中水浴控温。
(５）烘箱烘箱是用于灭菌和洗涤后的物品烘干。
烘箱有不同的控温范围,用户可以根据实验需求进行选择。
例如，有些塑料用具只能在42—45℃的烤箱中进行烘干；用于RNA方面的实验用具,需要在２5０℃烤箱中烘干。
（6)纯水装置纯水装置包括蒸馏水器和纯水机。
蒸馏水器的价格便宜,但在造水过程中需要有人值守；纯水机价格高些，但是使用方便，可以储存一定量的纯水。
分子生物学实验室安全操作规范
分子生物学实验室安全操作规范分子生物学实验室是进行生物大分子制备和分析常用技术、蛋白质与核酸的提取与分离、PCR技术、分子杂交与印迹技术、分子克隆技术、外源基因转移技术、蛋白质表达技术、分子标记技术、分子改造技术、测序及人工合成技术、基因组学技术、蛋白质组学技术、生物芯片技术、生物信息学技术、RNA研究技术和电泳检测等的场所，所有进入实验室的工作人员均应遵守必要的操作规范，现在就让未名雷蒙特带您来了解一下:1. 配制有毒挥发性溶液必须在通风橱内进行。
2. 使用实验室仪器设备要严格遵守操作规程，认真填写仪器设备使用记录。
使用精密贵重仪器设备，必须预约，并由专门负责的工作人员上机操作。
3. 实验室产生的工作废液及有毒有害物质，应在安全负责人的指导下妥善处理。
4. 在进行凝胶成像时，必须用保鲜膜把胶包好或用保鲜膜将胶和透照台隔开，确保不污染成像系统。
5. 实验过程中必须穿着工作服。
进行有毒、有害、有刺激性物质或有腐蚀性物质操作时，应戴好防护手套。
6. 由于实验过程中使用溴化乙锭(EB)、丙烯酰胺等有害物质，所有与此有关的操作必须带手套，在特定区域内完成，严禁将接触过此类物质的手套或其他杂物带出工作区。
7. 实验人员未经许可，不得随意动用专用实验的物品。
不得私自配制实验室各房门、抽屉、柜子钥匙，不得私自在实验室内安装其它设备。
8. 爱护仪器设备，节约实验材料，仪器设备如有损坏，要及时报告登记。
如发生意外事故，应立即采取必要措施，并及时报告实验室负责人、值班人员和报警。
9. 实验完毕后做好整理工作，关闭电源、水源、气源和门窗。
10. 工作结束后，清理使用过的台面及区域, 保持整洁。
实验室要保持安静、卫生，严禁在室内吸烟、饮食，严禁随地吐痰、大声喧哗。
分子生物学实验室本科生使用管理规定
分子生物学实验室本科生使用管理规定为保障本科实验能够安全、有序的进行，同时让同学们养成良好的实验习惯和爱护公共物品的良好品德，特制定本规定，每个进入实验室的使用者都要严格遵守，详细如下：1、进入实验室的班级根据人数分成不同的小组，老师为每个小组都准备了充足的实验仪器耗材以及试剂分配（详见“各小组仪器耗材药品分配清单”），在进入实验室的时候各组根据清单进行清点，如有问题及时找孜老师补齐。
实验结束经老师验收后方可离开。
同时，在实验过程中不得私自占用或挪用其他组的耗材和试剂，一经发现扣违规者实验过程分5分。
2、每班所用的分子生物学试剂/菌种（详见每班分子生物学试剂/菌种）都按照清单严格放在冰箱指定的位置（冷藏保存或冷冻保存），是每班的共用的试剂/菌种，这些试剂比较昂贵，每组使用过后立即放回原处，以方便其他组使用和实验的顺利进行，如有违规者，一经发现扣违规者实验过程分5分。
3、公共区域：除了每组固定的仪器耗材和试剂之外的是全班共用的物品，每组使用完毕后仪器归位并清理桌面，特别需要指出的是天平的使用和药品的称量，任何组仔细认真称量药品，如药品有洒出，及时清理天平和桌面，称量完毕后将药品盖拧好后放回药品柜，如不按规定进行违规者，一经发现扣违规者实验过程扣5分。
4、实验仪器使用严格按照操作进行，如有问题及时找老师。
5、为了让同学们养成好的卫生习惯，每天实验结束后都要进行实验室的清扫，以组为单位进行，从第一组开始依次轮流，除每组自己的仪器耗材以及台面外，值日生负责公共区域的仪器桌面的清洁，以及清扫和拖地面。
6、实验过程的有机溶剂使用过程中远离火源，且使用完毕后及时盖好并处理使用后的枪头和器材。
7、DNA电泳实验过程注意使用一次性PE手套进行防护。
8、实验过程中电炉使用频率很高，同学们在使用过程中小心使用注意烫伤，使用完毕后及时关闭电源。
9、每组使用后的耗材以及废品及时进行清洗和处理，不得污染环境以影响他人。
生物学实验操作手册
生物学实验操作手册第一章：实验室安全与基本操作1.1 实验室安全措施生物学实验室是一个需要特殊注意安全的环境。
在进行实验前，必须熟悉实验室的安全规定，并采取以下措施：- 佩戴实验室指定的个人防护装备，如实验手套、护目镜和实验服。
- 确保实验室内通风良好，避免吸入有害气体或蒸汽。
- 熟悉实验室中的应急设施和安全出口位置。
- 使用实验室设备时，遵循正确的操作步骤和安全指南。
1.2 基本实验室操作在进行生物学实验之前，必须掌握以下基本实验室操作技巧：- 使用实验室仪器和设备前，先阅读并理解操作手册和使用说明书。
- 准备实验所需的试剂和材料，并按照实验方案准确称量。
- 注意实验室的温度和湿度，以确保实验结果的准确性。
- 在实验过程中，记录实验数据和观察结果，并及时整理和分析。
第二章：细胞生物学实验2.1 细胞培养技术细胞培养是生物学研究中常用的技术手段之一。
在进行细胞培养实验时，需要注意以下事项：- 使用无菌技术，确保培养环境的无菌。
- 选择合适的培养基和培养条件，以促进细胞的生长和增殖。
- 定期观察和检测细胞的形态和生长状态，及时处理细胞培养中的问题。
2.2 细胞染色技术细胞染色技术可以帮助研究者观察和分析细胞的形态和结构。
在进行细胞染色实验时，需要注意以下事项：- 选择适当的染色方法，如荧光染色、核染色等。
- 控制染色时间和染色剂的浓度，以获得清晰的染色结果。
- 使用显微镜观察和记录染色细胞的图像，并进行图像分析。
第三章：分子生物学实验3.1 DNA提取技术DNA提取是分子生物学研究中的重要步骤之一。
在进行DNA提取实验时，需要注意以下事项：- 选择适当的DNA提取方法，如酚-氯仿法、盐法等。
- 保持实验环境的无菌和无污染。
- 控制DNA提取过程中的温度和时间，以确保提取到高质量的DNA。
3.2 PCR技术PCR技术可以扩增DNA片段，是分子生物学研究中常用的技术手段之一。
在进行PCR实验时，需要注意以下事项：- 准备PCR反应体系，包括引物、酶和模板DNA。
分子生物学仪器设备安全操作规定
分子生物学仪器设备安全操作规定分子生物学是研究分子结构、复杂的细胞和生物体的分子机制的学科。
随着现代科技的不断发展，分子生物学仪器设备得到广泛的应用。
为保障工作人员安全，本规定旨在规范分子生物学仪器设备的安全操作。
1. 培养箱安全操作1.1 保持清洁卫生培养箱作为实验室常用设备之一，在使用时应保持清洁卫生。
使用前应检查箱内是否有废弃物、杂物或污垢。
使用后应定期清洁箱体、观察口和照明系统，并保持培养箱内部干燥。
1.2 正确设置温度与湿度在使用培养箱时，应按照实验的需要正确设置温度和湿度。
使用前，应确认培养箱的温控及湿控系统均能正常工作。
设置温度和湿度时，应按照实验的需要，并确保设置正确。
1.3 避免过度装填在使用培养箱时，应避免过度装填，以免影响温控及湿控系统的正常工作，导致培养箱内部温度过高或过低，影响实验结果。
1.4 定期检查及维护为确保培养箱的正常工作，应定期检查温控及湿控系统的工作状态，并进行必要的维护。
若发现系统出现故障，应及时联系维修人员进行维护。
2. 离心机安全操作2.1 正确安装试管在使用离心机时，应确保试管正确安装在离心盘中，并确保离心盘平衡。
使用时避免过度转速和离心时间。
2.2 控制离心速度在使用离心机时，应按照实验需求控制离心速度，不宜过高或过低。
离心前应检查离心机转速表是否正常并调整速度。
在离心时，应关注离心机的运转情况，随时注意是否有异常情况。
2.3 预防样本泄漏在离心机转动时，试管内样本之间的力可能会相互作用，导致样本泄漏。
为了避免样本泄漏，应选择合适的离心管和离心机，同时注意安装离心管以及离心盘的角度和长度，使之尽可能的固定。
2.4 定期维护为确保离心机的正常工作，应定期检查机器运转情况，及时清洗离心盘、离心机转轴等易受污染的部分，确保离心机延长使用寿命并不影响实验结果。
3. PCR仪安全操作3.1 正确设置温度及时间在使用PCR仪时，应按照实验设计的参数设置温度和时间，确保PCR反应的可靠性。
分子生物学实验室安全常识
分子生物学实验安全常识
1.4 微生物的危害及处理
第三类病原微生物是指能够引起人类或者动物疾病，但一 般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限， 实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施 的微生物。
高致病性动物病原微生物是指来源于动物的、《动物病原 微生物分类名录》中规定的第一类、第二类病原微生物。
1.4 微生物的危害及处理
动物病原微生物分类名录（2005年农业部令第53 号） 第三类：
多种动物共患病病原微生物：低致病性流感病毒、伪狂犬病病毒、破伤风梭菌 、气肿疽梭菌、结核分支杆菌、副结核分支杆菌、致病性大肠杆菌、沙门氏菌、 巴氏杆菌、致病性链球菌、李氏杆菌、产气荚膜梭菌、嗜水气单胞菌、肉毒梭状 芽孢杆菌、腐败梭菌和其他致病性梭菌、鹦鹉热衣原体、放线菌、钩端螺旋体。 水生动物病病原微生物：流行性造血器官坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒 、马苏大麻哈鱼病毒、病毒性出血性败血症病毒、锦鲤疱疹病毒、斑点叉尾鮰病 毒、病毒性脑病和视网膜病毒、传染性胰脏坏死病毒、真鲷虹彩病毒、白鲟虹彩 病毒、中肠腺坏死杆状病毒、传染性皮下和造血器官坏死病毒、核多角体杆状病 毒、虾产卵死亡综合症病毒、鳖鳃腺炎病毒、Taura综合症病毒、对虾白斑综合 症病毒、黄头病病毒、草鱼出血病毒、鲤春病毒血症病毒、鲍球形病毒、鲑鱼传 染性贫血病毒。
分子生物学实验安全常识
1.4 微生物的危害及处理
重组核酸技术和生物安全
生物表达系统：由符合一系列标准并可安全使用的载体和宿主细胞组成。如果所要插入的 外源基因序列不要求更高级别的生物安全水平，大部分常规遗传工程实验可以按BSL-1安全 操作大肠杆菌工程菌。用于基因治疗和有效转移基因到组织培养细胞的病毒载体，大多是复 制缺陷型的，但操作时应采用与构建这些载体时的亲本病毒相同的生物安全水平。携带外源 性遗传信息的动物（转基因动物）应当在靶基因编码产物特性的防护水平下进行操作，定点 缺失特性基因的动物（基因敲除动物）一般不表现特殊的生物危害。 基因产物是否具有潜在的药理学活性是必须考虑的一项重要因素。比如，克隆、表达编码 毒素的基因就需要较高的生物安全水平，因为当采用病毒载体过量表达这些毒素蛋白时有可 能产生难以预料的后果。 危害度评估：一种动态过程，必须密切跟踪该生物因子研究的最新进展，一旦获得载体/宿 主的新信息时，需要随时将相关工作归入更高或更低的生物安全水平。
分子生物学实验讲义(2020版-)
《分子生物学》实验讲义实验一分子生物学实验基础知识及常用仪器介绍实验二质粒DNA分离纯化实验三琼脂糖凝胶电泳实验四聚合酶链反应(PCR)检测质粒DNA实验五限制酶切鉴定质粒DNA实验一分子生物学实验基础知识及常用仪器介绍一、实验目的了解分子生物学实验特点，了解分子生物学实验室常用设备及基本实验操作。
二、实验内容1.分子生物学实验知识⑴严格操作规程分子生物学实验一般比较复杂，如所用试剂多、操作步骤多、实验时间长等，因此为保证实验效果，在实验室中一定要有整体观念，严格按照操作规程进行。
⑵耐心细致操作实验中不能急于求成，特别是对于初入门者，应反复操作，积累经验。
⑶习惯微量操作在分子生物学实验中，试剂的用量往往很少，常常细到1ul液体、ug或ng固体，这是平常肉眼很难看到的，所以刚刚接触实验的人往往感到不习惯，总是担心要取的东西能否看到、准不准确，操作的样品会不会丢失，总是想加大反应体积，以为越多越好。
这些观念都是错误的。
只有定时定量加入液体，才能保证实验成功，所以平时应加以练习，逐渐建立微量操作的观念才能解决好问题。
⑷防止实验污染分子生物学实验的对象主要是核酸，不同生物材料的DNA和DNA之间，不同的样品之间，核酸酶等蛋白酶与核酸之间，产物与反应物之间都有可能造成污染，最终导致实验的失败。
故要从所用试剂、仪器设备、耗材及操作人员等方面进行防止污染的操作。
⑸正确处理试剂分子生物学实验中对试剂的要求十分严格，包括试剂的等级、配制、除菌储备等各方面均有严格要求。
⑹注意实验安全分子生物学实验中，操作者常会接触一些对人体有害的试剂，必须实验安全要求进行实验操作，否则会给实验室甚至整个人类带来巨大的危害。
2.分子生物学实验常用仪器介绍⑴微量取液器⑵水纯化装置（离子交换器、超纯水装置）⑶离心机（低速、高速、超速）⑷电泳装置（电泳仪、电泳槽）⑸灭菌设备（高压蒸汽灭菌锅、过滤除菌器）⑹超净工作台⑺PCR仪⑻凝胶成像系统（紫外分析仪、核酸凝胶电泳图谱的记录）⑼温度控制设备（冷冻设备、培养箱、水浴箱、烤箱）⑽其它设备（紫外可见分光光度计、微波炉、凝胶干燥器、真空干燥仪）3.分子生物学基本实验操作⑴基因组DNA的分离与纯化（核酸浓度和纯度测定）⑵真核细胞mRNA的分离与纯化⑶质粒DNA的提取⑷PCR基因扩增实验⑸限制性内切酶酶切实验⑹DNA重组技术⑺DNA转移技术⑻DNA测序：化学法、双脱氧链终止法⑼核酸探针的制备技术：末端标记、PCR法制探针、非放射性探针⑽分子杂交技术：Southern印迹、Northern印迹和Western印迹4.微量移液器的使用可调节微量移液器标准操作程序（适用的液体：水、缓冲液、稀释的盐溶液和酸碱溶液）：⑴调节数字至所需体积；⑵装上吸嘴（不同规格的移液器用不同的吸头），注意气密性）；⑶按到第一档，垂直进入液面几毫米；⑷缓慢松开控制按钮（否则液体进入吸头过速会导致液体倒吸入移液器内部吸入体积减少）；⑸停顿1s后将吸嘴提离开液面；⑹平稳按压打出液体。
分子生物学领域常用的实验室仪器介绍
分子生物学领域常用的实验室仪器介绍分子生物学领域是现代生命科学的重要分支之一，它研究的是生物分子层面的生命过程，旨在深入揭示生命的本质和机制。
而在分子生物学研究中，实验室仪器则是不可或缺的工具，它们不仅可以帮助研究者进行实验操作，还能够提高实验结果的可靠性和精度。
本文将为大家介绍分子生物学领域常用的实验室仪器。
一、PCR扩增仪PCR（聚合酶链式反应）扩增技术是分子生物学领域中最常用的实验技术之一，是通过对核酸单链进行不断反复的扩增，从而获得足够多的样品用于后续的实验研究。
PCR扩增仪是一种能够精确控制温度并产生稳定温度的设备，它可以通过快速升温和降温的方式对PCR反应的反应体系进行加热和冷却，以满足PCR反应各个步骤所需的不同温度条件。
根据不同的实验需求，PCR扩增仪通常有单块、双块和四块等不同规格型号。
二、电泳仪电泳是一个常见的探测和分离生物分子的方法，尤其在DNA和RNA分子的研究中应用广泛。
电泳仪则是进行电泳实验的设备。
电泳仪根据不同的实验需求、对样品大小和数量的要求，可以选择垂直电泳仪、平板电泳仪、毛细管电泳仪、聚丙烯酰胺凝胶等不同类型的电泳仪。
其中，聚丙烯酰胺凝胶电泳仪是目前应用最广泛的电泳仪之一，它可以以高效、稳定和可重复的方式对生物分子进行分离、检测和纯化。
三、荧光定量PCR仪荧光定量PCR（实时PCR）技术是PCR技术的一种延伸，它通过检测PCR反应过程中荧光信号的变化动态监测扩增产物的累积情况，从而实时定量测定PCR反应产物的含量。
荧光定量PCR仪是荧光定量PCR技术实验的核心设备，它通过荧光信号的强度或增长速率来定量PCR反应物质的含量。
荧光定量PCR仪可根据实验数量和复杂程度的不同分为单通道和多通道两种类型。
四、显微镜生物显微镜是分子生物学领域中经常使用的设备，它主要用于观察、研究和记录细胞和组织样品的结构和形态特征，以及细胞间和分子间的相互作用和动态过程。
在生物领域中广泛应用多种类型的显微镜如荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、超高分辨率显微镜等。
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分子生物学实验安全
紫外线辐射的危害和防护
在实验室里常用的紫外光源包括 手提式紫外灯和紫外透射仪、凝胶成像系统 。 只能通过吸收有害波长的滤片或安全玻璃片才能观察。在紫外光下操作时要戴合适的预防性手 套。应佩戴具有紫外线防护功能的护目镜和/或防护面罩，并遮蔽暴露的皮肤。
建议：使用荧光染料，切胶在Dark reader上操作。
分子生物学实验安全
化学试剂的安全使用
DTT 二硫苏糖醇
很强的还原剂，散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危 害健康。当使用固体或高浓度储存液时，戴手套和护目镜，在通风橱中 操作。 PMSF 苯甲基磺酰氟 一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂。它对呼吸道黏膜、眼睛和皮肤有非常 大的破坏性。可因吸入、咽下或皮肤吸收而致命。戴合适的手套和安全眼镜， 始终在化学通风橱里使用。在接触到的情况下，要立即用大量的水冲洗眼睛或 皮肤，已污染的工作服作为有害废物处理。 Triton X-100 引起严重的眼睛刺激和灼伤。可因吸入、咽下或皮肤吸收而受害。戴合适 的手套和护目镜。
分子生物学实验安全
化学试剂的安全使用
过硫酸铵 (NH4)2S2O8 对黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸入可致命 。操作时戴合适的手套、安全眼镜和防护服。始终在通风橱里操作， 操作完后彻底洗手。 叠氮钠（NaN3） 毒性非常大。它阻断细胞色素电子运送系统。含有叠氮钠的溶液要 标记清楚。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套和安 全护目镜，操作时要格外小心。 吉姆萨（Giemsa） 染料咽下可致命或引起眼睛失明，通过吸入和皮肤吸收是有毒的。 其可能的危险是不可逆的效应。戴合适的手套和安全护目镜。在化学通 风橱里操作，不要吸入其粉末。
Dark Reader 荧光透射仪 (Transilluminators) 的特点 : 1.Dark Reader 使用新的无毒 DNA 染料 : SYBR Green, SYBR Gold等, 避免了Ethidium Bromide (EB) 染料对人体的伤害。 2.Dark Reader使用 可见光 （400-500 nm）,没有UV（紫外线），将其对人体的伤害降低 至零。同时，大大降低了 对DNA样本的损伤，克隆DNA的效率将成百倍的提高。 3.灵敏度高，远远高于UV检测仪。 4.适 用染料范围广；荧光素 （fluorescein）, AttoPhos, GelStar, Vistra Green, SYPRO Orange, red-shifted GFP variants等都可使用。对于Rhodamines, Ethidium Bromide(EB)等激发光大于500 nm的染料亦 可适用；可以广泛用于DNA、RNA 以及蛋白质的检测。 5.Dark Reader同时提供琥珀色镜片的观 察眼镜（AG16），供切割凝胶时使用。 紫外照射消毒后由于空气中臭氧富集，不宜立即开始工作，应在停止紫外照射30 min后开始 工作，有条件的实验室，可安装无臭氧紫外灯。 超净工作台中进行紫外照射消毒后，也应用强风进行吹扫后再进行工作，以免臭氧危害身 体健康。
通风橱进行。如皮肤接触Trizol，请立即用大量去垢剂和水冲洗，
废液埋入地下。
分子生物学实验安全
化学试剂的安全使用
RNA酶的强抑制剂，一种潜在的致癌物质。 操作时戴口罩，在通风橱中进行。沾到手上 立即冲洗，废液通过废液道排泄。 CHCl3（Chloroform，氯仿） 常用于DNA和RNA提取，对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有强烈的刺 激作用和腐蚀性，易损害肝和肾。操作时戴手套在通风橱里进行，废 液收集后埋入地下。 Acrylamide（丙烯酰胺） DNA测序、SSR及蛋白质分离等技术中作电泳支持物，具神经毒性，聚 合后毒性消失。操作时戴手套在通风橱内进行，聚合后的聚丙烯酰胺凝胶 没有毒性，可随普通垃圾一起扔掉，千万不要倒入下水道.。
3)平放带有残余液体吸头的移液器(应将移液器挂在移液器架上)。吸嘴内有未排出液体时将移
液器平放于桌面，或进行走动，吸嘴内液体会回流入套筒内，大量程移液器回流的液体会 腐蚀活塞组件。正确方法：在进行实验前，应将实验用品放在触手可及的地方，避免在进 行实验时走动，养成即吸即排，即排即卸的习惯，使用后的移液器放回至移液器架。 4)用大量程的移液器移取小体积样品(应该选择合适量程范围的移液器)。 5)直接按到第二档吸液(应该按照上述标准方法操作，反向移液法外)。 6)使用丙酮或强腐蚀性的液体清洗移液器。吸取强挥发性液体后应及时拆开移液器用医用酒精
DEPC (Diethylprocarbonate) (二乙基焦碳酸酯)
分子生物学实验安全常识
化学试剂的安全使用
DMSO（二甲亚砜）
是一种既溶于水又溶于有机溶剂的非质子极性溶剂，常用作细胞 的冻存液和配制AS。皮肤沾上之后用大量的水洗及1%~5%稀氨水洗涤。 十二烷基硫酸钠(SDS) 有毒，易损害眼睛。质粒提取时作裂解液破坏细胞膜和 Southern 杂交时的洗膜液中的去垢剂。戴合适的手套和安全护目镜，不要吸 入其粉末。 四甲基二乙胺 TEMED 强神经毒性，防止误吸，操作时快速，存放时密封。
实验：分子生物学实验安全及 实验常用仪器设备
Байду номын сангаас
一、分子生物学实验安全注意事项
1．易燃易爆、有毒的化学试剂 有毒的化学试剂：较小剂量疾病/死亡 通过皮肤、呼吸道：1）丙烯酰胺、2）过硫酸铵、3）甲醛、4）氯仿、5） 十二烷基磺酸钠SDS、6）四甲基二乙胺（TEMED）、7）乙酸/冰醋酸、 异戊醇、异丁醇、正丁醇 致癌物或诱变剂：溴化乙锭、甲酰胺，焦碳酸二乙酯（DEPC） 易燃易爆化学试剂：苦味酸、酒精 腐蚀性 化学试剂：酸和碱、溴、苯酚 强氧化性 化学试剂：过氧化物、含有强氧化能力的含氧酸及其盐，如硝酸 铵、高氯酸及其盐、重铬酸及其盐 不相容 化学试剂：叠氮化物-铜 2.放射性试剂 3.生物学管制试剂、生物 4．设备方面的危险：紫外线
进行清洗，避免活塞组件受到腐蚀。
7）吸液体或排液速度过快，吸液速度过快会影响准确度，特殊液体会产生气泡。对于大量程 移液器，过快的吸液速度会造成液体倒吸腐蚀活塞组件。正确方法：平稳缓慢的进行移液 工作。
2．冷冻离心机的使用方法
以epdoff 5430冷冻离心机为例实物讲解 Centrifuge 5810R 型高速冷冻离心机的使用 天美CT15RT离心机的使用
• 取196ul ddH2O于1.5mL离心管中（请反复练习）。
• 3）2-20ul移液器的使用 • 取1ul6×上样缓冲液于4只0.2mlPCR管中； • 将上述1.5mL离心管中的196ul ddH2O平均加样到0.2mLPCR管中。 • 4）将上述4只PCR管在旋涡混合器上混合
• 5）在小型离心机或者冷冻离心机上离心（低速，5-10s），使得溶液
3．PCR 仪的使用方法
• 以PE9700型PCR仪 为例实物讲解
• 以C1000型PCR仪 为例实物讲解
4．纯水仪的使用方法/双蒸水仪的使用方法
以MiLLi-Q 型纯水仪为例实物讲解
其他仪器设备在实际操作中学习
五、学生练习
1. 微量移液器、旋涡混合器和冷冻离心机的使用
• 1）200-500ul移液器的使用 • 2）20-200ul移液器的使用
二、做好分子学实验应注意的有关问题
1．克服畏惧心理 2、克服轻视心理 3．克服用微量试剂不习惯 4．防止粗心大意 5．防止缺乏整体实验的概念 6．侥幸心理 7、试剂问题 ：严格按各种试剂的特定要求来操作 8、背景知识问题
三、分子生物学实验室常用仪器设备
1．灭菌设备 2．离心机 3．冷冻设备 4．光学测量 5．天平 7．凝胶电泳装置 8．恒温箱 9．温控摇床 10．磁力搅拌器（最好带加 热功能） • 11．微波炉 • 12．PH 计（酸度计） • • • • • • • • • • 13．0.1 μL - 5000 μL 范围的 微量移液器 • 14．PCR 仪（热循环仪） • 15．组织光照培养箱 • 16．紫外观测仪 • 17．旋涡混合器（Vortex） • 18．水浴装置 • 19．纯水仪/双蒸水仪 • 20．玻璃器皿及塑料制品 • 21．相应的分子生物学试剂 及试剂盒
均处于PCR管底部
2.PCR仪的编程
• • • • • • • • 程序：预变性94℃5min； 94变性1min 55℃退火1min（通常50-62℃） 72℃延伸1min 通常30-35循环，练习时：组别+30和循环 72℃延伸1min30s 12℃保温10-60min，或forever 请分组在PCR仪上练习编程，记录下你的程序名称 作为平时练习作业之一
设定移液器容量的正确方法是什么？
• 4.名词解释：退火、变性、预变性、延伸、反相移液法 • 5.说明PCR编程过程（以你编程的仪器型号进行说明），并记录你 的编程。 • 6.绘图或文字叙述PCR反应过程。
四、一些常用精密仪器的使用方法
1．微量移液器的使用方法
1-1微量移液器的使用 学生自学 1-2大龙移液器_使用_装配管嘴 1-3大龙移液器_使用_正向移液法_ 1-4大龙移液器 反向移液法：黏稠液体的移取 1-5大龙移液器性能测试和重新校准
微量移液器使用常见的错误操作
1)吸液时，移液器本身倾斜，导致移液不准确(应该垂直吸液，慢吸慢放)。 2)装配吸头时，用力过猛，导致吸头难以脱卸(无需用力过猛，选择与移液器匹配的吸头)。
3. 电泳上样练习
• 材料：电泳琼脂糖 • 取6×上样缓冲液2ul+1ulddH2O于一次性手套/封口膜上混
合，使用2-20ul移液器在琼脂糖胶上点样。（每人1-3次
以上，熟练为止）
六、思考题（作业）
• 1.分子生物学实验中要注意的安全事项有哪些？ • 2.叙述微量移液器的正确使用方法（重点掌握）。做2题则3题不 做。 • 3. 为了提高移液准确性，粘稠或易挥发液体移取如如何正确操作？
防护先行！